专利名称：：孟鲁司特的纯化的制作方法孟鲁司特的纯化相关申请的交叉参照本申请要求2005年7月5日提交的下列美国临时专利申请号60/697,000的权益。其内容通过引用结合于本文中。发明领域本发明涉及得到纯孟鲁司特(montelukast)钠的方法，并涉及孟鲁司特的新分离的杂质。发明背景孟鲁司特是选择性的、口服活性的白三烯受体拮抗剂，它抑制半胱氨酰白三烯CysLT,受体。白三烯与气道肌肉的炎症和收缩及肺中积液有关。孟鲁司特钠是治疗呼吸疾病例如哮喘和过敏性鼻炎的有用的治疗剂。孟鲁司特钠的化学名称是[R-(E)]-l-[[[l-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(l-羟基-l-曱基乙基)苯基]丙基]硫基]曱基]环丙烷乙酸，一钠盐。孟鲁司特钠是吸湿的、旋光性的白色至浅白色粉末。孟鲁司特钠大量地溶解于甲醇、乙醇和水中，但特别不溶解于乙腈。孟鲁司特钠盐由下列结构表示美国专利号5,565,473公开制备孟鲁司特钠的合成方法，其中所述化合物作为一种油获得，然后溶于水并冻干。非晶形孟鲁司特钠公开于美国专利号6,320,052和WO03/066598。该'052专利公开非晶形"对药物制剂是不理想的",第64-67行第1栏。该'052专利还公开了结晶孟鲁司特钠的可利用的方法"尤其不适于大规模生产"，因为需要"緩慢的层析纯化"技术并因为"产物得率过低"，第l栏，第61-64行。该'052专利公开在可利用的方法中，游离酸"被直接转化为相应的钠盐"，第l栏，第58-61行。该，052专利也公开由布有晶种的曱苯和水接着是乙腈(ACN)的溶液制备的孟鲁司特钠晶形。参见实施例8。布晶种是用少量晶体孟鲁司特在大量的样品中引起结晶。美国专利号5,614,632和6,320,052公开经二环己基胺盐制备孟鲁司特钠盐的方法。如任何合成化合物一样，孟鲁司特可含有来自多种来源的外来的化合物或杂质。它们可以是未反应的原料、反应副产物、副反应产物或降解产物。孟鲁司特或4壬何活性药物成分(API)中的杂质是不受欢迎的，在极端的情况下，甚至可能有害于正用含有API的剂型治疗的患者。本领域也知道，API中的杂质可能出自API本身的降解，这与贮存期间纯API的稳定性和包括化学合成的制备过程相关。过程杂质包括未反应原料、包含于原料中的杂质的化学衍生物、合成副产物和降解产物。除稳定性(其为API贮存期中的因素)外，在商业规模的制备过程中所生产的API纯度显然也是商品化的必须条件。在商业规模制备过程期间引入的杂质必须限制到极小量，并优选基本没有。例如，针对API厂商的ICHQ7A指引要求，通过明确原料质量，控制过程参数，例如温度、压力、时间和化学计量比，并包括在制备过程中的纯化步骤，例如结晶、蒸馏和液-液萃取过程，使杂质维持低于设定的限度。化学反应的产物混合物极少是具有符合药物标准的足够纯度的单一化合物。在多数情况下，反应副产物和副产品和用于反应的辅助剂也会出现在产物混合物中。在API,例如，(R)-孟鲁司特加工期间的某些步骤中，必须典型地通过HPLC或TLC分析，分析纯度，以确定是否适于持续加工，并最终用于药品。API不需要绝对纯，因为绝对纯度是理论上的理想，往往难以达到。当然，设定纯度标准的目的在于确保API尽可能没有杂质，并因而，临床应用尽可能安全。如上文所讨论的，在美国，食品和药品管理指导方针推荐，某些杂质的量限制在低于0.1个百分比。副产物、副产品，例如，MLK-D和辅助剂(统称为"杂质")一般借助分光镜和/或用另一种物理方法确认，再与例如层析中的峰位置，或TLC板上的点相关联。(Strobel953页，Strobel,H.A.;Hememan,W.R.ChemicalInstrumentation:ASystematicApproach,3rddd.(Wiley&Sons:NewYork1989》。