外源酶解提取高含量dha+epa磷虾油的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从南极磷虾中提取高含量DHA+EPA磷虾油的方法，所述的方法包括以下步骤：新鲜磷虾匀浆，制备木瓜蛋白酶液，将酶液加入磷虾匀浆液中调节pH值、温度，酶解反应后自然沉淀，取下层水解残渣用乙醇浸提三次，合并三次的浸提液减压浓缩，水浴加热。本发明的方法采用自溶与外源酶解结合的方式，工艺简单，更易于产业化，使用本发明的方法提取的磷虾油中EPA+DHA含量高于70％。
【专利说明】外源酶解提取高含量0…+0八磷虾油的方法
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及一种从南极磷虾中提取磷虾油的方法，具体地说，是一种外源酶解提取高含量0撤十2？八磷虾油的方法。
【【背景技术】】
[0002]南极磷虾，又名大磷虾或南极大磷虾，是一种生活在南冰洋的南极洲水域的磷虾。采用南极磷虾制备而得的磷虾油具有超强的降血脂、降血糖、降血压、穿越血脑屏障营养及活化脑部细胞和神经，从而起到预防和治疗脑血管疾病的作用；同时，还能预防和治疗冠状动脉粥样硬化，冠心病，预防发生心梗、支架、搭桥及二次复发等心血管疾病；南极磷虾油还可以起到抗菌消炎，预防癌症的发生发展，延缓衰老，调节内分泌等多重功效。
[0003]南极磷虾油含有0邮职-3必需脂肪酸二十碳五烯酸(即八)和二十二碳六烯酸(0撤)。006职-3必需脂肪酸有很多促进健康的益处，包括心血管，神经，骨骼和关节，视力，皮肤保健等。其不饱和脂肪酸是自然界中唯一以磷脂型态结合03-3和多样性超强抗氧化物(磷脂型奸青素八的分子结构。南极磷奸油是含有丰富的维生素
2、维生素八、虾青素、磷脂质、类黄酮的功能强大的抗氧化剂。南极磷虾自身富含高效的消化腺蛋白酶。
[0004]磷虾油的制备方法大致有以下几种:
[0005]1、申请号为201210410940的发明《一种从干南极磷虾中提取虾油粗品并处理泡沫的工艺》，步骤如下:(1)干南极磷虾，加入95?100%乙醇，搅拌提取处，用80目滤布挤滤后再用滤纸过滤，得滤液及滤渣；(2)向步骤(1)所得滤渣中加入95?100%乙醇，搅拌提取处，用80目滤布挤滤后再用滤纸过滤，得滤液及滤渣；向滤渣中再加入95?100%乙醇，搅拌提取处，用80目滤布挤滤后再用滤纸过滤，得滤液及滤渣；(3)将步骤(2)所得的滤液合并，真空浓缩，即得虾油粗品。每1008干南极磷虾(含水量为8%?10%)最终能得到19?20.728的虾油粗品。
[0006]2、《南极磷虾粗虾油提取工艺优化》一文研究了南极磷虾粗虾油的有机溶剂提取工艺。探讨不同提取剂、提取剂混合比、提取时间、提取温度和料液比对南极磷虾粗虾油得率的影响。在单因素试验基础上，通过响应面分析确定最佳的提取工艺条件为:以正己烷+乙酸乙酯为提取剂、提取剂混合比71.3:28.7、料液比1:6.6、在57.81提取50—；此时粗虾油得率为14.76%。
[0007]中国专利文献⑶:201310262319.7，公告日2013年9月18日公开了一种低温逆流提取南极磷虾虾油的方法，该方法运用溶剂逆向对原料进行提取，通过干燥粉碎、逆流提取、溶剂挥发，制备的南极磷虾油主要成分及含量为:磷脂35-40 %、2？八13-18%、0拟8-12%。专利文献:201180067212.6，公告日2014年01月08日公开了一种生产磷虾油的方法，所述用于生产磷虾油的方法包括以下步骤:准备磷虾；向所述磷虾中添加蛋白酶以进行酶反应；提取二十碳五烯酸(即八)、二十二碳六烯酸(0撤)，使用该种方法制备的磷虫下油2？八含量为14-18%，0撤含量为8-12。上述方法能有效的从磷奸中提取磷奸油，但所提取的磷虾油中0撤和20八的含量并不高。因此，研发一种从磷虾中提取高含量的01^+2？八磷虾油的方法是十分必要的。
【
【发明内容】
】
[0008]本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种从南极磷虾中提取高含量0^+2？^磷虾油的方法。
[0009]本发明的再一的目的是，提供由上述方法制备的磷虾油。
[0010]为实现上述目的，本发明采取的技术方案是:
[0011]一种从南极磷虾中提取高含量0撤—2？八磷虾油的方法，包括如下步骤:
