一种聚氨酯/小肠粘膜下层(pu/sis)双组份可注射水凝胶的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种双组份可注射水凝胶产品盒，它包括分开存放的两个组分：组分A是聚氨酯乳液，组分B是含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶。本发明还提供了前述产品盒的制备方法以及用途。本发明水凝胶产品包中的两个组分可通过内镜技术介导，实现注射植入，并能迅速在原位凝胶化，固定于损伤部位，对创面的修复效果良好，手术创伤极小，为肌性管腔组织损伤的微创修复治疗和预防并发症提供了一种新的选择，临床应用前景良好。
【专利说明】
-种聚氨醋/小肠粘膜下层(pu/s I s)双组份可注射水凝胶
技术领域
[0001] 本发明设及一种聚氨醋/小肠粘膜下层(PU/SIS)双组份可注射水凝胶。
【背景技术】
[0002] 20世纪W来，随着医学科学的整体发展，越来越多的研究成果被运用于疾病的诊 断与治疗中，因此一些重大疾病的病因、发病机制、诊断治疗乃至预防，在过去100年里取得 了显著进展。尤其是近年来消化内镜新技术飞速发展，对消化系统疾病的诊断和治疗更是 起到了革命性的推动作用。除常规胃镜、肠镜外，现在已有腹腔镜、胸腔镜、脑室镜、关节镜、 锥间盘腔镜等微型的内窥镜。在消化内科、肝胆外科、胸科、妇产科、泌尿外科、骨科等广泛 应用。
[0003] 传统的外科手术可W将病变组织切除得比较彻底，然而运是W切除大部分脏器为 前提的。其问题是，手术后容易使脏器原来的功能消失，造成的创伤大，极大的影响了患者 的生活质量。内镜技术有别于传统外科手术，它是使内镜前端抵达病人体内的病灶部位，在 内镜直视下进行治疗操作，完成全部手术过程。内镜治疗可W主动而有效地解决内科保守 治疗难W解决的问题，如急性食管胃底静脉破裂出血;可W简化复杂而危险的治疗方法或 替代某些手术，如急性化脈性胆管炎、肝内胆管结石等。它可在明确诊断的同时进行治疗， 具有简便、快速、高效、安全、不需要麻醉、对病人损伤小、并发症少、死亡率低和总耗费低等 特点，为广大病人，特别是急诊危重、高龄多病者所接受。内镜技术对于良性疾病具有治愈 性作用;对于恶性肿瘤病人可W有效地解除或减少痛苦，提高病人生存期间的生活质量。
[0004] 我国是食管癌发病率和死亡率最高的国家，而内镜下粘膜切除术（endoscopic mucosal resection,EMR)和粘膜剥离术（endoscopic mucosal dissection,ESD)正逐渐成 为早期食管癌治疗的优选方案。其中EMR主要用于直径小于2厘米的病变，对于病变范围广、 直径大于2厘米，浸润深度在SM1层W上，没有远处转移的早期食管癌，通常采用内镜下ESD 剥离病变。为确保完整切除病变，ESD切除范围为病变部位及其周边0.5cmW内的正常粘膜， 然而术后易出现W下并发症：穿孔、创面出血、术后疼痛、溃瘍愈合时间长(3~4周）W及后 期癒痕李缩狭窄等。因此为避免术后大面积溃瘍形成的穿孔、狭窄，对此类溃瘍面进行快速 而完整的修复显得至关重要。
[0005] 传统的溃瘍治疗方案一般采用质子累抑制剂(proton P皿P inhibitors，PPIs)通 过抑制胃酸分泌，达到促进ESD术后溃瘍愈合的效果。然而运类药物对ESD大范围且合并烧 灼损害的溃瘍确切并发症的预防作用尚难定论;国外也有关于口服糖皮质激素有助于预防 ESD术后食管狭窄的报道，但由于激素的副作用也使其临床应用面临较大的问题。国内的研 究者采用金属夹错夹创面W治疗胃肠粘膜早期肿瘤ESD术中、术后出血与穿孔等并发症，取 得了良好的效果，然而在食管癌治疗中有导致远期食管狭窄的风险。
[0006] 小肠粘膜下层（smallintestinal submucosa，SIS)等天然脱细胞基质，具有良好 的细胞相容性、富含多种生长因子、无免疫原性、具有抗微生物活性、组织特异性诱导再生 等优点，可W用于食道创面的修复。但是，小肠粘膜下层作为食管修复材料存在一些明显的 缺陷，如力学强度不足、降解时间太快，塑型困难，需要采用传统的开放式外科手术进行治 疗，存在创伤大等等问题。
[0007] 随着研究的逐步深入，目前通过将小肠粘膜下层与其他材料的复合方式，解决了 小肠粘膜下层力学强度不足、降解时间太快的问题，如，公告号为104341608A的专利申请公 开了一种聚氨醋/SIS复合的复合材料，解决了小肠粘膜下层力学强度不足的问题。
