一种红毛五加叶提取物及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明提供了一种红毛五加叶提取物，它是以红毛五加嫩叶为原料，以水、醇类溶剂中的一种或两种以上的组合溶剂提取得到。本发明还提供了该提取物的制备方法和用途。本发明研究发现，红毛五加嫩叶提取物具有一定的改善免疫功能及抗氧化的作用，该类生理活性的发现更有利于对红毛五加叶的开发，同时有助于避免对其植株茎、枝条和根的毁灭性的割断或者采挖。
【专利说明】
-种红毛五加叶提取物及其制备方法和用途
技术领域
[0001 ]本发明设及一种红毛五加叶提取物及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 红毛五加为五加科五加属植物红毛五加 Acanthopanax giraldii化rms的干燥茎 皮，在四川、甘肃、宁夏、青海、湖北、陕西、河南等地均有分布，是藏族、壮族、瑶族、弟族、彝 族、苗族、±家族等多民族常用药材;性溫，味辛，无毒，入肝、肾经。五加科五加属植物的药 用价值发现和利用历史悠久，五加属的植物大都具有滋补、抗炎、抗风湿、抗应激、抗病毒、 抗肿瘤、降血糖、降血脂、提高免疫力等作用，临床上常用于治疗风湿搏痛、腰膝酸软等病 症。红毛五加在四川阿巧藏族弟族自治州的小金县、金川县和茂县等地有较为丰富的野生 资源分布，零星的人工种植；当地藏弟农牧民用其茎皮泡酒饮用，新鲜嫩叶炒食和煮汤、用 开水烫后冰箱冷冻胆藏食用一年，认为其可W驱风除湿、强壮筋骨等功效。四川省宇妥藏药 有限公司和西藏自治区昌都、林芝、亚东等地医药公司均W红毛五加为主要原料开发出保 健食品。
[0003] 红毛五为小灌木，主要野生分布在在四川藏弟高山、半高山的脆弱生态环境中，当 地藏弟农牧民每年采集其茎皮或者枝皮30元/公斤左右销售给当地药材收购商，经济价值 小;采取全部割断地上部分的主茎和枝条，然后趁植株茎新鲜时，用木棒敲击，分出茎皮和 枝皮，废弃木屯、部分，该方法对该植物的可持续开发与利用、当地脆弱生态环境中的植被都 是极大的破坏；目前，红毛五加野生植物资源已经越来越少，红毛五加的野生植物资源亟待 在保护的前提下，进行科学、合理开发和综合利用。
[0004] 国内外对于红毛五加的研究主要集中在其茎和根皮，而对具有植被保护和生态环 境保护价值的红毛五加叶的研究较少。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种红毛五加叶提取物及其制备方法和用途。
[0006] 具体地，本发明提供了一种红毛五加叶提取物，它是W红毛五加嫩叶为原料，W 水、醇类溶剂中的一种或两种W上的组合溶剂提取得到。
[0007] 本发明在研究过程中，还将红毛五加嫩叶经过杀青、炒制等工艺制备成茶，在相同 的提取方法和条件下，茶的制备工艺较为繁琐，高溫杀青过程会对样品中的绿原酸等活性 成分造成破坏，因此本发明优选嫩叶为原料。嫩叶提取物在0.2mg/ml W上浓度时，对DPPH、 ABTS+自由基的清除能力与VC相近似。
[000引进一步地，提取方法选自如下之一 ：（1) W水为溶剂进行提取；（2) W醇类溶剂或含 水醇类溶剂进行提取;（3)先W醇类溶剂或含水醇类溶剂进行除杂，再用水提取。
[0009]更进一步地，所述提取方法为：W醇类溶剂或含水醇类溶剂进行提取。目前已经有 报道称红毛五加叶水提物具有一定抗氧化活性，然而，本发明研究发现，采用上述方案制备 的提取物，其抗氧化活性明显优于水提物(尤其是对DPPH自由基的清除能力）。
[0010] 其中，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇或异丙醇。
