本发明涉及生物防治
技术领域：
，尤其是涉及一种防治斑潜蝇的生物制剂及其制备方法。
背景技术：
：斑潜蝇又称“鬼画符”，是我国植物危险性检疫害虫。其幼虫和成虫皆可危害叶片，幼虫潜入寄主叶片表皮下取食绿色组织，曲折穿行，形成不规则的灰白色线状虫道，内有交替排列整齐的黑色虫粪；成虫在叶片表面取食和产卵，刺伤叶片细胞，形成针尖大小的近圆形刺伤“孔”，造成危害。自1993年斑潜蝇在我国海南省首次发现，1994列为国内检疫对象，至今已在我国20多个省、自治区、直辖市普遍发生，尤以海南省最为严重。每年可以发生30多代，严重危害菜豆、黄瓜、西葫芦、丝瓜、苦瓜、番茄、辣椒、甜菜、大白菜、茼蒿、茴香、芹菜等蔬菜，一般造成减产20-30％，严重时减产可达50％以上，甚至80％以上，成为我国害虫防治难题。斑潜蝇为害严重的原因首先是斑潜蝇寄主范围广，达33科170多种植物，几乎常见蔬菜都会发生，且一旦发生难以彻底去除；其次是发生代数多，世代重叠严重，繁殖速度快；再者抗药性严重；最后还有蜡脂层保护，斑潜蝇幼虫在叶片内部潜食，因此叶面会对其形成保护。当前对斑潜蝇的防治主要有黄板诱杀成虫、蛹盆杀蛹、熏烟杀成虫等物理法和诱杀成虫等化学法。一般防治方法既对环境造成污染，多次使用也会使斑潜蝇产生抗药性，降低作用效果，为减少这种问题，需要一种对环境污染小，能长期使用的防治制剂。技术实现要素：本发明的目的是提供一种防治斑潜蝇的生物制剂及其制备方法，既能减少化学农药的污染，又能达到成本可控的效果，而且该制剂配比简单，使用方便，可对斑潜蝇的卵和幼虫进行有效灭杀，杀灭率达95％以上。为实现上述目的，本发明提供了一种防治斑潜蝇的生物制剂，包括以下配方：微生物的质量分数为0.1‰～1‰、虾壳粉的质量分数为0.1‰～10‰、甲壳素的质量分数为0.5‰～5‰、胶原蛋白的质量分数为0.01‰～1‰、红糖的质量分数为1‰～20‰、复合氨基酸的质量分数为1‰～50‰、复合肥的质量分数为1‰～10‰，其余为水；所述水为生活用水；所述微生物包括枯草芽孢杆菌。优选的，所述微生物还包括蜡状芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌、所述蜡状芽孢杆菌和所述解淀粉芽孢杆菌的数量比为0.5～5：0.5～5：0.5～5。优选的，所述复合氨基酸为豆粕提取物、花生渣提取物或角蛋白提取物。优选的，所述复合肥中n、p、k的质量比为10～20：10～20：10～20，其中n、p、k均以水溶性的组分存在，如：no3-、nh4+、po3-、po43-、hpo42-、h2po4-、p6o186-、p2o74-、k+，在一些实例中，复合肥中的n、p、k存在形式为nh4no3/k2hpo4/kh2po4，n/p/k＝15/15/15、n/p/k＝15/15/17或n/p/k＝15/15/20。优选的，所述胶原蛋白为动物皮经粉碎或提取得到的粉末，其中胶原蛋白的含量为30％～65％，一些实例中，胶原蛋白为猪皮胶原蛋白；另一些实例中，胶原蛋白为牛皮胶原蛋白；还有一些实例中胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白。一种防治斑潜蝇的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：首先，将0.1‰～1‰的微生物、0.1‰～10‰的虾壳粉、0.5‰～5‰的甲壳素、0.01‰～1‰的胶原蛋白、1‰～20‰的红糖、1‰～50‰的复合氨基酸、1‰～10‰的复合肥与水混合进行发酵制得生物制剂，发酵的温度为室温，时间为48h，条件为鼓泡通气，ph值控制在6～8，制得的生物制剂中活菌数不低于1×109个/ml～20×109个/ml，优选的生物制剂中活菌数为1×1010个/ml。本生物制剂能够对斑潜蝇的幼卵起到内吸毒杀和夺氧使其窒息的作用，从而起到防治斑潜蝇的作用。优选的，所述发酵温度为25℃～35℃，所述鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％。优选的，所述生物制剂应用在防治斑潜蝇上。优选的，在应用时所述生物制剂为1质量份，水为1～10质量份。优选的，将所述生物制剂喷灌或喷洒在对应的作物表面上，所述生物制剂的施用量为10l/亩～100l/亩。枯草芽孢杆菌常用于污水处理、水产养殖等领域。