专利名称：植物细胞组织培养的教学试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物细胞组织培养的教学试剂盒，用于生物科学实验导论教学中的植物细胞组织培养实验。
背景技术：
目前，我国生物科学实验教学面临投入大、产效低的窘境，一般的实验室都需要同时配置实验教师和实验员。在实验前需要做大量的准备工作，往往先要购买与实验相关的多种试剂和材料，然后根据实验的要求、实验的人数情况进行分组配制。这些工作的完成需要一定数量的实验人员配置，同时购买的试剂和材料往往都大于实际需要的用量，因而存在不同程度的浪费，提高了实验成本。同时实验准备工作的技术难度也很高，对每个实验小组的使用量，对每种试剂、每种材料用量的精确度量及分配，都要求细致准确，以保证实验的正常进行。由此可见，准备实验需要消耗和浪费大量的人力、物力、财力，急需一种新的准备实验的方式。国产和进口科研试剂盒虽然在我国生物科学研究中应用已非常普遍，具有方便、快捷、高效和结果准确可靠的特点，但是至今在国内尚未见到适用于生物科学实验导论教学的试剂盒专利产品。同时由于科研试剂盒一般都是针对某一特定实验环节的，具有很强的技术特征，其内容很难适应面上的教学实验。因而，发明一种适用于生物科学实验教学的教学试剂盒显得尤为必要和迫切。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足和实际需要，提供一种适用于植物细胞组织培养的教学试剂盒，可以方便的直接用来完成教学实验，保证实验的高效率，节约实验成本。
为实现这样的目的，本发明针对植物细胞组织培养实验，将试剂和材料分别以小包装形式分组装在试剂盒内，并按10组一个实验教学标准班进行优化配置，每组中各个小包装内的材料根据一个实验小组的使用量设计，包括镊子、眼科剪、解剖针、小培养皿、锡箔纸、烟草无菌苗、三角瓶(50ml)、封口膜、酒精棉球等。每个试剂盒内装有十组小包装，并配备使用手册，可供一个标准班开展实验。
本发明的教学试剂盒含有植物细胞组织培养实验的全套材料和试剂。试剂盒内分组安放10组小包装材料，每组包括一把镊子、一把眼科剪、两支解剖针、一套6cm小培养皿、一张锡箔纸、一瓶烟草无菌苗、一只三角瓶(50ml)、一条封口膜、一袋酒精棉球等。另外试剂盒还配有共用的一袋蔗糖(4g)、一袋琼脂粉(3g)、一瓶培养基母液(可制备成200ml培养基)、一管灭菌激素(含0.535μmol的萘乙酸和0.22μmol的6-苄基腺嘌呤)，一袋次氯酸钠消毒粉(0.5g)，一瓶70％的酒精，一包灭菌滤纸(10片)等。试剂和材料的用量是经过历年来多次实验教学摸索得到的优化值其中培养基母液30ml，可制备成200ml培养基，内含有NH4NO3330mg、KNO3380mg、CaCl266.4mg、MgSO4·7H2O 74mg、KH2PO434mg、FeSO4·7H2O 5.56mg、Na2EDTA·2H2O 7.46mg、KI 0.166mg、H3BO31.24mg、MnSO4·7H2O 4.46mg、ZnSO4·2H2O 1.72mg、Na2MoO4·2H2O 50μg，CuSO4·5H2O 5μg、CoCl2·6H2O 5μg、肌醇20mg，烟酸100μg、盐酸吡哆醇100μg、盐酸硫胺素20μg、甘氨酸400μg，配制出的培养基最适合实验材料的生长；灭菌激素含0.535μmol的萘乙酸和0.22μmol的6-苄基腺嘌呤，这种激素的浓度与配比适合于豌豆茎尖簇生芽生成；蔗糖(4g)1袋，给予培养基2％的碳源供实验材料的生长；琼脂粉(3g)1袋，使固体培养基的物理硬度适合材料的生长；烟草无菌苗10瓶，使教师在无菌材料的制备与培育上节省了大量的准备时间和精力；用锡箔纸进行培养三角瓶的封口，方便学生在火焰上封口的灭菌操作，减少接种后的污染，同时也保证了培养的湿度，即使没有培养箱设备也可在室内光照培养；封口膜的使用有效的避免了茎尖长时间培养后培养基易干燥和污染的问题；酒精棉球的配量每人可对手进行3～4次消毒，充分考虑到初学者因各种原因实验中断后的继续实验；次氯酸钠以消毒粉(0.5g)形式配在试剂盒中，实验前配制成溶液，避免了消毒液存放时间过长的失效问题；试剂盒中另备一本试剂盒使用手册。