[0011] 本发明一个【具体实施方式】中，所述醇类溶剂选自乙醇。乙醇浓度选自80~95%v/ V。本发明一个【具体实施方式】中，选用95%v/v乙醇。
[0012] 本发明还提供了一种红毛五加叶提取物的提取方法，该方法选自如下之一 ：（1)W 水为溶剂进行提取；（2) W醇类溶剂或含水醇类溶剂进行提取；（3)先W醇类溶剂或含水醇 类溶剂进行除杂，再用水提取。
[0013] 本发明还提供了上述红毛五加叶提取物在制备提高免疫的保健品或药品中的用 途。
[0014] 进一步地，所述保健品或药品是改善免疫抑制患者的体液免疫功能或/和巨隧细 胞功能的保健品或药品。
[0015] 本发明还提供了上述红毛五加叶提取物在制备具有抗氧化活性的保健品或药品 中的用途。
[0016] 进一步地，所述抗氧化是指清除自由基;更进一步地，所述自由基为DPPH。
[0017] 进一步地，所述红毛五加叶提取物为红毛五加嫩叶的乙醇提取物。其中，乙醇浓度 选自80~95% v/v。本发明一个【具体实施方式】中，选用95% v/v乙醇。该类提取物对DPPH自由 基的清除能力显著优于其他提取物。
[0018] 本发明还提供了一种提高免疫或抗氧化组合物，它是W上述提取物为活性成分制 备而成。
[0019] 组合物中可W根据具体需求添加相应的辅料或辅助性成分，将其制备成各种实用 的剂型。
[0020] 本发明可W采用本领域常规的制剂技术手段或制药方法，将本发明提取物制备成 适当的保健品或药剂形式，包含:糖果、饮料、片剂，注射剂，町剂，栓剂，胶囊剂，膏剂(软膏 剂、乳膏剂），丸剂，植入剂，糖浆剂，雾剂(气雾剂、粉雾剂、喷雾剂），膜剂，颗粒剂，口服溶液 剂（口服混悬剂、口服乳剂），散剂，洗剂(冲洗剂、灌肠剂），搔剂(涂剂、涂膜剂），凝胶剂，贝占 剂等;优选为片剂，胶囊剂，眼用制剂。其中，所述片剂选自含片、舌下片、日腔贴片、狙嚼片、 分散片、可溶片、泡腾片、缓释片、控释片、肠溶片等;所述注射剂选自针剂、输液、冻干粉 针、乳液、植入体、微球制剂、微丸制剂等;所述胶囊剂选自硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释 胶囊和肠溶胶囊等;所述丸剂选自滴丸、糖丸等;所述颗粒剂选自混悬颗粒、泡腾颗粒、肠溶 颗粒、缓释颗粒、控释颗粒等。
[0021] 本发明所述辅料，是指除活性成分W外包含在保健品或药品中的物质，包括但不 仅限于填充剂(稀释剂）、润滑剂(助流剂或抗粘着剂）、分散剂、湿润剂、粘合剂、矫味剂、增 溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄巧 胶、纤维素及其衍生物（如微晶纤维素、簇甲基纤维素钢、乙基纤维素或径丙甲基纤维素 等）、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙締化咯烧酬等;填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍 生物、纤维素及其衍生物、无机巧盐(如硫酸巧、憐酸巧、憐酸氨巧、沉降碳酸巧等）、山梨醇 或甘氨酸等;润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸儀、滑石粉、氨氧化侣、棚酸、氨化植物油、聚乙二 醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物（如簇甲基淀粉钢、淀粉乙醇酸钢、预胶化淀粉、改良淀 粉、径丙基淀粉、玉米淀粉等）、聚乙締化咯烧酬或微晶纤维素等;湿润剂包含十二烷基硫酸 钢、水或醇等;抗氧剂包含亚硫酸钢、亚硫酸氨钢、焦亚硫酸钢、二下基苯酸等;抑菌剂包含 0.5%苯酪、0.3%甲酪、0.5%Ξ氯叔下醇等;调节剂包含盐酸、构祿酸、氨氧化钟(钢）、构祿 酸钢及缓冲剂(包括憐酸二氧钢和憐酸氨二钢)等；乳化剂包含聚山梨醋-80、脂肪酸山梨 坦、普流罗尼克F-68,卵憐醋、豆憐脂等;增溶剂包含吐溫-80、胆汁、甘油等。
