专利名称：用于治疗脓毒症的口服乳铁蛋白的制作方法
技术领域：
本发明涉及通过单独或者与标准疗法或金属鳌合剂例如EDTA(乙二胺四乙酸)联合口服施用乳铁蛋白(LF)的组合物来预防或治疗菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的方法。更具体来说，本发明涉及通过单独或者与金属鳌合剂联合或与标准疗法联合口服施用乳铁蛋白组合物来预防性或治疗性地治疗内毒素血症、革兰氏阴性或革兰氏阳性菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症如ARDS的方法。
背景技术：
脓毒症被定义为对感染过程的全身性炎症反应综合征(SIRS)。脓毒症是可以发生在身体任何部位的细菌感染的结果。常见的部位是泌尿生殖道、肝脏或胆道、胃肠道及肺脏，罕见的部位是静脉内注射线、外科伤口、褥疮性溃疡及褥疮。通过阳性血培养感染通常被确定，感染可引起休克，称为脓毒性休克。脓毒性休克更多由医院获得的革兰氏阴性杆菌引起，并且通常发生在无免疫应答的或患有慢性疾病的患者。但是，大约三分之一的患者由革兰氏阳性球菌和念珠菌引起。脓毒症的诊断基于下面四个指标中至少存在两个心动过速(心率＞90bpm)、换气过度(呼吸频率＞20/分钟或pCO2exp＜35mm Hg)、发烧(＞38.3℃)或低体温(＜36℃)，和白细胞增多(＞12,000/μL)或白细胞减少(＜4,000/μL)。
在美国，每年大约有750,000脓毒症病例，其中至少有225,000病人致命。到目前为止，只有一种药被批准用于脓毒症，即重组人体激活蛋白C，其表现出抗血栓形成、抗感染、纤维蛋白溶酶原的特性。
由菌血症和脓毒症(SIRS)引起的脓毒性休克的病因学尚未完全明白。通过感染的有机物引发的细菌毒素激发复杂的免疫反应。除了内毒素以外(从革兰氏阴性肠杆菌的细胞壁上被释放的脂多糖类的脂质分数)，包含了大量介体包括肿瘤坏死因子、白细胞三烯、脂肪氧化酶、组胺、缓激肽、血清和白细胞介素-2。最初，出现动脉和小动脉血管舒张，降低外周血管对正常或增加的心排出量的阻力，即使心率增加时射血分数可能降低。随后，心输出量可能降低，外周血管阻力可能增加。尽管增加了心输出量，但是到毛细交换血管的血流被损害，最终引起一个或多个内脏器官衰竭。
在实验动物中，例如，在注射内毒素的小鼠中，炎症介体的氧化作用的突然增加和过度产生伴发内毒素血症及内毒素引发的死亡。已经描述了腹膜内注射乳铁蛋白主要通过与细菌内毒素的结合影响内毒素血症的结果(Kruzel ML等人，2002)。也描述了非胃肠乳铁蛋白的其它作用，例如脂多糖类(LPS)激发前1小时，腹膜内注射乳铁蛋白引起几种介体的抑制，即在LPS注射后2小时，TNF-(α)相差82％，IL-6相差43％，IL-10相差47％；并且在休克后6小时氧化氮(NO)降低80％。LPS注射前18小时预防性腹膜内注射乳铁蛋白引起相似的降低，TNF-α降低95％，一氧化氮(NO)降低62％。与此相似，当腹膜内注射乳铁蛋白作为内毒素性休克治疗的后诱导时，血清中TNF-α和氧化氮显著降低。
已有文献报道口服乳铁蛋白通过成熟肠道没有任何重大程度的系统性吸收(Heyman M等人，1992；Fransson GB等人，1983；HollowayNM等人，2002)。文献还认为乳铁蛋白大部分作用与全身循环内毒素的结合有关。例如在Rhesus猴中进行的GLP药物代谢动力学研究以确定口服重组人乳铁蛋白(以下简写为rhLF)的利用度。标准剂量为4mL/kg，通过口服管饲法给药。与经脉注射rhLF药物代谢动力学比较。rhLF口服剂量为1000mg/kg。口服该剂量以后，rhLF的血浆浓度较服药前、内源性的乳铁蛋白值无显著性提高。计算的重组乳铁蛋白绝对生物利用度低于0.5％(Fransson GB等人，；Heyman M等人，1992)。
乳铁蛋白是单链金属结合糖蛋白，已知许多细胞类型如单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞及刷状边缘细胞都有乳铁蛋白受体。乳铁蛋白除了是B淋巴细胞和T淋巴细胞基本的生长因子之外，乳铁蛋白还具有宽泛的与宿主主要的防御机制有关的功能。例如，有报道乳铁蛋白激活自然杀伤细胞(NK)，诱导集落刺激活性，激活多形核中性白细胞(PWN)，调节粒细胞生成，提高抗体依赖细胞的细胞毒性，刺激使淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞活性，加强巨噬细胞毒性。
先前已经将重组人体乳铁蛋白描述为在各种原核和真核生物体包括曲霉菌(aspergillus)(US专利6,080,559)、牛(US专利5,919,913)、大米、谷物、酵母属(Sacharomcyes)(US专利6,228,614)和赤壁酵母属(Pichia pastoris)(US专利6,455,687、6,277,817、6,066,469)中表达之后被纯化。还描述了为全长人体乳铁蛋白的表达的表达系统(例如US专利6,100,054)。在所有的情况中，教导的部分是全长cDNA的表达和在前导肽处理后其N-末端是甘氨酸的完整蛋白的纯化。Nuijens等人(US专利6,333,311)单独描述了人体乳铁蛋白的变体，但是他们的注意力被局限在乳铁蛋白N-末端范围发现的精氨酸残基的缺失和替代上了。
本发明是第一次使用口服乳铁蛋白组合物作为全身性菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症的治疗和预防。此外，本发明是第一次使用乳铁蛋白与金属鳌合剂联合治疗全身性菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症。更进一步，本发明是第一次使用乳铁蛋白与现有疗法联合治疗全身性菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症。
发明概述本发明涉及预防性或治疗性地治疗菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症例如多器官衰竭和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的方法。所述治疗方法包括单独或者与金属鳌合剂联合口服施用乳铁蛋白组合物。
在可药用的载体中分散的乳铁蛋白组合物包括乳铁蛋白或其中至少N-末端甘氨酸残基被截短或替代的N-末端乳铁蛋白变体。乳铁蛋白是哺乳动物乳铁蛋白，更特别地，乳铁蛋白是人或牛的乳铁蛋白。更进一步，该乳铁蛋白是重组乳铁蛋白。N-末端乳铁蛋白变体包括至少缺乏N-末端甘氨酸残基或在N-末端甘氨酸残基发生替代的变体。该替代可以包括用天然的或人工合成的氨基酸残基替代N-末端甘氨酸残基。例如该替代可以包括用正氨基酸残基或负氨基酸残基替代N-末端甘氨酸残基，或者用除了甘氨酸以外的中性氨基酸残基替代N-末端甘氨酸残基。其它的N-末端乳铁蛋白变体包括缺乏一个或多个N-末端残基的或者在N-末端发生一个或多个替代的乳铁蛋白。在具体的实施方案中，N-末端乳铁蛋白变体占乳铁蛋白组合物的至少1％，占乳铁蛋白组合物的至少5％，占乳铁蛋白组合物的至少10％，占乳铁蛋白组合物的至少25％，占乳铁蛋白组合物的至少50％，或者之间的任何范围。
口服乳铁蛋白的给药量为每天大约1mg-大约100g，更优选的给药量为每天大约10mg-大约10g。更具体来说，该组合物是含乳铁蛋白浓度为大约0.1％-大约100％的溶液、胶囊或片剂。
在进一步的实施方案中，在可药用的载体中分散的金属鳌合剂可以与乳铁蛋白组合物一起施用。优选的金属鳌合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)或[亚乙基双(氧亚乙基次氮基)]四乙酸(EGTA)。更优选的金属鳌合剂是EDTA。EDTA的给药量为每天大约0.01μg到大约20g；EDTA与施用的组合物中的乳铁蛋白的比例为1∶10000-大约2∶1。
本发明的实施方案是治疗菌血症的方法，所述方法包括给个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以提供改善个体菌血症的步骤。这种改善是减轻脓毒症、减轻脓毒性休克、减轻器官衰竭，降低发病率和/或降低死亡率。更具体来说，口服给药是通过鼻饲管进行的。更进一步，乳铁蛋白组合物可以与抗生素联合给药。
对于口服给药来说，抗酸药与乳铁蛋白组合物可联合给药。可以将乳铁蛋白配制成延迟释放的制剂。更进一步的，乳铁蛋白组合物可以被配制成在小肠或大肠发生释放的制剂。施用的组合物可以是液体制剂、有肠溶包衣的固体制剂或没有肠溶包衣的固体制剂。
本发明的另一个实施方案是治疗菌血症的方法，所述方法包括给个体口服一定量的乳铁蛋白组合物以增加胃肠道中乳铁蛋白的量，补充个体粘膜免疫系统的步骤。更具体地说，口服是通过鼻饲管进行的。