[0008] 但是，其仍然必须通过传统开放式外科手术进行治疗，由其带来的相关问题不能 得到解决。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供一种聚氨醋/小肠粘膜下层(PU/SIS)可注射水凝胶材料， 其可W通过内镜的方式修复创面，创伤小，解决现有修复材料必需采用开放式手术进行修 复而存在创伤大的问题。
[0010] 本发明提供了一种双组份可注射水凝胶产品盒，它包括分开存放的两个组分:组 分A是聚氨醋乳液，组分B是含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶。
[00川优选地，所述聚氨醋乳液的平均粒径为30~lOOnm，固含量为10%~25%，Zeta电 位为-60mV ~-20mV。
[001 ^ 进一步优选地，所述聚氨醋乳液的制备方法如下：
[OOU] (1)预聚：取异氯酸醋与径基供体，预聚，二者的摩尔比为(0.26~0.27) :(0.15~ 0.19);
[0014] 所述异氯酸醋为异佛尔酬二异氯酸醋、赖氨酸二异氯酸醋或二苯基甲烧二异氯酸 醋中的任意一种或多种；
[0015] 所述径基供体为聚四氨巧喃酸、聚ε-己内醋二醇中任意一种或多种；
[0016] (2)扩链:加入扩链剂，扩链，其中，扩链剂与步骤(1)中径基供体的摩尔比为(0.15 ~0.19) :(0.05~0.09);扩链过程中加入丙酬；
[0017] 所述扩链剂为1,4-下二醇、2,2-二径甲基丙酸、乙二醇中的任意一种或多种；
[0018] (3)中和乳化:取中和剂，将聚氨醋聚合物分散于中和剂中，乳化化;其中，中和剂 与步骤(2)中扩链剂的摩尔比为(0.15~0.19) :(0.02~0.08);
[0019] (4)纯化:旋蒸除去丙酬和过量中和剂，去离子水透析除去杂质，即得。
[0020] 优选地，步骤（1)中，预聚的溫度为75°C;预聚的时间为2~4h;预聚采用的催化剂 为辛酸亚锡、Ξ乙醇胺或二月桂酸二下基锡；
[0021] 步骤(2)中，扩链的溫度为50°C~55°C ;扩链的时间为3~4h;
[0022] 步骤（3)中，在转速为1500r/m的快速剪切条件下将聚氨醋聚合物分散于中和剂 中；所述中和剂为Ξ乙胺或氨氧化钢；
[0023] 步骤(4)中，旋蒸的溫度为55°C。
[0024] 优选地，所述含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶，其平均粒径为600~900nm，固 含量为0.5%~4%，Zeta电位为20~50mV。
[0025] 优选地，所述溶胶中，醋酸与水的体积比为4:100,小肠粘膜下层粉末与醋酸水溶 液的质量体积比为2:100。
[0026] 优选地，所述含有含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶的制备方法为:取醋酸，审U 备醋酸水溶液，醋酸与水的体积为4:100,再加入小肠粘膜下层粉末，混匀，小肠粘膜下层粉 末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比为2:100。
[0027] 优选地，所述小肠粘膜下层按照下述方法制备得到：
[0028] (i)取猪小肠，水洗，剖开，剪成段；
[0029] (ii)刮除小肠的肌层和浆膜层；
[0030] (iii)水洗滤干后，将其浸入Ξ氯甲烧与甲醇的混合溶液中，浸泡时间为4小时，所 述混合溶液中Ξ氯甲烧与甲醇的体积比为1:1;
[0031] (iv)水洗后，放入膜蛋白酶溶液中，4°C处理过夜；
[0032] (V)水洗后，用SDS处理至少地；
[0033] (Vi)清洗后，冻干；
[0034] (vi i)粉碎，加入含有3 %醋酸、0.1 %胃蛋白酶的PBS溶液中，调抑至中性后，冻干， 再粉碎，即得。
[0035] 优选地，所述产品盒中，组分A与组分B的体积比为1: (1~3)。
[0036] 本发明还提供了一种制备前述可注射水凝胶产品包的方法，步骤如下：
[0037] I、制备聚氨醋乳液
[0038] (1)预聚：取异氯酸醋与径基供体，预聚，二者的摩尔比为(0.26~0.27) :(0.15~ 0.19);