随后，例如，可通过其在TLC板上的相对位置，其中板上的位置从基线用厘米测定，或者通过其在HPLC的层析中的相对位置，其中在层^f中的位置照例用注入柱中的样品和经检测器洗脱特定组分之间的分钟测量，鉴别杂质。层析中的相对位置被称为"保留时间"。而变化。为减轻这类变化对准确鉴别杂质的影响，从业者采用"相对保留时间"("RRT")鉴别杂质(Strobelp.922)。杂质的RRT是其保留时间除以参比标记的保留时间。以足够大到可以发觉和足够低至不使柱饱和的量，选择不同于所加入或存在于混合物中的API的化合物，并采用该化合物作为参比标记确定RRT是有利的。药物制备研究与开发领域的技术人员理解相对纯态的化合物可用作"参比标准品"。参比标准品类似于参比标记物，它只用来定量分析，但也用来对未知混合物中的参比标准的化合物定量。当采用标准是"外标"。(Strobelp.924,Snyder549页，Snyder,L.R.;Kirkland,JJ.IntroductiontoModemLiquidChromatography,第2版.(JohnWiley&Sons:NewYork1979》。可通过比较检测器响应的大小测定混合物中的化合物的量。还参见通过引用结合到本文的美国专利号6,333,198。如果已经预确定补偿检测器对两种化合物的敏感度的差别的"响应因子"，参比标准也可用来确定在混合物中另一种化合物的量。(Strobel894页)。为此，将参比标准品直接加到混合物中并称为"内标"。(Strobel925页，Snyder552页)。当未知混合物含有可检测量的参比标准化合物，不采用称为"标准加入"的技术刻意加入参比标准时，参比标准可用作内标。在''标准加入4支术"中，通过加入已知和不同量的内标准品，制备至少两种样品。(Strobel391-393页，Snyder571、572页)。可通过标绘针对加至各个样品的参比标准品的量的检测器响应，确定由于存在于未添加的混合物中参比标准品的检测器响应比例，并外推该图至参比标准的零浓度。(参见，例如，Strobel,392页图11.4)。针对从HPLC柱洗脱出的各种化合物，HPLC中的检测器(例如，UV检测器或折射率检测器)的响应通常可能是不同的。如所已知的，响应因子可1起检测器对从柱洗脱的不同化合物的响应信号的这种差别。本领域的技术人员知道，通过了解杂质的化学结构和合成途径，通过鉴别影响最终产物中杂质凄丈量的参数，可极大地增强对过程杂质的处理。参比标准的检测或量化用来确立API或它的中间体的纯度水平。作为标准使用化合物需要依靠基本纯的化合物样品。由于先有工艺过程未有效去除某些杂质，需要纯化孟鲁司特的改进的方法。尤其是，本发明人已经分离脱氢孟鲁司特杂质并提供降低孟鲁司特中这种或其它杂质的水平的改进纯化方法。发明概述在一个实施方案中，本发明提供含有少于0.14。/。重量MLK-SO的孟鲁司特钠。优选孟鲁司特钠含有少于约0.10。/。重量MLK-SO。在另一个实施方案中，本发明提供含有少于0.10%重量MLK-D的孟鲁司特。优选孟鲁司特钠含有少于约0.08。/。重量MLK-D。在又一个实施方案中，本发明提供纯孟鲁司特钠盐的制备方法，包括提供孟鲁司特游离酸；^f吏孟鲁司特游离酸转化为二正丙胺孟鲁司特盐；和使二正丙胺孟鲁司特盐转化为孟鲁司特钠盐。优选纯孟鲁司特钠盐含有少于0.14。/。重量MLK-SO。更优选纯孟鲁司特钠盐含有少于约0.10。/。重量MLK-SO。优选纯孟鲁司特钠盐含有少于0.10。/0重量MLK-D。更优选纯孟鲁司特钠盐含有少于约0.08%重量MLK-D。在一个实施方案中，本发明提供具有下列结构的新分离的杂质，[R-(E)]-l-[[[l-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(l-丙烯基)苯基]丙基]硫基]曱基]环丙烷乙酸(MLK-D):在另一个实施方案中，本发明提供含有少于0.14%,优选少于约0.10%和更优选少于约0.06%重量MLK-SO的孟鲁司特钠。