更进一步，另一个实施方案是提高个体胃肠道粘膜免疫应答的方法，所述方法包括给个体口服施用乳铁蛋白组合物的步骤。乳铁蛋白刺激胃肠道中的白细胞介素-18。白细胞介素-18刺激免疫细胞的产生或活性。乳铁蛋白减少促炎细胞因子的产生和活性。
另一个实施方案是预防处于发展成菌血症危险的个体的菌血症的方法，所述方法包括给个体口服施用有效量的含有乳铁蛋白的组合物和金属鳌合剂以预防或减轻该个体的菌血症的步骤。更具体地说，口服是通过鼻饲管进行的。处于发展成菌血症危险的个体可能是无免疫应答的个体。
一个特别的实施方案是降低有菌血症的个体死亡率的方法，所述方法包括给个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以减轻菌血症从而降低该个体死亡率的步骤。
另一个实施方案是治疗个体脓毒病症的方法，所述方法包括该个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以提供改善该个体脓毒病症的步骤。这种改善是降低循环细菌的水平、减轻脓毒性休克、减轻器官衰竭、降低发病率或降低死亡率。
进一步的实施方案是降低患有脓毒症的个体死亡率的方法，所述方法包括给个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以减轻脓毒症从而降低个体死亡率的步骤。组合物降低了循环细胞因子的水平，例如，细胞因子选自IL-4、IL-6、TNF-α和IL-10。更进一步，该方法包括乳铁蛋白组合物与已经被批准的脓毒症的疗法如Drotrecogin-α(被激活的)Xigris联合给药。
另一个实施方案是降低患有急性肺损伤(ALI)或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的个体死亡率的方法，所述方法包括给个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以减轻ALI或ARDS从而降低个体死亡率的步骤。更进一步，该方法包括将乳铁蛋白组合物与已经被批准的ALI/ARDS的标准疗法例如低潮气容积换气或表面活性剂联合给药。
前面已经相当宽泛地概述了本发明的特征和技术优势，以便于可以更好地理解下面对本发明的详尽描述。本发明的另外特征和优势将在下文中描述，形成本发明权力要求书的主题。应该意识到被公开的概念及特别的实施方案可以被容易地利用作为基础以改良或设计其它结构从而执行与本发明相同的目的。还应该认识到等效的解释不与在本发明附加的权力要求书中所阐述的内容相背离。当考虑与附图有关时，被认为是本发明特点的新特征关于它的组织和操作方法与进一步的目标和优势一起，将从下面的描述中更好的理解。但是，应该清楚地理解，提供每个图只为了图解和描述的目的，并且不打算作为本发明限制的定义。
附图简述为了更完全地理解本发明，参照下面与附图结合的描述。
图1比较以不同剂量和给药方案口服或静脉内施用rhLF对降低在脂多糖(LPS)引发的内毒素血症模型中的小鼠死亡率的作用。
图2显示脓毒症中死亡率的降低和关键细胞因子的减少。
发明详述对本领域的技术人员而言，显而易见的是，对本申请中被公开的发明实施各种方案并进行改良都没有超出本发明的实质和范围。
正如在此使用的，当在权力要求书和/或说明书中与术语“包含”一起使用时，“一个”的使用意味着“一个”，但它也与“一个或多个”、“至少一个”、“一个或多于一个”意思一致。更进一步，术语“有”、“包括”和“包含”可以互换，并且本领域技术人员认知这些术语是公开的最终术语。
本文所用术语“抗菌剂”被定义为抑制微生物生长、不对宿主造成损害的物质。例如抗生素、抗真菌剂及消毒剂。
本文所用术语“抗生素”被定义为抑制微生物生长、不对宿主造成损害的物质。例如抗生素可以抑制细胞壁合成、蛋白质合成、核酸合成，或改变细胞膜功能。可能被使用的抗生素的分类包括(但不限于此)大环内酯类(如红霉素)、青霉素类(如乙氧萘胺青霉素)、头孢菌素类(如先锋霉素)、carbepenems(如亚胺硫霉素，阿苏胺)、其它的β-内酰胺抗生素、β-内酰胺抑制剂(如舒巴坦)、oxalines(如linezolid)、氨基糖苷类(如庆大霉素)、氯霉素、磺胺类药物(如新诺明)、糖肽类(如万古霉素)、喹啉类(如环丙沙星)、四环素类(如二甲胺四环素)、褐霉素、甲氧苄胺嘧啶(磺胺增效剂)、甲硝唑、氯林肯霉素、甲单孢酸、利福霉素(如利福平)、链阳性菌素类(如喹奴普汀和达福普汀)、脂蛋白(如达帕托霉素)、多烯类(如两性霉素B)、唑类(如氟康唑)、和棘球白素类(如caspofungin acetate)。本文所用术语“发病率”是正在发病的状态或情况。此外，“发病率”也指发病的比例，例如，与具体人群有关的病人数或病例数。
本文所用术语“菌血症”被定义为个体血液中有细菌感染病灶或细菌。
本文所用术语“趋化因子”是指涉及细胞例如吞噬细胞和淋巴细胞的移动和活化的小细胞因子。本领域技术人员认识到趋化因子在炎症和免疫应答过程中起着重要作用。
本文所用术语“细胞因子”是指影响其它细胞行为(例如刺激或抑制细胞的增殖)的细胞制造的蛋白质。例如，由淋巴细胞制造的细胞因子常被称为淋巴因子或白细胞介素。本领域技术人员认识到术语细胞因子是文献中所使用的涉及影响其它细胞行为的细胞制造的蛋白质的普通术语。
本文所用术语“有效量”或“治疗有效量”是涉及使疾病的症状或情况得到改善或纠正的量。
本文所用术语“内毒素”涉及不被任意释放到周围介质的细菌毒素。
文所用术语“内毒素血症”涉及血液中内毒素的存在。
本文所用术语“革兰氏阴性菌”被定义为用革兰氏染色有红着色的被分类的细菌。革兰氏阴性菌有薄壁的细胞膜，细胞膜由单层肽聚糖和外层的脂多糖、脂蛋白及磷脂组成。典型的生物体包括但不限于由埃希氏杆菌属(Escgerichia)、志贺氏杆菌属(Shigella)、爱德华菌属(Edwardsiella)、沙门氏菌属(Salmonella)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、克雷白氏杆菌属(Klebsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、哈夫尼菌属(Hafnia)、沙雷氏菌属(Serratia)、变形杆菌属(Proteus)、摩根菌属(Morganella)、普罗威斯登菌属(Providencia)、耶森氏菌属(Yersinia)、欧文氏菌属(Erwinia)、Buttlausella、西地西菌属(Cedecea)、爱文氏菌属(Ewingella)、克罗非菌属(Kluyvera)、塔特姆菌属(Tatumella)和拉恩氏菌属(Rahnella)组成的肠杆菌科。其它示例性的不属于肠杆菌科的革兰氏阴性菌包括但不限于绿脓假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、Cepacia、加德纳氏菌属(Gardenerella)、Vaginalis和不动杆菌属(Acinetobacter)。
本文所用术语“革兰氏阳性菌”涉及用革兰氏染色成有兰着色的被分类的细菌。革兰氏阳性菌有厚的细胞膜，细胞膜由多层肽聚糖和外层的胞壁酸组成。典型的生物体包括但不限于此金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、凝固酶阴性葡萄球菌、链球菌(streptococci)、粪链球菌(enterococci)、棒状杆菌属(corynebacteria)及杆菌属(Bacillus)。
本文所用术语“无免疫应答的”被定义为当暴露于病原体时，个体具有减少一个或多个对感染正常防御的生理机制的预先存在情况。无免疫应答的情况可能是由于免疫系统缺陷或功能紊乱或者是由于提高对炎症敏感性的其它因素，例如免疫抑制因子。即使这样一种范畴考虑到了评价的概念性的基础，但是有炎症的无免疫应答的个体常不完全适合一组或其它组。身体防御机制中的多个缺陷可能被影响。例如，无免疫应答的可能起因于存在于中心线的或由于静脉内注射毒品而造成的其它型的损伤；或者由继发的恶性肿瘤、营养不良、或已经被其它感染因子如结核病、流感、金黄色葡萄球菌或性传播疾病例如梅毒或肝炎所感染。
本文所用术语“乳铁蛋白”或“LF”是指天然的或重组的乳铁蛋白。天然的乳铁蛋白可以通过哺乳动物奶或其它自然来源的初乳的纯化获得。重组乳铁蛋白(rLF)可以通过重组表达或在有遗传改变的动物体、植物、真菌、细菌或其它原核或真核生物属直接产生，或通过化学合成的方式生产。
本文所用术语“乳铁蛋白组合物”是指含有乳铁蛋白、部分或局部乳铁蛋白、N-末端乳铁蛋白变体或其组合的组合物。
本文所用术语“死亡率”是正在临终的或引起死亡的状态。此外，死亡率也可以指给出的人群死亡比率或死亡人数的比例。
