用于治疗肺高压的组合物和方法

用于治疗肺高压的组合物和方法
【专利摘要】在一些方面，本发明教导了包含TGF?β配体捕获剂的药物组合物，以及使用TGF?β配体捕获剂来治疗、预防肺高压(PH)或降低肺高压(PH)的进展速度的方法。本发明还提供了使用TGF?β配体捕获剂来治疗、预防多种病症或降低多种病症的进展速度的方法，所述病症包括但不限于：肺血管重塑、肺纤维化、右心室肥厚、与过度的TGF?β信号传导有关的疾病、与过度的GDF15信号传导有关的疾病以及与过度的PAI?1信号传导有关的疾病。本发明进一步提供了使用TGF?β配体捕获剂来降低受试者中的右心室收缩压的方法。
【专利说明】
用于治疗肺高压的组合物和方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 根据35U .S.C.119(e)，本申请要求2013年11月21日提交的美国临时专利申请系列 号61/907，260的权益，W引用的方式将其各自的内容整体并入本文。
[0003] 关于联邦赞助研究的声明
[0004] 本发明是在NIH授予的5R01AR057374的政府支持下作出的。政府对本发明享有一 定的权利。
技术领域
[0005] 本发明大体上设及医学领域W及屯、血管疾病和肺部疾病领域。
【背景技术】
[0006] 将本文中的所有出版物W引用的方式并入，其程度如同将每个单独的出版物或专 利申请具体且单独地指示为W引用的方式并入一样。下面的描述包括对于理解本发明可能 有用的信息。运并不是承认本文提供的任何信息都是现有技术或者与目前所请求保护的发 明相关，或者任何明确或隐含地引用的出版物都是现有技术。
[0007] 通过配体结合至细胞表面受体W及过度/异常活跃的信号传导出现了许多病理过 程和不期望的生物过程。因此，旨在降低或者有利地调制此类结合和信号传导的组合物和 方法可W是有用的。
[000引TGF-β超家族包括许多具有生物学意义的配体。TGF-β和活化素在许多疾病（包括 不受控的纤维化和癌症的进展，例如肾、肺和肝纤维化疾病）中发挥重要的致病作用。肌肉 生长抑制素(myostatinVGDW是与活化素有关的另一重要配体，该配体共享结合至相同的 II型受体(活化素 Rllb)。肌肉生长抑制素是骨骼肌生长的强力抑制剂，而且是用于肌肉萎 缩疾病(诸如肌营养不良症）的经过验证的治疗祀点。TGF-β家族中的额外的配体包括牵设 在屯、血管疾病中的骨形态发生蛋白（BMP)。例如，高水平的BMP2和BMP4均已在巧化的动脉粥 样硬化斑块和病态的主动脉瓣中发现。
[0009] 已开发了方法用来通过捕获配体并防止其与细胞表面受体的相互作用来减少配 体结合。W此种配体为祀标的主要试剂是对配体进行结合并隔离（sequester)的配体捕获 剂/括抗剂。两种实例是：（1)抗-配体抗体;W及(2)可溶性受体胞外结构域。
[0010] 已报导了使用直接捕获并中和配体的抗-配体抗体来抑制一些配体。受体胞外结 构域的可溶形式通过结合至配体、并防止配体与细胞表面受体相互作用来直接括抗配体。 在TGF-β的情况中，在动物模型中，TGF-β受体II型(邱RII)胞外结构域化D)的表达部分恢复 了宿主免疫并促进了肿瘤清除，表明受体胞外结构域介导的TGF-β的中和抑制了肿瘤的进 展。不幸的是，已表明就括抗TGF-β而言，单价邱RII-抓的功效低于最佳功效。克服运一问题 的尝试使得产生邱RII-抓的二价人工二聚化形式，经由融合至卷曲螺旋结构域或IgG的化 结构域发生二聚化。此种二聚化改善了括抗作用。已表明邱RII-抓的非共价二聚化(例如， 经由融合至异源二聚化的螺旋链(卷曲螺旋邱RII-ED))极大地增强了邱RII-抓的括抗效力 (De Crescenzo等，2004,J.Biol.Chem.279:26013)。卷曲螺旋融合二聚体的显著缺点是二 聚化结构域的非共价性质限制了它的效力，即该二聚体在低浓度下解离，从而使螺旋融合 的受体胞外结构域的大部分将被用作单体而非二聚体。IgG的Fc结构域的使用提供了共价 相互作用，但W大的尺寸为代价。
[0011] 重要的是，迄今开发出的用于治疗PH的TG邱RI抑制剂的临床部署的障碍之一是毒 性，包括出血性瓣膜坏死。
[0012] 鉴于到目前为止尝试的治疗手段的缺点，在本领域中明确地需要能够括抗配体活 性、并有潜力作为治疗试剂或诊断(成像或非成像)试剂的基于受体的捕获剂/中和剂，W用 于由本文所述的祀标配体的过度产生/活性引起的疾病/障碍。

【发明内容】

[0013] 结合系统、组合物和方法对如下实施方式及其方面进行描述和说明，其意在示例 和说明，而并不对范围进行限制。
[0014] 本发明的多个实施方式描述了包含TGF-β配体捕获剂的药物组合物。在一些实施 方式中，TGF-β配体捕获剂是可溶性重组TGF-的I型受体化-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。在一些 实施方式中，TGFBRII-Fc融合蛋白包含与SEQ ID N0:1的氨基酸序列至少80%、85%、90%、 95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的氨基酸序列;或者由与569 10^:1的氨基酸序 列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同的氨基酸序列组成。
[0015] 本发明的多个实施方式描述了用于治疗、预防受试者中的肺高压(PH)或降低受试 者中的肺高压(PH)的进展速度(progression rate)的方法。在一些实施方式中，该方法包 括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的PH或降低受试 者中的PH的进展速度。
[0016] 本发明的多个实施方式描述了治疗、预防受试者中的肺血管重塑或降低受试者中 的肺血管重塑的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效 量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的肺血管重塑或降低受试者中的肺血管重 塑的进展速度。
[0017] 本发明的多个实施方式描述了治疗、预防受试者中的肺纤维化或降低受试者中的 肺纤维化的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的 TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的肺纤维化或降低受试者中的肺纤维化的进展 速度。
[0018] 本发明的多个实施方式描述了治疗、预防受试者中的右屯、室肥厚或降低受试者中 的右屯、室肥厚的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效 量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的右屯、室肥厚或降低受试者中的右屯、室肥 厚的进展速度。
[0019] 本发明的多个实施方式描述了治疗、预防受试者中的与过度的TGF-β信号传导有 关的疾病或降低受试者中的与过度的TGF-β信号传导有关的疾病的进展速度的方法。在一 些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防 受试者中的所述疾病或降低受试者中的所述疾病的进展速度。
[0020] 本发明的多个实施方式描述了治疗、预防受试者中的与过度的GDF15信号传导有 关的疾病或降低受试者中的与过度的GDF15信号传导有关的疾病的进展速度的方法。在一 些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防 受试者中的所述疾病或降低受试者中的所述疾病的进展速度。
[0021] 本发明的多个实施方式描述了治疗、预防受试者中的与过度的PAI-1信号传导有 关的疾病或降低受试者中的与过度的PAI-1信号传导有关的疾病的进展速度的方法。在一 些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防 受试者中的所述疾病或降低受试者中的所述疾病的进展速度。
[0022] 本发明的多个实施方式描述了降低受试者中的右屯、室收缩压的方法。在一些实施 方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而降低受试者中的右 屯、室收缩压。
[0023] 本发明的多个实施方式描述了对受试者中的TGF-β配体进行成像/检测的方法，该 方法包括向受试者给予一定量的连接至成像分子的TGF-β配体捕获剂。
【附图说明】
[0024] 在参考的附图中对示例性的实施方式进行说明。本文公开的实施方式和附图意图 被视为说明性的、而非限制性的。
[0025] 图1A至图化是表明根据本发明的实施方式大鼠中的野百合碱(MCT)诱发的肺高压 与增高的PAI-1和降低的Idl转录活性有关的图表。在用MCT(40mg/kg SC)处理Sprague Dawl巧大鼠之后，定期对在右屯、室收缩压(RVSP，图1A)和右屯、室肥厚(RVH，图1B)方面的变 化进行测量。通过右屯、室导管插入术对RVSP进行测量，并通过右屯、室(RV)游离壁的重量对 左屯、室和间隔壁(LV+S)的总和的比例确定RVH(每个时间点η = 3)。经MCT处理的大鼠的肺的 定量RT-PCR显示升高的ΡΑΙ-1转录(反映了增高的TGF-β信号传导）（图1C)，PAI-1转录的水 平与基于RVSP的PH程度直接相关（图1D和图化）。相反，观察到Bmpr2W及其转录祀标Idl的 表达降低，两者都具有与RVSP负相关的水平。（n = 5-6，*p<0.05和*卸<0.01相较于对照大 鼠）。
[0026] 图2A至图2F示出了免疫印迹和图表。图2A-图2C表明根据本发明的实施方式 TGFBRII-Fc在人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)中选择性地抑制TGFf31、TG邱3和GDF15的信号传 导。将经培养的PASMC去除血清，并与多个浓度的BMP4、TGFf31、TG邱2、TG邱3和GDF15配体一 起解育30分钟。实施Western印迹和qPCR，W评估TGFBRII-Fc在体外对信号传导活性进行调 制的能力。图2D-图2F表明根据本发明的实施方式TGFBRII-化选择性地抑制血管平滑肌细 胞中的TG邱1与GDF15信号传导。（图2D)将人主动脉平滑肌细胞去除血清并过夜，然后与所 示浓度的81?4、了6即1、了6即2或60。15 -起解育30分钟，并如所示出的，通过免疫印迹对 Smadl、Smad2、Smad3和Smad5的憐酸化进行分析。TGFPl、TG邱巧日GDF15 W剂量依赖的方式引 起Smad2和Smad3的活化、并引起Smadl和Smad5活化较小程度，而BMP4仅活化Smadl和Smad5。 (图沈-图2F)将HASMCs去除血清，并用TGFBRII-Fc(2000ng/ml)或辅料预处理，随后与TG邱1 (lng/ml)、TGFe2(lng/ml)或 GDF15(30ng/ml) -起解育 2 小时。通过 qRT-PCR 的基因表达分析 显示GDF15和TG邱1-诱发的PAI-1和IdlmRNA表达得到有效抑制，但TG邱2诱发的PAI-1和 IdlmRNA表达未得到有效抑制(各自η = 3-5个样品，*p<0.05，**p<0.01相较于辅料）。