经研究表明，其能产生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对土壤致病菌抑制作用强；蜡状芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌活菌数不低于1×1010cfu/ml。氨基酸是重要的营养物质，本发明所用的复合氨基酸的主要成分为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸等，其来源不限制，可以是动物或植物酸解或碱解制得，也可以是微生物发酵制得，本发明中，所述复合氨基酸由豆粕提取物、花生渣提取物或角蛋白提取物。本发明对虾壳粉的来源不限制，可以是江河湖海任意来源的富含几丁质的水生动物外壳(也可以包含肉质)的干燥品经粉碎后过20目～100目筛的细颗粒粉末。因此，本发明采用上述结构的防治斑潜蝇的生物制剂及其制备方法，既能减少化学农药的污染，又能达到成本可控的效果，而且该制剂配比简单，使用方便，可对斑潜蝇的卵和幼虫进行有效灭杀，杀灭率达95％以上。下面通过实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。具体实施方式本发明提供了一种防治斑潜蝇的生物制剂及其制备方法，本领域的技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域的技术人员来说都是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明的制备方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供了一种防治斑潜蝇的生物制剂，包括以下配方：微生物的质量分数为0.1‰～1‰、虾壳粉的质量分数为0.1‰～10‰、甲壳素的质量分数为0.5‰～5‰、胶原蛋白的质量分数为0.01‰～1‰、红糖的质量分数为1‰～20‰、复合氨基酸的质量分数为1‰～50‰、复合肥的质量分数为1‰～10‰，其余为水，水为生活用水，微生物包括枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的数量比为0.5～5：0.5～5：0.5～5，复合氨基酸为豆粕提取物、花生渣提取物或角蛋白提取物，复合肥中n、p、k的质量比为10～20：10～20：10～20，其中n、p、k均以水溶性的组分存在，如：no3-、nh4+、po3-、po43-、hpo42-、h2po4-、p6o186-、p2o74-、k+，在一些实例中，复合肥中的n、p、k存在形式为nh4no3/k2hpo4/kh2po4，n/p/k＝15/15/15、n/p/k＝15/15/17或n/p/k＝15/15/20，胶原蛋白为动物皮经粉碎或提取得到的粉末，其中胶原蛋白的含量为30％～65％，一些实例中，胶原蛋白为猪皮胶原蛋白；另一些实例中，胶原蛋白为牛皮胶原蛋白；还有一些实例中胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白。一种防治斑潜蝇的生物制剂的制备方法，包括以下步骤：首先，将0.1‰～1‰的微生物、0.1‰～10‰的虾壳粉、0.5‰～5‰的甲壳素、0.01‰～1‰的胶原蛋白、1‰～20‰的红糖、1‰～50‰的复合氨基酸、1‰～10‰的复合肥与水混合进行发酵制得生物制剂，发酵的温度为室温，一般为25℃～35℃，时间为48h，条件为鼓泡通气，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，制得的生物制剂中活菌数不低于1×109个/ml～20×109个/ml，优选的生物制剂中活菌数为1×1010个/ml。本生物制剂能够对斑潜蝇的幼卵起到内吸毒杀和夺氧使其窒息的作用，从而起到防治斑潜蝇的作用，在应用时生物制剂为1质量份，水为1～10质量份，将生物制剂喷灌或喷洒在对应的作物表面上，所述生物制剂的施用量为10l/亩～100l/亩。实施例1取水1000l、枯草芽孢杆菌0.1kg、虾壳粉0.1kg、甲壳素0.5kg、胶原蛋白0.01kg、红糖3kg、复合氨基酸3kg、复合肥3kg，其中胶原蛋白为猪皮胶原蛋白，复合氨基酸为豆粕提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/15。