本发明的试剂盒中一组材料可供一组学生(2-3人)使用，十组材料可供一个标准班(30人)开展实验。还可以根据不同的需要配备相应的实验指导教材和光盘。
实验之前，实验老师或准备人员只需要做简单的准备工作将蔗糖和琼脂粉加到培养基母液，并稀释定容到200ml，制备成固体MS(Murashige & Skoog)培养基。其中150ml用于50ml三角瓶的分装，每瓶15ml，封口灭菌；灭菌后，另外50ml培养基加灭菌激素后分装到10个6cm小培养皿中(无菌操作)；将烟草无菌苗分发到各组，每组一瓶，豌豆幼苗可以从市场上购买，并分发到各组，每组20～30棵。将剪刀、镊子、封口膜、酒精棉球分发到各组，每组一套，解剖针每组两根；将次氯酸钠消毒粉(0.5g)溶于500ml蒸馏水中，每组分装50ml(或实验时共同使用)；将70％消毒酒精(100ml)，每组分装10ml(或实验时共同使用)。
实验时，学生首先完成第一部分实验内容，烟草无菌苗的快速切繁-继代培养。具体操作点燃酒精灯，用酒精棉球擦拭双手，打开生长有烟草无菌苗的三角瓶，三角瓶的瓶口在酒精灯外焰上烧过灭菌。用无菌镊子夹出1株幼苗，用灭菌手术剪将无菌苗剪成0.5-1cm的小段，要求每段至少包含一个生长点，直接剪入盛有MS培养基的三角瓶中(实验前按试剂盒使用手册要求和试剂盒配备的药品操作已准备好)，每一个切段必须直接接触培养基，三角瓶口在酒精灯火焰上烧过灭菌，重新封口。15～25℃，每天16h光照条件下培养4周后，观察。
再完成第二部分实验内容，豌豆苗茎尖培养。取发芽6天的豌豆幼苗10株，剪取1cm左右的茎尖，浸入70％的酒精(约10ml)中1min，再浸入饱和次氯酸钠溶液(约50ml)中消毒15min，用无菌水冲洗5次，在灭菌滤纸上吸干水分，放入灭菌培养皿中。在双目解剖镜下，用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥，用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。将挑好的茎尖移到含有激素的MS培养基上诱导簇生芽的形成，用封口膜将培养皿封好。将培养皿置于26℃恒温培养箱中培养六周，形成簇生芽，经继代培养后，可用于生根培养。
本发明的教学试剂盒提供了植物细胞组织培养实验的全套材料和试剂，实验老师不需要进行繁琐的计算和称量，只需简单的配制、灭菌和分装就可完成繁琐的实验准备，使学生开展烟草无菌苗的快速切繁和豌豆苗茎尖培养实验。这样一方面减少了实验人员配置，另一方面也使得实验教学快捷、高效，学生可获得比较标准、可靠的实验结果。
本发明为生物科学实验导论教学提供了一种经济实用的教学试剂盒，将实验试剂和材料按10组一个实验教学标准班进行优化配置，避免了不必要的浪费，节约了试剂和材料。实验时，教师阅读试剂盒使用手册后，只要按照说明将每组所需的材料和试剂进行简单的配制、灭菌和分装后分发到各组结合讲解即可进行实验教学，省去了繁琐的实验准备，节约了教师的时间和精力。同时，工作效率的提高使得实验人员的配置可以有一定的减少。学生根据教师的课堂讲解以及试剂盒附有的使用手册，可以在较短的时间内对实验内容有很好的掌握并顺利完成实验。本发明的试剂盒使植物细胞组织培养实验能够高效、快速的完成并取得良好的实验效果，可将实验准备所需要消耗的财力、物力、人力降到最低。
图1为本发明试剂盒所包含的试剂和药品的展示。
图中，1.试剂盒，2.培养基母液(可制备成200ml培养基)1瓶，3.蔗糖(4g)1袋，4.琼脂粉(3g)1袋，5.镊子10把，6.眼科剪10把，7.解剖针20根，8.小培养皿(6cm)10套，9.锡箔纸10片，10.烟草无菌苗10瓶，11.三角瓶(50ml)10瓶，12.封口膜10条，13.酒精棉球10袋，14.灭菌激素(含0.535μmol的萘乙酸和0.22μmol的6-苄基腺嘌呤)，15.次氯酸钠消毒粉(0.5g)，16.灭菌滤纸(1包)，17.70％的酒精(100ml)，18.试剂盒使用手册具体实施方式
以下结合附图对本发明的技术方案作进一步描述。