[0027] 图3A至图3D是表明根据本发明的实施方式低剂量的TGFBRII-化处理引起降低右 屯、室收缩压（RVSP)的趋势、降低右屯、室肥厚的趋势W及显著降低肺血管重塑的趋势的图 表。在用或不用TGFBRII-化(5mg/kg，每周两次）的条件下，经MCT处理3周后，通过在用戊己 比妥麻醉的条件下的导管插入术和气管内插管，W盲法对大鼠进行分析，从而确定RVSP(图 3A)、体循环动脉压（未示出），并将大鼠进行安乐死。基于化1 ton ' S比例（RV/化V+S))的测 量，W盲法对RVH的程度进行评估（图3B)。将值表示为平均值±SEM，n = 6-8，*p<0.05和**p< 0.01(相较于对照大鼠）。用α-平滑肌肌动蛋白和血管性血友病因子对肺组织切片进行染 色，W分别识别血管平滑肌血管和内皮。对远端腺泡内血管(直径10皿-50皿)的肌肉化进行 定量，并对无肌肉化血管、部分肌肉化血管和完全(周向）肌肉化血管的百分比进行计算（图 3C)。对全部的完全肌肉化的腺泡内血管(直径10μπι-50皿，图3D)的内侧壁厚度进行计算。将 壁厚指数计算为：指数=(外径-内径)/外径XlOOeTGFBRII-Fc处理(5mg/kg，每周两次）引 起降低完全肌肉化血管的百分比的趋势W及显著降低内侧壁厚度指数的趋势。将值表示为 平均值± SEM，η = 100-150个血管/处理组(各自来自6-8只大鼠），P值如图所示。
[002引图4Α至图4D示出了表明根据本发明的实施方式高剂量的TGFBRII-化处理减弱了 右屯、室收缩压（RVSP)、右屯、室肥厚、并防止肺血管重塑的图表。在用或不用TGFBRII-Fc (15mg/kg，每周两次）的条件下，经MCT处理3周后，W盲法对大鼠进行分析，W确定RVSP(图 4A)。基于化Iton's比例的测量，W盲法对RVH的程度进行评估（图4B)。将值表示为平均值± SEM，η = 6-8。对远端腺泡内血管(直径10μπι-50μπι)的肌肉化进行定量（图4C)。对全部的完全 肌肉化的腺泡内血管（直径10μπι-50μπι，图4D)的内侧壁厚度进行计算。TGFBRII-Fc处理 (15mg/kg，每周两次）显著降低了完全肌肉化血管的百分比、并降低了内侧壁厚度指数。将 值表示为平均值±861，11 = 89-127个血管/处理组(各自来自6-8只大鼠），*p<0.05和***p< 0.001相较于对照大鼠。
[0029] 图5A至图加示出了表明根据本发明的实施方式TGFBRII-化减弱了超声屯、动图的 RV肥厚的图表。在MCT(40mg/kg SC)处理后，在MCT后24小时开始用辅料或TGFBRII-Fc (15mg/kg，每周两次)对大鼠进行处理。在MCT 2周后，在用1.5%异氣烧麻醉的条件下，通过 小动物超声检查对大鼠进行分析，W测量右屯、室厚度和舒张期内径（图5A和图5B)、肺血流 加速时间（PAT，图5C)W及肺射血时间（PET，图加）。将值表示为平均值±SEM，n = 6-8，*p< 0.05和***p<0.001相较于对照大鼠。
[0030] 图6A至图6F是表明根据本发明的实施方式P胡市组织中的TGFBRII-Fc抑制的TGW- 介导的转录的图表。MCT-诱发的PH与TG邱1的适度增高和TG邱2mRNA表达的显著降低相关 (图6A-图6C) dMCT处理之后，Bmpr2和Idl表达的阻抑未受到TGFBRII-Fc的影响（15mg/kg每 周两次，图抓-图6E)，而用TGFBRII-Fc处理使得TG邱1及其转录祀标PAI-1显著降低（图6F)。 将值表示为平均值± SEM，n = 3-5，*p<0.05和**p<0.01相较于对照。
[0031] 图7A至图7C是表明根据本发明的实施方式在PH确立之后用TGFBRII-化处理同根 据本发明的多个实施方式的死亡率和PH的部分复苏有关的图表。在用MCT(40mg/kg SC)处 理之后，W延迟的方式在PH确立后的第17天开始用TGFBRII-FC(15mg/kg每周Ξ次)对大鼠 进行处理。相较于用辅料处理的大鼠（每组n=12，p = 0.10)，Kaplan-Meie;r分析（图7A)显示 出在经TGFBRII-Fc处理的组中的改善的存活趋势。在第35天的存活动物中，在用TGFBRII- 化处理的动物中存在显著降低的RVSP(图7B)。然而，在存活的动物中，在RVH方面不存在显 著差异（图7C)。示出的值为平均值± SEM，每组η = 8-11，**p<0.01相较于对照。
[0032] 图8A和图8B示出了人IgGl、IgG2、IgG3和IgG4較链（图8A)W及Fc(图8B)结构域的 氨基酸序列。IgGl較链结构域(SEQ ID N0:65);IgG2較链结构域(SEQ ID N0:66);IgG3較链 结构域(SEQ ID N0:67);IgG4較链结构域(SEQ ID N0:68);图8BW与图8A相同的顺序示出： IgGlFc结构域(SEQ ID N0:69)，即氨基酸序列的第一行；IgG2Fc结构域(SEQ ID N0:70)，即 氨基酸序列的第二行；IgG3Fc结构域(SEQ ID N0:71)，即氨基酸序列的第兰行；IgG4Fc结构 域(SEQ ID N0:72)，即氨基酸序列的第四行。根据Kabat EU编号系统对图8A和图8B中示出 的氨基酸残基进行编号。通过将各自較链区域的第一个和最后一个半脫氨酸残基(其形成 重链间S--S键)置于相同的位置，将同种型序列与IgGl序列进行比对。就图8B而言，CH2结构 域中的残基由加号(+ )表示，而CH3结构域中的残基由波浪线表示。可将任何Fc结构域用于 本发明的方法中，如在向多种Fc结构域提供指导的图8中所述，可对全部的抗体序列进行比 对。
[0033] 图9A至图9B示出了表明响应于TGFBRII-Fc处理而无二尖瓣重塑、退行性病变或异 常的组织切片。图9A为对照。图9B为经TGFBRII-Fc-处理。
【具体实施方式】
[0034] 本文中引用的所有参考文献都^引用的方式整体并入本文进行充分阐述。除非另 外定义，否则本文使用的科技术语具有与本发明所属领域中的普通技术人员通常所理解的 相同白勺含义DSingleton等，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology，第3 片反，J.Wiley&Sons(New York，NY 2001);March，Advanced Organic Chemistry 民eactions， Mechanisms and Structure,第5版，J.Wiley&Sons(New York,NY 2001); 1^及53111131'〇〇1^和 民ussel，Molecular Cloning : A Laboratory Manual，第3片反，Cold Spring Harbor Laboratoiy Press(Cold Spring Harbor,NY 2001)，为本领域技术人员提供了本申请中使 用的许多术语的通用指导。
[0035] 关于如何制备抗体的参考文献，参见例如D · Lane，Antibodies : A LaboratoiT Manual(Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor NY，1988);Kohler和Milstein， (1976)Eur.J. Immunol .6:511 ;Queen等，美国专利号5,585,089; 1^及1^6(31111131111 等，Nature 332:323(1988)。除非另有说明，本发明的实践将采用本领域的技术范围之内的分子生物学 (包括重组技术）、微生物学、细胞生物学、生物化学、核酸化学和免疫学的常规技术。在文献 中对此类技术进行了充分地阐释，例如，Current Protocols in ImmunologyQ.E.Coligan 等编著，1999,包括 2011 年的补充）；Current Protocols in Molecular Biology (F.M.Ausubel等编著，1987,包括2011 年的补充）；Short Protocols in Molecular Biology，F.M.Ausubel等编著，第五版2002,包括2011年的补充；Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第S版（Sambrook和Russel,2001);PCR:The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等编著，1994) ;The Immunoassay Handbook(D.Wild编著，Stockton Press NY, 1994) ；Bioconjugate Techniques(Greg T.Hermanson编著，Academic Press， 1996);Methods of Immunological Analysis(R.Masseyeff，W.H.A化6別和N.A.Staines编 著，Weinheim:VCH Verlags gesellschaft mbH，1993)，Harlow and Lane Using Antibodies：A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press , Cold Spring Harbor，N.Y. ,1999; 1^及86311〇3容6等编著，Current Protocols in Nucleic Acid Qiemistry John Wiley&Sons公司，New York,2000)。
[0036] 本领域技术人员将认识到可用于本发明的实践中、与本文描述的方法和材料类似 或等同的许多方法和材料。本发明的其它特征和优势将根据结合附图进行的如下详细描述 而变得显而易见，所述附图通过示例的方式说明本发明的实施方式的多个特征。实际上，本 发明并不限于所描述的方法和材料。出于本发明的目的，下面对一些术语进行定义。
[0037] "有益结果"可包括但不W任何方式限于减轻或缓解疾病病症的严重程度、防止疾 病病症恶化、治疗疾病病症、防止疾病病症发展、降低患者发展疾病病症的机会W及延长患 者的寿命或预期寿命。在多个实施方式中，疾病病症是肺高压、肺血管重塑、肺纤维化、右屯、 室肥厚、与过度的TGF-β信号传导有关的疾病、与过度的GDF15信号传导有关的疾病W及与 过度的PAI-1信号传导有关的疾病。
[0038] 如本文所使用的"治疗/处理"指的是治疗性的治疗/处理和预防性或防范性措施， 其中，目标是减缓(减轻)祀向的病理病症、预防病理病症、追求或获得有益结果、或即使治 疗最终不成功也会降低个体发展病症的机会。需要治疗/处理的对象包括已患有病症的对 象W及易于患有病症的对象、或在其中待对病症进行预防的对象。
[0039] 如本文所使用的"肺高压"（PH)可包括肺动脉(肺动脉高压）、肺静脉或肺毛细血管 (一起被称为肺脉管系统）中的血压的增高，导致呼吸急促、头晕、昏厥、下肢肿胀W及其它 症状。PH可W是伴随有显著降低的运动耐量W及屯、力衰竭的严重疾病。PH可W是至少五种 不同的可能类型中的一种，包括:动脉PH、静脉PH、缺氧性PH、血栓栓塞性PH或混杂性PH。
[0040] 如本文所使用的"TGF-β配体捕获剂"指的是能够捕获TGF-β配体（即使仅瞬时地）， 从而调制配体与一种或多种额外的分子相互作用的能力的蛋白质。
[0041 ] 在一些实施方式中，TGF-β配体可意味着选自TGF-m、TGF-e2、TGF-03和GDF 15中 的配体。