[0039] 所述异氯酸醋为异佛尔酬二异氯酸醋、赖氨酸二异氯酸醋或二苯基甲烧二异氯酸 醋中的任意一种或多种；
[0040] 所述径基供体为聚四氨巧喃酸、聚ε-己内醋二醇中任意一种或多种；
[0041] (2)扩链:加入扩链剂，扩链，其中，扩链剂与步骤(1)中径基供体的摩尔比为(0.15 ~0.19) :(0.05~0.09);扩链过程中加入丙酬；
[0042] 所述扩链剂为1,4-下二醇、2,2-二径甲基丙酸、乙二醇中的任意一种或多种；
[0043] (3)中和乳化:加入中和剂，快速剪切条件（150化/m)将聚氨醋聚合物分散中和剂 中，乳化化;其中，中和剂与步骤(2)中扩链剂的摩尔比为(0.15~0.19) :(0.02~0.08);
[0044] 所述中和剂为Ξ乙胺或氨氧化钢；
[0045] (4)纯化:旋蒸除去丙酬和过量中和剂，去离子水透析除去杂质，即得聚氨醋乳液， 包装，即可；
[0046] Π 、制备含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶
[0047] 取醋酸，制备醋酸水溶液，醋酸与水的体积为4:100，再加入小肠粘膜下层粉末，混 匀，包装，即可，其中，小肠粘膜下层粉末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比为2:100;
[004引所述小肠粘膜下层粉末按照下述方法制备得到：
[0049] (i)取猪小肠，水洗，剖开，剪成段；
[0050] (i i)刮除小肠的肌层和浆膜层；
[0051] (iii)水洗滤干后，将其浸入Ξ氯甲烧与甲醇的混合溶液中，浸泡时间为4小时，所 述混合溶液中Ξ氯甲烧与甲醇的体积比为1:1;
[0052] (iv)水洗后，放入膜蛋白酶溶液中，4Γ处理过夜；
[0化3] (V)水洗后，用SDS处理至少地；
[0054] (Vi)清洗后，冻干；
[005引 （Vi i)粉碎，加入含有3 %醋酸、0.1 %胃蛋白酶的PBS溶液中，调抑至中性后，冻干， 再粉碎，即得。
[0056] 本发明还提供了前述的可注射水凝胶产品包的使用方法，步骤如下：取前述的可 注射水凝胶产品包，将组分A与组分B按照1:(1~3)的体积比混合，即可。
[0057] 本发明还提供了一种聚氨醋/小肠粘膜下层(PU/SIS)水凝胶，按照如下方法制备： 取前述的可注射水凝胶产品包，将组分A与组分B按照1:(1~3)的体积比混合，即得水凝胶。
[0058] 本发明还提供了前述可注射水凝胶产品包W及聚氨醋/小肠粘膜下层(PU/SIS)水 凝胶在制备创面修复材料中的用途。
[0059] 使用本发明可注射水凝胶产品包，在使用内镜手术对创面进行检查时即可进行修 复，无需再次进行开放式手术，避免了二次手术导致的风险与医疗成本，易被患者接受。
[0060] 本发明可注射水凝胶产品包中，组分A和组分B能够迅速的形成凝胶体系，使用时， 先通过内镜将组分B覆于创面，再将组分A覆于创面，即可原位形成凝胶，固定于损伤部位， 实现修复。本发明W内镜技术治疗食管与胃黏膜为例，为肌性管腔组织损伤的微创修复治 疗和预防并发症提供了一种新的选择。
[0061] 综上，本发明水凝胶产品包中的两个组分可通过内镜技术介导，植入创伤部位，并 能迅速在原位凝胶化，固定于损伤部位，对创面的修复效果良好，且手术创伤极小，患者依 从性好，为肌性管腔组织损伤的微创修复治疗和预防并发症提供了一种新的选择，临床应 用前景良好。
[0062] 下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限 审IJ，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述 基本技术思想前提下，还可W做出其它多种形式的修改、替换或变更。
【附图说明】
[0063] 图1对照组0周图（犬食管ESD术）
[0064] 图2埃索美拉挫组0周图（犬食管ESD术）
[0065] 图3本发明可注射PU/SIS补片组0周图（犬食管ESD术）
[0066] 图4对照组4周图（犬食管ESD术）
[0067] 图5埃索美拉挫组4周图（犬食管ESD术）
[006引图6本发明可注射PU/SIS补片组4周图（犬胃窦ESD术）图7对照组2周图（犬胃窦ESD 术）