在又一个实施方案中，本发明提供含有少于约0.10%,优选少于约0.08%重量MLK-D的孟鲁司特。在一个实施方案中，本发明提供确定在样品中存在化合物的方法，包括用MLK-D作为参比标记进行HPLC或TLC。在另一个实施方案中，本发明提供确定在样品中存在MLK-D的方法，包括用MLK-D作为参比标记进行HPLC或TLC。具体地，该方法包4舌(a)通过HPLC或TLC测定对应于包含MLK-D的参比标记中MLK-D的保留时间；(b)通过HPLC或TLC测定对应于包含孟鲁司特钠和MLK-D的样品中的MLK-D的保留时间；和(c)通过比较步骤(a)的保留时间和步骤(b)的保留时间确定样品中MLK-D的存在。在又一个实施方案中，本发明提供确定样品中化合物的量的方法，包括用MLK-D作为参比标准进行HPLC或TLC。在一个实施方案中，本发明提供确定样品中MLK-D的量的方法，包括进行HPLC或TLC,其中MLK-D被用作参比标准。具体地，该方法包括以下步骤(a)经HPLC或TLC测量，对应于包含已知量MLK-D的参比标准中的MLK-D的峰下面积；(b)经HPLC或TLC测量，对应于包含MLK-D和孟鲁司特钠的样品中的MLK-D的峰下的面积；和(c)通过比较步骤(a)的面积与步骤(b)的面积，确定样品中的MLK隱D的量。在另一个实施方案中，本发明还提供由具有出现小于约0.10%面积(经HPLC测定)的MLK-D的孟鲁司特钠制备孟鲁司特的方法，它包括以下步骤(a)得到一批或多批孟鲁司特钠的一个或多个样品；(b)测量各个样品中的MLK-D水平；(c)根据对各批样品的测量，选择具有约少于0.10%面积(经HPLC测定)的MLK-D水平的来自步骤a)的那批；和(d)用所选择的那批制备孟鲁司特钠。在又一个实施方案中，本发明提供分离MLK-D的方法。该方法包括提供含有MLK-D、孟鲁司特游离酸和溶剂的溶液；从溶液中沉淀出孟鲁司特游离酸；和分离MLK-D。适用的溶剂包括，但不限于》至少醇(优选甲醇)，卣化烃、CVC8芳香烃或酯之一。优选方法还包括浓缩含有MLK-D的溶液的步骤。例如，可通过蒸发溶剂浓缩溶液。优选通过本领域已知的层析技术分离MLK-D。在一个实施方案中，本发明提供包含稳定的本发明MLK-Na和药学上可接受的赋形剂的药物制剂。在另一个实施方案中，本发明提供药物制剂的制备方法，包括使稳定的本发明MLK-Na与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。在又一个实施方案中，本发明提供稳定的本发明MLK-Na在制备药用组合物中的用途。图的简述图1图解孟鲁司特钠的HPLC层析图。图2和3描述二曱亚砜中的脱氢孟鲁司特的NMR光i脊。图4描述脱氢孟鲁司特的快原子轰击离子化(FAB)质谱。图5图解脱氢孟鲁司特的NMR谱。发明详述如美国专利号5,614,632和6,320,052中所述，经二环己基胺盐制备孟鲁司特钠盐的方法不能有效去除包含孟鲁司特S-—氧化物和脱氬孟鲁司特(D-MLK)的特定杂质。事实上，脱氬孟鲁司特杂质还没有被鉴别。本发明涉及纯化孟鲁司特的方法，包括使孟鲁司特游离酸转化为孟鲁司特二正丙胺盐和使孟鲁司特二正丙胺盐转化为孟鲁司特钠盐。转化为二正丙胺盐用来减少杂质MLK-D和下面详细描述的杂质的水平。用于本文的术语"MLK-D"指[R-(E)]-l-[[[l-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-丙烯基)苯基]丙基]硫基]甲基]环丙烷乙酸。用于本文的术语"MLK-SO"指[R-(E)-l-[[[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-羟基-1-曱基乙基)苯基]丙基]硫基]曱基]环丙烷乙酸S-—氧化物。