[0012](1)取新鲜的南极磷虾匀浆，加入超纯水，混合均匀，得磷虾均浆液；
[0013](2)取木瓜蛋白酶，溶解于超纯水中，得酶液；
[0014](3)将步骤⑵制备的酶液加入到步骤⑴制备的磷虾均浆液中，调节邱至
6.0-7.0，于45-551酶解1.5-2.5卜；自然沉淀后分别得上层的水解液和下层的水解残渣；
[0015](4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用95-100%的乙醇浸提，浸提温度为48-521，浸提时间为1.5-2.5卜；浸提所得的残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液；减压浓缩，于801水浴加热至乙醇挥发干净，得磷虾油。
[0016]步骤(1)中超纯水用量为南极磷虾质量的5-7倍。
[0017]步骤⑵中酶液的浓度为1.5-3%。
[0018]步骤(2)中木瓜蛋白酶的质量为南极磷虾的1.5?2.5% ；优选为2%。
[0019]步骤⑶中调节邱值至7.0。
[0020]步骤(3)中，酶解温度为501。
[0021]步骤(3)中，酶解时间为2.511。
[0022]步骤⑷中浸提温度为501，浸提时间为2匕。
[0023]所述新鲜磷虾与乙醇的料液比为18:6-101111 ；优选为18:61111。
[0024]为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是:
[0025]如上任一所述的方法制备的磷虾油，所述的磷虾油中撤含量为70-80%。
[0026]本发明中所选用的木瓜蛋白酶活力值为250口/呢。
[0027]本发明中所述的磷虾即为南极磷虾。
[0028]本发明优点在于:
[0029]1、利用磷虾自溶特性，采用自溶+外源酶解的方式，更易于磷虾油的提取。
[0030]2、不需要事先对磷虾进行干燥处理，工艺简单；易于产业化。
[0031〕 3、所得的磷虾油中0撤—2？八含量〉70 %，较以往工艺有明显提高(现有技术一般仅能达到60%左右
[0032]4、避免使用易爆炸的乙酸乙酯作为溶剂；选用的乙醇是工业常用溶剂，无毒，易回收，不易爆炸。
【【专利附图】
【附图说明】】
[0033]附图1为不同邱条件下所得磷虾油中0撤+213八含量的对比图。图中]3? = 5、邱=6、邱=7、邱=8分别对应对比例1、实施例1、实施例2、对比例2。
[0034]附图2为不同料液比条件下所得磷虾油中0撤—2？八含量的对比图。图中料液比为1:6、1:10、1:14分别对应实施例3、实施例4、对比例3。
[0035]附图3为不同酶用量条件下所得磷虾油中01^+2？八含量的对比图。图中酶含量为
0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%分别对应对比例4、对比例5、实施例5、实施例6、实施例7。
[0036]附图4为不同酶解时间下所得磷虾油中0撤—2？八含量的对比图。图中酶解时间为111、1.511,211,2.51311分别对应对比例6、对比例7、实施例8、实施例9、实施例10。
[0037]附图5为不同酶解温度下所得磷虾油中0撤+213八含量的对比图。图中温度为401、451、501、551、601、401分别对应对比例8、实施例11、实施例12、实施例13、对比例9、对比例10。
【【具体实施方式】】
[0038]下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0039]实施例1-2
[0040](1)取308新鲜的磷虾，加入15001超纯水，置于匀浆机中匀浆，备用；
[0041](2)取0.458木瓜蛋白酶(上海士锋生物科技有限公司，活力值为250口/呢下同)，溶解于401111超纯水中，制备得酶液；
[0042](3)将制备的酶液加入磷虾匀浆液中，使用浓度为1?211101/1此1溶液、版10?溶液调节邱(实施例1调节邱为6.0，实施例2调节邱为7.0，对比例1调节邱为5.0，对比例2调节邱为8.0)，在551酶解2.51！；所得的酶解产物静置，自然沉淀得到位于上层的水解液和位于下层的水解残渣；
