专利名称：一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种有机聚合物，特别是涉及一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法。
背景技术：
目前有人采用化学方法制备硫酸半乳低聚糖的报道，但该方法存在反应条件剧烈、活性基团易受破坏、产物质量不稳定等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法，它能克服现有技术的上述缺点。
一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法，包括配制κ-卡拉胶底物，加入κ-卡拉胶酶粉，反应后用沸水浴加热使酶失活，离心去除酶解抗性片段，用乙醇沉淀收集可溶性酶解低聚糖，浓缩干燥，磺化衍生后，经乙醇反复洗涤和真空抽滤并干燥，其特征是所用的κ-卡拉胶酶由海洋微生物产生，在所述的浓缩干燥后对酶解低聚糖进行化学修饰。
本发明将酶法降解和化学修饰相结合，其优点是制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，并且该产品具有抗肿瘤活性，具备抗肿瘤药物的开发潜力。
具体实施例方式
取2g κ-卡拉胶溶于100ml蒸馏水中，加入5单位由海洋噬纤维菌产生的κ-卡拉胶酶粉，1个酶活力单位定义为在32℃条件下，每min产生1μmol还原糖(以半乳糖计)所需要的酶量。于32℃ 150r/min振荡反应12h，用沸水浴加热使酶失活，冷却后以3000r/min离心分离7min，以去除未酶解的不溶性片段，向上清液加入1倍体积的乙醇去除分子量大的组分，其余可溶性组分于60℃旋转蒸发进行浓缩至20ml，然后加入3倍体积的乙醇使低聚糖得到沉淀，离心收集沉淀物，经70℃烘干后得到卡拉胶酶解片段。于冰盐浴条件下，加5ml甲酰胺至三颈瓶中并不停搅拌，用恒压分液漏斗缓缓滴加15ml氯磺酸进行反应，形成白色乳状磺化试剂。移去冰浴，于温水浴中加入5g彻底烘干的卡拉胶低聚糖制品到瓶底部，开动搅拌，逐渐升温至指定温度68℃反应2-4h。反应体系成为红褐色，待反应液冷却后，加入10ml去离子水，倒入烧杯中，加乙醇搅拌得到沉淀，真空抽滤后，用乙醇反复洗涤，50℃烘干，获得黄色的硫酸半乳低聚糖。
对硫酸半乳低聚糖的分子量分布情况采用水相GPC技术(TOSOHTSK-凝胶柱G3000PWXL，300mm×7.8mm；流动相2.84％Na2SO4溶液，0.5ml/min)进行分析，用RI检测器检测，35℃条件下操作，进样量20μl。以葡聚糖为标准，加流动相溶解制成5g/L的标准溶液，用GPC软件根据不同分子量标准品的出峰时间，绘制标准曲线。根据样品出峰时间计算出峰位分子量及各峰的相对百分含量。
本实施例中制得的硫酸半乳低聚糖的重均分子量(Mw)为1726，分子量分布系数(D)为1.06。
权利要求
1.一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法，包括配制κ-卡拉胶底物，加入κ-卡拉胶酶粉，反应后用沸水浴加热使酶失活，离心去除酶解抗性片段，用乙醇沉淀收集可溶性酶解低聚糖，浓缩干燥，磺化衍生后，经乙醇反复洗涤和真空抽滤并干燥，其特征是所用的κ-卡拉胶酶由海洋微生物产生，在所述的浓缩干燥后对酶解低聚糖进行化学修饰。
全文摘要
一种具有抗肿瘤活性的硫酸半乳低聚糖的制备方法，包括配制κ－卡拉胶底物，加入κ－卡拉胶酶粉，反应后用沸水浴加热使酶失活，离心去除酶解抗性片段，用乙醇沉淀收集可溶性酶解低聚糖，浓缩干燥，磺化衍生后，经乙醇反复洗涤和真空抽滤并干燥，其特征是所用的κ－卡拉胶酶由海洋微生物产生，在所述的浓缩干燥后对酶解低聚糖进行化学修饰。本发明将酶法降解和化学修饰相结合，其优点是制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，并且该产品具有抗肿瘤活性，具备抗肿瘤药物的开发潜力。
文档编号C07H3/06GK1487089SQ0313897
公开日2004年4月7日 申请日期2003年8月4日 优先权日2003年8月4日
发明者牟海津, 江晓路, 管华诗 申请人:中国海洋大学