本文所用术语“发病率”是生病的状态。此外，发病率也可以指给出的人群病人或疾病病例的生病率或比例。
本文所用术语“金属鳌合剂”是指与金属结合的化合物。可用于本发明的金属鳌合剂包括二价金属鳌合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)、[亚乙基双(氧亚乙基次氮基)四乙酸](EGTA)、1，2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸(BAPTA)、羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)或其盐。
本文所用术语“N-末端乳铁蛋白变体”是指其中至少N-末端甘氨酸已被截短和/或替代的乳铁蛋白。N-末端乳铁蛋白变体也包括但不限于一个或多个N-末端氨基酸残基的缺失和/或替代，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个N-末端氨基酸残基的缺失和/或替代等。因此，N-末端乳铁蛋白变体包括至少1～16个N-末端氨基酸残基的缺失或截短和/或替代。至少乳铁蛋白N-末端甘氨酸的缺失和/或替代调节与完全长度乳铁蛋白相同的生物学作用和/或可以增强乳铁蛋白生物学活性，例如，通过刺激各种细胞因子(如IL-18、MIP-3α、GM-CSF或IFN-γ)的产生、通过抑制各种细胞因子(如IL-2、IL-4、IL-5、Il-6、IL-10和TNF-α)、通过减轻脓毒症、减轻脓毒性休克、减轻器官衰竭、降低发病率和/或降低死亡率。
本文所用术语“口服给药”包括经口、颊、肠、直肠或胃内给药。
本文所用术语“可药用的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌制剂、等张的和吸收延迟制剂等。在本领域用于药物活性物质的介质和制剂的使用是众所周知的。除了在任何传统的介质或制剂的范围内与本发明的带菌者或细胞相矛盾外，期待在治疗组合物中使用，也可以将补充的活性成分组合到该组和物中。
本文所用术语“预防”涉及减小、降低或抑制发展成疾病状态或与疾病状态或进展有关的参数，或其它不正常的或有害的情况的危险。
本文所用术语“脓毒症”被定义为对感染过程的全身性炎症反应综合征，其宿主免疫系统严重混乱不能预防炎症介质从局部病灶到全身循环的广泛“溢出”。
本文所用术语“脓毒性休克”是全身性炎症反应导致重要器官功能衰竭(如在ARDS中的肺衰竭)的脓毒症的结果。
本文所用术语“个体”意味着根据此处描述的方法口服乳铁蛋白组合物的任何哺乳类动物个体。专业技术人员认识到哺乳类动物个体包括但不限于此人类、猴子、马、猪、牛、狗、猫、大鼠和小鼠。在具体的实施方案中，用本发明的方法治疗人类个体。在进一步的实施方案中，该个体处在发展成菌血症或脓毒症的危险。因此，该个体可以或不可以认知他们的疾病状态或潜在的疾病状态，并且可以或不可以知道他们是治疗的需要(治疗性治疗或预防性治疗)。
本文所用术语“医治”和“治疗”涉及个体施用治疗有效剂量的重组人体乳铁蛋白组合物，以便于个体的疾病有所改善。改善是与菌血症、脓毒症、脓毒性休克或它们的后果有关的症状的改善或纠正。改善是可以观察到的或可以衡量的改善，例如，降低循环细菌的水平、降低死亡率、降低发病率、减轻器官衰竭的发展、减少住院天数、减少或消减重症监护如重症监护病房的天数、或者减少或消减支持疗法如机械呼吸器或PaO2/FiO2比例的使用。因此，本领域技术人员认识到治疗可以改善疾病的情况，但是不可以完全治愈该疾病。
A.乳铁蛋白根据本发明所使用的乳铁蛋白能够从自然来源例如但不限于哺乳动物奶通过分离和纯化获得。乳铁蛋白优选为哺乳动物乳铁蛋白，如牛或人乳铁蛋白。在被优选的实施方案中，利用已熟知的、在本领域已被使用的基因工程技术重组产生乳铁蛋白，如在基因改变的动物、植物或真核细胞重组表达或直接产生，或化学合成。见例U.S.专利5,571,896；5,571,697及5,571,691，在此引用作为参考。
在某些方面，本发明提供了具有超过天然LF和/或rLF的生物活性的乳铁蛋白变体，例如刺激和/或抑制细胞因子或趋化因子的能力提高。特别是，本发明提供了其中至少一个N-末端甘氨酸残基已经被替代和/或截短的乳铁蛋白变体。N-末端乳铁蛋白变体可以自然存在或可通过一个或多个氨基酸的替代或缺失而被修改。
通过乳铁蛋白水解和/或多聚核苷酸的表达能够产生缺失的变体，编码一个被截短的乳铁蛋白，正如在U.S.专利6,333,311中所描述的，在此引用作为参考。
替代变体或取代变体通常包含在蛋白质内一个或多个位点上的一个氨基酸与另一个氨基酸的交换，替代可能是保守的，即一个氨基酸被另一个相似形状和电荷的氨基酸所替代。保守的替代在本领域被熟知并且包括，例如，丙氨酸变成丝氨酸；精氨酸变成赖氨酸；天冬酰胺变成谷氨酰胺或组氨酸；天冬氨酸变成谷氨酸；半胱氨酸变成丝氨酸；谷氨酰胺变成天冬氨酸；谷氨酸变成天冬氨酸；甘氨酸变成脯氨酸；组氨酸变成天冬酰胺或谷氨酰胺；异亮氨酸变成亮氨酸或缬氨酸；亮氨酸变成缬氨酸或异亮氨酸；赖氨酸变成精氨酸；蛋氨酸变成亮氨酸或异亮氨酸；苯丙氨酸变成酪氨酸、亮氨酸或蛋氨酸；丝氨酸变成苏氨酸；苏氨酸变成丝氨酸；色氨酸变成酪氨酸或苯丙氨酸；缬氨酸变成异亮氨酸或亮氨酸。
在进行这样的改变中，可以考虑氨基酸的亲水指数。使蛋白质具有相互生物功能的氨基酸亲水指数的重要性是本领域通常已知的(Kyte and Doolittle，1982)。氨基酸相关的亲水特征有助于所得蛋白的二级结构，该二级结构又限定蛋白质与其它分子例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等的相互作用。
基于亲水性和电荷特征的，指定每个氨基酸的亲水指数(Kyte和Doolittle，1982)。这些是异亮氨酸(+4.5)、缬氨酸(+4.2)、亮氨酸(+3.8)、苯基丙氨酸(+2.8)、半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)、蛋氨酸(+1.9)、丙氨酸(+1.8)、甘氨酸(-0.4)、苏氨酸(-0.7)、丝氨酸(-0.8)、色氨酸(-0.9)、酪氨酸(-1.3)、脯氨酸(-1.6)、组氨酸(-3.2)、谷氨酸(-3.5)、谷氨酰胺(-3.5)、天冬氨酸(-3.5)、天冬酰胺(-3.5)、赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。
本领域公知某些氨基酸可以被其它具有相似亲水指数或分数的氨基酸所替代，并且仍然产生具有相似的生物活性的蛋白质，例如，仍然获得生物功能相当的蛋白质。在进行这样的变化中，优选亲水指数在±2范围内的氨基酸替代物，特别优选亲水指数在±1范围内的氨基酸替代物，更特别优选亲水指数在±0.5范围内的氨基酸替代物。
本领域也理解像氨基酸的替代物在亲水性的基础上可以被有效地制得。U.S.专利4,554,101在此引用作为参考，声明蛋白质最大的局部平均亲水性，正如由相邻氨基酸的亲水性所控制，与蛋白质的生物性能有关。正如U.S.专利4,554,101所详述的，下面的亲水性值指定给氨基酸残基精氨酸(+3.0)、赖氨酸(+3.0)、天冬氨酸(+3.0±1)、谷氨酸(+3.0±1)、丝氨酸(+0.3)、天冬酰胺(+0.2)、谷氨酰胺(+0.2)、甘氨酸(0)、苏氨酸(-0.4)、脯氨酸(-0.5±1)、丙氨酸(-0.5)、组氨酸(-0.5)、半胱氨酸(-1.0)、蛋氨酸(-1.3)、缬氨酸(-1.5)、亮氨酸(-1.8)、异亮氨酸(-1.8)、酪氨酸(-2.3)、苯基丙氨酸(-2.5)、色氨酸(-3.4)。
更进一步，一个氨基酸能够被另一个具有相似亲水性值的氨基酸所替代，并且仍获得生物性和免疫性相当的蛋白质，是被理解的。在这样的变化中，优选亲水性值在±2的氨基酸替代物，特别优选在±1范围内的氨基酸替代物，更特别优选在±0.5范围内的氨基酸替代物。
因此，在本发明中，替代的变体或取代物可以用标准的突变技术产生，例如，象在U.S.专利5,220,007；5,284,760；5,354,670；5,366,878；5,389,514；5,635,377；5,789,166和6,333,311公开的定点诱变在此引用作为参考。设想至少N-末端甘氨酸残基可以用20个天然存在的氨基酸中的任何一个替换或替代，例如，阳性电荷氨基酸(精氨酸、赖氨酸或组氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸)和/或阴性电荷氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)。更进一步，期望在N1～N16范围内的任何氨基酸残基可以被替换或替代。设想只要蛋白质保持刺激各种细胞因子(如IL-18，MIP-3α，GM-CSF或IFN-γ)产生的生物学的和/或功能的活性，至少到16个之多的N-末端氨基酸残基可以被替换或替代，通过抑制各种细胞因子(如IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10或TNF-α)，通过减轻脓毒症、减轻脓毒性休克、减轻器官衰竭、降低发病率、和/或降低死亡率。因此，本发明的N-末端乳铁蛋白变体被认为是乳铁蛋白功能相等物。