[0069] 图8埃索美拉挫组2周图（犬胃窦ESD术）
[0070] 图9本发明可注射PU/SIS补片组2周图（犬胃窦ESD术）
[0071] 图10对照组4周图（犬胃窦ESD术）
[0072] 图11埃索美拉挫组4周图（犬胃窦ESD术）
[0073] 图12本发明可注射PU/SIS补片组4周图（犬胃窦ESD术）
[0074] 图13对照组愈合时间图（犬胃窦ESD术）
[0075] 图14埃索美拉挫组愈合时间周图（犬胃窦ESD术）
[0076] 图15本发明可注射PU/SIS补片组愈合时间周图（犬食管ESD术）
[0077] 图16愈合效果对照图
【具体实施方式】 [007引缩略词：
[0079] SIS:小肠粘膜下层，PU:聚氨醋，DMPA:2,2-二径甲基丙酸。SDS:十二烷基硫酸钢
[0080] 1.聚氨醋乳液固含量的测定
[0081] 固含量是乳液或涂料在规定条件下烘干后剩余部分占总量的百分数。参照 GB1725-79,取干燥的表面皿称质量，并用减重法称取1.5~2. Og的阴离子聚氨醋乳液平铺 于表面皿中，放入40°C烘箱中干燥2地，取出、冷却至室溫后称量。用分析天平精确称量前洗 净干燥的称量瓶称重Ag，样品重量Bg，烘干后称重饱含了样品和称量瓶)Cg，计算(C-AVB* 100%得出固含量。
[0082] 2.粒径表征与Ze化电位表征
[0083] 2.1平均粒径检测方法
[0084] 采用粒径测试仪对液体样品的平均粒径大小及分布进行测试。取适量制备的水性 聚氨醋乳液或SIS溶胶，用移液枪取1ml样品转移至样品池中。将装有液体样品的样品池放 入仪器光路中，在室溫下进行平均粒径测试。
[0085] 2.2Ze化电位检测方法：
[0086] 采用Zeta电位分析仪对液体样品的Zeta电位进行测试。取适量制备的水性聚氨醋 乳液或SIS溶胶，用移液枪取ImL左右样品转移至样品池中。将装有液体样品的样品池放入 仪器光路中，在室溫下进行Zeta电位测试。
[0087] 实施例1本发明可注射凝胶产品盒的制备 [008引（1)制备方法
[0089] 组分A的制备：
[0090] 将0.26mol赖氨酸二异氯酸醋与0.19mol聚e-己内醋二醇1000加入四口 S颈瓶中， 反应过程中通冷凝水，调节揽拌杆的转速为800~lOOOr/m.。在氮气保护、二甲基乙醇胺(3 滴）为催化剂溫度为75°C的条件下聚合4h，之后加入0.02mol小分子扩链剂乙二醇与 0.03mol亲水扩链剂DMPA，降溫至50°C，继续反映3~地，反应过程采用丙酬调节粘度(加入 扩链剂后，每隔化加入丙酬调节体系的粘度，每次8ml)。配置0.04mol/LS乙胺溶液lOOOmL, 快速剪切条件（15(K)r/m)下将聚氨醋聚合物分散于Ξ乙胺溶液中，乳化反应化，将得到的乳 液于55°C溫度下旋蒸，除去乳液中的丙酬和Ξ乙胺等小分子物质，去离子水透析Ξ天除去 杂质。
[0091] 经检测，制备得到的聚氨醋乳液的平均粒径89.7nm、固含量20.1 %、Zeta电位的数 值-43.2ev。
[0092] 分装制备得到的聚氨醋乳液，即可。
[0093] 组分B的制备：
[0094] SIS粉末的制备方法：
[0095] 本发明中，SIS粉末采用现有技术的常规方法制备得到，例如采用下述方法制备 SIS粉末：
[0096] 1)取新鲜猪小肠，用水冲去内容物，盐揉磋后用水反复冲洗3次。用手术刀剖开小 肠，并剪成10~20cm长的肠段；
[0097] 2)用压舌板刮除小肠的肌层和浆膜层，4°C下保存于生理盐水中；
[0098] 3)去离子水漂洗干净并滤干后将其浸入Ξ氯甲烧-甲醇的混合液中（Ξ氯甲烧：甲 醇=1:1) 4小时，平均化换一次液，0.化揽拌一次；
[0099] 4)去离子水反复清洗后放入浓度为0.25%的膜蛋白酶液里，4°C处理过夜；
[0100] 5)用去离子水漂洗10次后用0.5%的SDS处理至少地；
[0101] 6)清洗后置于-70°C下冻干2地。
[0102] 7)将低溫粉碎的SI巧日入含有3%醋酸，0.1 %胃蛋白酶的PBS溶液中，揽拌48h，调 pH至中性后，冻干，再粉碎，即得到小肠粘膜下层粉末。侣塑袋热封;环氧乙烧消毒。
[0103] 取醋酸，制备醋酸水溶液，冰醋酸与水的体积为4mL:100mL，再加入小肠粘膜下层 粉末，混匀，形成均一的溶胶体系，小肠粘膜下层粉末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比 为2g:lOOmL。