[0042] TGF-β配体捕获剂的实例包括但不W任何方式限于可溶性重组TGF-β受体化-融合 蛋白，其包含TGF-β受体的TGF-β配体结合结构域和免疫球蛋白的Fc结构域。
[0043] 因此，在一个实施方式中，提供了治疗、预防受试者中的肺高压(PH)或降低受试者 中的肺高压(PH)的进展速度的方法。该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕 获剂，从而治疗、预防受试者中的PH或降低受试者中的PH的进展速度，其中TGF-β配体捕获 剂包含：1 )TGF-i3受体的TGF-β配体结合结构域;2)免疫球蛋白的化结构域；W及3)任选的在 配体结合结构域和Fc结构域之间的接头(免疫球蛋白接头或其它接头）。
[0044] 在一个实施方式中，TGF-β受体的TGF-β配体结合结构域包含SEQ ID N0:63、或其 部分、或其变体:?ΡΡΗ V0KSV NN DΜIVTDNN GAVKFPQLCK FCDV 艮 FSTCD NQKSCMSNCS ITSiCEKPQE VCVAVW 民 KND ENiTLETVCH DPKLPYHDFl LEDAASPKCi MKEKKKPGET FFMCSCSSDE CNDNilFSEE YNTSNPD (SEQ ID NO: 63)。
[0045] 在一个实施方式中，TGF-β受体的TGF-β配体结合结构域包含SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:4、或SEQ ID NO:5、或其部分、或其变体。
[0046] 在一个实施方式中，Fc结构域包含SEQ ID N0:64、或SEQ ID N0:64的部分/片段、 或其变体。沈Q ID N0:61:ECPPCPAP P-VAGPSVFLF PPKPKDTLMi S 民 TPEVTCVV VDVSHE；DPE￥ QFNWYVDGVE VHNAKTKP 民 E EQFNSTF 民 VV SVLTVVHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPAPIE KTISKTKGQP REPQVYTLPP S 民 EEM 下 KNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPMLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK (SEQ ID NO: 64)。
[0047] 进一步而言，图8B中描述了示例性的Fc结构域，例如SEQ ID N0:69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID N0:71和沈Q ID N0:72。在一些实施方式中，Fc结构域包含沈Q ID N0:69、SEQ ID N0:70、SEQ ID N0:71、或沈Q ID N0:72,或者包含沈Q ID N0:69的片段、SEQ ID N0:70 的片段、SEQ ID N0:71的片段、或沈Q ID N0:72的片段、或者沈Q ID N0:69的变体、SEQ ID NO:70的变体、SEQ ID NO:71的变体、或SEQ ID NO:72的变体。
[0048] 按照本文的公开内容，对合适的结合结构域进行选择在本领域普通技术人员的能 力之内。在一些实例中，结合结构域可选自TGF-的型受体和TGF-βΠ 型受体的胞外结构域。 一个非限制性实例是可溶性重组TGF-的I型受体Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。
[0049] 在进一步的实例中，从其出发设计多肤结合结构域的天然受体可W是邱R-I-邸或 邱R-n-邸。
[0050] 在一个实施方式中，TG邱受体的TGF-β配体结合结构域包含TGF-βΙ型受体胞外结 构域的序列、或胞外结构域的部分;例如SEQ ID NO:73或其部分， GVQVETISPG DGRTFPKRGQ TCVVHYTGML EDGKKFDSS 民 DRNKPFKFML GKQEVIRGWE EGVAQMSVGQ RAKLT1SPDY AYGATGHPGI IPPHATLVFD VELLKLEC SE〇 ID NO: 73)；
[0化1 ] 或者例如沈Q ID NO: 74、或其部分/ j 'I.段，EDPSLDRPFl:沒EGTTLK：丘LI YDMTTSGSGS GLPLLVQ 民 Τ? A 民 TIVLQESl GKG 民 FGEVW 民 GKWRGEEVAV KIFSS 民 EERS WFREAEIYQT VMLRHENILG FiAADNKDNG TWTQLWLVSD YHEHGSLFDY LNRYTVTVEG MIKLALSTAS GLAHLHMEiV GTQGKPAIAH RDLKSKNILV KKNGTC 幻 AD LGLAVRHDSA TDTIDIAPNH RVGTKRYMAP EVLDDSINMK HFESFKRADI YAMGLVFWEI AR 民 CSIGGIH EDYQLPYYDL VPSDPSVEEM RKVVCEQKL 民 PNIPN 民 WQSC EAL民VMA脚M RECWYANGAA RLTAL民胀KT LSQLSQQBGi KM (SEQ 1D NO: 74)(链A，无化bp 12而结晶的未憐酸化的TGF-的型受体的细胞质结构域，GenBank 登录 1IAS_A 01:15988007)。
[0052]在一个实施方式中，TG邱受体的TGF-β配体结合结构域包含邱R-III-邸的序列、或 沈Q ID N0:75的部分；MTSHYVIAIF ALMSSCLATA GPEPGALCEL SPVSASHPVQ ALMESFTVLS GCASRGTTGL PQEVHVLNLR TAGQGPGQLQ 民EVTLHLNPl SSVHiHHKSV VFLLNSPHPL VWHLKTE 民 LA TGVSRLFLVS EGSVVQFSSA NFSLTAETEE 民 NFPHGNEHL LNWARKEYGA VTSFTELKIA 民 NIYIKVGED QVFPPKCNIG KNFLSLNYLA EYLQPKAA 巨 G CVMSSQPQNE EVHIIELITP NSNPYSAFQV DITIDIRPSQ EDLEVVKNLI LILKCKKSVN VVVIKSFDVKG SLKllAPNSI GFGKESERSM TMTKSI 民 DDI PSTQGNLVKW ALDNGYSPIT SYTMAPVANR FHL 民 LENNEE MGDEEVHTIP PELRILLDPG ALPALQNPPi 艮 GGEGQNGGL PFPFPDISR 民 VWNEEGEDGL P 民 PKDPVIPS IQLFPGL 民 EP EEVQGSVDIA LSVKCDNEKM IVAVEKDSFQ ASGYSGMDVT LLDPTCKAKM NGTHFVLESP LNGCGT 民P 艮 W SALDGVVYYN SiVIQVPALG DSSGWPDGYF. DLESGDNGFP GDMDEGDASL FTRPEIVVFN CSLQQVRNPS SFQEQPHGNi TFNMELYNTD LFLVPSQGVF SVPENGHVYV EVSVTKAEQE LGFAIQTCFi SPYSNPDRMS HYTIIENICP KDESVKFYSP KRVHFPIPQA DMDKK 民 FSFV FKPVFNTSLL FLQCELTLCT KMEKHPQKLP KCVPPDEACT SLDASliWAM MQNKKTFTKP LAVIHHEAES KEKGPSMKEP NPISPPIFHG LDTLT 、'SEQ !D NO: ^)(化称为可溶性TGF-β受体III，例如，在如下中对人重组可溶性TGF-fcR III进行了描述：Moren A等，Molecular cloning and characterization of the human and porcine transforming growth factor-beta type III receptors，1992， J.Biochem.Bic^hys.Res.Commun.189(1),356-362)〇
[0053] 在如下中对重组可溶性TGF-邮II型cDNA进行了描述：Melissa A.Rowland- Goldsmith等，Soluble Type II Transforming Growth Factor-0(TGF-0)Receptor Inhibits TGF-0Signaling in COL〇-357Pancreatic Cancer Cells in Vitro and Attenuates Tumor F'ormationlJOOUClin Cancer Res,7:2931。将人邱RII的完整cDNA用 作邱RII的细胞外结构域的编码序列(包含信号序列的核巧酸1-477)的PCR扩增的模板。使 用正义引物（5'-AAGCTTGCCGCCGCCATGGGTCG(SEQ ID N0:76))和反义引物（5'- CTGGAATTCGTCAGGATTGCTGG(SEQ ID N0:77))实施PCR。沈Q ID N0:78是II型转化生长因子- iKTGF-β)受体细胞外结构域的实例： Μ 妇 R(3LL 民 GLW PLHIVLWTRI A 沒 TIPPHVQK SVNNDMIVTD NNGAVKFPQL CKFCDVRFST CDNQKSCMSN CSITSICEKP QEVCVAVWRK NDENITLETV CHDPKLPYHD FILEDAASPK CiMKEKKKPG ETFFMCSCSS DECNDNMFS EEYNTSNPDL LLVIFQVTGI SLLPPLGVAI SVIllFYCYR VN 民 QQKLSST WETGKTRKLM EFSEHCAIiL EDDRSDISST CANNINHNTE LLPIELDTLV GKG 民 FAEVYK AKLKQNTSEQ FETVAVKIFP YEEYASWKTE KDIFSDINLK HENILQFLTA EE 民 KTELGKQ YWLITAFHAK GNLQEYLTRH VISWF,DLRKL GSSLARGiAH LHSDHTPCG 民 PKMPIVH 民 DL KSSNMLVKND LTCCLCDFGL SLRLDPTLSV DDLANSGQVG TARYMAPEVL ES 民 MNLENVE SFKQTDVYSM ALVLWEMTSR CNAVGEVKDY EPPFGSIC (SEQ ID NO 78)。
[0054] TG邱受体的完整细胞外部分通常包含位于其折叠的配体结合结构域两侧的非结 构化部分。运些非结构化的细胞外部分从如下显而易见:可从PDB数据库获得的实验确定的 3D结构(Berman等，2000，Nucl. Acid Res. 28:235)(例如，I型TGF-β受体胞外结构域(Groppe 等，2008，Mol .Cell 29: 157)或II型TGF-β受体胞外结构域的晶体结构（Hart等， 2002化t. Struct .Biol.9:203; Boesen 等，2002，Structure 10 : 913 ;G;roppe等，2008， Mol.Cell 29:157))、或11型了6。-0受体胞外结构域的醒3结构（〇6邱等，2〇〇3,81〇油611113付7 42:10126)。本领域技术人员精通于识别TGF-β受体的配体结合结构域。就TGF-β配体捕获剂 而言，可使用本领域技术人员公知的标准配体结合分析法(例如放射配体结合分析法)对配 体的结合进行确认（参见例如Si ttampalam , G . S . ; Kahl ,S.D. iJanzen.W.P.High- throughput screening:Advances in assay technologies,1997,Current Opinion in Qiemical Biology 1(3) :384-391 及De Jong,L.A.A.等，Receptor-ligand binding assays:Technologies and Applications,2005,Journal of Chromatography B 829(1- 2):l-25)。
