玉竹叶黄酮苷提取物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，设及玉竹叶黄酬巧提取物及其制备方法，还设及玉竹叶黄 酬巧提取物在制备预防和/或治疗糖尿病肾病产品中的用途。
【背景技术】
[0002] 糖尿病肾病是常见的糖尿病慢性微血管并发症之一，通常是指由于糖尿病引起的 肾小球基底膜增厚，系膜扩张 W及胞外基质增生，导致肾小球的高滤过和蛋白尿。早期表现 为尿中排出微量白蛋白，继之出现临床蛋白尿，最后进展为慢性肾功能不全，已成为终末期 肾衰的主要病因。DN发病与高血糖引起糖代谢异常相关的机制主要有蛋白质非酶糖基化终 末产物生成增多、多元醇代谢途径异常和蛋白激酶C激活等。
[0003] 已有大量证据表明，持续高血糖引起机体多种蛋白质非酶糖基化，由此形成的非 酶糖基化终末产物在糖尿病肾病的发病机制中起重要作用，作为糖尿病肾病治疗的新祀 点，蛋白质非酶糖基化终末产物抑制剂将成为一类新型的糖尿病肾病治疗药物。
[0004] 玉竹始载于《神农本草经》，列为上品，源于百合科黄精属植物玉竹Polygonatum Odoratum (Mill.) Druce的干燥根茎，为中国药典2015年版一部所收载。具有养阴润燥， 生津止渴之功能，用于肺胃阴伤，燥热咳嗽，咽干口渴，内热消渴。本案发明人发现玉竹根茎 所含的二氨高异黄酬类化合物3-(4'-径苯甲基)-5,7-二径基-6-甲基-8-氧甲基-苯丙二氨 化喃-4-酬，3-(4 ' -径苯甲基)-5，7-二径基-6，8-二甲基-苯丙二氨化喃-4-酬和3-(4 ' -甲氧 苯甲基)-5,7-二径基-6-甲基-8-氧甲基-苯丙二氨化喃-4-酬对蛋白质非酶糖基化终末产 物的形成具有明显地抑制作用。在此基础上，本案发明人制备了玉竹二氨高异黄酬提取物 并发现了玉竹二氨高异黄酬提取物预防和/或治疗糖尿病肾病作用，已获得发明专利授权 (ZL 2009 1 0067518.6)。玉竹的非药用部位玉竹叶生物量大，价廉易得，但对其开发利用 非常有限，常常弃之不用，未见玉竹叶化学成分和药理作用的研究报道。本案发明人对其化 学成分进行了研究，从乙醇提取物乙酸乙醋和正下醇分离部位中分离鉴定了 10个化合物 [徐伟强，等.中国实验方剂学杂志，2014，20(21) : 112 ]。
【发明内容】
[0005] 本案发明人采用体外D-葡萄糖-牛血清白蛋白蛋白质非酶糖基化反应体系测定玉 竹叶乙醇提取物对蛋白质非酶糖基化抑制作用研究中发现，玉竹叶乙醇提取物对蛋白质非 酶糖基化终末产物的形成具有显著的抑制作用。进一步采用体外D-葡萄糖-牛血清白蛋白 蛋白质非酶糖基化反应体系研究了从玉竹叶中分离鉴定的10个化合物，首次发现玉竹所含 的黄酬巧肥皂草巧对蛋白质非酶糖基化终末产物的形成具有明显地抑制作用，在此基础 上，本案发明人制备了肥皂草巧含量50~70%的玉竹叶黄酬巧提取物并发现了玉竹叶黄酬巧 提取物基于抑制蛋白质非酶糖基化终末产物的形成机制预防和/或治疗糖尿病肾病作用， 因而完成了本发明。
[0006] 本发明提供一种玉竹叶黄酬巧提取物及其制备方法和用途。
[0007] 本发明的玉竹叶黄酬巧提取物，从玉竹叶中提取。
[0008] 本发明的玉竹叶黄酬巧提取物中肥皂草巧的含量50~70%，肥皂草巧是由下述式表 示的化合物。
[0009] 本发明提供玉竹叶黄酬巧提取物的制备方法，其特征在于包括W下步骤： a) 玉竹叶用0~100%乙醇或丙酬水溶液回流提取，滤过，提取液合并，提取液减压浓缩得 提取物； b) 将步骤a)获得的提取物加水溶解，经非极性或弱极性大孔吸附树脂柱色谱，用水洗 脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液； C)用10~20%乙醇水溶液至洗脱液近无色，弃去洗脱液； d)用30~50%乙醇水溶液洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩、干燥得玉 竹叶黄酬巧提取物。
[0010] 本发明提供玉竹叶黄酬巧提取物的制备方法，优选的包括W下步骤： a) 玉竹叶加70~90%乙醇水溶液回流提取，滤过，提取液合并，减压回收乙醇得提取物； b) 将步骤a)获得的提取物加水溶解，经非极性或弱极性大孔吸附树脂柱色谱，用水洗 脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液； C)用10%乙醇水溶液洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液； d)用30%乙醇水溶液洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，洗脱液液减压浓缩、干燥得玉 竹叶黄酬巧提取物。
[0011] 本发明的玉竹叶黄酬巧提取物在制备预防和/或治疗糖尿病肾病产品中的应用， 特别是在制备蛋白质非酶糖基化抑制剂产品中应用。