用于本文的术语"MLK-Na"指[R-(E)]-l-[[[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(l-羟基-l-曱基乙基)苯基]丙基]硫基]曱基]环丙烷乙酸钠盐。用于本文的术语"相对保留时间"(RRT)指相对于MLK-Na的从柱洗脱的化合物的时间量的比。本发明提供含有少于0.14。/。重量MLK-SO的孟鲁司特钠。优选孟鲁司特钠含有少于约0.10%重量的MLK-SO。本发明提供含有少于0.10%重量MLK-D的孟鲁司特。优选孟鲁司特钠含有少于约0.08%重量MLK-D。本发明提供纯孟鲁司特钠盐的制备方法，该方法包括提供孟鲁司特游离酸；使孟鲁司特游离酸转化为二正丙胺孟鲁司特盐；和使二正丙胺孟鲁司特盐转化为孟鲁司特钠盐。优选纯孟鲁司特钠盐含有少于0.14。/。重量MLK-SO。更优选纯孟鲁司特钠盐含有少于约0.10。/。重量MLK-SO。优选纯孟鲁司特钠盐含有少于0.10%重量MLK-D。更优选纯孟鲁司特钠盐含有少于约0.08%重量MLK-D。任选地，该方法还包括使孟鲁司特游离酸转化为异丙基胺孟鲁司特盐；和使异丙基胺孟鲁司特盐转化为二正丙胺孟鲁司特盐。得到孟鲁司特异丙基胺盐的该任选步骤用来除去孟鲁司特的S-对映体。制备孟鲁司特异丙基胺盐的方法可包括使异丙基胺与孟鲁司特游离酸合并。异丙基胺优选与孟鲁司特游离酸在有机溶剂中的溶液合并。有机溶剂优选2-丁酮。任选从CVC8芳族溶剂或酮，更加优选从2-丁酮中结晶，得到孟鲁司特异丙基胺盐。可通过本领域已知的任何方法，包括，但不限于，过滤、离心或滗析，分离所生成的孟鲁司特异丙基胺盐。所得到的孟鲁司特异丙基胺盐优选溶解于选自下列的至少一种有机溶剂中醚、芳族溶剂和々包和烃。醚优选THF。芳族溶剂优选CVC8芳族溶剂。饱和烃优选CVC8饱和烃。更优选芳族溶剂为曱苯。最优选的溶剂是曱苯和THF的混合物。可通过酸化溶液使孟鲁司特异丙基胺盐转化回游离酸。优选通过加入乙酸酸化溶液。优选通过使孟鲁司特游离酸或孟鲁司特异丙基胺盐溶解于醚、芳族溶剂或饱和烃中的至少一种，并加入二正丙胺，使孟鲁司特游离酸或孟鲁司特异丙基胺盐转4b为孟鲁司特二正丙胺盐。溶剂优选曱苯或THF。孟鲁司特游离酸对孟鲁司特二正丙胺的摩尔比优选约1:2。可通过本领域已知的任何方法，包括，但不限于，过滤、离心或滗析，分离所生成的孟鲁司特二正丙胺盐。优选从05-(38芳族溶剂(优选曱苯)或饱和C5-C8烃的至少一种中结晶孟鲁司特二正丙胺盐。也可在未分离异丙基胺盐下进行该方法。由二正丙胺孟鲁司特盐制备孟鲁司特钠盐的方法优选包括使孟鲁司特二正丙胺盐溶解于C5-C8芳族溶剂或饱和CVCs烃的至少一种；用酸酸化溶液，生成孟鲁司特游离酸；和加入至少一种钠离子源，生成孟鲁司特钠盐。芳族;容剂优选曱苯。酸优选乙酸。可通过本领域已知的任何方法制备孟鲁司特游离酸。参见，例如，2005年l月31日提交的美国申请号11/048,276和2005年4月21日提交的11/112,790,它们二者通过引用结合于本文。孟鲁司特游离酸可为经分离的固体形式或可原位制备。优选原位制备孟鲁司特游离酸。例如，可通过使l-(巯基曱基)环丙烷乙酸曱酯(CYTAM)与2-(2-(3问-(3-(7-氯-2-喹啉基)-乙烯基)苯基)-3-曱磺酰基氧基丙基)苯基-2-丙醇反应(曱磺酸酯)反应，制备孟鲁司特游离酸。为了后继的转化步骤，该原位制备的原料或孟鲁司特游离酸可溶解于有机溶剂中。在任一种情况下，有机溶剂是醚、芳族溶剂或饱和烃中的的至少一种。醚优选四氢呋喃(THF);茅族溶剂优选C5-Q芳族溶剂，和饱和烃优选C5-Q烃。芳族溶剂最优选曱苯。本发明提供具有下列结构的、分子式为C^H^qNO^和分子量为567.90的新分离的杂质，[R-(E)]-l-[[[l-[3-[2曙(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-丙烯基)苯基]丙基硫基]曱基]环丙烷乙酸(MLK-D):杂质MLK-D的特征在于约1.65处的RRT与MLK-Na相关。