一种制作大鼠单侧肺肺纤维化模型的方法
【专利摘要】本发明涉及医疗技术领域，特别是涉及一种制作试验大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法。特别地，本发明公开了一种制作大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为：麻醉动物，气管切开、气管插管，单侧肺博来霉素灌注，缝合气管，术后护理。
【专利说明】
-种制作大鼠单侧肺肺纤维化模型的方法
技术领域
[0001] 本发明设及医疗技术领域，特别是设及一种制作试验大鼠单侧肺肺纤维化动物模 型的方法。
【背景技术】
[0002] 慢性肺纤维化疾病是目前导致全世界致死性肺脏疾病中的主要肺疾病之一。一种 快速，有效，低死亡率的晒齿类动物的肺纤维化模型是目前该类疾病的病因学，病理学和药 学研究所必需的。目前所采用的博来霉素诱导的晒齿类动物的肺纤维化模型都是非选择性 的双肺肺纤维化。模型存在病变分布不均匀，变异性大，死亡率高等模型自身的不确定性因 素，给肺纤维化疾病研究带来不便，特别是对肺纤维化治疗药物的研发影响巨大。因此，我 们的团队建立了一种大鼠单侧肺肺纤维化模型，弥补了现有模型的诸多弊端，达到病变分 布均匀，变异性小，动物死亡率接近零。为慢性肺纤维化疾病研究提供了一个稳定，可靠和 有效的动物模型。
【发明内容】
[0003] 本发明主要解决的技术问题是提供一种制作大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方 法，在实验大鼠上建立与人类肺纤维化疾病高度相似疾病模型用于肺纤维化疾病的病因 学，病理学和药学评价的模型。开发一种简单易行、能广泛推广的、可真实模拟肺纤维化自 然发生过程、模型稳定的方法。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种制作单侧肺肺纤 维化动物模型的方法，包括步骤为：（1)麻醉动物；（2)气管切开、气管插管；（3)单侧肺博来 霉素灌注；（4)缝合气管；（5)术后护理;步骤(2)气管插管和(3)单侧肺灌注博来霉素诱发灌 注侧肺肺损伤，造成单侧肺肺纤维化。
[0005] 在本发明一个较佳实施例中，步骤(3)中所述博来霉素剂量为1.5、3.0、5. Omg/kg。
[0006] 在本发明一个较佳实施例中，所述动物为各类种系的实验性雌雄大鼠。
[0007] 在另一个方面，本发明提供了一种制作肺纤维化动物模型的方法，其包括:用有效 量的博来霉素灌注晒齿类动物的单侧肺。
[000引在一些实施方案中，所述有效量为0.5至lOmg/kg，优选1至8mg/kg，更优选1.5至 5.0mg/kg，例如1.5、3.0 或 5.0mg/kg。
[0009] 在另一些实施方案中，所述晒齿类动物选自：大鼠、小鼠和豚鼠。
[0010] 本发明的有益效果是:本发明的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，该方法制 作过程简单，可广泛推广，实验成果率高，病变分布均匀，结果稳定，变异小，死亡率低。在对 肺纤维化疾病的病因学，病理学和药学评价中具有重要意义。
【附图说明】
[0011] 图1是本发明的实验操作概图，其中1是主气管，2是肺灌注导管，主要对应具体实 施方式中的步骤(3)。
[0012] 图2是正常肺与不同剂量博来霉素(分别是1.5mg/kg，3.0mg/kg，5.0mg/kg)灌注后 一周、两周和Ξ周肺的对比图，其中3是正常肺，4-12是用不同浓度博来霉素诱导左侧肺肺 纤维化不同时间后的肺。
[0013] 图3是正常肺与不同剂量博来霉素(分别是1.5mg/kg，3.0mg/kg，5.0mg/kg)灌注后 一周、两周和Ξ周的Masson Trichrome染色的组织学对比图，其中左上图是正常肺的皿染 色，右侧Ξ列分别是博来霉素灌注后一周、两周和Ξ周的Masson Trie虹ome染色图，可体现 本发明实验方法真实模拟肺纤维化的病理过程。
[0014] 图4是使用不同剂量博来霉素灌注正常肺后一周、两周、Ξ周肺的皿染色对比图， 其中B图和C图从左至右分别为灌注后一周、两周、Ξ周的皿染色。博来霉素灌注后一周肺的 肥染色可体现终末细支气管上皮增生，肺泡壁损伤，炎细胞浸润;博来霉素灌注后两周肺的 皿染色可体现肺泡壁增厚，肺泡上皮再生，肺泡壁纤维母细胞增生，炎细胞浸润;博来霉素 灌注后Ξ周肺的肥染色可体现肺泡壁纤维化，肺泡壁肉芽肿形成，炎细胞浸润，总体表现了 早期肺泡壁破坏、炎症反应、纤维膜细胞增生到中后期的胶原纤维沉积、肉芽肿形成、血管 新生、细小支气管慢性病变等明确的肺纤维化病理改变。
[0015] 图5是不同剂量博来霉素灌注后一周、两周、Ξ周肺的组织病理评分。
[0016] 图6是模型验证试验，验证药物化菲尼酬在本模型中的预防性治疗实验结果。
[0017] 图7是模型验证试验，验证药物尼达尼布在本模型中的预防性治疗实验结果。
【具体实施方式】
[0018] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0019] 实施例1.制作单侧肺肺纤维化动物模型