[0104] 经检测，制备得到的SIS溶胶的平均粒径815nm、固含量2%、Zeta电位的数值 28.65mV。
[0105] 分装制备得到的含有醋酸和小肠粘膜下层的溶胶，即可。
[0106] (2)使用方法
[0107] 先将组分B涂覆于创面，再将1~3倍体积的组分A涂覆于创面，即可。
[0108] 实施例2本发明可注射凝胶产品盒的制备
[0109] (1)制备方法
[0110] 组分A的制备：
[0111] 将0.27mol异氣尔酬二异氯酸醋与0.15mol聚四氨巧喃酸1000加入四口 Ξ颈瓶中， 反应过程中通冷凝水，调节揽拌转速为800~lOOOr/m，加入2滴辛酸亚锡催化剂，在75°C和 氮气保护下预聚合2小时，然后降溫至55°C，加入0.04mol小分子扩链剂1,4-下二醇与 0.05mol亲水扩链剂2，2-径甲基丙酸(DMPA)，继续扩链反应3~4小时。反应过程中可加入丙 酬调节反应体系的粘度(加入扩链剂后，每隔化加入丙酬调节体系的粘度，每次加入的量为 8mL)，使反应维持在平稳状态下进行。配置0.02mol/LS乙胺溶液lOOOmL，快速剪切条件 (15(K)r/m)将聚氨醋聚合物分散于Ξ乙胺溶液中，乳化反应化，将得到的乳液于55°C溫度下 旋蒸，除去乳液中的丙酬和Ξ乙胺等小分子物质，去离子水透析Ξ天除去杂质。
[0112] 经检测，制备得到的聚氨醋乳液的平均粒径70.2nm、固含量18%、Zeta电位的数 值-28.4：3mV。
[0113] 分装制备得到的聚氨醋乳液，即可。
[0114] 组分B的制备：
[0115] SIS粉末的制备方法：同实施例1。
[0116] 取醋酸，制备醋酸水溶液，冰醋酸与水的体积为4mL:100mL，再加入小肠粘膜下层 粉末，混匀，形成均一的溶胶体系，小肠粘膜下层粉末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比 为0.5g:lOOmL。
[0117] 经检测，制备得到的SIS溶胶的平均粒径600nm、固含量0.5%、Zeta电位的数值 20mV。
[0118] 分装制备得到的含有醋酸和小肠粘膜下层的溶胶，即可。
[0119] (2)使用方法
[0120] 先将组分B涂覆于创面，再将1~3倍体积的组分A涂覆于创面，即可。
[0121] 实施例3本发明可注射凝胶产品盒的制备
[0122] (1)制备方法
[0123] 组分A的制备：
[0124] 将0.27mol异氣尔酬二异氯酸醋与0.15mol聚e-聚己内醋二醇2000加入四口 Ξ颈 瓶中，反应过程中通冷凝水，调节揽拌杆的转速为800~lOOOr/m.。在氮气保护、二醋酸二下 基锡(2滴)为催化剂溫度为75°C的条件下聚合地，之后加入0.07mol亲水扩链剂二径甲基丙 酸(是2,2-二径甲基丙酸），将体系溫度下调至50°C，继续反应3~地。反应过程采用适量的 丙酬调节粘度(加入扩链剂后，每隔化加入丙酬调节体系的粘度，每次8mL)。配置0.08mol/L Ξ乙胺溶液1200mL，快速剪切条件（150化/m)下将聚氨醋聚合物分散于Ξ乙胺溶液中，乳化 反应化，将得到的乳液于55°C溫度下旋蒸，除去乳液中的丙酬和Ξ乙胺等小分子物质，去离 子水透析Ξ天除去杂质。
[0125] 经检测，制备得到的聚氨醋乳液的平均粒径（110.2nm)、固含量23.5、Zeta电位的 数值-41.01 eV。
[0126] 分装制备得到的聚氨醋乳液，即可。
[0127] 组分B的制备：
[012引SIS粉末的制备方法:同实施例1。
[0129] 取醋酸，制备醋酸水溶液，冰醋酸与水的体积为4mL:100mL，再加入小肠粘膜下层 粉末，混匀，形成均一的溶胶体系，小肠粘膜下层粉末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比 为4g:100mL。
[0130] 经检测，制备得到的SIS溶胶的平均粒径900nm、固含量4%、Zeta电位的数值50mV。
[0131] 分装制备得到的含有醋酸和小肠粘膜下层的溶胶，即可。
[0132] (2)使用方法
[0133] 先将组分B涂覆于创面，再将1~3倍体积的组分A涂覆于创面，即可。
[0134] W下用实验例的方式来证明本发明的有益效果：