[0化日]本文所使用的叮GFBRII-Fc"指的是包含如下的融合蛋白：TGF-的I型受体的TGF-β 配体结合结构域或其变体或其生物活性部分W及免疫球蛋白的Fc结构域。在多个实施方式 中，在TGF-β配体结合结构域和化结构域之间可包含接头。还根据本发明，融合蛋白可包含 TGF-WI型受体的整个细胞外部分或其变体W及免疫球蛋白的化结构域。在一些实施方式 中，融合蛋白可包含如下的一部分:TGF-WI型受体的细胞外部分或其变体W及免疫球蛋白 的Fc结构域。变体的实例可包括但不限于包括传统的氨基酸突变、SNP变体W及剪接变体的 变体。一个非限制性实例是TGF-的I型受体的Hb剪接变体。在多个实施方式中，可对TGF-0 配体结合结构域和/或化结构域进行修饰例如用于促进纯化，只要此类修饰不会将运些结 构域的功能降低至不可接受的水平。
[0化6]已在本领域中普遍描述了化-融合的基本技术，例如在Czajkowsky等，Fc-化sion proteins:new developments and future perspectives，EMB0 Mol Med.2012年10月，4 (10) :1015-28中，w引用的方式将其整体并入本文。TGF-β型II受体可来自哺乳动物。在一 些实例中，该受体来自人、猴、猿、狗、猫、牛、马、山羊、绵羊、猪、兔、小鼠或大鼠。免疫球蛋白 可来自哺乳动物。仅举例来说，免疫球蛋白可来自人、猴、猿、狗、猫、牛、马、山羊、绵羊、猪、 兔、小鼠或大鼠。
[0057] 当提及抗体结构域时，根据Kabat的定义对各个结构域指定氨基酸（参见，Elvin A.Kabat,Tai Te Wu，Kay S.Gottesman，Carl Foeller的"Sequences of Proteins of Immunological Interest"，第5版，出版号913242,国立卫生研究院，Bethesda,Md.，1991， W及更早的版本）。来自免疫球蛋白的成熟重链和轻链的可变区域的氨基酸通过链中的氨 基酸的位置指明。Kabat描述了就抗体而言的许多氨基酸序列，识别了就各亚组而言的氨基 酸共有序列，W及对每个氨基酸指定了残基编号。通过参照保存的（conserved)氨基酸将有 疑问的抗体与Kabat中的共有序列中的一个进行比对，可将Kabat的编号方案扩展到未包含 在他的概论内的抗体。用于指定残基编号的运一方法已经在本领域中成为标准，并方便地 识别不同抗体中（包括嵌合变体或人源化变体)的等价位置处的氨基酸。例如，人抗体轻链 的位置50处的氨基酸占据了小鼠抗体轻链的位置50处的氨基酸的等价位置。
[0058] 如本文所使用的术语"Fc区域"、"Fc结构域"或类似的术语用于限定IgG重链的 CH2/CH3C-末端区域。图8B中示出了包含人IgGl的氨基酸序列的实例。如根据Kabat系统的 编号，虽然界限可能略有变化，Fc结构域从氨基酸231延伸至氨基酸447(根据Kabat系统对 图8B中的氨基酸残基进行编号：参见Kabat等，"Sequences of Proteins of Immunological Interest",第5版，Public Health Se;rvice，NIH，MD(1991)，W引用的方式 将其整体并入本文）。图8B还提供了 IgG同种型IgGl、IgG2、IgG3和IgG4的Fc区域的氨基酸序 列的实例。
[0059] IgG的Fc区域包含两个恒定的结构域:CH2和C册。根据Kabat的编号系统，人IgG Fc 区域的C肥结构域通常从氨基酸231延伸至氨基酸341(图8B)。根据Kabat的编号系统，人IgG Fc区域的C册结构域通常从氨基酸342延伸至氨基酸447(图8B)。人IgG化区域的C肥结构域 (也称为乂丫 2"结构域)是独特的，因为它不与另一结构域紧密配对。而是，两个N-连接的分 支糖链插在完整的天然IgG的两个CH2结构域之间。
[0060] TGFBRII-Fc的实例包括但不限于具有在SEQ ID N0:1或其变体中列出的序列的蛋 白质。在一个实施方式中，SEQ ID N0:1的变体包含与SEQ ID N0:1具有至少80%、85%、 90 %、95 %、98 %或99 %序列一致性的序列。 TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQL成 FCDV民FSTCD
[0061 ] 在SEQ ID NO: 1中，氨基酸1-137是TGF-β配体结合结构域，氨基酸138-141是接头， 且氨基酸142-364是化结构域。运一示例性了6。8311斗(3可通过包含56〇10^:2或其简并变 体中列出的核巧酸序列的核酸来表示。如本文所使用的"简并变体"指的是具有突变的核巧 酸序列、但由于遗传密码的冗余性仍然编码相同多肤的变体。
[0062]
[0063]
[0064]
[0065] 使用Kabat编号，通常将重链IgG的"较链区域"或"较链结构域"定义为人IgGl的 G1U216延展至Pro230。图8A中示出了人IgGl较链区域的氨基酸序列的实例(根据Kabat系统 对图8A中的氨基酸残基进行编号）。如图8A中所示，通过将形成重链间S--S键的第一个和最 后一个半脫氨酸残基置于相同的位置，可将其它IgG同种型的较链区域与IgGl序列进行比 对。在一些实施方式中，配体结合结构域和Fc结构域之间的接头包含较链区域，例如SEQ ID N0:65至SEQ ID N0:68中的任一者(参见图8A)。在一个实施方式中，接头包含TGG G(SEQ ID NO :79)。在一些实施方式中，接头包含沈Q ID NO :6至SEQ ID NO :48中的任一者（参见实施 例3)。
[0066] 本领域技术人员将容易理解的是，与在本文中具体描述的肤基本相同的肤是在考 虑之列的，并且可包含一种或多种传统的氨基酸突变。本领域中已知的是，对参照肤进行一 种或多种传统的氨基酸突变可产生在生理学、化学或功能性质方面与所述参照肤相比没有 实质变化的突变肤;在此类情况中，参照肤和突变肤可被认为是"基本上相同"的多肤。
[0067] 传统的氨基酸的突变可包括氨基酸的添加、缺失或取代。在本文中将传统的氨基 酸取代定义为将一个氨基酸残基用具有类似化学性质(例如大小、电荷或极性)的另一氨基 酸残基取代。在非限制性实例中，传统的突变可W是氨基酸取代。此类传统的氨基酸取代可 将碱性氨基酸、中性氨基酸、疏水性氨基酸或酸性氨基酸用具有相同基团的另一氨基酸取 代。
[0068] 如本文所使用的"碱性氨基酸"包括具有大于7的侧链地a值的亲水性氨基酸，其在 生理抑下通常带正电。碱性氨基酸包括组氨酸化is或H)、精氨酸(Arg或R)和赖氨酸化ys或 K)。如本文所使用的"中性氨基酸"（也称为"极性氨基酸"）意味着具有在生理pH下不带电的 侧链的亲水性氨基酸，但是在其中具有至少一个键，在所述键中两个原子共用的成对电子 更靠近其中一个原子。极性氨基酸包括丝氨酸(Ser或S)、苏氨酸(Thr或T)、半脫氨酸(切S或 C)、酪氨酸(Tyr或Y)、天冬酷胺(Asn或N)和谷氨酷胺(Gin或Q)。依据Eisenberg的标准化通 用疏水性标度(1984 )，术语"疏水性氨基酸"（也被称为"非极性氨基酸"）意味着包括显示出 大于零的疏水性的氨基酸。疏水性氨基酸包括脯氨酸(Pro或P)、异亮氨酸(lie或I)、苯丙氨 酸(Phe或F)、鄉氨酸(化1或V)、亮氨酸化eu或L)、色氨酸(T巧或W)、甲硫氨酸(Met或M)、丙氨 酸(Ala或A)和甘氨酸(Gly或G)。"酸性氨基酸"指的是具有小于7的侧链地a值的亲水性氨基 酸，其在生理pH下通常带负电。酸性氨基酸包括谷氨酸(Glu或E)和天冬氨酸(Asp或D)。
[0069] 将序列一致性用于评价两个序列的相似性；当对两个序列的残基位置之间的最大 对应性(correspondence)进行比对时，通过计算相同的残基的百分比确定序列一致性。任 何已知的方法都可用于计算序列一致性;例如，可用计算机软件来计算序列一致性。作为非 限制性实例，序列一致性可通过诸如BLAST-P、Blast-N或FASTA-N的软件、或者本领域中已 知的任意其它合适的软件来计算。本发明的基本上相同的序列可至少80%相同。在其它实 例中，基本上相同的序列可在氨基酸水平上与本文所述的序列至少80%、85%、90%、95% 或100%相同。
[0070] 如上所述，在多个实施方式中，在TGF-β配体结合结构域和化结构域之间，可存在 接头。本文提供的是此类接头的序列。在一个实施方式中，接头是非结构化和柔性的多肤序 列。接头区域提供了不同于结构化的配体结合结构域和Fc结构域的区段，并因此可将接头 区域用于缀合至辅助分子(例如，用于提高诸如聚乙二醇化(PEGylation)部分的稳定性的 分子)或负荷分子(诸如用于成像的造影剂和毒素），而无需对配体结合结构域和化结构域 进行化学上的修饰。缀合的方法有所不同，但通常可使用能够经由常见的反应性基团（诸如 伯胺、班巧酷亚胺(NHS)醋和琉基反应性基团）进行缀合的商业化试剂盒来实施。一些非限 制性实例是：Alexa Fluor 488蛋白质标记试剂盒（分子探针，Invitrogen detection technologies)和聚乙二醇化试剂盒(Pierce Biotechnology Inc.)。
[0071] 接头可包括非结构化的氨基酸序列，该非结构化的氨基酸序列可与TGF-β超家族 中的另一受体或感兴趣的配体的的细胞外部分中的天然非结构化区域的序列相同、或者衍 生自对该天然非结构化区域的序列的传统修饰。在其它实例中，此类接头在组成和来源上 可W是完全人工化的，但将会包含所选定的用于提供非结构化的柔性接头的氨基酸，在当 使该接头紧密接近感兴趣的配体时，具有较低可能遇到静电或空间位阻混乱。
[0072] 认为接头的长度是如下两者之间的氨基酸的数量：（a)位于接头N-末端的结合结 构域的C-末端主链碳原子；W及(b)位于接头C-末端的结合结构域的N-末端主链氮原子。当 接头长度允许结合结构域将它们的天然结合位点结合在它们的天然配体上时，该接头长度 被认为是可接受的。表2中给出了不同长度的天然接头序列和人工接头序列的实例。例如， 不希望W任何方式受到限制，接头长度可为约18-80个氨基酸、25-60个氨基酸、35-45个氨 基酸、或可为任何其它合适的长度。
[0073] 在一些实例中，可能期望使本文公开的配体结合试剂的基于多肤的连接设计接受 特定应用所期望的特性的优化。例如，为了改善结合亲和性、特异性、免疫原性和稳定性，可 基于原子水平模拟和基于知识的设计，在长度和组成上对接头进行修饰。运适用于表现出 同聚、异聚、二聚和多聚的配体-受体结构特性的广泛范围的分子系统。可将额外的不同的 结合结构域并入，W产生具有甚至更高的结合效价的多价捕获剂。