在功能相等物术语中，本领域技术人员很好地理解，“生物功能相等”的蛋白的固有定义是这样的概念，当保持一个分子具有相等的生物活性的可接受水平和/或提高乳铁蛋白分子的生物学活性时，对在分子被定义的部分的范围内所进行的变化数量有一个限制。因此，生物学功能相等物在此被定义为那些被选择的氨基酸(或密码子)可以被替代的蛋白质。功能活性被定义为乳铁蛋白刺激或抑制各种细胞因子或趋化因子和/或减轻脓毒症、减轻脓毒性休克、减轻器官衰竭、降低发病率、和/或降低死亡率。
更进一步，N-末端氨基酸残基可以用一个被修饰过的、和/或不常见的氨基酸所替代。一个示范表(但不限于此)，在下面提供了被修饰过的和/或不常见的氨基酸。
在乳铁蛋白(乳铁蛋白组合物)的制备中，N-末端乳铁蛋白变体(缺失和/或替代)的存在和相关比例可以利用标准方法，通过Edman降解确定N-末端氨基酸序列来确定。N-末端乳铁蛋白变体的相关比例包括乳铁蛋白组合物的至少1％，乳铁蛋白组合物的至少5％，乳铁蛋白组合物的至少10％，乳铁蛋白组合物的至少25％，乳铁蛋白组合物的至少50％或之间的任何范围。
在该方法中，蛋白质与异硫氰酸苯酯(PITC)反应，PITC在碱性条件下与氨基末端的氨基酸残基反应形成苯基硫代氨基甲酰基衍生物(PTC-蛋白)。然后，三氟乙酸裂解掉第一个氨基酸作为anilinothialinone衍生物(ATZ-氨基酸)和为下一个降解循环留下新的氨基酸末端。
N-末端乳铁蛋白变体的百分比通过利用丹磺酰化反应更精确地确定。简言之，利用丹磺酰氯在碱性条件下(pH10)与蛋白质反应，蛋白质被丹磺酰化。在丹磺酰化之后，将反应混合物被干燥成小球状，然后，在6N盐酸中完全水解。用在线荧光计与由已知的丹磺酰化氨基酸组成的标准物比较，通过RP HPLC确定N-末端氨基酸的比例。
B.药物组合物本发明被描写成包含乳铁蛋白组合物的组合物，乳铁蛋白组合物分散在药物载体中。包含在本发明组合物中的乳铁蛋白包括乳铁蛋白或其中至少N-1端甘氨酸残基被截短或替代N-末端乳铁传递蛋变体。更具体而言，N-末端乳铁蛋变体占组合物的至少1％，占组合物的至少5％，占组合物的至少10％，占组合物的至少25％，占组合物的至少50％或之间的任何范围。
此外，该组合物包括与分散在药物载体中的金属鳌合剂联合的乳铁蛋白。因此，本发明被描写成具有或不具有分散在药物载体中的金属鳌合剂的乳铁蛋白组合物。本领域的技术人员明白两个组合物(例如，单独的乳铁蛋白或与金属鳌合剂组合的乳铁蛋白)都在本发明的范围之内，并且能够被交换使用，取决于所期望的反应类型。设想金属鳌合剂加到乳铁蛋白组合物中提高了金属离子的螯合，并且因此增强了免疫系统或提高了乳铁蛋白的效果。
可以与乳铁蛋白联合使用的金属鳌合剂包括二价金属鳌合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)、[亚乙基双(氧亚乙基次氮基)四乙酸](EGTA)、1，2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸(BAPTA)、羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)或其盐。更优选EDTA与乳铁蛋白联合使用。
进一步依照本发明，适合施用的本发明组合物在可接受的药物载体中被提供，有或无惰性稀释剂。该载体应该是可吸收的，并且包括液体、半固体如糊剂、或固体载体。除了在任何传统的介质、剂型、稀释剂或载体对接收者或对其中包含的组合物的疗效有损害的情况，为了用于实践本发明的方法，在可施用的组合物中它的使用是合适的。载体或稀释剂的例子包括脂肪、油类、水、盐溶液、脂类、脂质体类、树脂类、粘合剂类、填充剂等，或其组合。
依照本发明，该组合物以任何方便和可应用的方式与载体组合，例如，通过溶液、悬浮液、乳化作用、附加剂、胶囊、吸收剂等。这些方法对本领域的技术人员来说是常规的。
在本发明的具体实施方案中，该组合物与半固态或固态载体完全结合或混合。混合能够以任何方式进行，如研磨。为了使该组和物治疗活性免受损失例如在胃中变性，在混合过程中可以加入稳定剂。用于该组合物稳定剂的例子包括缓冲剂，氨基酸如甘氨酸和赖氨酸，糖类如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇等，蛋白水解酶抑制剂等。此外，设想二价金属鳌合剂，如EDTA也能够被用来稳定本发明组合物。更优选地，对于口服组合物来说，稳定剂也可以包括胃酸分泌的拮抗剂。
与半固态或固态载体组合的口服的组合物可以被进一步配制成硬或软壳的明胶胶囊、片剂或丸剂。更优选将明胶胶囊、片剂或丸剂进行肠包衣。肠溶包衣预防该组和物在胃或上部肠的变性，此处pH为酸性。见，如，U.S.专利5,62,9001。紧接着到达小肠，其pH碱性溶解包衣并允许乳铁蛋白通过专门的细胞例如肠上皮细胞和Peyer’spatch M细胞释放和吸收。
在另一个实施方案中，粉末组合物与有或无稳定剂液体载体例如水或盐溶液合并。
本发明中乳铁蛋白的量可以为大约1g-大约100g，在优选的实施方案中，本发明的组合物包括乳铁蛋白的浓度为大约0.0001％-大约30％。更优选地，乳铁蛋白以10mg～10g的量口服。乳铁蛋白可以包括乳铁蛋白或其中至少N-1末端甘氨酸残基被截短和/或被替代的N-末端乳铁蛋白变体。
更优选，本发明的组合物还包含金属鳌合剂，例如但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、[亚乙基双(氧亚乙基次氮基)四乙酸](EGTA)、1，2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸(BAPTA)、羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)或其盐。组合物中金属鳌合剂的量可以为大约1ng-大约20g。优选的金属鳌合剂是EDTA。
在配制时，溶液以与制剂相容的方式施用，量是治疗的有效量以导致症状改善或纠正。制剂以各种剂型如可吞咽的溶液、药物释放胶囊等容易地施用。剂量的变化可以发生取决于被治疗的个体的情况。在任何情况下，负责给药的人可为个体决定合适的剂量。
C.治疗和/或预防根据本发明，任何上述所描述的药物载体提供的组合物对怀疑或患有菌血症、脓毒症、脓毒性休克或后遗症的个体口服给药。这些情况可能由革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌或其它感染因子如身体任何病灶内的念珠菌所引起，并且处于发展成或已经发展成全身炎症反应综合征。在考虑几个因素，如局部效果、药效学、吸收、代谢、传递方式、年龄、体重、疾病严重程度和对治疗的反应的基础上，本领域技术人员能够决定给予个体治疗和/或预防有效剂量的组合物。口服组合物包括经口的、颊部的、肠的或胃内的施用。
菌血症可以由革兰氏型阴性菌或革兰氏阳性菌引起。革兰氏型阴性菌具有薄壁细胞膜，细胞膜由单层肽聚糖和外层的脂多糖、脂蛋白及磷脂组成。典型的革兰氏型阴性生物体包括但不限于由埃希氏杆菌属、志贺氏杆菌属、爱德华菌属、沙门氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷白氏杆菌属、肠杆菌属、哈夫尼菌属、沙雷氏菌属、变形杆菌属、摩根菌属、普罗威斯登菌属、耶森氏菌属、欧文氏菌属、Buttlausella、西地西菌属、爱文氏菌属、克罗非菌属、塔特姆菌属和拉恩氏菌属组成的肠杆菌科。其它示例性的不属于肠杆菌科的革兰氏阴性菌包括但不限于绿脓假单孢菌、嗜麦芽糖寡养单胞菌、伯克霍尔德氏菌属、Cepacia、加德纳氏菌属、Vaginalis和不动杆菌属。革兰氏阳性菌细胞膜厚，细胞膜由多层肽聚糖和外层的胞壁酸组成。典型的革兰氏阳性生物体包括金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、链球菌、粪链球菌、棒状杆菌属及杆菌属。
例如，菌血症可以通过感染的口腔组织的外科处理或常规的牙科处理、感染的下部尿道的导管插入术、脓肿的切开和引流、留置的器械的移殖，特别是IV和心脏内导管、尿导管和造瘘术器械和导管引起。感染的原发位通常在肺、泌尿生殖道(GU)或胃肠道(GI)，或着软组织包括褥疮性溃疡患者的皮肤。慢性病和无免疫应答的个体较健康个体，更常见革兰氏型阴性菌。另外，这些无免疫应答的个体可以发展成由需氧杆菌、厌氧菌和真菌引起的血流感染。