[0135] 实验例1本发明水凝胶产品盒对ESD术后食管溃瘍的疗效及预防食管狭窄的作用
[0136] 1、实验方法
[0137] 经胃镜建立犬食管ESD术后溃瘍模型，观察不同治疗手段对犬ESD术后食管溃瘍的 疗效及预防食管狭窄的作用：
[0138] 经胃镜建立犬食管ESD术后溃瘍模型：实验犬麻醉(戊己比妥钢1.2ml/kg，腹腔内 注射）及气管插管后，采用胃镜（Olympus GIF-Q260J)、电刀（Olympus ESG-100)及相关附 件，选择距beagle犬（10kg，雄性）Π 齿40-45厘米之间环周剥离5cm长食管粘膜层，采用隧道 式全周剥离法化STD)，建立食管溃瘍模型。
[0139] 经胃镜建立犬食管ESD术后溃瘍模型，随机分为对照组(安慰剂）、本发明双组分可 注射PU/SIS水凝胶补片(本发明实施例1制备的可注射水凝胶产品盒)及埃索美拉挫(PPIs 一种)药物治疗组。
[0140] 给药：（1)埃索美拉挫组:术后第3天始于晨间犬饮食中加入埃索美拉挫20mg，每日 一次。（2)本发明双组分可注射PIVSIS凝胶治疗组:术后第3天直接经胃镜活检孔插入喷洒 管，先注入B组分5ml覆盖于创面之上，再注入A组分5ml覆盖于A组分之上，即可；（3)对照组： 建模后不予处理。
[0141] 2、实验结果
[0142] 实验结果如表1所示：
[0143] 表1:不同治疗手段对犬食管ESD术后溃瘍愈合的疗效对比
[0144]
[0145] 对照组:术后第2天于食管粘膜剥离处形成溃瘍，表覆黄白苔;2周后食管溃瘍开始 愈合，溃瘍下缘开始出现狭窄；3周后溃瘍进一步愈合，表面白苔变薄，新生细胞长入，溃瘍 下缘开始狭窄，内镜无法通过，实验犬进食减少，仅能进食少量流质饮食;4周后溃瘍完全愈 合，表面无苔，溃瘍面癒痕李缩，上下缘均狭窄明显，内镜无法通过，直径约0.5cm，实验犬逐 渐无法进食，6周后死亡。
[0146] 埃索美拉挫治疗组:术后第2天于食管粘膜剥离处形成溃瘍，表覆黄白苔;2周后食 管溃瘍开始愈合，溃瘍下缘开始出现狭窄;3周时溃瘍基本愈合，狭窄明显，内镜勉强可W通 过，实验犬进食减少，但可进食固体食物;4周时溃瘍完全愈合，溃瘍面癒痕李缩，内镜仍勉 强可W通过，但易擦碰癒痕边缘致出血，直径约0.8-1.0cm，实验犬进食进一步减少，仍可进 食固体食物。
[0147] 本发明双组分可注射PU/SIS水凝胶补片组:术后1周后食管溃瘍开始愈合，溃瘍下 缘开始出现狭窄；2周时溃瘍已大部分愈合，上下缘出现轻度狭窄，内镜通过无阻力，实验犬 进食稍减少;3周创面溃瘍已完全愈合，溃瘍上下缘见李缩环，管腔无明显狭窄，实验犬进食 同前;术后4周实验犬完全正常进食。
[0148] 结果显示:Ξ组ESD术后食管溃瘍愈合时间有所差异，本发明双组分可注射PU/SIS 水凝胶组修复效果较优，该材料具有促进食管溃瘍愈合，预防溃瘍癒痕李缩狭窄的作用，体 内修复无明显巧化现象，使用安全，为消化道粘膜修复提供了一种新的选择。
[0149] 实验例2本发明水凝胶对胃窦ESD术后溃瘍的作用
[0150] 1、实验方法
[0151] 经胃镜建立犬胃窦ESD术后溃瘍模型，观察不同治疗手段对犬ESD术后胃溃瘍的疗 效：
[0152] 经胃镜建立犬胃窦ESD术后溃瘍模型：实验犬麻醉(戊己比妥钢1.2ml/kg，腹腔内 注射)及气管插管后，采用胃镜(Olympus GIF-Q260J)，选择beagle犬（10kg，雄性）胃窦前壁 采用ESD技术剥离胃窦粘膜，形成直径3cm圆形ESD术后溃瘍，成功建立犬胃溃瘍模型。
[0153] 经胃镜建立犬ESD术后胃溃瘍模型12只，并随机分为:对照组、埃索美拉挫(PPIs- 种)药物治疗组及双组分可注射PU/SIS凝胶(本发明实施例1制备的可注射水凝胶产品盒） 治疗组，每组4只。
[0154] 给药：（1)埃索美拉挫组:术后第3天始于晨间犬饮食中加入埃索美拉挫20mg，每日 一次。（2)本发明双组分可注射PIVSIS凝胶治疗组:术后第3天直接经胃镜活检孔插入喷洒 管，先注入B组分1.5ml覆盖于创面之上，再注入A组分4.5ml覆盖于A组分之上，即可；（3)对 照组:建模后不予处理。
[0巧日]2、实验结果
[0156] 实验结果如表2和图16所示：
[0157] 表2:不同治疗手段对犬胃窦ESD术后溃瘍愈合的疗效对比 [015 引