[0074] 可对接头进行设计，W促进接头和/或配体结合捕获剂的纯化。所选择的精确纯化 方案将确定需要何种修饰，例如而且不希望受到限制，加入纯化"标签"（诸如化S标签)是在 考虑之列的;在其它实例中，接头可包含有利于添加负荷分子或辅助分子的区域。当此类添 加影响了接头的非结构化性质或引入了潜在的静电或空间干扰时，将适当增加接头长度w 确保结合结构域能够使其位点结合在配体上。按照本文的方法和教导，此类确定可通过本 领域技术人员常规地做出。
[0075] 在本发明的实施方式中，其中配体结合结构域和接头主要包含天然序列，在典型 的患者中通常不期望该天然序列是严重免疫原性或毒性的。
[0076] 本发明的多肤可用作对与疾病相关的共价稳定的二聚配体(诸如生长因子）的作 用进行中和的治疗剂。它们还可具有用作诊断试剂的商业化潜力，W在成像和非成像诊断 应用中检测与疾病相关的共价稳定的二聚配体(诸如生长因子)的存在。
[0077] 本发明还涵盖了对本发明的多肤进行编码的核巧酸序列。可对运些核巧酸序列进 行克隆并将其插入到任何合适的载体(包括表达载体)中，并因此运些核巧酸序列非常适合 于生产本发明的多肤。
[0078] 如本文所使用的术语"载体"指的是可向其中插入核酸序列的载体核酸分子，W用 于将核酸序列引入它可在其中复制的细胞中。核酸序列可W是"外源的"，运意味着核酸序 列对于载体被引入其中的细胞而言是外来的，或所述序列与细胞中的序列同源、但处在宿 主细胞核酸之内的通常未发现该序列的位置中。载体包括质粒、粘粒、病毒(隧菌体、动物病 毒和植物病毒)和人工染色体(例如YACs)。通过标准重组技术，本领域技术人员将很好地准 备构建载体(参见，例如，Maniatis等，1988W及Ausubel等，1994, W引用的方式将两者并入 本文）。另外，就有效的载体构建而言，在参照的附图中表明和本文所述的技术也是有启发 性的。
[0079] 术语"表达载体"指的是任何类型的遗传构建体，其包含对能被转录的RNA进行编 码的核酸。在一些情况中，RNA分子随后被翻译成蛋白质、多肤或肤。在其它情况中，例如在 反义分子或核酶的生产中，运些序列不被翻译。表达载体可包含多种的"控制序列"，该控制 序列指的是在特定宿主细胞中对于可操作地连接的编码序列的可能的翻译和转录而言所 必需的核酸序列。除了支配转录和翻译的控制序列之外，载体和表达载体可包含还起到其 它功能、在下文描述的核酸序列。
[0080] 如本文所使用的术语"多肤"或"蛋白质"是指通过肤键W特定序列连接的氨基酸 的聚合物。如本文所使用的，除非另外具体地指定，术语"氨基酸"指的是氨基酸的D或L立体 异构体形式。
[0081] 如本文所使用的分子的"生物活性"部分指的是能够执行与较大的分子类似功能 的较大的分子的部分。仅作为非限制性实例，蛋白质的生物活性部分是蛋白质的任何部分， 该部分保留了（即使仅略微地)执行全长蛋白质的一种或多种生物功能的能力(例如与另一 分子结合、憐酸化等）。作为非限制性实例，配体结合结构域是TGFi3受体的生物学部分。
[0082] 如本文所使用的术语"治疗有效量"意味着减弱或抑制过度的TGF-β信号传导并因 此使得治疗、预防本文所述的疾病病症或减缓本文所述的疾病病症的进展速度的TGF-β配 体捕获剂的量。根据患者和他或她的状态W及本领域技术人员公知的其它因素，有效量将 取决于待治疗的病症或病理而变化。本领域技术人员容易确定有效量。在一些实施方式中， W范围为0.05mg/kg体重-50mg/kg体重、W及任选1. Omg/kg体重-lOmg/kg体重、或0.3mg/kg 体重-3.Omg/kg体重的剂量，经由皮下途径、銷内途径、对流增强途径、静脉内途径或动脉内 途径，W每日至每月的间隔给予治疗剂量。在多个实施方式中，每周1-7次、或每周一次、或 每两周一次、每Ξ周一次、或每四周一次向受试者给予TGF-β配体捕获剂。在多个实施方式 中，向受试者给予TGF-β配体捕获剂1 -5天、1 -5周、1 -5个月、或1 -5年。
[0083] 尽管根据本发明提供了一些示例性的给予途径，但可对TGF-β配体捕获剂的任何 合适的给予途径进行改进，因此本文所述的给予途径并不意在进行限制。给予途径可包括 但不限于静脉内、口服、颊部、鼻内、吸入、局部施用至粘膜、或注射(包括皮内注射、銷内注 射、脑池内注射、病灶内注射或任何其它类型的注射）。给予可连续地或间歇地进行，并随受 试者和待治疗的病症而变化。本领域技术人员将容易理解的是，本文所述的多种给予途径 将使得能够在肺部疾病位置或祀细胞上、在肺部疾病位置或祀细胞中、在接近肺部疾病位 置或祀细胞处递送TGF-β配体捕获剂或组合物。本领域技术人员还将容易理解的是，本文所 述的多种给予途径将使得能够将本文所述的TGF-β配体捕获剂或组合物递送至在待治疗的 患病组织、器官或单个细胞的邻近区域。"邻近"可包括受试者中的任何组织或体液，所述组 织或体液足够紧密地接近患病组织、器官或单个细胞，或者与患病组织、器官或单个细胞充 分连通，从而使得向受试者给予的TGF-β配体捕获剂或组合物的至少部分到达其预期祀标 并发挥其治疗效果。
[0084] 药物组合物
[0085] 在多个实施方式中，本发明提供了包含本文所述的TGF-β配体捕获剂的药物组合 物。在多个实施方式中，药物组合物被配制用于改进释放、持续释放、或控制释放、或它们的 组合。在多个实施方式中，药物组合物被配制用于口服、经由吸入、鼻部、舌下、颊部、皮下、 皮内、肌内、静脉内、腹膜内或肠胃外给予。
[0086] 在多个实施方式中，药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂。赋 形剂的实例包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、 润湿剂、乳剂、着色剂、脱模剂(release agents)、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂、 抗氧化剂、增塑剂、胶凝剂、增稠剂、硬化剂、凝固剂（setting agents)、悬浮剂、表面活性 剂、保湿剂、载体、稳定剂W及它们的组合。
[0087] 在多个实施方式中，药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的载体。药学 上可接受的载体在本领域中是公知的，并包括水性溶液，例如生理缓冲盐水、或其它溶剂、 或辅料(诸如乙二醇、甘油、植物油(例如橄揽油)或可注射的有机醋）。药学上可接受的载体 可用于向体外的细胞或向受试者体内给予本发明的组合物。药学上可接受的载体可包含生 理学上可接受的化合物，例如，所述化合物具有对组合物进行稳定或增加试剂的吸收的作 用。生理学上可接受的化合物可包括例如碳水化合物(诸如葡萄糖、薦糖或右旋糖）、抗氧化 剂(诸如抗坏血酸或谷脫甘肤）、馨合剂、低分子量蛋白质或其它稳定剂或赋形剂。其它生理 学上可接受的化合物包括润湿剂、乳化剂、分散剂或防腐剂，防腐剂特别是用于防止微生物 的活动或生长。多种防腐剂是公知的并包括例如苯酪和抗坏血酸。本领域的技术人员知晓 的是，药学上可接受的载体(包含生理学上可接受的化合物）的选择取决于例如多肤的给予 途径。例如，生理学上可接受的化合物(诸如单硬脂酸侣或明胶)被特别用作延长向受试者 给予的药物组合物的吸收速度的延迟剂。可在1日的111，1^1111叫如11'3?}1日^11.5^.，第15版， (Mack Publ. Co .，Easton，1975)中发现载体、稳定剂或辅助剂的进一步实例，将其W引用的 方式并入本文。载体的其它实例包括但不限于基于纳米颗粒的载体(例如，聚合物N-(2-^ 丙基）甲基丙締酷胺化PMA)、谷氨酸、PEG、右旋糖)和纳米载体(例如，纳米壳、脂质体、纳米 脂质体）。
[0088] 治疗方法
[0089] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的肺高压(PH)或降低受试 者中的肺高压(PH)的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗 有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的PH或降低受试者中的PH的进展速 度。在一些实施方式中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获 剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。肺动脉高压是可特别适合于用 TGF-β配体捕获剂治疗的肺高压的类型。因此，在一些实施方式中，该方法包括向受试者给 予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的肺动脉高压(包括肺动脉高 压的如下亚类中的任一者)或降低受试者中的肺动脉高压(包括肺动脉高压的如下亚类中 的任一者)的进展速度。肺动脉高压可继发于其它病症、或作为原发性或特发性肺动脉高压 产生。特别令人感兴趣的是，家族性肺动脉高压的一些类型与骨形态发生蛋白受体II型 (BMPRII)的降低的表达或功能有关，运被认为导致了 TGF-β的过度的信号传导。
[0090] 肺高压可具有五种主要类型，因此实施了一系列的测试，W将肺动脉高压与如下 区分开:静脉肺高压、缺氧性肺高压、血栓栓塞性肺高压或混杂性肺高压。运些测试一般包 括:肺功能测试;血液测试W排除HIV、自身免疫性疾病和肝部疾病;屯、电图巧CG);动脉血气 测量;胸部X射线（如果怀疑有间质性肺部疾病，随后进行高分辨率CT扫描）；W及通气灌注 或V/Q扫描，W排除慢性血栓栓塞性肺高压。PAH的诊断需要肺高压的存在。虽然可基于超声 屯、动图对肺动脉压进行估计，但用穿过屯、脏右侧的Swan-Ganz导管进行的压力测量提供了 用于诊断的最确切的评估。
[0091] 本领域技术人员精通于监测肺高压中的改善，例如通常通过"六分钟步行测试" (即，患者在六分钟内可步行的距离)对临床改善进行测量。运一测量中的稳定性和改善与 更好的存活相关联。血液BNP水平现还被用于跟踪肺高压患者的进展。还可通过分析动脉压 对症状的改善进行监测。例如，生活在海平面的人在休息时的正常肺动脉压具有8mmHg- 20111111叱（1066化-2666?日）的平均值。当休息时平均肺动脉压超过25111111化(3300?日)时，存在 肺高压。不应将平均肺动脉压（mPAP)与通常在超声屯、动图报告中报告的肺动脉收缩压 (sPAP)混淆。40mm Hg的收缩压通常暗示着超过25mm化的平均压力。粗略地，mPAP = 0.61 · sPAP+2。
[0092] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的肺血管重塑或降低受试 者中的肺血管重塑的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗 有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的肺血管重塑或降低受试者中的肺血 管重塑的进展速度。在一些实施方式中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量 的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0093] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者的屯、脏中的血管重塑或降低 受试者的屯、脏中的血管重塑的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法可进一步包括 在向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体 捕获剂混合。在一些实施方式中，本发明的方法降低了二尖瓣退行性病变、或例如二尖瓣脱 垂。可通过超声屯、动图对有益效果进行监测。