对于脓毒性休克易感因素包括糖尿病；肝硬变；白细胞减少的状态，特别是那些与下面的肿瘤或用细胞毒素因子治疗有关的状态；在尿道、胆道、或胃肠的先期感染；器械侵入包括导尿管、引流管、和其它外来的材料；和先前用抗生素、皮质激素、呼吸机治疗。脓毒性休克更常见于新生儿、大于35的个体、妊娠妇女、和那些由下面的疾病或医生的治疗引起的并发症导致的严重的无免疫应答的的人。
在进一步的实施方案中，该组合物与抗酸药联合施用。因此，在口服施用该组合物之前或同时或之后，施用抗酸药。在施用该组合物之前或之后立即施用抗酸药可以有助于降低乳铁蛋白在消化道中的灭活的程度。合适的抗酸药的例子包括但不限于碳酸钠、氧化镁、氢氧化镁、碳酸钙、三硅酸镁、碳酸镁和氢氧化铝凝胶。
根据本发明，上面所描述的方法被用于菌血症、脓毒症、脓毒性休克、相关病症或其后果的预防。在具体的实施方案中，紊乱以由于抗生素使用和相继的内毒素的释放引起的内毒素血症的危险为特点，同明确鉴别菌血症一样。
此外，另一个实施方案是对处于发展成菌血症危险的个体预防菌血症的方法，包括给个体施用足够剂量的乳铁传蛋白组合物以预防个体菌血症的步骤。设想乳铁蛋白组合物不仅对患有菌血症的个体具有治疗的益处，而且对那些处于发展成菌血症、脓毒症、脓毒性休克和相关情况危险的个体还具有预防特性。处于危险的个体可以或不可以认知他们的疾病状态或潜在的疾病状态，可以或不可以知道他们是治疗的需要。
处于发展成菌血症、脓毒症、脓毒性休克和/或相关情况危险的人被考虑为无免疫应答的的和/或慢性疾病。在细菌暴露时，无免疫应答的个体，有一个先存在的条件，其降低了一个或多个对炎症正常防御的机制。无免疫应答的的情况可以是由于免疫系统缺陷或功能紊乱或增加对感染敏感性的其它因素，如免疫抑制剂。
预防性地，设想乳铁蛋白组合物能够降低下面的任何一个(指标)循环细菌水平；个体发展成脓毒症、脓毒性休克、器官衰竭的危险、和减少与菌血症有关的发病率和死亡率。
在本发明的优选实施方案中，施用有效量的该组合物，以减少、降低、抑制或排除发展成菌血症的危险和减小已经存在的菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关情况的影响。组合物中乳铁蛋白的量可以为大约1mg-100g。口服的组合物含乳铁蛋白的量每天在大约10mg～10g范围内为优选。组合物含乳铁蛋白的量每天在大约1mg～50g范围内更优选。更优选，本发明的组合物还包含金属鳌合剂，例如但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、[亚乙基双(氧亚乙基次氮基)四乙酸](EGTA)、1，2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸(BAPTA)、羟基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)或其盐。组合物中金属鳌合剂的量可以为大约0.01μg～20g。优选的金属鳌合剂为EDTA。口服的组合物中，EDTA和乳铁蛋白的比例更优选为大约1∶10,000-大约2∶1。
治疗方案也可以变化，并且取决于细菌感染和其后果发展的进程。对正存在的细菌感染的阳性确定、抗生素的使用和治疗配剂的已知效果和毒性(如果有)的基础上，临床医生最适合决定最好的治疗方案以使用。应用rhLF的指导原则是在发展成菌血症、脓毒症、脓毒性休克的最早期体征时给予该治疗以减轻菌血症的进展并且降低由于脓毒症和脓毒症性休克造成的器官损伤的程度。
改善是任何能够观察到的或可衡量的改善。因此，本领域的技术人员认识到治疗可以改善病人或个体的情况，但不会是疾病的完全治愈。在某些方面，施用有效剂量的该组合物以减少、降低、抑制或废除循环中的细菌水平。在进一步方面，改善可以包括下面任何一种情况，例如，降低循环细菌的水平、减轻脓毒症的进展、减轻脓毒性休克的进展、减轻器官衰竭的进展、降低与菌血症有关的发病率和降低与菌血症有关的死亡率(死亡)。因此，施用乳铁蛋白以后，如果上述任何情况改善，则乳铁蛋白的量被认为是有效剂量。此外，施用乳铁蛋白也将减轻脓毒症、脓毒性休克和与其有关的其它情况的进展。
在某些方面，施用有效剂量的该组合物以减少、降低、抑制或废除脓毒症或脓毒性休克的严重性。在进一步方面，改善可以包括下面任何一种情况，例如，降低死亡率、降低发病率、减轻器官衰竭进展、减少住院天数、减少或排除重症监护如在重症监护病房的天数、减少或排除支持疗法的使用如机械呼吸机或减少后遗症如ARDS的发生。基线上的器官衰竭的患者的存活和预防及器官衰竭的逆转也被评估。因此，施用乳铁蛋白以后，如果上述任何情况改善，则乳铁蛋白的量被认为是有效剂量。
在某些方面，施用有效剂量的该组合物以减少、降低、抑制或消除ALI或ARDS的严重性。在进一步方面，改善可以包括下面任何一种情况，例如，降低死亡率、减轻器官衰竭进展、减少住院天数、减少或排除减少或排除重症监护如在重症监护病房的天数、减少或排除支持疗法的使用如机械呼吸机或PaO2/FiO2比例。因此，施用乳铁蛋白以后，如果上述任何情况改善，则乳铁蛋白的量被认为是有效剂量。
在具体实施方案中，该组合物可以单剂量或多剂量给药。单剂量可以每天施用1次、或1天多次或1周多次。在进一步的实施方案中，乳铁蛋白以系列剂量给药。该系列剂量可以每天施用1次、或1天多次，1周1次或1周多次。在进一步的实施方案中，乳铁蛋白通过鼻饲管连续注入给药。
本发明的进一步实施方案是治疗菌血症、脓毒症、脓毒性休克、相关病症或其后果的方法，包括通过增加胃肠道中乳铁蛋白的量补充粘膜免疫系统的步骤。优选口服乳铁蛋白。
此外，进一步的实施方案是提高个体胃肠道粘膜免疫应答的方法，包括该个体口服本发明的组合物的步骤。该组合物包含单独的乳铁蛋白或与其它金属鳌合剂如EDTA结合的乳铁蛋白。设想通过乳铁蛋白刺激细胞因子和/或趋化因子提高免疫应答。细胞因子的例子包括白细胞介素-18和胃肠道中的GM-CSF，已知其可以增加免疫细胞或刺激免疫细胞的产生。例如，白细胞介素-18增加了自然杀伤细胞或T淋巴细胞。在具体的实施方案中，白细胞介素-18增加了(IL-18)CD4+、CD8+、CD3+细胞。本领域技术人员公知IL-18是一个Th1细胞因子，其与白细胞介素-12和白细胞介素-2协同作用于淋巴细胞IFN-γ产生的刺激。其它的细胞因子或趋化因子也可以被增加，例如但不限于IL-12、IL-1b、MIP-3α、MIP-1α或IFN-γ。其它的细胞因子或酶可以被抑制，例如但不限于IL-12、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、TNF-α或基质金属蛋白酶。进一步预期乳铁蛋白抑制TNF-α的产生，其抑制炎症中的细胞。还设想继口服乳铁蛋白后，乳铁蛋白刺激白细胞介素-18和Th1反应，其抑制原炎症细胞因子，如IL-12、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α。
本发明中的乳铁蛋白组合物还能导致细胞因子和趋化因子的抑制。细胞因子包括但不限于白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。更进一步，乳铁蛋白组合物还能抑制基质金属蛋白酶(MMP)的产生。
在进一步的实施方案中，细胞因子，例如，白细胞介素-18或粒细胞/巨噬细胞菌落刺激因子能刺激免疫细胞的产生或活性。免疫细胞包括但不限于T-淋巴细胞、自然杀伤细胞、NK-T细胞、巨噬细胞、树枝状细胞、和多形核白细胞。更具体地，多形核白细胞是嗜中性粒细胞，T-淋巴细胞选自CD4+、CD8+和CD3+T细胞。
此外，设想口服与金属鳌合剂如EDTA联合口服给药的乳铁蛋白增加了被掩蔽的金属离子的数量，并且因此增强了乳铁蛋白在提高免疫系统方面的效果。
D.联合治疗为了提高本组合物的效果，期待将本发明的这些组合物和方法与在治疗或预防菌血症、脓毒症、脓毒性休可和相关病症的已知的药剂效果结合，例如，治疗细菌感染的已知药剂如抗生素、治疗脓毒症的已知药剂如α-Drotrecogin(被激活的)和治疗炎症的药剂。在一些具体的实施方案中，预期传统的疗法或药剂包括但不限于此，药理学的治疗药剂与本发明的组合物组合。
本发明的组合物可以先于、同时和/或在其它药剂间隔几分钟～几周之后。在实施方案中，本发明的组合物和其它药剂分别应用在细胞、组织或生物体，通常保证重要的时间周期不超过每次给药之间的时间，以便于该组合物和药剂仍然能够对细胞、组织或生物体发挥有利的联合作用。
该组合物和一种或多种药剂的各种联合方案被应用。本领域的技术人员知道本发明的组合物和药剂能够以任何顺序或联合方式施用。在其它方面。一种或多种药剂可以被基本上同时、或大约几分钟到几小时、到几天、到几周之内施用和任何其可推论的的范围，施用该组合物之前和/或之后施用。