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥加入到水中鼓泡通气进行培养，培养温度为室温25℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。实施例2取水1000l、蜡状芽孢杆菌0.1kg、虾壳粉0.5kg、甲壳素2kg、胶原蛋白0.1kg、红糖5kg、复合氨基酸3kg、复合肥1kg，其中胶原蛋白为牛皮胶原蛋白，复合氨基酸为角蛋白提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/20。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥加入到水中鼓泡通气进行培养，培养温度为室温28℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。实施例3取水1000l、解淀粉芽孢杆菌0.5kg、虾壳粉1kg、甲壳素1kg、胶原蛋白0.5kg、红糖3kg、复合氨基酸3kg、复合肥3kg，其中胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白，复合氨基酸为豆粕提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/15。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥加入到水中鼓泡通气进行培养，培养温度为室温29℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。实施例4取水1000l、枯草芽孢杆菌0.2kg、蜡状芽孢杆菌0.5kg、虾壳粉1kg、甲壳素3kg、胶原蛋白0.5kg、红糖3kg、复合氨基酸1kg、复合肥2kg，其中胶原蛋白为猪皮胶原蛋白，复合氨基酸为豆粕提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/17。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥鼓泡通气进行培养，培养温度为室温28℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。实施例5取水1000l、枯草芽孢杆菌0.6kg、解淀粉芽孢杆菌1kg、虾壳粉2kg、甲壳素0.5kg、胶原蛋白0.01kg、红糖2kg、复合氨基酸5kg、复合肥3kg，其中胶原蛋白为牛皮胶原蛋白，复合氨基酸为花生渣提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/15。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥加入到水中鼓泡通气进行培养，培养温度为室温33℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。实施例6取水1000l、蜡状芽孢杆菌0.1kg、解淀粉芽孢杆菌0.5kg、虾壳粉0.5kg、甲壳素0.5kg、胶原蛋白1kg、红糖5kg、复合氨基酸1kg、复合肥2kg，其中胶原蛋白为牛皮胶原蛋白，复合氨基酸为角蛋白提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/20。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥加入到水中鼓泡通气进行培养，培养温度为室温27℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。实施例7取水1000l、枯草芽孢杆菌0.5kg、蜡状芽孢杆菌1kg、解淀粉芽孢杆菌0.6kg、虾壳粉1kg、甲壳素0.5kg、胶原蛋白0.01kg、红糖5kg、复合氨基酸1kg、复合肥1kg，其中胶原蛋白为鱼皮胶原蛋白，复合氨基酸为角蛋白提取物，复合肥中n/p/k＝15/15/20。将上述微生物、虾壳粉、甲壳素、胶原蛋白、红糖、复合氨基酸、复合肥加入到水中鼓泡通气进行培养，培养温度为室温35℃，培养时间为48h，ph值控制在6～8，鼓泡通气的速率为20l/min，溶氧量为20％，即得生物制剂。