[0094] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的肺纤维化或降低受试者 中的肺纤维化的进展速度的方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效 量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的肺纤维化或降低受试者中的肺纤维化的 进展速度。在多个实施方式中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量的TGF-β配 体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0095] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的右屯、室肥厚或降低受试 者中的右屯、室肥厚的进展速度的方法。在多个实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗 有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的右屯、室肥厚或降低受试者中的右屯、 室肥厚的进展速度。在一些实施方式中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量 的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0096] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的与过度的TGF-β信号传导 有关的肺部疾病或降低受试者中的与过度的TGF-β信号传导有关的肺部疾病的进展速度的 方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而 治疗、预防受试者中的所述疾病或降低受试者中的所述疾病的进展速度。在一些实施方式 中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可 接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0097] 在多个实施方式中，TGF-β可W是TGF-化、TGF-盼或它们的组合。
[0098] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的与过度的GDF15信号传导 有关的肺部疾病或降低受试者中的与过度的GDF15信号传导有关的肺部疾病的进展速度的 方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而 治疗、预防受试者中的所述疾病或降低受试者中的所述疾病的进展速度。在一些实施方式 中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可 接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0099] 在多个实施方式中，本发明提供了治疗、预防受试者中的与过度的PAI-1信号传导 有关的肺部疾病或降低受试者中的与过度的PAI-1信号传导有关的肺部疾病的进展速度的 方法。在一些实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而 治疗、预防受试者中的所述疾病或降低受试者中的所述疾病的进展速度。在一些实施方式 中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可 接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0100] 在多个实施方式中，本发明提供了降低受试者中的右屯、室收缩压的方法。在一些 实施方式中，该方法包括向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而降低受试者中 的右屯、室收缩压。在一些实施方式中，该方法可进一步包括在向受试者给予治疗有效量的 TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体捕获剂混合。
[0101] 在多个实施方式中，上述实例中的受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，受试者 是人、猴、猿、狗、猫、牛、马、山羊、绵羊、猪、兔、小鼠或大鼠。在多个实施方式中，TGF-β是 TGF-化、TGF-盼或它们的组合。
[0102] 在多个实施方式中，向受试者给予的TGF-β配体捕获剂的量为0.05mg/kg体重- 50mg/kg体重、任选1. Omg/kg体重-1 Omg/kg体重、或0.3mg/kg体重-3. Omg/kg体重。在多个实 施方式中，每周1-7次、或每周一次、或每两周一次、或每Ξ周一次、或每四周一次向受试者 给予TGF-β配体捕获剂。在多个实施方式中，向受试者给予TGF-β配体捕获剂1-5天、1-5周、 1-5个月或1-5年。TGF-β配体捕获剂可通过用于蛋白质疗法的任何途径给予，包括但不限于 皮下给予、静脉内给予或肌内给予。
[0103] 如上所述，在多个实施方式中，向受试者口服、经由吸入、鼻部、舌下、颊部、皮下、 皮内、肌内、静脉内、腹膜内或肠胃外给予TGF-β配体捕获剂。在多个实施方式中，在受试者 发展如下疾病病症之前、期间或之后给予TGF-β配体捕获剂，所述疾病病症包括但不限于： 肺高压、肺血管重塑、肺纤维化、右屯、室肥厚、与过度的TGF-β信号传导有关的肺部疾病、与 过度的GDF15信号传导有关的肺部疾病W及与过度的PAI-1信号传导有关的肺部疾病。
[0104] 在多个实施方式中，TGF-β配体捕获剂是药物组合物的部分。在多个实施方式中， 药物组合物被配制用于改进释放、持续释放、或控制释放、或它们的组合。在多个实施方式 中，药物组合物被配制用于口服、经由吸入、鼻部、舌下、颊部、皮下、皮内、肌内、静脉内、腹 膜内或肠胃外给予。
[0105] 在多个实施方式中，药物组合物进一步包含至少一种药学上可接受的赋形剂。赋 形剂的实例包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、 润湿剂、乳剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂、抗氧化剂、增塑剂、 胶凝剂、增稠剂、硬化剂、凝固剂、悬浮剂、表面活性剂、保湿剂、载体、稳定剂W及它们的组 厶 1=1 〇
[0106] 本发明的一些实施方式可由如下编号段落中的任一段定义：
[0107] 段落1. 一种治疗、预防受试者中的肺高压(PH)或降低受试者中的肺高压(PH)的进 展速度的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预 防受试者中的PH或降低受试者中的PH的进展速度。
[0108] 段落2.如段落1所述的方法，其中，所述PH通过过度的TGF-β信号传导而介导。
[0109] 段落3.如段落1-2中任一段所述的方法，其中，所述受试者是人。
[0110] 段落4.如段落1-3中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂包含：1)TGF 受体的TGF-β配体结合结构域;W及2)免疫球蛋白的Fc结构域。
[0111] 段落5.如段落4所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂进一步包含在TGF受体的 TGF-β配体结合结构域和Fc结构域之间的接头。
[0112] 段落6.如段落1-5中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂是可溶性重 组TGF-的I型受体Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。
[0113] 段落7.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc由SEQ ID NO: 1或 其变体中列出的序列组成。
[0114] 段落8.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1 或其变体中列出的序列。
[0115] 段落9.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1 中列出的序列的一个或多个生物活性部分。
[0116] 段落10.如段落1-6中任一段所述的方法，其中，通过如下核酸对所述TGFBRII-化 进行编码，所述核酸包含SEQ ID NO:2或其简并变体中列出的核巧酸序列。
[0117] 段落11.如段落1-10中任一段所述的方法，其中，向受试者给予的TGF-β配体捕获 剂的量为0.1 mg/kg体重-lOmg/kg体重。
[0118] 段落12.如段落1-11中任一段所述的方法，其中，每月1-7次向受试者给予所述 TGF-β配体捕获剂。
[0119] 段落13.如段落1-12中任一段所述的方法，其中，向受试者给予所述TGF-β配体捕 获剂1-5天、1-5周、1-5个月或1-5年。
[0120] 段落14.如段落1-13中任一段所述的方法，其中，向受试者口服、经由吸入、鼻部、 舌下、颊部、皮下、皮内、肌内、静脉内、腹膜内或肠胃外给予TGF-β配体捕获剂。
[0121] 段落15.如段落1-14中任一段所述的方法，其中，在受试者发展PH之前、期间或之 后给予TGF-β配体捕获剂。
[0122] 段落16.如段落1-15中任一段所述的方法，其中，所述方法进一步包括在向受试者 给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与TGF-β配体捕获剂混 厶 1=1 〇
[0123] 段落17.如段落1-16中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂是药物组 合物的部分。
[0124] 段落18.如段落17所述的方法，其中，所述药物组合物被配制用于改进释放、持续 释放、或控制释放、或它们的组合。
[0125] 段落19.如段落17所述的方法，其中，所述药物组合物被配制用于口服、经由吸入、 鼻部、舌下、颊部、皮下、皮内、肌内、静脉内、腹膜内或肠胃外给予。
[01%]段落20.如段落17所述的方法，其中，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上 可接受的赋形剂。
[0127] 段落21.如段落17所述的方法，其中，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上 可接受的载体。
[0128] 段落22. -种治疗、预防受试者中的肺血管重塑或降低受试者中的肺血管重塑的 进展速度的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、 预防受试者中的肺血管重塑或降低受试者中的肺血管重塑的进展速度。