[0022] 所述的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述提取物 在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，运些辅助功效仅仅是对该成分已知 活性的利用，是本领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明提取物配合使 用，仍然应属于本发明保护的范围。
[0023] 本发明研究发现，红毛五加嫩叶提取物具有一定的改善免疫功能及抗氧化的作 用，该类生理活性的发现更有利于对红毛五加叶的开发，同时有助于避免对其植株根茎的 破坏。
【附图说明】
[0024] 图1 DPPH清除率散点图 [002引图2 ABTS+清除率散点图
[0026] 图3还原力的比较
【具体实施方式】
[0027] 提取前工艺：
[00%]烘干:将采摘的红毛五加嫩叶置于40°C电热鼓风干燥箱中干燥2天，并且要定期翻 动，达到烘干均匀的效果。
[0029] 制茶:挑选出鲜嫩的红毛五加叶片，去掉叶柄，摊开放置，定期轻翻动2~3次，当 顶叶下垂并失去光泽，手捏有弹性时进行杀青处理;杀青溫度为200°C左右，时间为5min左 右;将杀青后的五加嫩叶采用轻、重、轻的原则，揉抢5~6min，溫度150°C左右，使叶片卷成 条索，破碎叶细胞挤出汁，粘附于叶表面，手摸有润滑粘手的感觉即可;将成形的五加茶置 于不诱钢筛网中装好，厚度为2cm左右，置入烘箱中烘干，溫度设定为40°C，时间lOh，取出即 得。
[0030] 实施例1本发明各提取物的制备
[0031] 水提物的制备：取一定量红毛五加嫩叶，加入10倍量水，浸泡30min，加热至水微 沸，保持化，过滤，滤液待用;取滤渣重复上述操作;合并两次滤液，即得嫩叶的水提物。将水 提物进一步旋转蒸发浓缩至粘稠状，转移至表面皿中，冷冻干燥，即得嫩叶水提物干浸膏。
[0032] 乙醇提取物的制备:取一定量红毛五加嫩叶，加入95%乙醇至样品表面完全浸没， 冷浸提取72h，过滤，滤液待用;滤渣重复上述操作;合并两次滤液，即得嫩叶的乙醇提取物。 将乙醇提取物进一步旋转蒸发浓缩至粘稠状，转移至表面皿中，真空干燥，即得嫩叶的乙醇 提取物干浸膏。
[0033] 醇提后水提物的制备:取醇提后的滤渣，挥干乙醇后按照水提物的制备方法制备， 即得。
[0034] 本发明中，7"表示"或"。
[0035] 下述实施例2、3中使用的提取物如下：
[0036] 红毛五加茶水提物(简称:茶水提物，代号:B1，替换原料后按实施例1方法制备）， 为栋褐色颗粒;红毛五加嫩叶水提物(简称:水提物，代号:B2)，褐色块状物;红毛五加嫩叶 乙醇冷浸提取物(简称：乙醇冷浸提取物，代号:B3)，褐色浸膏;红毛五加嫩叶乙醇冷浸后水 提物(简称:乙醇冷浸后水提物，代号:B4)，褐色浸膏。
[0037] 实施例2本发明提取物对免疫活性调整的研究
[0038] 1、实验动物及环境条件
[0039] 昆明种小鼠，SPF级合格动物，生产许可证号：SCXK(川）2013-19号。由四川省中医 药科学院实验动物研究室提供。
[0040] 本试验在国家中医药管理局二级实验室、四川省中医药管理局Ξ级实验室中药药 理实验室（TCM-2009-325)、四川省中药新药筛选与药理研究中屯、进行，应用设施符合SPF (Ξ)级标准的动物实验室内进行。室内通过自动空调控制室溫在19~2 rC，相对湿度控制 在40~70%。通过自动换气装置调节室内空气。人工控制巧光照明，每天8~20时明，20~8 时暗。实验动物分笼饲养，动物每笼不超过5只，自由饮水，常规全价饲料，定时定量喂养。