对于细胞、组织或生物体，该组合物的施用可以依照心血管疗法服药的总的治疗方案，要考虑其毒性，如果有。期望治疗周期被重复作为必要。在具体的实施方案中，设想各种附加的药剂可以与本发明联合应用。
药理学治疗制剂和施用的方法、剂量等为本领域的技术人员所熟知(见例如“Physicians Desk Reference”、Goodman & Gilman’s“The Pharmacological Basis of Therapeutics”、“Remington’sPharmaceutical Sciences”、和“The Merck Index，EleventhEdition”在此引用作为相关部分的参考)，并且可以依照此处的公开内容与本发明结合。剂量的变化必然要取决于被治疗的个体的情况而发生。在任何情况下，负责给药的人员将为每一个个体的个体决定合适的剂量，并且这种个体的确定是在本领普通技术人员的技术范围之内。
可以被用于本发明的药理学治疗剂非限制性实例包括抗菌剂、抗脓毒症剂、抗炎剂、抗生素/溶解纤维蛋白制剂、血凝素、抗心律不齐剂、抗高血压剂、血管加压药，或治疗代谢性酸中毒的药物。本发明的某些方面，抗菌剂，例如，抗生素被用于与本发明的组合物结合，可以被使用的特异性抗生素的例子包括但不限于红霉素、乙氧萘胺青霉素、头孢唑啉、亚胺硫霉素、噻肟单酰胺霉素、庆大霉素、新诺明、万古霉素、环丙沙星、二甲氧苯二氨嘧啶、利福平、甲硝唑、林肯梅素、替考拉宁、假单孢酸、阿奇梅素、甲基红霉素、氧氟沙星、盐酸洛氟沙星、诺氟沙星、萘啶酸、帕氟沙星、培氟沙星、氨氟沙星、加替沙星、莫西沙星、格米沙星、依诺沙星、氟罗沙星、二甲胺四环素、linezolid、替马氟沙星、甲苯磺酸托氟沙星、克林沙星、舒巴坦、克拉维酸、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、复方酮康唑和制霉菌素。抗生素的其它例子，如在U.S.4,642,104所列出的在此处引用作参考的那些抗生素，对于本领域的普通技术人员来说，将容易建议他们自身。抗脓毒症的药物包括但不限于Drotrecogin-α(被激活的)。用于ALI和ARDS的药物包括但不限于表面活性剂的肺内滴注，和白细胞三烯改良剂。抗炎症药物包括但不限于非类固醇类抗炎症药物(例如，萘普生、布洛芬、施乐宝)和类固醇类抗炎症药物(例如，糖皮质激素)。
可以被用于本发明的非药理学干预的非限制性实例包括支持疗法如脓毒症和脓毒性休克中的器官支持，及ALI和ARDS中的低潮气容积换气方案。
E.实施例下面的实施例被包括以确定本发明的优选实施方案。本领域技术人员应该意识到下面的实施例中所公开的技术代表了由本发明者发现的技术，以在本发明的实践中行使良好功能并且因此能被认为制定了优选的模式用于实践中。然而，依照现在的内容，本领域的技术人员应该意识到在被公开的具体的实施方案中可以进行许多改变，并且仍然获得同样或相似的没有背离本发明的实质和范围的结果。
实施例1脂多糖引发的小鼠脓毒性休克—模型描述在本实验中，确定了脂多糖的剂量与实验动物死亡率之间的关系。使用多组C57BL/6J、18±1g小鼠，每组10只。在用D(+)-半乳糖胺(20mg/小鼠)预治疗后，动物立即接受不同剂量的大肠杆菌脂多糖(LPS，30、20、15和10ng/小鼠，静脉内注射)和载体(盐水，0.2ml/小鼠，静脉内注射)。每12小时记录死亡率，计3天。表2说明20～30ng/小鼠的LPS导致100％死亡率，15ng/小鼠的LPS导致50％死亡率。
表2脂多糖引发的脓毒症的鼠科动物模型治疗途径 剂量N每12小时记录的死亡数 ％死亡率0-1212-2424-3636-4848-6060-72总计载体IV 0.2ml/小鼠 10 0 0 0 0 0 0 0 0(盐水)LPS IV 30ng/小鼠 10 10 0 0 0 0 0 10 100LPS IV 20ng/小鼠 10 8 2 0 0 0 0 10 100LPS IV 15ng/小鼠 10 1 2 2 0 0 0 6 50LPS IV 10ng/小鼠 10 0 1 1 0 0 0 2 20实施例2静脉内注射rhLF在鼠科动物脓毒症的LPS模型中的效果在用脂多糖(来自大肠杆菌的脂多糖，20ng/动物的LD100，静脉内注射)加半乳糖胺(20mg/动物，静脉内注射)攻击前60分钟和攻击后10分钟，静脉内注射载体和测试物质(rhLF)，每组8只C57BL/6J雄性小鼠，体重18～20g，如表3所示，RhLF将脂多糖引发的死亡率降低了38％。
表3静脉内注射rhLF在脂多糖引发的脓毒症中的效果治疗途径剂量N死亡数保护载体 IV 0.2ml/小鼠×28 8--RhLF IV 500μg/小鼠×2 8 538％实施例3口服rhLF在鼠科动物脓毒症的脂多糖模型中的效果在用脂多糖加半乳糖胺攻击后1、6和12小时，口服或静脉内注射重组人体乳铁蛋白，剂量为5mg/小鼠和1.5mg/鼠(PO)，1.5mg/鼠和0.5mg/鼠(IV)。图1说明了口服rhLF提供了与静脉内注射rhLF相似的保护。
实施例4口服rhLF对脂多糖引发的脓毒性休克的剂量依赖性保护在4组、每组10只实施例1中所描述的小鼠中，用脂多糖和半乳糖胺引发脓毒性休克。然后，这群鼠在施用脂多糖后1小时、6小时和12小时接受用管饲法施用安慰剂或施用3个剂量的rhLF(每剂量为1.5mg、5mg或10mg)中的1个剂量。如表4所示，口服rhLF对脂多糖引发的死亡率提供了剂量依赖性保护。
表4RhLF在脂多糖引发的脓毒症中提供剂量依赖性保护治疗剂量N死亡数保护载体 -- 10 10 --RhLF 1.5mg/剂10 6 40％RhLF 5mg/剂 10 5 50％RhLF 10mg/剂 10 4 60％实施例5通过不同方案口服rhLF对脂多糖引发的脓毒性休克的效力在5组、每组8-10只实施例1中所描述的小鼠中，用脂多糖和半乳糖胺引发脓毒性休克。这群小鼠在以4个不同方案中的一个接受管饲法施用安慰剂或5mg/剂rhLF。如表5所示，当预防性或治疗性施用时和在所有被测试的方案中，口服rhLF对脂多糖引发的死亡率提供了保护。
表5以不同方案使用的RhLF对脂多糖引发的脓毒症提供保护治疗方案*N死亡数保护载体+1，+6，+12 10 10 --RhLF+1，+6，+12 10 5 50％RhLF-1，+1，+6，+12 -8 3 63％RhLF-+1，+12 8 6 25％RhLF-+1，+4，+8，+12 8 4 50％RhLF+6，+12 8 6 25％*注在与LPS剂量相对的小时施用安慰剂/RhLF。
实施例6RhLF在菌血症鼠科动物模型中的保护效果使用得自雄性或雌性小鼠的ICR，每组10只，重22±2g。每只动物用在0.5ml、含5％粘蛋白的心-脑浸液培养基中被悬浮的大肠杆菌(ATCC 25922；1-3×105CFU/小鼠)进行腹膜内接种。
在给予大肠杆菌后1、6、12和24小时，施用载体或rhLF(10mg/鼠)，在7天内测量死亡率。如表6所示，相对于安慰剂治疗的动物，rhLF治疗的动物显示死亡率下降10％。
表6rhLF的保护效果治疗剂量N死亡数保护载体 5mL/kg×6 10 10 0％RhLF 10mg/小鼠 10 910％实施例7RhLF在菌血症的亚致死鼠科动物模型中的保护效果使用得自雄性或雌性鼠的ICR，每组10只，重22±2g。每只动物用在0.5ml、含5％粘蛋白的心-脑浸液培养基中被悬浮的亚致死量的大肠杆菌(ATCC 25922)进行腹膜内接种。
测试物质，rhLF或载体，用下面的剂量和给药时间表给药1组细菌接种后@1、6、12和24小时，10mg/小鼠；2组细菌接种后@1、6、12、24、48和72小时，10mg/小鼠；3组载体对照，细菌接种后@1、6、12、24、48和72小时给药。N＝10组；全部数量＝30只动物。在随后的7天内每天记录死亡率。
实施例8与抗生素联合的rhLF对菌血症的亚致死鼠科动物模型的保护效果使用得自雄性或雌性鼠的ICR，每组10只，重22±2g。每只动物用在0.5ml、含5％粘蛋白的心-脑浸液培养基中被悬浮的亚致死量的大肠杆菌(ATCC 25922)进行腹膜内接种。动物用卡那霉素抗生素治疗，剂量100mg/kg/天。
测试物质，rhLF或载体，用下面的剂量和给药时间表给药1组细菌接种后@1、6、12和24小时，10mg/小鼠；2组细菌接种后@1、6、12、24、48和72小时，10mg/小鼠；3组载体对照，细菌接种后@1、6、12、24、48和72小时给药。N＝10组；全部数量＝30只动物。在接着的7天内每天记录死亡率。
实施例9口服rhLF对脓毒症的狒狒模型的保护效果在预期的、随机的、安慰剂对照的研试验，在72小时的时间内测定口服rhLF的功效，在处于抗生素治疗下长期用设备监视的输注活的大肠杆菌的雄性狒狒中进行。