[0043](4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用18001体积浓度为95%的乙醇浸提，浸提温度为481，浸提时间为2.51！；浸提所得到残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液，减压浓缩至18“，于常压条件下801水浴加热至乙醇挥发干净，得南极磷虾油。
[0044]分析所得磷虾油中0撤及2？八含量如图1所示，从图1中可以看出:实施例1、实施例2所制备的南极磷虾油中0撤和2？八含量高于对比例1、对比例2。
[0045]实施例3-4
[0046](1)取308新鲜的磷虾，加入20001超纯水，置于匀浆机中匀浆，备用；
[0047](2)取0.758木瓜蛋白酶(上海士锋生物科技有限公司，活力值为250口/呢)，溶解于201111超纯水中，制备得酶液；
[0048](3)将制备的酶液加入磷虾匀浆液中，使用浓度为1?211101/1此1溶液、版10?溶液调节邱至7.0，在551酶解2.51！；所得的酶解产物静置，自然沉淀得到位于上层的水解液和位于下层的水解残渣；
[0049](4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用98%的乙醇浸提(实施例3乙醇用量为18001，实施例4乙醇用量为30001，对比例3乙醇用量为42001)，浸提温度为521，浸提时间为1.51！；浸提所得到残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液，减压浓缩至22“，于常压条件下801水浴加热至乙醇挥发干净，得南极磷虾油。
[0050]分析所得磷虾油中0撤及2？八含量如图2所示，从图2中可以看出:实施例3、实施例4所制备的南极磷虾油中0撤和2？八含量高于对比例3。
[0051]实施例5-7
[0052](1)取308新鲜的磷虾，加入17001超纯水，置于匀浆机中匀浆，备用；
[0053](2)取木瓜蛋白酶(实施例5木瓜蛋白酶用量为0.458，实施例6木瓜蛋白酶用量为0.68，实施例7木瓜蛋白酶用量为0.758，对比例4木瓜蛋白酶用量为0.15^,对比例5木瓜蛋白酶用量为0.30，溶解于301111超纯水中，制备得酶液；
[0054](3)将制备的酶液加入磷虾匀浆液中，使用浓度为1?211101/1此1溶液、版10?溶液调节邱至6.0，在501酶解2.01！；所得的酶解产物静置，自然沉淀得到位于上层的水解液和位于下层的水解残渣；
[0055](4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用24001体积浓度为100%的乙醇浸提，浸提温度为501，浸提时间为2.01！；浸提所得到残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液，减压浓缩至20“，于常压条件下801水浴加热至乙醇挥发干净，得南极磷虾油。
[0056]分析所得磷虾油中0撤及2？八含量如图3所示，从图3中可以看出:实施例5、实施例6、实施例7所制备的南极磷虾油中0撤和2？八含量高于对比例4、对比例5。
[0057]实施例8-10
[0058](1)取308新鲜的磷虾，加入19001超纯水，置于匀浆机中匀浆，备用；
[0059](2)取0.608木瓜蛋白酶，溶解于3001超纯水中，制备得酶液；
[0060](3)将制备的酶液加入磷虾匀浆液中，使用浓度为1?211101/1此1溶液、版10?溶液调节邱至6.5，在521酶解(实施例8酶解时间为1.5卜，实施例9酶解时间为2.0卜，实施例10酶解时间为2.5卜，对比例6酶解时间为1卜，对比例7酶解时间为310 ；所得的酶解产物静置，自然沉淀得到位于上层的水解液和位于下层的水解残渣；
[0061](4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用28001体积浓度为96%的乙醇浸提，浸提温度为511，浸提时间为2.31！；浸提所得到残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液，减压浓缩至21“，于常压条件下801水浴加热至乙醇挥发干净，得南极磷虾油。
