专利名称：一种生产云芝糖肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种生产云芝糖肽(PSK)的方法。
背景技术：
云芝(Coriolus versicolor(L.Fr)Quel)属非招菌目(Aphyllophorales)多孔菌科(POlyporaceae)，生长在山区阔叶树倒腐木或枯枝上，复瓦状群生。分布于我国大部分地区。云芝糖肽(POlysocohartibe-piptide)是一种结合蛋白质的多糖体，主要成分是含蛋白质的葡聚糖，多糖含量25-60％，蛋白质含量13-20％，多糖由β-(1.3)或β-(1，3)(1，6)葡聚糖组成。云芝糖肽是一种免疫增强剂，具有抗癌消炎、保肝解毒、提高机体免疫力等功能。服用云芝糖肽后，白细胞迅速恢复正常，T淋巴细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞活性提高。同时，血清中C补体和免疫球蛋白Ig有所增加。有报道云芝糖肽可预防和治疗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、子宫癌和白血病。
目前，在日本有用发酵云芝菌丝体，用碱法从菌丝体中提取云芝糖肽的专利(Ssaburo Ueno，Ichigayadai et al.专利号Jul.7.1976[JP]Japan 80664)，中国上海师大的杨庆尧用发酵云芝菌丝体，水提醇沉法从菌丝体中提取云芝糖肽(专利号CN 89105471.5)。用碱法从菌丝体中提取云芝糖肽不但需要投资较大的设备，而且发酵菌丝本身生产成本也较高，过量的NaOH还要用HCl中和，不仅提高成本，也污染环境。
我国野生云芝资源丰富，且野生云芝富含多种矿物质，其中的铜离子还能增强抗癌功能，因此，如果利用野生云芝生产云芝糖肽，不但可充分利用我国的野生资源，增加林业工人的收入，也可提高现有云芝糖肽的疗效。
发明创造内容本发明的目的是提供一种简便、低成本的生产云芝糖肽的方法。
本发明所提供的生产云芝糖肽的方法，基本上包括以下步骤(1)粉碎野生云芝子实体，加5-15倍体积的水后，再用氨水、调节pH至10-14；(2)加热保持微沸1-3小时，然后经100目-140目滤网过滤，收集滤液即提取液；(3)将步骤(2)中得到的残渣再重复步骤(1)和(2)一次或两次；
(4)合并步骤(2)和(3)中的提取液，得到云芝糖肽粗提物；(5)精制粗提物，得到云芝糖肽产品。
所述步骤(1)中优选的是加10倍体积的水，再用氨水调节pH至12。
所述加热为蒸汽加热或直接加热，优选为蒸汽加热。
所述步骤(2)中的溶液微沸2小时后经120目过滤。
所述步骤(4)中的提取液经浓缩、干燥、粉碎得到粗提物。
所述精制粗提物的步骤为粗提物加20-40倍水溶解，再通过树脂脱去重金属，得到的溶液经浓缩，干燥，粉碎即得到产品。所述树脂优选的是阳离子树脂。
所述浓缩为减压浓缩或煮沸浓缩，优选的为减压浓缩。
所述干燥为在80-100℃下烘干或自然干燥。
本发明所采用的原料是野生云芝，有效地利用了我国的野生资源，与通过发酵云芝菌丝体，用碱法从菌丝体中提取云芝糖肽相比，省去了庞大复杂的发酵设备，发酵车间和发酵工艺。本发明采用pH法提取云芝糖肽，省去了HCl中和的步骤，降低了生产成本，也不会产生环境污染问题。根据原料的实际特点，本发明巧妙地除去了提取物中过高的重金属，所生产的云芝糖肽，多糖蛋白有效成分含量高，活性不易被破坏，抗癌效果显著。
对两种性别，大、小鼠进行急性毒性试验，结果是LD50为10g/kgbw，根据急性毒性分级标准，本发明的云芝糖肽属实际无毒。三项致突变试验，结果为阴性。30天喂养试验，根据生长发育、血液学和血液生化学、脏器称量及病理组织学检查结果综合判断，本发明的云芝糖肽未对大鼠引起有害效应。
实验证明，本发明的云芝糖肽具有显著的免疫调节及抑制肿瘤的作用。通过对NIH种小鼠经口给云芝糖肽，连续28天，结果表明1)可明显提高绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应能力，具有增强细胞免疫功能作用。2)可使受试动物血清溶血素抗体滴度反应增高，具有增强体液免疫功能作用。3)可使受试动物碳廓清吞噬指数增加，具有增强巨噬细胞吞噬功能作用。4)可使受试动物的脾脏重量增加。动物试验表明。云芝糖肽对两株移植性肿瘤(S-180、H-22)在小鼠体内的生长与对照组比较有明显的抑制作用，抑瘤率大于30％，同时对正常小鼠的免疫功能未表现抑制作用。
图1为生产云芝糖肽的工艺流程图具体实施方式