本发明提供含有少于0.14%、优选少于约0.10%和更优选少于约0.06%重量MLK-SO的孟鲁司特钠。本发明还提供含有少于约0.10%，优选少于约0.08%重量MLK-D的孟鲁司特。对表的分析表明，杂质水平为约0.17。/。重量MLK-SO和约0.10%重量MLK-D。本发明还提供样品中存在化合物的确定方法，包括用MLK-D作为参比标记进行HPLC或TLC。本发明还提供在样品中存在MLK-D的确定方法，包括用MLK-D作为参比标记进行HPLC或TLC。该方法具体地包括(a)通过HPLC或TLC测定对应于包含MLK-D的参比标记中MLK-D的保留时间；(b)通过HPLC或TLC测定对应于包含孟鲁司特钠和MLK-D的样品中MLK-D的保留时间；和(c)通过比较步骤(a)的保留时间和步骤(b)的保留时间，确定样品中MLK-D的存在。本发明提供测定样品中的化合物的量的方法，包括用MLK-D作为参比标准进行HPLC或TLC。本发明还提供确定样品中MLK-D的量的方法，包括进行HPLC或TLC,其中MLK-D净皮用作参比标准。具体地，该方法包括以下步骤(a)经HPLC或TLC测量，对应于包含已知量MLK-D的参比标准中的MLK-D的峰下面积；(b)经HPLC或TLC测量，对应于包含MLK-D和孟鲁司特钠的样品中的MLK-D的峰下面积；和(c)通过比较步骤(a)的面积与步骤(b)的面积，确定样品中的MLK-D的量。本发明也提供由具有出现少于约0.10%面积(经HPLC测定)的MLK-D的孟鲁司特钠制备孟鲁司特的方法，该方法包括以下步骤(a)得到一批或多批孟鲁司特钠的一个或多个样品；(b)测量各个样品中的MLK-D水平；(c)根据对各批样品的测量，选择具有约少于0.10%面积(经HPLC测定)的MLK-D水平的来自步骤a)的那批；和(d)用所选择的那批制备孟鲁司特钠。本发明提供分离MLK-D的方法。该方法包括提供含有MLK-D、孟鲁司特游离酸和溶剂的溶液；从溶液中沉淀出孟鲁司特游离酸；和分离MLK-D。适用溶剂包括，但不限于醇(优选曱醇)、卣化烃、C5-C8芳香烃或酯的至少一种。优选该方法还包括浓缩含有MLK-D的溶液的步骤。例如，可通过蒸发溶剂浓缩溶液。优选通过本领域已知的层析技术分离MLK-D。本发明还提供包含稳定的本发明MLK-Na和药学上可接受的赋形剂的药物制剂。本发明还提供药物制剂的制备方法，包括使稳定的本发明MLK-Na与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。本发明还提供稳定的本发明MLK-Na在制备药用组合物中的用途。可根据患者的年龄、性别和症状，以各种制剂实施本发明药用组合物的给药方法。例如，可作为片剂、丸剂、散剂、液体制剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射剂(溶液和悬液)等，给予药用组合物。本发明的药用组合物可任选与其它形式的MLK-Na和/或其它活性成分混合。此外，本发明的药用组合物可含有非活性成分，例如，稀释剂、载体、填充剂、膨胀剂、粘合剂、崩解剂、崩解抑制剂、吸收促进剂、增湿剂、润滑剂、助流剂、表面活性剂、矫味剂等。稀释剂增加固体药用组合物的体积，并可使药用剂型含有使患者更容易接受的组合物并顾及给予者的操作。固体组合物的稀释剂包括，例如，微晶纤维素(例如，AVICEL⑧)、microfine纤维素、乳糖、淀粉、预胶化淀粉、碳酸钙、硫酸钙、糖、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、磷酸氢锅二水合物、^粦酸钙、白陶土、碳酸镁、氧化镁、麦芽糊精、甘露醇、聚曱基丙烯酸酯(例如，EUDRAGIT)、氯化钾、粉状纤维素、氯化钠、山梨醇和滑石粉。被压制成剂型，例如，片剂的固体药用组合物可包含赋形剂，赋形剂的作用包括在压制后帮助将活性成分和其它赋形剂粘合在一起。