在施用抗生素时预防性地施用rhLF。狒狒随机接受安慰剂或口服rhLF，剂量100、200或400mg/kg/天。
主要的结果测量是死亡率。较重要的发病率被考虑作为次要终点。施用rhLF的安全性也被监视。
治疗的药理学效果通过测量重要的细胞因子浓度的变化，即在多个治疗时间点收集的血清中的IL-18、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的浓度变化来进行评价。
实施例10rhLF与EDTA联合用药时在菌血症、脓毒症和脓毒性休克中的保护效果重组人体乳铁蛋白与EDTA联合用药，重量比为1∶1，口服或静脉内注射剂量为5和1.5mg rhLF/小鼠及5和1.5mg EDTA/小鼠(PO)，和1.5和0.5mg/小鼠以及1.5和0.5mg EDTA/小鼠(IV)，分别在用脂多糖加半乳糖胺攻击后1、6和12小时给予。记录3天内的死亡率。相对于载体治疗组死亡率大于或等于50％显示重要意义的保护。
实施例11使用rhLF治疗菌血症和脓血症安全性的临床研究选择患者用于该研究，基于菌血症症状的存在—发烧＞101°F(38.3℃)、寒战、身体不适、腹痛、恶心、呕吐、腹泻、焦虑、呼吸短促和精神错乱。最可能的细菌感染是由于葡萄球菌、假单胞菌属、嗜血杆菌属和大肠杆菌。继发的脓毒性休克通常出现在无免疫应答的或慢性病患者。
下面指标至少出现2个症状时做脓毒症的诊断心动过速(心率＞90bpm)、换气过度(呼吸频率＞20/分或pCO2ex＜35mmHg)、发烧(＞38℃)或低体温(＜36℃)，以及白细胞增多(＞12,000/μL)或白细胞减少(＜4,000/μL)。
在使用抗生素治疗潜在的感染时、或任何其它以后的、症状出现时最早的可能时间预防性地施用重组人体乳铁蛋白。患者随机地接受安慰剂或口服rhLF 3天，剂量为100、200或400mg/kg/天的逐渐增加的剂量，治疗方案从最低剂量开始，在进展到下一个剂量前评价施用的安全性。对于不能口服摄取剂量的患者，使用鼻饲管以同样的剂量水平输注96小时。
本研究的主要结果是对菌血症和脓毒症的患者使用rhLF的安全性的评价。
实施例12临床研究显示rhLF对脓毒症的保护作用—剂量范围选择患者用于该研究，基于菌血症症状的存在—发烧＞101°F(38.3℃)、寒战、身体不适、腹痛、恶心、呕吐、腹泻、焦虑、呼吸短促和精神错乱。最可能的细菌感染是由于葡萄球菌、假单胞菌属、嗜血杆菌属和大肠杆菌。继发的脓毒性休克通常出现在无免疫应答的或慢性病患者。
下面指标至少出现2个症状时做脓毒症的诊断心动过速(心率＞90bpm)、换气过度(呼吸频率＞20/分或pCO2exp＜35mmHg)、发烧(＞38℃)或低体温(＜36℃)，以及白细胞增多(＞12,000/μL)或白细胞减少(＜4,000/μL)。
在使用抗生素治疗下面的感染时、或任何其它以后的时间、症状出现时最早的可能时间预防性地使用重组人类乳铁蛋白。患者随机地接受安慰剂或口服rhLF 3天，剂量为100、200或400mg/kg/天。对于不能口服摄取剂量的患者，使用鼻饲管以同样的剂量水平输注96小时。
主要结果量度标准是死亡率。较重要的发病率作为次要点，rhLF使用的安全性也被监视。病人至少被随访90天。
治疗的药理学效果通过测量重要的细胞因子浓度的变化，即在多种治疗时间点收集的血清中的IL-18、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α。
实施例13临床研究显示rhLF对菌血症和脓毒症的保护作用-三期研究选择患者用于该研究，基于菌血症症状的存在—发烧＞101°F(38.3℃)、寒战、身体不适、腹痛、恶心、呕吐、腹泻、焦虑、呼吸短促和精神错乱。最可能的细菌感染是由于葡萄球菌、假单胞菌属、嗜血杆菌属和大肠杆菌。继发的脓毒性休克通常出现在无免疫应答的或慢性病患者。
下面指标至少出现2个症状时做脓毒症的诊断心动过速(心率＞90bpm)、换气过度(呼吸频率＞20/分或pCO2exp＜35mmHg)、发烧(＞38℃)或低体温(＜36℃)，以及白细胞增多(＞12,000/μL)或白细胞减少(＜4,000/μL)。
在随机的、双盲的、多剂量的、安慰剂对照的多中心研究中，重组人体乳铁蛋白被用于患有菌血症和/或脓毒症的重症监护病房(ICU)患者。患者随机接受安慰剂或使用rhLF以400mg/kg/天口服。对于不能口服摄取剂量的患者，使用鼻饲管以同样的剂量水平输注96小时。
主要结果量度标准是对于被治疗的病人其所有原因的28天的死亡率。后期的效果变量包括在随访的28天时间内时间对死亡，和患者在解除随访时的状态(到90天)。较重要的发病率被作为次要点考虑。(多器官功能紊乱评分(MODS)和与脓毒症有关的器官衰竭评价(SOFA))。基线上的器官衰竭的病人的存活及器官衰竭的预防和逆转也被评价。患者被随访至少90天。
实施例14临床研究显示rhLF/Xigris组合对菌血症和脓毒症的保护作用-二期研究选择患者用于该研究，基于菌血症症状的存在现—发烧＞101°F(38.3℃)、寒战、身体不适、腹痛、恶心、呕吐、腹泻、焦虑、呼吸短促和精神错乱。最可能的细菌感染是由于葡萄球菌、假单胞菌属、嗜血杆菌属和大肠杆菌。继发的脓毒性休克通常出现在无免疫应答的或慢性病患者。
下面指标至少出现2个症状时做脓毒症的诊断心动过速(心率＞90bpm)、换气过度(呼吸频率＞20/分或pCO2exp＜35mmHg)、发烧(＞38℃)或低体温(＜36℃)，以及白细胞增多(＞12,000/μL)或白细胞减少(＜4,000/μL)。
在随机的、双盲的、多剂量的、安慰剂对照的多中心研究中，重组人体乳铁蛋白被用于患有菌血症和/或脓血症的重症监护病房(ICU)患者。患者随机接受Xigris(Drotrecogin-α，激活的)@24μg/kg/小时注入96小时，或施用rhLF以400mg/kg/天速率与XigrisR浸剂@24μg/kg/小时一起注入96小时。对于不能口服摄取rhLF剂量的患者，使用鼻饲管以同样的剂量水平输注96小时。
主要结果量度标准是对于被治疗的病人其所有原因的28天的死亡率。后期的效果变量包括在随访的28天时间内时间对死亡，和患者在解除随访时的状态(到90天)。主要的发病率被作为次要点考虑。(多器官功能紊乱评分(MODS)和与脓血症有关的器官衰竭评价(SOFA))。基线上的器官衰竭的病人的存活及器官衰竭的预防和逆转也被评价。患者被随访至少90天。
实施例15临床研究显示rhLF在ARDS中的保护作用-二期研究在随机的、对照的研究中，每个患者被随机化到12mL/kg和6mL/kg换气治疗组以及rhLF或安慰剂之间。RhLF臂是安慰剂对照和双盲的。
RhLF具有抗炎和免疫调节性能，具有先前的研究提出的在ARDS预防中的效果。该研究被设计为了检测在急性肺损伤或ARDS发作后早期口服rhLF是否将降低死亡率和发病率。
患者随机接受安慰剂或以400mg/kg/天速率口服rhLF。
对于不能口服摄取剂量的患者，使用鼻饲管以同样的剂量水平输注96小时。
主要的结果测量是死亡率。较重要的发病率被考虑作为次要终点。患者被随访至少90天。
实施例16脓毒症死亡率的降低与关键的细胞因子在脂多糖引发的脓毒症中口服rhLF的保护作用与已知的细胞因子调节器有关。用脂多糖(20ng静脉内注射)+半乳糖胺治疗小鼠。与脂多糖激发有关的，通过管饲法动物接受安慰剂(-1，+1，+6，+12小时)或rhLF(5mg/剂)。尽管在24小时内全部死亡，但死亡率在72小时被测定。循环的细胞因子在脂多糖激发后45分钟用ELISA方法测定。细胞因子群是每组4只动物。总计28只动物(12只安慰剂，16只rhLF)被生存随访。1-后部的(1-tailed)p-值比较安慰剂组和rhLF组动物。对于个体的细胞因子值以平均值显示。与较早期的实验一致，rhLF治疗的动物显示死亡率显著降低59％。另外，观察到IL-4，IL-6和IL-10的循环水平的降低(图2)，先前报告所有的Th2细胞因子在脓毒症的病理生理学中起作用。
实施例17与L006相对的L005抗脓毒症的活性用脂多糖引发的脓毒症的小鼠模型比较N-1截短百分比不同的三个批次的rhLF的生物学活性。对各组10只C57BL/6J、重18-20g雄性鼠用脂多糖(20ng/鼠静脉内注射)+半乳糖胺(20mg/鼠静脉内注射)激发后1，6和12小时口服次安慰剂或rhLF(5mg/剂)。在72小时内每12小时记录死亡率。如表7所示，不同批次的rhLF，随着N-1截短的宽变化浓度，对脂多糖引发的死亡率都提供了相似的保护。
表7三种不同rhLF制剂的抗脓毒症的效果
实施例18小鼠口服rhLF的生物利用度的缺乏定制合成的14C标记的rhLF(Perkin-Elmer生命科学)对CD-1小鼠口服给药以确定蛋白吸收的程度。用14C-rhLF给小鼠接种，收集血和组织样本如下表8所示。