[0129] 段落23. -种治疗、预防受试者中的肺纤维化或降低受试者中的肺纤维化的进展 速度的方法，所述方法包括:向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防 受试者中的肺纤维化或降低受试者中的肺纤维化的进展速度。
[0130] 段落24.如段落23所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配体 捕获剂。
[0131] 段落25.-种治疗、预防受试者中的右屯、室肥厚或降低受试者中的右屯、室肥厚的 进展速度的方法，所述方法包括：向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、 预防受试者中的右屯、室肥厚或降低受试者中的右屯、室肥厚的进展速度。
[0132] 段落26.如段落25所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配体 捕获剂。
[0133] 段落27. -种治疗、预防受试者中的与过度的TGF-β信号传导有关的肺部疾病或降 低受试者中的与过度的TGF-β信号传导有关的肺部疾病的进展速度的方法，所述方法包括： 向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的所述疾病或降低 受试者中的所述疾病的进展速度。
[0134] 段落28.如段落27所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配体 捕获剂。
[0135] 段落29.如段落1-28中任一段所述的方法，其中，所述TGF-β是TGF-i31、TGF-盼或它 们的组合。
[0136] 段落30. -种治疗、预防受试者中的与过度的GDF15信号传导有关的肺部疾病或降 低受试者中的与过度的GDF15信号传导有关的肺部疾病的进展速度的方法，所述方法包括： 向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的所述疾病或降低 受试者中的所述疾病的进展速度。
[0137] 段落31.如段落30所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配体 捕获剂。
[0138] 段落32. -种治疗、预防受试者中的与过度的PAI-1信号传导有关的肺部疾病或降 低受试者中的与过度的PAI-1信号传导有关的肺部疾病的进展速度的方法，所述方法包括： 向受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防受试者中的所述疾病或降低 受试者中的所述疾病的进展速度。
[0139] 段落33.如段落32所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配体 捕获剂。
[0140] 段落34.-种降低受试者中的右屯、室收缩压的方法，所述方法包括：向受试者给予 治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而降低受试者中的右屯、室收缩压。
[0141] 段落35.如段落34所述的方法，所述方法使用段落4-10中任一段所述的TGF-β配体 捕获剂。
[0142] 实施例
[0143] 提供如下实施例是为了更好地阐明所请求保护的发明，而不应解释为限制本发明 的范围。就所提到的具体的材料而言，只是为了说明的目的，而并不意在限制本发明。本领 域技术人员可开发出等效方式或反应物，而无需创造力且并不背离本发明的范围。
[0144] 实施例1:额外的背景和结果的简要概括
[0145] 如上所述，转化生长因子-(TGF-β)配体对发展中的重要过程进行协调，并对疾病 中的纤维化和组织重塑进行调节。过度的TGF-β信号传导已牵设在肺高压(PH)的动脉重塑 中，部分基于TG邱I型受体(ALK5)激酶抑制剂的能力，W改进动物模型中的实验性PH。然而， ALK5抑制剂的临床部署已受到屯、血管毒性的限制。本文所公开的实验和结果表明，可溶性 重组TGF的I型受体Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)在野百合碱(MCT)-诱发PH的大鼠中抑制TG邱 信号传导。当在MCT之后预防性地给予时，TGFBRII-Fc处理降低了右屯、室收缩压、右屯、室肥 厚并减弱了肺血管重塑。与TG邱信号传导的减弱一致，TGFBRII-Fc对MCT大鼠肺中的TG邱转 录祀标PAI-1的升高的mRNA水平进行了校正。当在MCT之后的2.5周给予时，TGFBRII-Fc在第 5周时部分地复苏了已确立的PH并具有改善的存活趋势。值得注意的是，未发现与W任何剂 量的TGFBRII-Fc处理相关的屯、脏结构异常或瓣膜异常。总体而言，本文所公开的数据支持 如下结论:TG邱配体捕获剂可W是用于校正TG邱-介导的肺血管重塑和PH的有效和可接受 的安全策略。
[0146] 实施例2
[0147] 表1.非限制性的示例性的TG邱配体结合结构域
[014 引
[0149] 实施例3
[0150] 表2.非限制性的示例性的接头
[0151]
[0152]
[0153]
[0154] 还在考虑之列的是编码各上述的接头和结合结构域的核酸序列。
[0155] 实施例4
[0156] 材料和方法
[0157] PAH的大鼠模型
[015引雄性Sprague-Dawley大鼠（6-8周龄，体重150g-170g)购自化arles River实验室。 所有的方案和外科手术均由当地的动物保护委员会批准。动物在24°C下于12小时光照-黑 暗周期中饲养。食物和水自由摄取。大鼠接受野百合碱(MCT，40mg/kg)的单次皮下注射，W 诱发PAH。表3中总结了包括在本研究中的大鼠总数和死亡数。
[0159]表3
[0160]
[0161] 药物处理
[0162] 预防方案-在PAH诱发后24小时，将大鼠随机分为TGFBRII-化组（5mg/kg或15mg/ kg，每周两次)或辅料组。将大鼠处理21天。在第14天，通过超声屯、动图对屯、室功能和RV重塑 进行检查。在第21天，使大鼠接受血流动力学和右屯、室肥厚测量。
[0163] 复苏方案-在另一群组中，对TGFBRII-化逆转PAH进展的能力进行了检查。在第18 天，用MCT注射大鼠并随机给予TGFBRII-Fc (15mg/kg，每周Ξ次)或辅料。在第35天检查血流 动力学和右屯、室肥厚(RVH)。
[0164] LV和RV功能的超声屯、动图评估
[0165] 在PA出秀发后第14天，用1.5%异氣烧对大鼠进行麻醉，并将其保持在仰邸位置。使 用Visual Sonics小动物高频超声探针检测肺血流加速、右屯、室功能和肥厚W及左屯、室功 能。使多普勒穿过二尖瓣和Ξ尖瓣，W确定TGFBRII-化处理是否诱发任何明显的反流或损 伤。
[0166] 血流动力学和RVH测量
[0167] 在特定的时间点，将大鼠用戊己比妥进行麻醉，并穿过气管进行插管。使用晒齿类 动物呼吸机对大鼠进行机械通气，并如之前所述使用填充有流体的导管穿过右屯、室(RV)顶 点进行血流动力学评估(Megalou, A. J.，Glava ,C.，Vilaeti,A.D.，Oikonomidis , D 丄.， Baltogiannis'G.G.，Papalois,A.，Vlahos,A.P.和Kolettis'T.M.(2012)Pulm Circ 2， 461-469)。用PBS对肺进行灌注，将一个右肺叶切除并快速冷冻，W用于RNA和蛋白质提取。 用1%多聚甲醒(PFA)进一步灌注肺进入肺动脉中，随后灌注气管1分钟。将左肺叶包埋在石 蜡中。为了获取RVH的程度，移出屯、脏，将RV游离壁从左屯、室加上间隔壁化V+S)中解剖出来， 并分别称重。从RV/ (LV+S)比例对RVH的程度进行确定。
[0168] 血管重塑的定量
[0169] 为了确定肺血管重塑的程度，用α-平滑肌肌动蛋白和血管性血友病因子对肺组织 切片进行染色。对远端腺泡内血管（直径1〇μπι-5化m)的肌肉化进行定量，并对无肌肉化血 管、部分肌肉化血管和完全肌肉化血管的百分比进行计算。
[0170] 对全部的完全肌肉化的腺泡内血管(直径10皿-50皿)的内侧壁厚度进行计算。将 壁厚指数计算为:指数=(外径-内径)/外径X 100。
[0171] 表达研究
[0172] 将冷冻肺样品进行匀浆，并如之前所述使用TRIZ化试剂进行总的RNA提取(Long, L.'Crosby,A.，Yang,X.，Southwood,Μ.，Upton,P.D.，Kim,D.K.和Morrell,N.W.(2009) Circulation 119,566-576)。如此前所述实施逆转录和定量PCR化ong,L.，C;rosby,A.， 化ng,X.，Southwood,M.，Upton,P.D.，Kim,D.K.和Morrell,N.W.(2009)Ci;rculation 119， 566-576)。计算特异性基因对β-肌动蛋白的比例，并将该比例表示为倍数变化。表4中总结 了大鼠-特异性的序列。
[017引 表4
[0174]
[0175] 试剂
[0176] 野百合碱购自Oakwood ProductS公司。重组人ΒΜΡ4、TGFm、TG邱巧日GDF15从R&D Systems获得。对憐酸化-Smad 3而言特异性的一抗购自Abeam，而对憐酸化-Smad 2、憐酸 化-Smad 1/5W及总的Smad 3而言特异性的其它一抗从Cell Signaling获得。
[0177] 统计分析
[0178]血流动力学和RVH测量W及肺血管重塑定量的所有分析W盲法实施。将数据表示 为平均值±561，并采用t检验在各组之间进行比较。p<0.05被认为统计学上显著。
[01巧]二尖瓣的血管重塑
[0180] 图9A至图9B示出了表明响应于TGFBRII-Fc处理而无二尖瓣重塑、退行性病变或异 常的屯、脏组织切片。图9A为对照。图9B为经TGFBRII-Fc-处理。
[0181] 上述多种方法和技术提供了实施该申请的多种方式。当然，应当理解的是，根据本 文所述的任何特定实施方式，所述的所有目标和优点未必都能实现。因此，例如，本领域技 术人员将认识到，可通过实现或优化如本文教导的一个优点或一组优点而不必实现如本文 教导或暗示的其它目标或优点的方式来实施本方法。本文提及了多种替代方式。应当理解 的是，一些优选的实施方式具体包括一种、另一种或多种特征，而其它的实施方式则具体地 排除一种、另一种或多种特征，然而还有其它实施方式通过包括一种、另一种或多种有利特 征而缓和特定的特征。
[0182] 此外，技术人员将认识到来自不同实施方式的多种特征的适用性。相似地，本领域 的普通技术人员能够W多种组合采用上述公开的多种要素、特征和步骤W及各此类要素、 特征或步骤的其它已知等同物，W根据本文所述的原理实施方法。在多种要素、特征和步骤 之中，一些将被具体地包括在不同的实施方式之中，而其它的则被具体地排除在不同的实 施方式之外。
[0183] 虽然本申请已在一些实施方式和实施例的上下文中进行了公开，但是本领域的技 术人员将会理解的是，本申请的实施方式延伸到具体公开的实施方式之外，并延伸至其它 替代性实施方式和/或用途W及其修改物和等同物。