实施例1、生产云芝糖肽云芝糖肽的生产工艺流程如图1所示，具体步骤如下1.粗品提取将180公斤云芝子实体粉碎后放入2000升的提取罐中，加水1800升，再加氨水调节pH至12，用蒸汽加热至沸腾，减少给汽量，保持微沸2小时。提取液经120目尼龙滤网过滤并放入储液罐。残渣留在提取罐中，并再加水至1800升，再调pH，沸腾后仍保持微沸2小时。用同法收集第2次提取液，两次提取液合并后压入三效罐进行浓缩，浓缩至波美比重1.2时，将浓缩液分别加入不锈钢盘中，进入100度烘箱，烘至浓缩液表面结硬皮后，将装有浓缩液的不锈钢盘转入80度的真空干燥箱继续烘干。最后得到干燥块状物13公斤。
2.精制取干燥块状提取物30公斤，经120目粉碎后，加水600升并搅拌30分钟，静置2小时后经300目尼龙滤网过滤后收集滤液。沉淀再加水450升，搅拌30分钟，静置2小时，300目过滤后与前次滤液混合，经市售的107号阳离子树脂处理30分钟，此滤液再经阳离子树脂处理30分钟，滤液经三效浓缩至波美比重1.2后，80度的真空干燥箱进行干燥。粉碎后得到精品即云芝糖肽产品13公斤。
得到的产品各项指标为颜色褐色；形状粉状；水份7％；灰分8％；多糖含量30％；蛋白质含量18％；铜离子含量10ppm；铅离子含量1ppm。
实施例2、生产云芝糖肽生产云芝糖肽的具体步骤如下1.粗品提取将180公斤云芝子实体粉碎后放入2000升的提取罐中，加水1080升，氨水调节pH至14，用直接加热至沸腾，保持微沸1小时。提取液经100目尼龙滤网过滤并放入储液罐。残渣留在提取罐中，并再加水至1080升，沸腾后仍保持微沸1小时。用同法收集第2次提取液，两次提取液合并后煮沸浓缩至波美比重1.2时，将浓缩液分别加入不锈钢盘中，进入100度烘箱，烘至浓缩液表面结硬皮后，80℃干燥。最后得到干燥块状物13公斤。
2.精制取干燥块状提取物30公斤，经粉碎至120目后，加水1050升并搅拌30分钟，静置2小时后经300目尼龙滤网过滤后收集滤液。沉淀再加水450升，搅拌30分钟，静置过夜，300目过滤后与前次滤液混合，经市售的107号阳离子树脂处理30分钟，滤液经(三效)煮沸浓缩至波美比重1.2后，80℃烘箱干燥。粉碎后得到精品即云芝糖肽产品12.5公斤。
得到的产品各项指标为颜色褐色；形状粉状；水份8-10％；多糖含量28％灰分7％蛋白质含量14％铜离子含量15ppm；铅离子含量2ppm。
权利要求
1.一种生产云芝糖肽的方法，基本上包括以下步骤(1)粉碎野生云芝子实体，加5-15倍体积的水后，再用氨水、调节pH至10-14；(2)加热保持微沸1-3小时，然后经100目-140目滤网过滤，收集滤液即提取液；(3)将步骤(2)中得到的残渣再重复步骤(1)和(2)一次或两次；(4)合并步骤(2)和(3)中的提取液，得到云芝糖肽粗提物；(5)精制粗提物，得到云芝糖肽产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中加10倍体积的水，再用氨水调节pH至12。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述加热为蒸汽加热或直接加热。
4.根据权利要求1或2述的方法，其特征在于所述加热为蒸汽加热。
5.根据权利要求1或2述的方法，其特征在于所述步骤(2)中的溶液煮沸2小时后经120目过滤。
6.根据权利要求1或2述的方法，其特征在于所述步骤(4)中的提取液经浓缩、干燥、粉碎得到粗提物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述浓缩为减压浓缩或煮沸浓缩。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述精制粗提物的步骤为粗提物加20-40倍水溶解，再通过树脂脱去重金属，得到的溶液经浓缩，干燥，粉碎即得到产品。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述树脂为阳离子树脂；所述浓缩为减压浓缩或煮沸浓缩。
10.根据权利要求6或7述的方法，其特征在于所述干燥为在80-100℃下烘干或自然干燥。
全文摘要
本发明公开了一种生产云芝糖肽的方法，其目的是提供一种简便、低成本的生产云芝糖肽的方法。本发明所提供的方法基本上包括以下步骤(1)粉碎野生云芝子实体，加5－15倍体积的水后，再用氨水、调节pH至10－14；(2)加热保持微沸1－3小时，然后经100目一140目过滤，收集滤液即提取液；(3)将步骤(2)中得到的残渣再重复步骤(1)和(2)一次或两次；(4)合并步骤(2)和(3)中的提取液，得到云芝糖肽粗提物；(5)精制粗提物，得到云芝糖肽产品。本发明利用野生资源，采用pH法提取云芝糖肽，生产成本低，所生产的云芝糖肽，多糖蛋白有效成分含量高，活性不易被破坏，减少了在发酵过程的副产物或化学污染，且抗癌效果显著。
文档编号C07K14/37GK1552732SQ0313699
公开日2004年12月8日 申请日期2003年5月26日 优先权日2003年5月26日
发明者杜千有, 关秀清 申请人:中国科学院植物研究所