[0020] WSprgue-Dawley(SD)雄性大鼠为例，提供一种制作单侧肺肺纤维化动物模型的 方法(实验操作如图1所示），包括步骤为：
[0021] (1)用50mg/kg戊己比妥钢诱导麻醉动物。
[0022] (2)动物颈部正中线剌毛，消毒，切开暴露主气管。在气管软骨环之间行气管切开， 气管插管，连接呼吸机，呼吸比为1:2，频率为110次/分钟，潮气量为约lOml/kg。
[0023] (3)沿气管插管通道导入阳-50导管进入左肺主支气管，缓注博来霉素，150ul，博 来霉素浓度分别为1.5mg/kg，3. Omg/kg，5. Omg/kg。然后启动呼吸机，使得动物在呼吸机的 控制下呼吸4-5分钟，促使博来霉素液体均匀分布与左肺。
[0024] (4)造模完成，缝合气管、逐层缝合各组织。缝合完毕，消毒表皮。
[0025] (5)术后动物安置在37度溫控毯，时时观察，直至完全清醒，返回饲养房（图2-4分 别显示使用不同浓度博来霉素灌注后不同时间的照片、Masson Trie虹ome染色图和肥染色 图，图5显示组织学评分）。
[0026] (6)博来霉素（3.Omg/kg)诱导的术后动物接受验证药物化菲尼酬口服给药，进行 预防性治疗实验，50mg/kg，每天两次，连续给药14天。第十五天安乐死动物，病理检测左肺 肺纤维化程度，观察疗效(如图6所示）。
[0027] (7)博来霉素（3.Omg/kg)诱导的术后动物接受验证药物尼达尼布口服给药，进行 预防性治疗实验，60mg/kg，每天一次，连续给药14天。第十五天安乐死动物，病理检测左肺 肺纤维化程度，观察疗效(如图7A所示）。
[00%] (8)博来霉素（3.Omg/kg)诱导的术后动物接受验证药物尼达尼布口服给药，进行 临床治疗性药效实验，50mg/kg，和lOOmg/kg，每天一次，连续给药14天。第十五天安乐死动 物，病理检测左肺肺纤维化程度，观察疗效(如图7B所示）。
[0029] 表1:本模型实验动物在各个剂量条件各组动物生存率
[0030]
[0031] 博来霉素诱导的肺纤维化动物模型广泛应用于肺纤维化研究的模型之一，是公认 的药效评价模型。本发明采用博来霉素诱导单侧肺肺纤维化动物模型，符合目前肺纤维化 动物模型制作的基本理念。能真实模拟肺纤维化的病理过程，模型成功率百分之百，稳定性 好，死亡率为零。改变了目前非选择性双肺肺纤维化模型的诸多弊端。可观察到早期肺泡壁 破坏，炎症反应，纤维膜细胞增生，中后期的胶原纤维沉积，肉芽肿形成，血管新生，细小支 气管慢性病变等明确的肺纤维化病理改变。本模型通过目前临床应用的两个不同作用机制 的口服药物(化菲尼酬和尼达尼布)预防性给药治疗达到了良好的疗效，验证了本模型的实 际应用价值，即用于肺纤维化的新药研发和科学研究。
[0032] 本发明具有的优点有:在实验大鼠上建立与人类肺纤维化疾病高度相似疾病模型 用于肺纤维化疾病的病因学，病理学和药学评价的模型。开发一种简单易行、能广泛推广 的、可真实模拟肺纤维化自然发生过程、模型稳定的方法。因其病理过程与人慢性肺纤维化 病理过程高度相似，具备较高病因学和病理学研究价值，在对抗肺纤维化药物的评价中具 有重要意义。
[0033] W上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发 明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领 域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1. 一种制作大鼠单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为:麻醉动物，气管切开、气 管插管，单侧肺博来霉素灌注，缝合气管，术后护理。2. 根据权利要求1所述的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为：气管切开、 气管插管的手术操作和步骤。3. 根据权利要求1所述的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征为:所述的博来 霉素剂量为1.5,3.0,5.0mg/kg。4. 根据权利要求1-3任一所述的制作单侧肺肺纤维化动物模型的方法，其特征在于，所 述动物为各种种系和性别的实验大鼠。5. -种制作肺纤维化动物模型的方法，其包括：用有效量的博来霉素灌注啮齿类动物 的单侧肺。6. 根据权利要求5的方法，其中所述有效量为0.5至10mg/kg，优选1至8mg/kg，更优选 1.5至5.0mg/kg，例如1 ·5、3·0或 5.0mg/kg。7. 根据权利要求5的方法，其中所述啮齿类动物选自：大鼠、小鼠和豚鼠。
【文档编号】A61K49/00GK105999221SQ201610324204
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】庄永杰, 陈继巧
【申请人】南京凯斯艾生物科技有限公司