[0041] 2、试剂及仪器
[0042] 注射用环憐酷胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：130032812,有效期至： 2015年2月，规格:0.2g X 10瓶;氯化钢注射液(0.9 % )，昆明南疆制药有限公司生产，规格： 500mL:4.5g，批号:C130814A，有效期至:2015年7 月。
[0043] Varioskan Flash全波长扫描式多功能读数仪，美国Thermo Scientific;UV-730 生化分析仪：日本岛津生产;LXJ-64-01离屯、机:北京医疗仪器厂生产;JA1003电子天平，上 海精科天平，d=lmg;邸-3200D电子天平，由日本化imadzu生产，d = 0.01g;YB电子天平，上 海海康电子仪器厂生产，d = 0.1g;RB-200智能热板仪，成都泰盟软件有限公司；手术器械、 秒表、直尺、灌胃针等。
[0044] 3、试验方法
[0045] 3.1红毛五加对小鼠网状内皮系统吞隧廓清能力的影响(碳廓清法）
[0046] 取体重在18~2?小鼠80只，随机分成10组，按下表剂量分别给药或纯水，每天一 次，给药7d后，除对照组外，各组动物肌注环憐酷胺注射液50mg. kg-i，共计2次，第12d给药后 化，每鼠按lOmL.kg-i静脉注射用生理盐水稀释的25%印度墨水，注入墨水后Imin和lOmin， 分别从内赃静脉丛取血20化，并立即将其加到2.OmL 0.1 %化2(X)3溶液中。用分光光度计在 675皿波长处测光密度值(0D)，W化2〇)3溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤 级纸吸干脏器表面血污，分别称重。W吞隧指数表示小鼠碳廓清的能力。按下式计算吞隧指 数K和校正吞隧指数a:
[0047]
[004引同上法重复实验一次，结果见表1、表2。
[0049] 表1红毛五加嫩叶提取物对网状内皮系统吞隧廓清能力的影响（无 ±S )
[(Κ)加 ]
[0化1] 注:冲<0.05，*冲<0.01，与模型组比较，w下同
[0052]表2红毛五加嫩叶提取物对网状内皮系统吞隧廓清能力的影响（重复试验） ('子 ±S)
[0化3]
[0054] 红毛五加嫩叶茶水提物、水提物、乙醇冷浸提取物、乙醇冷浸后水提物8邑生药· kg-i给药12d后免疫抑制小鼠吞隧指数均有较明显的提高，与模型组比较有统计意义(P< 0.05或P<0.01)。提示红毛五加对免疫抑制小鼠网状内皮系统吞隧廓清能力（巨隧细胞功 能)有促进作用。
[0055] 3.2红毛五加对鸡红细胞所诱导小鼠血清溶血素抗体生成的影响
[0056] 取体重在18~2?小鼠100只，随机分成10组，按下表剂量分别给药或纯水，每天一 次，给药12d后，然后每鼠腹腔注射5 %鸡红血球0.2mL免疫。免疫后各组动物继续给药，同时 除对照组外，各组动物肌注环憐酷胺注射液40mg · kg-i，共计3次。小鼠免疫6d后，每鼠从眼 眶取血约0.8mL，3000r/分离屯、，取血清10化加入盛有1. OmL生理盐水的试管内，加入5 %鸡 红血球0.5mL，于水中再加1:10混合豚鼠血清0.5mL，摇匀后置37 °C水浴中30min，取出后冰 水浴终止反应，离屯、后取上清液l.OmL，加血红蛋白稀释液(都氏液)3.0mL混匀，静置lOmin， 在波长处540nm比色，用OD值表示血清溶血素含量。结果见表3。
[0化7] 表3红毛五加嫩叶提取物对鸡红细胞诱导小鼠血清溶血素生成的影响（X ±s )
[0化引
