用于显微镜的载样装置及其应用的制作方法

本发明是一种适用于显微镜的载样装置，尤其适用于高倍物镜的观察。

背景技术：

目前显微镜观察的载样装置有培养皿(图1)、孔板、培养瓶、载玻片等，但是这些装置因为底较厚，大于高倍物镜工作距离，因此不能用于高倍物镜观察。若想用高倍物镜观察有两种方法：一种方法是在细胞培养液中加入盖玻片，让细胞铺在盖玻片上，然后打捞起盖玻片进行后续荧光染色等操作，最后盖玻片与物镜接触进行显微观察。但是盖玻片与皿底贴合较紧密，很难打捞，而且进行后续制样操作时容易将盖玻片弄反，使荧光染料加错面，造成染色失败。

另一种方法是使用玻底皿(图2)，这种培养皿中间有一圆孔，下面粘有盖玻片。细胞在玻底皿中培养、制样，最后直接用显微镜观察。但是观察的范围局限在这圆孔内。而且玻底皿为一次性耗材，不能重复使用，成本很高。

图1和图2中的两种载样装置都有侧壁，高度约为1cm，在显微操作中如此高的侧壁严重限制显微操作针的倾斜角度和移动范围。

技术实现要素：

为了解决现有技术中载样装置底厚度大、观察范围小、成本高等缺陷，本发明提出了一种用于显微镜的载样装置。

一方面，本发明提供了一种用于显微镜的载样装置，包括：上板、垫圈、盖玻片、下板以及胶格，其特征在于：所述上板的中央有一通孔，通孔的尺寸略小于所述盖玻片；所述垫圈由柔性材料制成，并且中央有一通孔，通孔的尺寸与所述上板的通孔一致；所述盖玻片用来承载样品；所述下板的形状和大小与所述上板相同，中央有一通孔，并且通孔的尺寸与所述上板的通孔一致，所述上板和所述下板设有耦合装置，用于将所述载样装置整合在一起，所述胶格通过粘合剂粘在所述盖玻片上，将盖玻片分隔成独立的小室，所述胶格由柔性材料制成，并且中央有一通孔。

优选地，所述上板和下板分别由刚性材料制成，所述刚性材料选自塑料、不锈钢或铝合金。

优选地，所述上板的通孔周围有刻度或数字。

优选地，所述胶格的形状为正方形、长方形或圆形，可选地，可以使用多个胶格将一张盖玻片分隔成多个小室，以便加载不同的样品。

优选地，所述垫圈和胶格的柔性材料分别选自硅胶或橡胶。

优选地，所述耦合装置为锁扣装置。

优选地，所述上板设有锁扣，所述下板设有锁槽，或者所述上板设有锁槽，所述下板设有锁扣。

另一方面，本发明还提出了所述载样装置在显微观察或显微操作中的应用。

又一方面，本发明还提出了所述载样装置在细胞培养或荧光染色中的应用。

与现有技术相比，本发明的载样装置具有以下有益效果：

1、本发明装置使用的材料(包括上板、下板、垫圈、胶格)经消毒后可反复使用，仅盖玻片为消耗品，节约了材料，与一次性使用的玻底皿相比大大降低了成本。

2、本发明装置是在盖玻片上载样，可选用厚度小于0.17mm的盖玻片，所以可用高倍物镜观察，如100倍油镜。所述载样装置上板、下板、垫圈通孔的大小约为盖玻片大小，所以即便用高倍物镜观察，也能观察到约整个盖玻片的视野范围。

3、可用于细胞培养。本发明由于密封性较好，可以直接用于培养细胞。本发明装置的高度可以设计成1cm，与普通培养皿高度一致，细胞可以加载与盖玻片上，覆以细胞培养液，置于孵育箱中培养。同时胶格将一张盖玻片分成了多个小室，可以加载多个样品或者同一样品进行多种处理，保证孵育条件一致，方便进行单因素变量分析。一张盖玻片上加载多个样品，大大节约了观察时换样、调焦的时间。

4、可用于荧光染色。细胞在本发明装置上培养后可以直接进行荧光染色等操作，避免了打捞盖玻片的操作，同时避免了将盖玻片弄反、使荧光染料加错面、造成染色失败。若使用胶格，胶格尺寸小，缩小了染色范围，从而节约抗体和荧光染料，降低实验成本。使用本发明装置进行样品荧光染色，加上缓冲液就能直接观察，省略了加封片液、涂抹指甲油的步骤，节约了制样的时间。同时避免了指甲油渗入样品，对样品造成污染，影响观察。

5、可用于显微操作。本发明装置降低了载样装置的高度，装置的高度可以设计成0.2-0.5cm，是普通载样装置高度的五分之一至二分之一，从而增加显微操作针的倾斜角度和移动范围。