图1为本发明提供的教学试剂盒的一个实施例，试剂盒中包含了植物细胞组织培养实验所需的全套材料和试剂。如图1所示，实验试剂和材料按10组一个实验教学标准班进行优化配置，每组中的材料为一个实验小组的使用量，包括一把镊子5、一把眼科剪6、两支解剖针7、一套小培养皿8(6cm)、一片锡箔纸9、一瓶烟草无菌苗10、一只50ml三角瓶11、一条封口膜12、一袋酒精棉球13。另外还配有10组共用的一瓶培养基母液2(可制备成200ml培养基)、一袋4g装蔗糖3、一袋3g装琼脂粉4、一管灭菌激素14、一袋0.5g装次氯酸钠消毒粉15、一包灭菌滤纸16，一瓶100ml 70％的酒精17以及试剂盒使用手册18。
其中所述培养基母液为30ml，内含有NH4NO3330mg、KNO3380mg、CaCl266.4mg、MgSO4·7H2O 74mg、KH2PO434mg、FeSO4·7H2O 5.56mg、Na2EDTA·2H2O 7.46mg、KI 0.166mg、H3BO31.24mg、MnSO4·7H2O 4.46mg、ZnSO4·2H2O 1.72mg、Na2MoO4·2H2O 50μg，CuSO4·5H2O 5μg、CoCl2·6H2O 5μg、肌醇20mg，烟酸100μg、盐酸吡哆醇100μg、盐酸硫胺素20μg、甘氨酸400μg。
所述灭菌激素含0.535μmol的萘乙酸和0.22μmol的6-苄基腺嘌呤。
试剂盒中上述每个小包装中材料的用量是历年实验教学得到的优化值，一组材料供一组学生(2-3人)使用，十组材料可供一个标准班(30人)开展实验。
实验时，将试剂盒中的每组材料取出分到各个实验小组，按照使用手册的说明，教师进行讲解即可指导学生完成实验。另外，试剂盒内还可以根据不同的需要配置相应的配套实验指导教材和光盘，结合教学进行实验，效果更好。
权利要求
1.一种植物细胞组织培养的教学试剂盒，其特征在于将植物细胞组织培养实验所需的试剂和材料按10组一个实验教学标准班进行优化配置；每组中的材料为一个实验小组的使用量，包括一把镊子(5)、一把眼科剪(6)、两支解剖针(7)、一套6cm培养皿(8)、一片锡箔纸(9)、一瓶烟草无菌苗(10)、一只50ml三角瓶(11)、一条封口膜(12)、一袋酒精棉球(13)；另外还配有共用的一瓶培养基母液(2)、一袋4g装蔗糖(3)、一袋3g装琼脂粉(4)、一管灭菌激素(14)、一袋0.5g装次氯酸钠消毒粉(15)、一包灭菌滤纸(16)，一瓶100ml 70％的酒精(17)以及试剂盒使用手册(18)；其中所述培养基母液为30ml，内含有NH4NO3330mg、KNO3380mg、CaCl266.4mg、MgSO4·7H2O 74mg、KH2PO434mg、FeSO4·7H2O 5.56mg、Na2EDTA·2H2O 7.46mg、KI 0.166mg、H3BO31.24mg、MnSO4·7H2O 4.46mg、ZnSO4·2H2O 1.72mg、Na2MoO4·2H2O 50μg，CuSO4·5H2O 5μg、CoCl2·6H2O 5μg、肌醇20mg，烟酸100μg、盐酸吡哆醇100μg、盐酸硫胺素20μg、甘氨酸400μg；所述灭菌激素含0.535μmol的萘乙酸和0.22μmol的6-苄基腺嘌呤。
2.根据权利要求1的植物细胞组织培养的教学试剂盒，其特征在于试剂盒(1)内还配备实验指导教材和光盘。
全文摘要
本发明涉及一种植物细胞组织培养的教学试剂盒，针对植物细胞组织培养实验，将试剂和材料按10组一个实验教学标准班进行优化配置，包括培养基母液、蔗糖、琼脂粉、镊子、眼科剪、解剖针、小培养皿、锡箔纸、烟草无菌苗、三角瓶、封口膜、酒精棉球、灭菌激素、次氯酸钠消毒粉、灭菌滤纸、70％的酒精等。每个试剂盒内装有十组小包装，每个试剂盒内配备使用手册，可供一个标准班开展实验。本发明应用于生物科学实验导论教学中，可节约教师实验准备时间，减少实验人员配置，降低实验准备时的技术难度，使植物细胞组织培养实验能够高效、快速的完成并取得良好的实验效果。
文档编号G09B19/00GK1804940SQ2006100232
公开日2006年7月19日 申请日期2006年1月12日 优先权日2006年1月12日
发明者曹阳, 张霞, 祝新德, 陈熹兮, 张承康, 熊顺子 申请人:上海交通大学