[0059] 红毛五加嫩叶茶水提物、水提物、乙醇冷浸提取物、乙醇冷浸后水提物8邑生药· kg-i给药18d后对免疫抑制小鼠血清溶血素生成有较明显的提高，与模型组比较有统计学意 义(P<0.01或P<0.05)。试验结果表明：红毛五加嫩叶水提物、乙醇冷浸提取物、乙醇冷浸后 水提物4g生药· kg-i给药18d后免疫抑制小鼠血清溶血素生成有一定程度提高，提示红毛五 加嫩叶对免疫抑制小鼠体液免疫反应有促进作用。
[0060] 实施例3本发明提取物抗氧化活性研究
[0061] 机体在生命活动的氧化代谢过程中会不断产生各种活性氧自由基，独立存在，易 损伤组织、引起各种疾病。在正常情况下，机体内的自由基处于动态平衡，但是一旦该平衡 被打破，就会对机体造成损害，从而引发一系列相关疾病，因此需要我们提高防御机制，在 日常生活中增加天然抗氧化剂的摄入量。本试验采用Ξ种体外抗氧化指标比较红毛五加嫩 叶提取物浸膏的对抗氧化活性能力。
[00创 1、仪器、试剂与药材
[0063] 723型可见光光度计（上海光谱仪器有限公司）；Centrifuge 5804R(德国 eppendorf);FA1004N型电子天平(上海菁海仪器有限公司）；800型离屯、沉淀器(上海手术器 械厂）；KH5200B型超声波清洗（昆山禾创超声仪器有限公司）；移液枪（德国eppendort); DZKW-5-4型电热恒溫水浴锅(北京市永光明医疗器械有限公司）；GS(-9420M肥型电热恒溫 鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂）。
[0064] 1，1-二苯基-2-苦阱基(DPPH)、ABTS+、维生素 C、铁氯化钟、Ξ氯化铁、Ξ氯乙酸、憐 酸氨二钢、憐酸二氨钢、丙酬、石油酸、氯仿、甲醇、乙醇、硫酸亚铁、氨氧化钢、盐酸等均为 国产分析纯。
[00化]2、方法
[0066] 2.1清除DPPH自由基能力比较
[0067] DPPH无水乙醇溶液:称取0.004g DPPH，用80%无水乙醇定容至lOOmL容量瓶中，得 到浓度为ο. 〇4mg/mL的DPKl溶液。置于4°C冰箱中，避光保存。
[0068] 样品溶液:分别准确称取红毛五加不同浸膏样品0.200g，用80%无水乙醇溶解，转 移至lOmL容量瓶中，定容，作为样品溶液母液。从母液中准确移取0.01、0.05、0.10、0.20、 0.40、0.60、0.80、1.00、1.201^至101^容量瓶中定容。
[0069] DPPH自由基清除能力的测定：分别取l.OmL不同浓度的红毛五加浸膏样品液于 1 OmL具塞比色管中，依次向其中加入2. OmL DPPH乙醇溶液，为Ai;向1. OmL不同浓度的红毛 五加浸膏样品液中分别加入2 . OmL的80 %无水乙醇，为A2;向2 . OmL DPPH乙醇溶液中加入 1 .OmL的80%无水乙醇，为Aq。振荡混匀后，室溫下避光放置30min后，在516nm处测定吸光 度，W80%无水乙醇做空白对照，平行测定3次，计算清除率，WVc做阳性对照，计算公式如 下：
[0070]
[0071] 式中 Ao: DPPH 溶液(2. OmL) +80 % 无水乙醇（1.0血）
[0072] Ai: DPP田容液（2.0血)+样品溶液（1.0血）
[0073] A2:80 %无水乙醇（2.0血)+样品溶液（1.0血）
[0074] 备注:公式中引入A2是为了消除样品溶液本身颜色对实验测定的干扰。2.2清 [00巧]除ABTS+自由基能力比较
[0076] ABTS+储备液的制备:准确称取37.84mg过硫酸钟，用去离子水溶解并定容至lOmL 的容量瓶中，即得浓度为140mmol/mL的A溶液。