6、上下板材料可选择密度高的不锈钢、铝合金等，增加了载样装置的重量。载样装置重量增加，视野不易漂移。这在倒置显微镜高倍物镜下的显微观察中，尤其是多点反复观察时优势更突出。

附图说明

图1为现有技术中的普通细胞培养皿；

图2为现有技术中的玻底皿；

图3为本发明实施例中的载样装置示意图。

附图标记说明：

1-上板；2-垫圈；3-盖玻片；4-下板；5-胶格；6-锁槽；7-锁扣。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。

本发明的用于显微镜的载样装置包括：上板1、垫圈2、盖玻片3、下板4以及胶格5，上板1上设置有锁槽6，下板4上设置有锁扣7，载样装置整体由锁槽6和锁扣7整体结合在一起。

上板1可以为长方形、正方形、圆形等任意形状，并且中央有一通孔。通孔的周围还可以有刻度或数字，用于精准定位观察区域，以便寻找先前观察的区域。在一个实施例中上板1的大小为7.5×2.5cm，厚度约0.2cm，中央有一方形孔，孔的大小4×2cm，孔周刻有数字。

垫圈2由柔性材料制成，起到封闭的作用，可以增加装置的密封性。垫圈2的中央有一通孔，通孔的尺寸与上板1的通孔相同。在一个实施例中，垫圈2的大小为7.5×2.5cm，厚度约0.1cm，中央有一方形孔，孔的大小4×2cm。垫圈2的尺寸也可小于上板1的尺寸。

盖玻片3用来承载样品。在一个实施例中，盖玻片3的大小4.5×2.5cm。

下板4的形状与大小与所述上板相同，中央有一通孔，通孔的大小、位置与上板1的通孔一致。

上板1和下板4由锁扣装置或其它耦合装置相连，在另一个实施例中，锁槽6设置在下板4上，锁扣7设置在上板1上。上板1和下板4由刚性材料制成，所述刚性材料可选自塑料、不锈钢、铝合金等。

上板1和下板4及垫圈2中央的通孔可依据盖玻片3大小设计不同的规格，略小于盖玻片3即可。

胶格5由柔性材料制成，并且中央有一通孔，胶格5可以通过粘合剂粘在盖玻片3上，将盖玻片3分隔成独立的小室。作为优选，可以使用多个胶格5将盖玻片3分隔成多个小室，以便加载不同的样品。胶格5的形状可以为正方形、长方形或圆形等，可单独使用也可多个一起使用。在一个实施例中，胶格5的大小为0.5×0.5cm。上板1的通孔周围的刻度或数字的间距与胶格5的尺寸一致，起到标记胶格位置的作用。垫圈2和胶格5的材料不限，为柔性材料即可，如硅胶、橡胶等。

上板1、垫圈2、下板4和胶格5可以消毒后反复使用，节约成本。

本发明的载样装置适用于普通显微镜、激光扫描共聚焦显微镜等的观察。样品经荧光染色等制样步骤，加上缓冲液就能直接观察，省略了加封片液、涂抹指甲油的步骤，节约了制样的时间。而且避免了指甲油渗入样品，对样品造成污染，影响观察。

本发明装置也可直接用于荧光染色等操作，避免了打捞盖玻片的操作，同时避免了将盖玻片弄反、使荧光染料加错面、造成染色失败。若使用胶格，胶格尺寸小，缩小了染色范围，从而节约抗体和荧光染料，降低实验成本。使用本发明装置进行样品荧光染色，加上缓冲液就能直接观察，省略了加封片液、涂抹指甲油的步骤，节约了制样的时间。同时避免了指甲油渗入样品，对样品造成污染，影响观察。

本发明的载样装置适用于显微操作，降低了载样装置的厚度，增加显微操作针的倾斜角度和移动范围。

本发明的载样装置也适合于悬浮细胞的观察。可以用多聚赖氨酸包被盖玻片，然后滴加悬浮细胞，再用显微镜观察。

本发明的载样装置也可用于细胞培养。由于密封性好，可以用本发明培养细胞，置于孵育箱中培养细胞。相比于普通培养皿，胶格尺寸小，从而缩小了细胞生长的空间，大大节约培养基、生长因子等试剂，降低实验成本。同时，胶格将不同样品分开，一张盖玻片上可以同时处理多个样品，保证不同样品间的孵育条件一致，确保单变量研究。

本发明的载样装置除盖玻片外，其余部分均可高温灭菌，反复使用，大大降低购买培养皿的成本。同时盖玻片作为承载样品的部位，一次性使用，避免清洗不干净造成污染。使用本发明既可以避免污染，又降低成本。

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。