上述各实施例制得的生物制剂，经检测，菌种密度如表1：表1为各实施例的菌种密度项目菌种密度实施例12.8×1012实施例26.7×1011实施例38.1×1012实施例42.1×1012实施例51.3×1013实施例64.3×1011实施例79.0×1012结果表明，本发明各个配方实施例中提供的生物制剂均具有非常高的菌种密度。将实施例1-7中的生物制剂使用无菌水稀释至106cfu/ml,检测其对斑潜蝇的防治效果。田间试验实例1防治豇豆(龙泉一号豇豆，济南龙泉种子有限公司)美洲斑潜蝇的试验。地点设在海南省三亚市槟榔谷三力源生态农业园区大棚，于2018年1月4日试验施药，这时豇豆正处于快速伸蔓期，且美洲斑潜蝇发生普遍，每株都有受害叶。试验设生物制剂原液、生物制剂1:1稀释液、生物制剂1:2稀释液、5％阿维菌素乳油1500倍液及清水对照共5个处理。小区面积20平方米，随机排列，重复三次。2018年1月4日下午使用背负式电动喷雾器作地上部叶面均匀喷施，让药液均匀沾满叶面并下滴，施用量60升/亩。调查方法与统计：于喷药前进行，采用5点取样法，每小区选择5个点，每点5墩，每墩挂牌调查1个展开叶片，每小区调查25个展开叶，记载幼虫总数，作为药前虫口基数，喷药后2、6、10、天各调查一次，记录活虫数。计算虫口减退率，校正虫口减退率，即防治效果。计算公式：虫口减退率＝(施药前虫口基数-施药后活虫数)/施药前虫口基数×100％防治效果(校正虫口减退率)＝(对照区虫口减退率-处理区虫口减退率)/(1-对照区虫口减退率)×100％对试验中的5个处理的药效统计结果，如表2：表2生物制剂防治豇豆美洲斑潜蝇试验药效统计表生物制剂原液及其1:1、1:2稀释液在喷药后第6天对豇豆美洲斑潜蝇的防治效果(校正虫口减退率)分别为：100％、100％、96.89％，远远高于5％阿维菌素乳油1500倍液66.5％的防治效果，施药后第10天校正虫口减退率分别为99.83％、99.12％、89.84％，更是远高于5％阿维菌素乳油1500倍液54.50％的防治效果。因此，生物制剂原液和生物制剂1:1、1:2稀释液在直接杀死豇豆美洲斑潜蝇各龄幼虫和长期控制方面效果显著。田间试验实例2防治黄瓜(津绿4号)美洲斑潜蝇的试验。地点设在海南省三亚市槟榔谷三力源生态农业园区大棚。于2018年12月31日试验施药，这时黄瓜美洲斑潜蝇为发生初期，且每株均受到伤害。试验设生物制剂原液、生物制剂1:1稀释液、生物制剂1:2稀释液、5％阿维菌素乳油1500倍液及清水对照共5个处理。小区面积30平方米，个数15个，随机排列，重复三次。2018年12月31日下午使用背负式电动喷雾器作地上部叶面均匀喷施，让药液均匀沾满叶面并下滴，施用量为60升/亩。调查方法与统计：于喷药前进行，采用5点取样法，每小区选择5个点，每点2株，每株挂牌调查3个展开叶片，记载幼虫总数，作为药前虫口基数调查。喷药后3、7、14天各调查一次，记载死或者活虫数。计算死亡率，校正死亡率，虫口减退率，校正虫口减退率(防治效果)，用于评价不同药剂处理对的美洲斑潜蝇的致死作用。安全性调查：施药后1、3天调查作物有无药害症状，以正确评价试验药剂对作物的安全性。计算公式：虫口减退率＝(施药前虫口基数-施药后活虫数)/施药前虫口基数×100％防治效果(校正虫口减退率)＝(对照区虫口减退率-处理区虫口减退率)/(1-对照区虫口减退率)×100％对试验中的5个处理的药效统计结果，如表3：表3生物制剂防治黄瓜美洲斑潜蝇试验药效统计表喷药后1至3天观察无要害发生。生物制剂原液和生物制剂1:1、1:2稀释液在喷药后第七天对黄瓜美洲斑潜蝇的防治效果(校正虫口减退率)分别为：100％、100％、95.74％，远远好于5％阿维菌素乳油1500倍液59.06％的防治效果，施药后第十四天防治效果分别为97.98％、95.44％、85.27％更是远高于5％阿维菌素乳油1500倍液52.03％的防治效果。可见生物制剂原液和生物制剂1:1、1:2稀释液对豇豆美洲斑潜蝇各龄幼虫直接杀死作用和长期控制作用显著，可达14天以上。且生物制剂本身对环境污染小，可减缓害虫抗药性的产生，有广阔的推广前景。最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。当前第1页12