[0184] 在一些实施方式中，在描述本申请特定实施方式的上下文中（尤其是在如下一些 权利要求的上下文中）使用的术语"一"、"一个"、"所述/该"和类似的提法可被解释为涵盖 单数和复数。本文列举的值的范围仅意在用作单独提及的落在该范围内的各单独值的速记 方法。除非本文另外指明，否则每个单独的值均被并入本说明书，就像在本文中单独列举一 样。除非本文另外指明或上下文明显冲突，否则本文所述的所有方法可W按任何合适的顺 序实施。关于本文的一些实施方式提供的任何和所有实例或示例性语言（例如，"诸如"）的 使用仅意在更好地阐明本申请，并不对本申请的范围造成限制，除非它们被请求保护。本说 明书中的语言不应解释为是表示实践本申请所必需的任何未请求保护的要素。
[0185] 本文对运一申请的优选实施方式进行了描述，包括本发明人已知的用于实施本申 请的最佳模式。在本领域的普通技术人员阅读上述说明时，运些优选实施方式的变型将变 得显而易见。在考虑之列的是，技术人员可在适当时采用此类变型，并且本申请可按本文具 体描述之外的方式加 W实践。因此，如可适用的法律所允许的，运一申请的许多实施方式包 括所附权利要求书中列出的主题的所有修改物和等同物。此外，除非在本文中另外指明，或 除非与上下文明显冲突，本申请涵盖上述要素在其所有可能的变型中的任何组合。
[0186] 除了如下，将本文中参考的所有专利、专利申请、专利申请的公开文本W及其它材 料(诸如文章、书籍、说明书、出版物、文件、事物和/或类似物）由此都W此种引用方式整体 并入本文，用于所有目的：与相同材料相关的任何审查文件历史、与本文件不一致或冲突的 任何相同材料、或可能对当前或随后与本文件相关的权利要求书的最广范围具有限制作用 的任何相同材料。举例来说，如果与任何并入的材料相关的术语的描述、定义和/或用途同 与本文件相关的术语的描述、定义和/或用途之间存在任何不一致或冲突，应w本文件中的 术语的描述、定义和/或用途为准。
[0187] 应当理解的是，本文所公开的申请的实施方式是对本申请实施方式的原理的说 明。可采用的其它修改形式可在本申请的范围内。因此，举例来说，而非加 W限制，本申请的 实施方式的替代构造可根据本文的教导而使用。因此，本申请的实施方式不限于如精确地 示出和描述的内容。
[0188] 在上面的详细说明中描述了本发明的多个实施方式。虽然运些描述直接描述上面 的实施方式，但是应该理解，本领域技术人员可对本文示出和描述的特定的实施方式构想 出修改和/或变化。落入本发明说明书范围内的任何此类修改或变化也意图包括在其中。除 非特别指出，否则，本发明人的意图是说明书和权利要求书中的词汇和短语都被赋予适用 领域的普通技术人员所知晓的普通含义和惯用含义。
[0189] 已经给出了本
【申请人】在提交申请时所知道的本发明的多个实施方式的前述描述， 并意在用于说明和描述的目的。本描述并不意在详尽无遗，也并不意在将本发明限于所公 开的精确形式，并且根据上述教导，许多修改和变化都是可能的。所描述的实施方式是用来 解释本发明的原理及其实际应用，并用来使本领域其他技术人员能够按多种实施方式及适 合于所预期的特定用途的多种修改来利用本发明。因此，并不意在将本发明限制至所公开 的用于实施本发明的特定实施方式。
[0190] 虽然已经示出和描述本发明的特定实施方式，但是对于本领域技术人员来说显而 易见的是，根据本文中的教导，在不背离本发明及其较宽泛的方面的情况下可W作出改变 和修改，并且因此，所附权利要求书将在它们的范围内涵盖所有此类落在本发明的真正精 神和范围内的改变和修改。本领域技术人员将理解，一般而言，本文使用的术语一般意图作 为"开放的"术语(例如，术语"包掠'应解释为"包括但不限于"，术语"具貧'应解释为"具有 至少'，术语"包含"应解释为"包含但不限于'等）。
【主权项】
1. 一种治疗、预防受试者中的肺高压(PH)或降低受试者中的肺高压(PH)的进展速度的 方法，所述方法包括：向所述受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防所 述受试者中的PH或降低所述受试者中的PH的进展速度。2. 如权利要求1所述的方法，其中，所述PH通过过度的TGF-iH言号传导而介导。3. 如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中，所述受试者是人。4. 如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂包含：I)TGF受体 的TGF-β配体结合结构域；以及2)免疫球蛋白的Fc结构域。5. 如权利要求4所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂进一步包含在TGF受体的所述 TGF-β配体结合结构域和所述Fc结构域之间的接头。6. 如权利要求1 -5中任一项所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂是可溶性重组 TGF-βΙΙ型受体Fc-融合蛋白（TGFBRII-Fc)。7. 如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc由SEQ ID NO: 1或其变 体中列出的序列组成。8. 如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1或其 变体中列出的序列。9. 如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述TGFBRII-Fc包含SEQ ID NO: 1中列 出的序列的一个或多个生物活性部分。10. 如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，通过如下核酸对所述TGFBRII-Fc进行 编码，所述核酸包含SEQ ID N0:2或其简并变体中列出的核苷酸序列。11. 如权利要求1 -1 〇中任一项所述的方法，其中，向所述受试者给予的TGF-β配体捕获 剂的量为〇. lmg/kg体重-10mg/kg体重。12. 如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，每月1-7次向所述受试者给予所述 TGF-β配体捕获剂。13. 如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，向所述受试者给予所述TGF-β配体捕 获剂1-5天、1-5周、1-5个月或1-5年。14. 如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，向所述受试者口服、经由吸入、鼻部、 舌下、颊部、皮下、皮内、肌内、静脉内、腹膜内或肠胃外给予所述TGF-β配体捕获剂。15. 如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，在所述受试者发展PH之前、期间或之 后给予所述TGF-β配体捕获剂。16. 如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括在向所述受试者 给予治疗有效量的所述TGF-β配体捕获剂之前，将药学上可接受的载体与所述TGF-β配体捕 获剂混合。17. 如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，所述TGF-β配体捕获剂是药物组合物 的一部分。18. 如权利要求17所述的方法，其中，所述药物组合物被配制用于改进释放、持续释放、 或控制释放、或它们的组合。19. 如权利要求17所述的方法，其中，所述药物组合物被配制用于口服、经由吸入、鼻 部、舌下、颊部、皮下、皮内、肌内、静脉内、腹膜内或肠胃外给予。20. 如权利要求17所述的方法，其中，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接 受的赋形剂。21. 如权利要求17所述的方法，其中，所述药物组合物进一步包含至少一种药学上可接 受的载体。22. -种治疗、预防受试者中的肺血管重塑或降低受试者中的肺血管重塑的进展速度 的方法，所述方法包括：向所述受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防 所述受试者中的肺血管重塑或降低所述受试者中的肺血管重塑的进展速度。23. -种治疗、预防受试者中的肺纤维化或降低受试者中的肺纤维化的进展速度的方 法，所述方法包括:向所述受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防所述 受试者中的肺纤维化或降低所述受试者中的肺纤维化的进展速度。24. 如权利要求23所述的方法，所述方法使用权利要求4-10中任一项所述的TGF-β配体 捕获剂。25. -种治疗、预防受试者中的右心室肥厚或降低受试者中的右心室肥厚的进展速度 的方法，所述方法包括：向所述受试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防 所述受试者中的右心室肥厚或降低所述受试者中的右心室肥厚的进展速度。26. 如权利要求25所述的方法，所述方法使用权利要求4-10中任一项所述的TGF-β配体 捕获剂。27. -种治疗、预防受试者中的与过度的TGF-β信号传导有关的肺部疾病或降低受试者 中的与过度的TGF-iH言号传导有关的肺部疾病的进展速度的方法，所述方法包括：向所述受 试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防所述受试者中的所述疾病或降低 所述受试者中的所述疾病的进展速度。28. 如权利要求27所述的方法，所述方法使用权利要求4-10中任一项所述的TGF-β配体 捕获剂。29. 如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中，所述TGF-β是TGF-βΙ、TGF-f33或它们的 组合。30. -种治疗、预防受试者中的与过度的GDF15信号传导有关的肺部疾病或降低受试者 中的与过度的GDF15信号传导有关的肺部疾病的进展速度的方法，所述方法包括：向所述受 试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防所述受试者中的所述疾病或降低 所述受试者中的所述疾病的进展速度。31. 如权利要求30所述的方法，所述方法使用权利要求4-10中任一项所述的TGF-β配体 捕获剂。32. -种治疗、预防受试者中的与过度的PAI-I信号传导有关的肺部疾病或降低受试者 中的与过度的PAI-I信号传导有关的肺部疾病的进展速度的方法，所述方法包括：向所述受 试者给予治疗有效量的TGF-β配体捕获剂，从而治疗、预防所述受试者中的所述疾病或降低 所述受试者中的所述疾病的进展速度。33. 如权利要求32所述的方法，所述方法使用权利要求4-10中任一项所述的TGF-β配体 捕获剂。34. -种降低受试者中的右心室收缩压的方法，所述方法包括：向所述受试者给予治疗 有效量的TGF-β配体捕获剂，从而降低所述受试者中的右心室收缩压。35. 如权利要求34所述的方法，所述方法使用权利要求4-10中任一项所述的TGF-β配体 捕获剂。
【文档编号】A61K39/00GK105934249SQ201480073820
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2014年11月21日
【发明人】保罗·于, 阿斯亚·格林博格, 戴安娜·S·萨科, 罗斯琳·卡斯顿圭, 丽塔·斯帝夫斯, 拉温德拉·库马尔
【申请人】布里格姆及妇女医院股份有限公司, 阿塞勒隆制药公司