固体药用组合物的粘合剂包括阿拉伯胶、海藻酸、卡波姆(例如，卡波普)、羧曱基纤维素钠、糊精、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、氢化植物油、羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素(例如，KLUCEL)、羟基丙基曱基纤维素(例如，METHOCEL)、液体葡萄糖、硅酸镁铝、麦芽糊精、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚维酮(例如，KOLLIDON、PLASDONE)、预胶化淀粉、藻酸钠和淀粉。可通过向组合物加入崩解剂提高经压制固体药用组合物在患者胃中的溶出率。崩解剂包括海藻酸、羧曱基纤维素钙、羧甲基纤維素钠(例如，AC-DI-SOL、PRIMELLOSE)、胶态二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮(例如，KOLLIDON、POLYPLASDONE)、瓜尔胶、硅酸镁铝、曱基纤维素、微晶纤维素、聚克立林钾(polacrilmpotassium)、粉状纤维素、预胶^t淀粉、藻酸钠、淀粉羟乙酸钠(例如，EXPLOTAB⑧)和淀粉。可添加助流剂以提高非压制固体组合物的流动性，并提高剂量的准确性。可起助流剂作用的U武形剂包括胶态二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石粉和磷酸钩。当通过压制粉状组合物制备剂型，例如，片剂时，组合物受到来自沖头和冲模的压力。某些赋形剂和活性成分具有粘合到沖头和冲模表面的趋势，这可使产物具有凹痕和其它表面不规则性。可将润滑剂加入到组合物中，以减少粘合并使产物易于从沖模中脱出。润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、甘油单硬脂酸酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、月桂基硫酸钠、硬脂酰富马酸钠、硬脂酸、滑石粉和硬脂酸锌。矫味剂和增味剂使剂型对患者更适口。可包含在本发明组合物中的药用产品的普通矫味剂和增味剂包括麦芽酚、香草醛、乙基香草醛、薄荷脑、柠檬酸、富马酸、乙基麦芽酚和酒石酸。也可用药学上可接受的任何着色剂对固体和液体组合物染色，以改善其外观和/或帮助患者鉴别产品和单位剂量水平。在本发明的液体药用组合物中，稳定的MLK-Na和其它任何固体赋形剂溶解或悬浮于液体载体，例如水、植物油、醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油中。液体药用组合物可含有乳化剂，以将不溶于液体载体的活性成分或其它赋形剂均匀地分散于整个组合物中。可用于本发明的液体组合物的乳化剂包括，例如，明胶、蛋黄、酪蛋白、胆固醇、阿拉伯胶、黄蓍胶、角叉菜属、果胶、曱基纤维素、卡波姆、十六醇十八醇混合物和十六醇。本发明的液体药用组合物也可含有粘度提高剂，以改善产品的口感和/或涂于胃肠道的内层。这类试剂包括阿拉伯胶、海藻酸膨润土、卡波姆、羧曱基纤维素钙或钠、十六醇十八醇混合物、曱基纤维素、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、羟基乙基纤维素、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚乙烯醇、聚维酮、碳酸丙烯酯、丙二醇藻酸盐、藻酸钠、羟乙酸淀粉钠、淀粉、黄蓍胶和黄原胶。可加入甜味剂例如，山梨醇、糖精、糖精钠、蔗糖、阿司帕坦、果糖、甘露醇和转化糖以改善味道。可以安全摄入的水平加入防腐剂和螯合剂，例如，醇、苯曱酸钠、丁羟甲苯、丁羟茴醚和乙二胺四乙酸，以提高贮存稳定性。