表8给小鼠使用14C-rhLF的剂量
在所规定的时间，小鼠被施用无痛致死术，收集血和组织用于分析。在含有蛋白酶抑制剂的缓冲液中使组织匀化以防止蛋白降解。将血加工成血浆。血浆和组织匀浆的样本在闪烁计数器上计数，在聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)色谱上运转以通过大小分离样本成分。凝胶内容物在被暴露在磷成像屏幕的膜上被吸收，以探测14C标记的带。该屏幕能够探测到500cpm大小。所记录的计数值在下面的表9中显示。
虽然计数被在血浆和组织中发现，这与已知的口服rhLF后其在胃和小肠中的降解是一致的。没有探测到在聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)凝胶上见到的完整的rhLF，确认在探测的范围之内，没有rhLF蛋白在口服后被吸收。
表9口服后14C标记的rhLF的分布
实施例19人类口服rhLF生物利用度的缺乏5组独立的健康人类个体口服重组人体乳铁蛋白。这5组人群按6∶1的比例随机分为rhLF和安慰剂组(总计使用了35名个体)。剂量在表10中显示。
表10人类个体用药剂量和剂量方案
收集1组从0到48小时血样，或2组和5组1和7天的剂量间隔。使用被确认有效的ELISA法确定血浆乳铁蛋白。乳铁蛋白浓度值显示对于rhLF和安慰剂治疗的个体来说，个体之间高变异性。既然ELISA确定内源性的和重组人体乳铁蛋白，口服以后的rhLF的吸收程度只能够对照内源性乳铁蛋白的产生和逆转的个体之间的差异估计。乳铁蛋白的学业水平与施用给出的剂量的rhLF之间没有关系是明显的，重复每天用药在第7天的乳铁蛋白的水平没有可测量到的增加。基于这些数据，估计rhLF口服生物利用度＜0.5％。(Mojaverian P，等人)引用的参考文献在该说明书中提到的所有专利和出版物是本发明所属的领域技术人员水平的象征。所有专利和出版物在此引用作为参考对于同样的范围似乎个体的出版物被特别地和个性地指明以被引用作为参考。
US 5,571,691US 5,571,697US 5,571,896US 5,629,001Kruzel ML，等人.Clin Exp Immunol 2002；13025-31Heyman M and Desjeux J-F，J Pediatr Gastroenterol Nutr1992；1548-57Frasson GB等人，Nutr Res 1983；3373-84Holloway NM，等人，Am J Vet Res 2002 Apr；63(4)476-8Mojaverian P.等人，Proceedings of the Annual Meeting ofthe American association of Pharmaceutical Scientists，2003。
尽管本发明和它的优点已被详细描述，但是应该理解各种变化、替代物和改变能够在此进行而没有背离由权利要求书所限定的本发明实质和范围。而且，本申请的范围不限制于在说明书中描述的方法、机理、制备、物质成分、手段、方法和步骤的具体的实施方案。作为本领域普通的技术人员将容易意识到本发明的公开内容、方法、机理、制备、物质成分、手段、方法或步骤，目前存在或以后被发展的充分地执行相同的功能或取得实质性的相同的结果，因为在此描述的相关的实施方案可以根据本发明被利用。据此，权利要求书意欲包括它们的范围如方法、机理、制备、物质成分、手段、方法或步骤。
权利要求
1.治疗菌血症的方法，所述方法包括给个体口服施用有效剂量的乳铁蛋白组合物的以提供该个体的菌血症的改善的步骤。
2.权利要求1的方法，其中所述改善是减轻脓毒症。
3.权利要求1的方法，其中所述改善是减轻脓毒性休克。
4.权利要求1的方法，其中所述改善是减轻器官衰竭。
5.权利要求1的方法，其中所述改善是降低个体发病率。
6.权利要求1的方法，其中所述改善是降低个体死亡率。
7.权利要求1的方法，其中所述乳铁蛋白组合物分散在可药用载体中。
8.权利要求1的方法，其中所述乳铁蛋白是哺乳动物乳铁蛋白。
9.权利要求8的方法，其中所述乳铁蛋白是人或牛乳铁蛋白。
10.权利要求1的方法，其中所述乳铁蛋白是重组的乳铁蛋白。
11.权利要求1的方法，其中所述乳铁蛋白组合物包含N-末端乳铁蛋白变体。
12.权利要求11的方法，其中所述N-末端乳铁蛋白变体至少缺乏N-末端甘氨酸残基。
13.权利要求12的方法，其中所述N-末端乳铁蛋白占乳铁蛋白组合物的至少1％-至少50％。
14.权利要求1的方法，所述方法还包括联合施用抗酸剂与所述乳铁蛋白组合物。
15.权利要求1的方法，其中乳铁蛋白的给药量为大约1mg/天-大约100g/天。
16.权利要求1的方法，其中乳铁蛋白的给药量为大约10mg/天-大约10g/天。
17.权利要求1的方法，其中所施用的组合物是液体制剂。
18.权利要求1的方法，其中所施用的组合物是固体制剂。
19.权利要求1的方法，其中所施用的组合物是具有肠溶包衣的固体制剂。
20.权利要求1的方法，其中所述口服施用是通过鼻饲管进行的。
21.权利要求1的方法，所述方法还包括施用分散在可药用载体中的金属鳌合剂。
22.权利要求21的方法，其中所述金属鳌合剂是乙二胺四乙酸(EDTA)或[亚乙基双(氧亚乙基次氮基)]四乙酸(EGTA)。
23.权利要求22的方法，其中EDTA的给药量为大约0.01μg/天-大约20g/天。
24.权利要求22的方法，其中组合物中EDTA与乳铁蛋白的比例为1∶10,000-大约2∶1。
25.权利要求1的方法，所述方法还包括联合施用乳铁蛋白组合物与抗生素。
26.治疗菌血症或脓毒症的方法，所述方法包括通过口服途径施用有效量的乳铁蛋白组合物来补充个体粘膜免疫系统的步骤。
27.提高个体胃肠道中粘膜免疫应答的方法，所述方法包括给所述个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物的步骤。
28.权利要求27的方法，其中所述乳铁蛋白刺激胃肠道中的白细胞介素-18。
29.权利要求28的方法，其中所述白细胞介素-18刺激免疫细胞的产生或活性。
30.权利要求28的方法，其中所述乳铁蛋白降低促炎细胞因子的产生或活性。
31.降低有菌血症的个体死亡率的方法，所述方法包括给所述个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以减轻菌血症从而降低该个体的死亡率的步骤。
32.治疗个体脓毒症的方法，所述方法包括给所述个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以提供所述个体脓毒症的改善的步骤。
33.权利要求32的方法，其中所述改善是降低循环细菌的水平。
34.权利要求32的方法，其中所述改善是减轻脓毒性休克。
35.权利要求32的方法，其中所述改善是减轻器官衰竭。
36.权利要求32的方法，其中所述改善是降低个体的发病率。
37.权利要求32的方法，其中所述改善是降低个体的死亡率。
38.降低有脓毒症的个体死亡率的方法，所述方法包括给所述个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以减轻脓毒症从而降低个体死亡率的步骤。
39.权利要求38的方法，其中乳铁蛋白组合物的量降低循环细胞因子的水平。
40.权利要求39的方法，其中所述细胞因子选自IL-4、IL-6和IL-10。
41.权利要求38的方法，所述方法还包括联合施用乳铁蛋白组合物与抗生素。
42.权利要求38的方法，所述方法还包括联合施用乳铁蛋白组合物与Drotrecogin-α(激活的)。
43.降低有急性肺损伤(ALI)或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的个体的死亡率的方法，所述方法包括给个体口服施用有效量的乳铁蛋白组合物以减轻ALI或ARDS从而降低个体死亡率的步骤。
44.权利要求43的方法，所述方法还包括联合施用乳铁蛋白组合物与低潮气容积换气或表面活性剂。
全文摘要
本发明涉及通过单独或者与标准疗法或金属鳌合剂联合口服施用乳铁蛋白的组合物以预防或治疗细菌引发的全身性炎症反应综合征的后果来预防或治疗菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症如ARDS的方法。特别是，要求保护单独或者与金属鳌合剂或其它治疗干预组合的重组人乳铁蛋白在降低由菌血症、脓毒症、脓毒性休克或相关病症如ARDS引起的死亡率中的治疗应用。
文档编号C07K14/00GK1744907SQ200380109569
公开日2006年3月8日 申请日期2003年12月5日 优先权日2002年12月6日
发明者A·瓦拉哈查里, K·佩特拉克 申请人:阿根尼克斯有限公司