[0077] 准确称取38.40mg ABTS+标品，溶解并转移至lOmL的容量瓶中，向其中加入l.OmL 的A溶液，再用去离子水定容至刻度，在室溫避光条件下静止16h，形成ABTS+储备液，临用时 用去离子水稀释至吸光度为0.698~0.702(取1.OmL ABTS+储备液，稀释至50mL，吸光度值 约为0.7)。
[0078] 样品溶液:称取红毛五加不同的浸膏样品0.20g，用蒸馈水溶解，定容至lOmL容量 瓶中，做为样品溶液母液，从母液中准确移取0.01、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、 1.00、1.20mL至1 OmL容量瓶中定容。
[0079] 清除ABTS+自由基能力比较:分别取1.OmL不同浓度的浸膏样品溶液于lOmL具塞比 色管中，再向其中加入2.OmL的储备液，为Ai;取1.OmL的不同浓度的浸膏样品溶液，再向其 中加入2. OmL的去离子水，为A2;取一只试管向其中加入2 . OmL的储备液和1. OmL的去离子 水，为Ag。震荡混匀后，室溫避光下反应6min，在734nm波长下测定其吸光度。
[0080]
[0081 ]式中 A0:ABTS+储备液(2.0mL)+去离子水（l.OmL)
[0082] A1 :ABTS+储备液(2.0mL)+样品溶液（1 .OmL)
[008：3 ] A2:80 % 无水乙醇（2. OmL) +样品溶液（1. OmL)
[0084] 2.3还原能力的比较
[0085] 样品溶液：称取不同浸膏样品的红毛五加0.20g，用80%无水乙醇溶解，转移至 1 OmL容量瓶中，定容，为母液。
[0086] 0.20mol/L pH = 6.6憐酸盐缓冲液的配制：配制0.20mol/L的憐酸氨二钢lOOmL和 ο. 20mol/L的憐酸二氨钢lOOmL，准确移取37.50mL的憐酸氨二钢和62.50mL憐酸二氨钢至 lOOmL容量瓶中，即配成了抑=6.6的憐酸盐缓冲液。
[0087] 分别移取母液 0.01、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.201^至101^容量 瓶中，定容，为样品液。取样品液2.OmL，分别加入抑=6.6的憐酸缓冲液2.5mL和1 %铁氯化 钟溶液2.5mL，混合后于50°C水浴锅中放置20min，取出后加入10%Ξ氯乙酸2.5mL，而后于 离屯、机中W3000转离屯、lOmin，取上层液2.5mL于lOmL具塞比色管中，然后依次向其中加入 去离子水2.5mL，0.1 氯化铁0.5mL，混匀后静置lOmin，在700皿波长下测定吸光值。平行 巧憶3次，WVc做阳性对照。
[0088] 本实施例中，浓度W浸膏量计算。
[0089] 3结果与分析
[0090] 3.1清除DPPH自由基能力比较
[0091] 表4 DPPH清除率(IC50)
[0092]
[0093] 通过图1和表4表明：不同制备方法所得浸膏样品对于DPPH自由基均有较强的清除 能力，且随着样品浓度的增加，其清除能力也逐渐增强，当样品浓度为〇.4mg/mL时，样品对 于DPPH的清除率达到最大值，进一步增大样品浓度，样品对于DPPH自由基的清除率均趋于 平衡不再增大;Vc对于DPPH的最大清除率为94.5 % ;红毛五加嫩叶醇浸提物对于DPPH的清 除率其次，最大清除率可达92.5%;五加茶水提物浸膏对于DPPH自由基的最大清除率值最 低，但是也可W达到86.4 %，其1C日日值为0.079mg/mL。
[0094] 3.2清除ABTS+自由基能力比较
[0095] 表5 ABTS+清除率1C己0
[0096]