[0012] 本发明采用体外D-葡萄糖-牛血清白蛋白蛋白质非酶糖基化反应体系测定玉竹叶 黄酬巧提取物的抑制作用，玉竹叶黄酬巧提取物半数抑制浓度ICso值24.7~37.9 yg/mL，阳 性对照氨基脈半数抑制浓度ICsq值231.26山1。上述结果表明玉竹叶黄酬巧提取物可在制备 预防和/或治疗糖尿病肾病产品中应用，特别是作为蛋白质非酶糖基化抑制剂在制备预防 和/或治疗糖尿病肾病产品中应用。也可W含有玉竹叶黄酬巧提取物的药物组合物在制备 预防和/或治疗糖尿病肾病产品中应用，特别是作为蛋白质非酶糖基化抑制剂在制备预防 和/或治疗糖尿病肾病产品中应用。
[0013] 本发明的玉竹叶黄酬巧提取物优点为其中肥皂草巧的含量50~70%，运是W前技术 尚未报道的，由于含量高，从而提高了疗效，满足制备预防和/或治疗糖尿病肾病产品的需 要。
[0014] 本发明的玉竹叶黄酬巧提取物制备方法优点为工艺简单，操作方便，技术易掌握， 能耗小，溶剂可回收循环使用，生产成本低。
[0015] 本发明的玉竹叶黄酬巧提取物可用于制备预防和/或治疗糖尿病肾病产品优点为 作用机制明确，基于抑制蛋白质非酶糖基化。
[0016] 本发明还提供用本发明的玉竹叶黄酬巧提取物W及药学上可接受的载体或赋形 剂制备的药物制剂。运些药物制剂选自W下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片 剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸 剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可W根据 需要制备成缓释或控释制剂。
[0017] 本发明的含有玉竹叶黄酬巧提取物的药物制剂，在制备药物制剂时可加入药物可 接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、塞合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿 润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、抑调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如:甘露糖醇、右旋糖 巧、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钢、娃衍生物、纤维素、纤维 素衍生物、明胶、聚乙締化咯烧酬、甘油、吐溫80、琼脂、碳酸巧、聚乙二醇、环糊精、憐脂类材 料、滑石粉、硬脂酸儀、硬脂酸巧等。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明的玉竹叶黄酬巧提取物高效液相色谱图 W下通过具体实施例对本发明作进一步的说明，并非对本发明的限定，依照本领域公 知的现有技术，本发明的实施方式并不限于具体实施例。
【具体实施方式】 [0019]实施例1 HPLC法测定玉竹叶黄酬巧提取物中肥皂草巧含量的方法 色谱条件与系统适用性试验 W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W甲醇为流动相A，WO. 1 %憐酸溶液为流动相B， 线性梯度洗脱:〇 min(A 20 %，B 80 %)一 10 min(A 20 %，B 80 %)一 20 min(A 30 %，B 70 %)一 40 min(A30 %，B 70 %)一 50 min(A 40 %，B 60 %)一 60 min(A 60 %，B 40 〇/〇) 一 70 min(A 100%，B 0 %)一 90 min(A 100 %，B 0 %);流速：1.0 mL.min-i;检测波长为 340nm。理论塔板数按肥皂草巧峰计算，不低于6000。
[0020] 溶液的制备 对照品溶液的制备 精密称取肥皂草巧对照品适量，加甲醇制成每1 mL含肥皂草巧180 iig的溶液。
[0021] 供试品溶液的制备 取玉竹叶黄酬巧提取物30 mg，精密称定，加甲醇溶解，转移至100 ml量瓶中，加甲醇至 刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0022] 样品测定方法 精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20山，按色谱条件进样测定，外标一点法计算玉 竹叶黄酬巧提取物中肥皂草巧的含量。
[0023] 实施例2 取玉竹叶10 Kg，加8倍量水回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回收得提 取物。取提取物加水溶解，加于HPDlOO大孔吸附树脂柱上，用水洗脱至洗脱液近无色，弃去 洗脱液，用10%乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，用50%乙醇洗脱至洗脱液近无色，收 集洗脱液，减压回收得玉竹叶黄酬巧提取物348 g。采用实施例1的方法测定玉竹叶黄酬巧 提取物中肥皂草巧的含量为50.23 %。
[0024] 实施例3 取玉竹叶10 Kg，加10倍量80%丙酬回流提取3次，每次2小时，滤过，提取液合并，减压回 收得提取物。取提取物加水溶解，加于HPD