根据本发明，液体组合物也可含有緩沖剂，例如，guconicacid、乳酸、柠檬酸或乙酸、guconate钠、乳酸钠、柠檬酸钠或乙酸钠。可通过配制科学家基于对本领域的标准程序和参考书的经验和考虑，容易地确定赋形剂和用量的选4爭。当制备可注射(胃肠外)药用组合物时，溶液和悬液被灭菌并优选被制成与血液等渗。注射制剂可采用本领域普遍已知的载体。例如，注射制剂的载体包括，但不限于水、乙醇、丙二醇、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯化(polyoxylated)异硬脂醇和聚氧乙烯山梨坦的脂肪酸下容易地确定使注射制剂等渗所必需的氯化钠、葡萄糖或甘油的量。可加入额外的成分，例如，溶解剂、緩冲剂和止痛剂。本发明的固体组合物包括粉末、颗粒、聚结和紧密组合物。该药剂包括适于口服、口腔、直肠、胃肠道外(包括皮下、肌肉内和静脉内)、吸入和经眼给药的药剂。在给定的任何情况下，尽管最合适的给药会取决于要治疗的病症的性质和严重性，但本发明的最优选途径是口服。药剂可方便地以单位剂量形式存在，并由制药领域所熟知的任何方法制备。剂型包括如片剂、散剂、胶囊剂、栓剂、小药嚢、药片和锭剂的固体剂型，及液体糖浆剂、混悬剂和酏剂。本发明的剂型可为在硬或软壳内含有本发明组合物，优选粉状或颗粒状的固体组合物的胶嚢剂。壳可由明胶制备并任选含有增塑剂，例如，甘油和山梨醇，和遮光剂或着色剂。根据本领域的已知的方法，可将活性成分和赋形剂配制成组合物和剂型。可通过湿法制粒制备用来制片或胶囊填充的组合物。在湿法制粒中，混合呈粉状的部分或全部活性成分和赋形剂，然后在液体，典型地是使粉末聚结成颗粒的水的存在下，进一步混合。筛选颗粒和/或研磨、干燥和再筛选和/或研磨至所需要的颗粒大小。再将颗粒制片，或者在制片前加入其它赋形剂，例如，助流剂和/或润滑剂。可通过干燥混合，方便地制备片剂组合物。例如，活性剂和赋形剂的经混合组合物可被压制成条或片，然后粉碎成紧密的颗粒。紧密的颗粒可继续被压制成片剂。作为干法制粒的选择，可用直接压缩技术，将经混合的组合物直接压缩成紧密的剂型。直接压缩制成无颗粒的更加均匀的片剂。特别适于直接压缩制片的赋形剂包括微晶纤维素、喷雾干燥的乳糖、磷酸氢《丐二水合物和胶态二氧化硅。在直接压缩制片中适当采用这些和其它赋形剂为在直接压缩制片的特定配制挑战方面具有经验和技术的本领域那些人所知。本发明的胶嚢填充可包括参照制片而描述的任何上述混合和制粒，然而，它们不经过最终的制片步骤。本发明的固体组合物包括粉末、颗粒、聚结和紧密组合物。该药剂包括适于口服、口腔、直肠、胃肠道外(包括皮下、肌肉内和静月永内)、吸入和经眼给药的药剂。在给定的任何情况下，尽管最合适的给药途径将取决于要治疗病症的性质和严重性，但本发明的最优选途径是口服。药剂可方便地以单位剂量形式存在，并由制药领域所熟知的任何方法制备。已经参照某些优选实施方案，描述本发明，从对本说明书的考虑，其它实施方案对本领域的技术人员会变得显而易见。通过参考详细描述本发明化合物的制备的下列实施例，可进一步限定本发明。不脱离本发明范围的情况下，进行原料和方法的许多修饰，对本领域的技术人员而言是显而易见的。仪器经HPLC测定孟鲁司特钠的杂质范围按下列说明进行HPLC:柱和装填LUNACI8(2)100A250x4.6mm,5pm,P.N.00-G-4252-E0緩沖液溶液I:3mlTFA用水稀释到100ml溶液II:3mlTFA用乙腈稀释到100ml洗脱液A:1ml溶液I至2L水洗脱液B:lml溶液II至2L乙腈洗脱梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>停止时间40min平衡时间10min流速1.5ml/min;险测器225mm注射体积20^1稀释80%乙腈20%水柱温度25°C自动取样器温度5°C实施例实施例1:「R-(E)l-l-m3-『2