[0062]分析所得磷虾油中0撤及2？八含量如图4所示，从图4中可以看出:实施例8、实施例9、实施例10所制备的南极磷虾油中0撤和2？八含量高于对比例6、对比例7。
[0063]实施例11-13
[0064](1)取308新鲜的磷虾，加入21001超纯水，置于匀浆机中匀浆，备用；
[0065](2)取0.708木瓜蛋白酶，溶解于3501超纯水中，制备得酶液；
[0066](3)将制备的酶液加入磷虾匀浆液中，使用浓度为1?211101/1此1溶液、版10?溶液调节邱至7.0，酶解2.01！(实施例11酶解温度为451，实施例12酶解温度为501，实施例13酶解温度为551，对比例8酶解温度为401，对比例9酶解温度为601，对比例10酶解温度为701 )；所得的酶解产物静置，自然沉淀得到位于上层的水解液和位于下层的水解残渣；
[0067](4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用20001体积浓度为97%的乙醇浸提，浸提温度为491，浸提时间为1.81！；浸提所得到残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液，减压浓缩至21“，于常压条件下801水浴加热至乙醇挥发干净，得南极磷虾油。
[0068]分析所得磷虾油中0撤及2？八含量如图4所示，从图5中可以看出:实施例11、实施例12、实施例13所制备的南极磷虾油中0撤和即八含量高于对比例8、对比例9、对比例10。
[0069]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种从南极磷虾中提取高含量DHA+EPA磷虾油的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)取新鲜的南极磷虾匀浆，加入超纯水，混合均匀，得磷虾均浆液； (2)取木瓜蛋白酶，溶解于超纯水中，得酶液；所述木瓜蛋白酶的质量为南极磷虾质量的的 1.5-2.5% ； (3)将步骤(2)制备的酶液加入到步骤(I)制备的磷虾均浆液中，调节pH至6.0-7.0，于45-55°C酶解1.5-2.5h ；自然沉淀后分别得上层的水解液和下层的水解残渣； (4)上层的水解液废弃处理，取下层的水解残渣用95-100%的乙醇浸提，浸提温度为48-52°C，浸提时间为1.5-2.5h ;浸提所得的残渣重复浸提两次，合并三次浸提所得的浸提液；减压浓缩，于80°C水浴加热至乙醇挥发干净，得磷虾油。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中超纯水用量为南极磷虾质量的5-7 倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中酶液的浓度为1.5-3%。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中木瓜蛋白酶的质量为南极磷虾质量的2%。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中调节pH值至7.0。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，酶解温度为50°C。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，酶解时间为2.5h。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中浸提温度为50°C，浸提时间为2h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述新鲜磷虾与乙醇的料液比为lg:6-10ml ;优选为 lg:6ml。
10.权利要求1-9任一所述的方法提取的磷虾油，其特征在于，所述磷虾油中EPA+DHA含量为70-80%。
【文档编号】C11B1/10GK104450163SQ201410740489
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月8日 优先权日:2014年12月8日
【发明者】沈俊慧, 毕燕龙 申请人:上海市同济医院