[0159] (1)对照组：1周时，溃瘍均大小约2.5*2.5cm，溃瘍周围黏膜平整，底呈凹陷状;2周 时见溃瘍较前愈合，局部黏膜皱缩，底发红，均大小约2.0*1.5cm; 4周时可见溃瘍较前进一 步缩小，均大小约1.0*0.5cm，周围黏膜稍隆起，表面发红，花斑样;6周时，可见溃瘍大部分 愈合，均大小约0.5*0.5cm，周围黏膜红白相间，结构清晰；7周时，可见溃瘍表面呈花斑样， 但组织结构接近正常黏膜，周围黏膜发白稍皱缩。平均愈合时间为50天。
[0160] (2)埃索美拉挫组：1周时，溃瘍均大小约2.5*2.0cm，溃瘍周围黏膜平整，底呈凹陷 状;2周时见溃瘍较前愈合，局部黏膜尚平坦，底成凹陷状伴发红，均大小约1.5*1.5cm;4周 时可见溃瘍较前进一步缩小，均大小约0.5*0.5cm，周围黏膜稍隆起，呈福射状;6周时，可见 溃瘍已基本愈合，表面呈花斑样，但组织结构接近正常黏膜，周围黏膜发白稍皱缩。平均愈 合时间为42天。
[0161] (3)本发明PU/SIS凝胶组:注射后1周，溃瘍均大小约2.0*2.0cm，溃瘍周围黏膜尚 平整，底呈凹陷状且表面颗粒样粗糖;2周时见溃瘍较前愈合，局部黏膜稍皱缩伴隆起，底成 凹陷状伴发红，表面仍呈颗粒样，均大小约1.5*1.0cm;4周时可见溃瘍已基本愈合，表面稍 隆起呈花斑样，组织结构接近正常黏膜，周围黏膜发白稍皱缩。平均愈合时间为30天。
[0162] 结果显示:Ξ组ESD术后食管溃瘍愈合时间长短依次为对照组 > 埃索美拉挫组> PIVSIS凝胶组。组织学分析表明术后四周PU/SIS组溃瘍面已完全再上皮化，可认为已经愈 合，如图10所示，运与大体观察的结果相一致。实验结果说明，本发明PU/SIS凝胶具有促进 ESD术后溃瘍愈合的作用，具有临床应用前景，并为临床肌性管腔组织损伤的微创、腔镜下 修复提供了一种新的思路。
[0163] 综上，本发明水凝胶产品包中的两个组分可通过内镜技术介导，实现注射植入，并 能迅速在原位凝胶化，固定于损伤部位，对创面的修复效果良好，并为临床肌性管腔组织损 伤的微创、腔镜下修复提供了一种新的选择，临床应用前景良好。
【主权项】
1. 一种双组份可注射水凝胶产品盒，其特征在于：它包括分开存放的两个组分:组分A 是聚氨酯乳液，组分B是含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶。2. 根据权利要求1所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:所述组分A聚氨酯乳液的 平均粒径为30~lOOnm，固含量为10%~25%，Zeta电位为-60mV~-20mV。3. 根据权利要求2所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:所述聚氨酯乳液的制备方 法如下： (1) 预聚：取异氰酸酯与羟基供体，预聚，二者的摩尔比为（0.26~0.27) :(0.15~ 0.19)； 所述异氰酸酯为异佛尔酮二异氰酸酯、赖氨酸二异氰酸酯或二苯基甲烷二异氰酸酯中 的任意一种或多种； 所述羟基供体为聚四氢呋喃醚、聚ε_己内酯二醇中任意一种或多种； (2) 扩链:加入扩链剂，扩链，其中，扩链剂与步骤（1)中羟基供体的摩尔比为（0.15~ 0.19) :(0.05~0.09);扩链过程中加入丙酮； 所述扩链剂为1，4_ 丁二醇、2,2_二羟甲基丙酸、乙二醇中的任意一种或多种； (3) 中和乳化:取中和剂，将聚氨酯聚合物分散于中和剂中，乳化2h;其中，中和剂与步 骤(2)中扩链剂的摩尔比为(0.15~0.19) :(0.02~0.08); (4) 纯化:旋蒸除去丙酮和过量中和剂，去离子水透析除去杂质，即得。4. 根据权利要求3所述的可注射水凝胶产品包，其特征在于:步骤（1)中，预聚的温度为 75°C;预聚的时间为2~4h;预聚采用的催化剂为辛酸亚锡、三乙醇胺或二月桂酸二丁基锡； 步骤(2)中，扩链的温度为50°C~55°C ;扩链的时间为3~4h; 步骤(3)中，在转速为1500r/m的快速剪切条件下将聚氨酯聚合物分散于中和剂中；所 述中和剂为三乙胺或氢氧化钠； 步骤(4)中，旋蒸的温度为55 °C。5. 