[0097] 如图2和表5所示:不同制备方法所得浸膏样品对于ABTS+自由基均有较强的清除 能力，且随着样品浓度的增加，其清除能力也逐渐增强，当样品浓度为〇.4mg/mL时，样品对 于ABTS+的清除率达到最大值，进一步增大样品浓度，样品对于ABTS+自由基的清除率均趋于 平衡不再增大;Vc对于DPPH的最大清除率为99.8%，其IC50值为0.003mg/mL红毛五加嫩叶 醇浸提物对于ABTS的最大清除率也可W达到99.8%;红毛五加嫩叶水提物浸膏对于DPPH自 由基的最大清除率相对较低，为98.8%，其IC50值为0.0176111邑/1^;红毛五加茶水提物对于 ABTS+的最大清除率较嫩叶水提物高，但是其IC5G最高，为0.0213mg/mL。
[0098] 3.3还原能力的比较
[0099] 如图3所示，不同制备方法所得浸膏样品对于铁离子均有较强的还原能力，且随着 样品浓度的增加，其还原能力逐渐增大。Vc的还原能力最强，当浓度为l.Omg/mL时，吸光度 值为3.765;红毛五加嫩叶醇浸提后水提物样品的还原能力其次，在浓度为l.Omg/mL时，吸 光度值为1.918;红毛五加茶水提物样品的还原能力最弱，在浓度为l.Omg/mL时，吸光度值 为 1.163。
[0100] 4 小结
[0101] 本试验采用多种体外抗氧化方法比较红毛五加不同浸膏样品进行体外抗氧化活 性能力，试验结果表明：所有样品均有较好的清除DPPH、ABTS+自由基的能力，其中，嫩叶醇 提物对DPPH自由基的清除能力最强，且与阳性对照VC相当；各提取物对ABTS+自由基的清除 能力较为相似，且与阳性对照VC相当。
[0102] 采用铁离子还原法比较红毛五加各样品的还原能力，其还原性W嫩叶醇提物略 强。
[0103] 巧中评价指标结果均表明：
[0104] (1)红毛五加各样品随着其对应浓度增加抗氧化能力增强，呈较好的量效关系。
[0105] (2)嫩叶醇提物的抗氧化功效优于其他各提取物(尤其是对DPPH自由基的清除能 力），且令人意外的是，该提取物在0.2mg/ml W上浓度时，对DPPH、ABTS+自由基的清除能力 都与阳性对照VC相当，表现出了极强的自由基清除能力。
【主权项】
1. 一种红毛五加叶提取物，其特征在于：它是以红毛五加嫩叶为原料，以水、醇类溶剂 中的一种或两种以上的组合溶剂提取得到。2. 根据权利要求1所述的红毛五加叶提取物，其特征在于:提取方法选自如下之一 ：（1) 以水为溶剂进行提取；（2)以醇类溶剂或含水醇类溶剂进行提取；（3)先以醇类溶剂或含水 醇类溶剂进行除杂，再用水提取。3. 根据权利要求2所述的红毛五加叶提取物，其特征在于:所述提取方法为：以醇类溶 剂或含水醇类溶剂进行提取。4. 根据权利要求1~3所述的红毛五加叶提取物，其特征在于:所述醇类溶剂选自甲醇、 乙醇或异丙醇。5. 根据权利要求4所述的红毛五加叶提取物，其特征在于:所述醇类溶剂选自乙醇;进 一步地，所述乙醇的浓度为80~95 % v/v。6. 权利要求1~5任意一项所述红毛五加叶提取物在制备提高免疫的保健品或药品中 的用途。7. 根据权利要求6所述的用途，其特征在于:所述保健品或药品是改善免疫抑制患者的 体液免疫功能或/和巨噬细胞功能的保健品或药品。8. 权利要求1~5任意一项所述红毛五加叶提取物在制备抗氧化的保健品或药品中的 用途。9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于:所述抗氧化是指清除自由基;进一步地，所 述自由基为DPPH或/和ABTS+。10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述红毛五加叶提取物为红毛五加嫩叶 乙醇提取物。
【文档编号】A23L33/00GK105920063SQ201610258072
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月25日
【发明人】刘圆, 陈奕君, 赵薇, 李利民
【申请人】西南民族大学, 刘圆