根据权利要求1所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:所述组分B含有小肠粘膜 下层粉末和醋酸的溶胶中，醋酸与水的体积比为4:100,小肠粘膜下层粉末与醋酸和水的总 量的质量体积比为(0.5~4):100，优选为2:100。6. 根据权利要求1或5所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:所述溶胶的平均粒径 为600~900nm，固含量为0·5%~4%，Zeta电位为20~50mV。7. 根据权利要求1、5或6所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:所述含有小肠粘膜 下层粉末和醋酸的溶胶的制备方法为:取醋酸，制备醋酸水溶液，醋酸与水的体积为4:100， 再加入小肠粘膜下层粉末，混匀，小肠粘膜下层粉末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比 为2:100 〇8. 根据权利要求1、5~7任意一项所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:所述小肠 粘膜下层按照下述方法制备得到： (i) 取猪小肠，水洗，剖开，剪成段； (ii) 刮除小肠的肌层和浆膜层； (i i i)水洗滤干后，将其浸入三氯甲烷与甲醇的混合溶液中，浸泡时间为4小时，所述混 合溶液中三氯甲烷与甲醇的体积比为1:1; (i v)水洗后，放入胰蛋白酶溶液中，4 °C处理过夜； (V)水洗后，用十二烷基硫酸钠处理至少4h; (vi) 清洗后，冻干； (vii) 粉碎，加入含有3%醋酸、0.1 %胃蛋白酶的PBS溶液中，调pH至中性后，冻干，再粉 碎，即得。9. 根据权利要求1~8任意一项所述的可注射水凝胶产品盒，其特征在于:组分A与组分 B的体积比为1: (1~3)。10. -种制备权利要求1~9任意一项所述的可注射水凝胶产品包的方法，其特征在于： 步骤如下： I、制备聚氨酯乳液 (1) 预聚：取异氰酸酯与羟基供体，预聚，二者的摩尔比为（0.26~0.27) :(0.15~ 0.19)； 所述异氰酸酯为异佛尔酮二异氰酸酯、赖氨酸二异氰酸酯或二苯基甲烷二异氰酸酯中 的任意一种或多种； 所述羟基供体为聚四氢呋喃醚、聚ε_己内酯二醇中任意一种或多种； (2) 扩链:加入扩链剂，扩链，其中，扩链剂与步骤（1)中羟基供体的摩尔比为（0.15~ 0.19) :(0.05~0.09);扩链过程中加入丙酮； 所述扩链剂为1，4_ 丁二醇、2,2_二羟甲基丙酸、乙二醇中的任意一种或多种； (3) 中和乳化:加入中和剂，快速剪切条件（1500r/m)将聚氨酯聚合物分散中和剂中，乳 化2h;其中，中和剂与步骤(2)中扩链剂的摩尔比为(0.15~0.19) :(0.02~0.08); 所述中和剂为三乙胺或氢氧化钠； (4) 纯化:旋蒸除去丙酮和过量中和剂，去离子水透析除去杂质，即得聚氨酯乳液，包 装，即可； Π 、制备含有小肠粘膜下层粉末和醋酸的溶胶 取醋酸，制备醋酸水溶液，醋酸与水的体积比为4:100,再加入小肠粘膜下层粉末，混 匀，包装，即可，其中，小肠粘膜下层粉末的加入量与醋酸水溶液的质量体积比为2:100; 所述小肠粘膜下层粉末按照下述方法制备得到： (i) 取猪小肠，水洗，剖开，剪成段； (ii) 刮除小肠的肌层和浆膜层； (i i i)水洗滤干后，将其浸入三氯甲烷与甲醇的混合溶液中，浸泡时间为4小时，所述混 合溶液中三氯甲烷与甲醇的体积比为1:1; (i v)水洗后，放入胰蛋白酶溶液中，4 °C处理过夜； (v) 水洗后，用SDS处理至少4h; (vi) 清洗后，冻干； (vii) 粉碎，加入含有3%醋酸、0.1 %胃蛋白酶的PBS溶液中，调pH至中性后，冻干，再粉 碎，即得。11. 一种聚氨酯/小肠粘膜下层(PU/SIS)水凝胶，其特征在于:按照如下方法制备:取权 利要求1~8任意一项所述的可注射水凝胶产品包，将组分A与组分B按照1:(1~3)的体积比 混合，即得水凝胶。12. 权利要求1~8任意一项所述的可注射水凝胶产品包以及权利要求11所述水凝胶在
【文档编号】A61L15/42GK105999373SQ201610380033
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】解慧琪, 龚梅
【申请人】四川大学华西医院