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基l苯基l-3-『2-(l-羟基-1-曱基乙基)苯基l丙基l硫基l曱基l环丙烷乙酸的制备由10.1g二醇(MKT)((S)-l-[[[l-[3-[2(E)-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]]-3-[2-(1-羟基-1-甲基乙基)苯基]-1-丙醇))制备曱磺酸(2-(2-(3(8)-(3-(7-氯-2-喹啉基)-乙烯基)苯基)-3-曱磺酰基氧基丙基)苯基-2-丙醇)酉旨的冷溶液(约-5。C,38ml)。向CYTAM(l-(巯基曱基)环丙烷乙酸曱酉旨)(5.05g)的N,N-二甲基乙酰胺(-7。C,20ml)的冷溶液中加入曱磺酸酯il^液。在强烈搅拌下，用9min逐滴加入47%NaOH(4.55g)。该反应是放热的；温度升到-l。C。将该透明的粘性反应混合物于-6。C搅拌lh，于18°C下搅拌1.5h，再用1小时加热至38。C。一次性加入全部47%NaOH(5.12g)并于38。C彻夜搅拌。在38°C，搅拌下，用5。/。NaCl(50ml)猝灭反应混合物(带固体的液体)。分离并弃去含水的更低的相。用THF(30ml)稀释有机相，并用5%NaCl(50ml)洗涤。分离并弃去含水相。用THF(10ml)稀释有机相，并用7.5。/。酒石酸(50ml)处理，调节pH至3-5。分离并弃去含水相。有机溶液直接用于下一步骤。实施例2:通过制备〖11-(￡)1-1-『旧-『2-(7-氯-2-查啉基)乙烯基1苯基1-3-『2-(1-羟基-1-甲基乙基)苯基l丙基l硫基l甲基l环丙烷乙酸异丙基胺盐纯化对映异构体异丙基胺(1.95g)被加至来自前面实施例的反应混合物中。室温下，搅拌该透明反应溶液0.5h,通过在减少的压力(20mbar)下，55°C浴中蒸发，除去挥发物。50°C下，使油状残余物溶解于曱基'乙基酮(40ml),用曱基'乙基酮汽提(stripped)残余THF。重复该操作。71。C下，使残余物重油溶解于热甲基'乙基酮(120ml)。使该透明溶液逐渐冷却0.5h至37°C,诱发结晶。该温度下保持该悬液0.5h，并用lh逐渐冷却至0。C。0。C下保持该混合物1.3h,再过滤。用冷的曱基'乙基酮(0。C,50ml)洗涤滤饼，得到21.22g湿产物，室温下将其彻夜干燥，并在减压(20mbar)下于50。C干燥3h，得到呈浅白色固体的9.5g干燥的粗产物(纯度98.4%)。相对于MKT的分离率为68%。S-对映体水平从0.28%降低到不能检测的水平。MLK-SO水平从0.16%降低到0.09%。实施例3:3-f2-0-羟基-l-甲基乙基)苯基l丙基l硫基l甲基l环丙基乙酸异丙铵盐(MLK-IPAM)在作为溶剂的THF(20升)中的DIPEA(2.2Kg)的存在下，使S-MKT(4kg)与曱磺酰氯(1.4kg)反应，生成曱磺酸酯化合物。在反应期间，形成二异丙基乙基胺盐酸化物(DIPEA'HC1)盐。经过滤除去该盐。再于THF和DMA(4L)混合物中的氢氧化钠(2kg)存在下，使母液，MKT-曱磺酸酯的THF溶液与CYTAM(2.4kg)反应，生成R-MLK-Me溶液。在分离步骤后，逐渐加热反应混合物至40。C和并用额外量的氢氧化钠(2kg)处理。混合该溶液约4h，以诱发R-MLK-Me水解，生成R-MLK-Na。经用稀NaCl溶液(每次用20升5。/。NaCl溶液洗涤)洗涤反应混合物两次，除去DMA和其它副产物，得到粗MLK-Na的THF溶液。用酒石酸(7.5。/。)的稀水溶液酸化反应混合物，直到pH达到3-4,生成MLK-H。分离含水相，得到粗MLK-H的THF溶液。弃去含有酒石酸盐的含水溶液。50°C,真空下蒸馏除去THF溶剂直到干燥。使残余物(粘性泡沫)溶解于曱基-乙基-酮(MEK)并冷却至〈30。C。加入0.78kg异丙胺(IPAM),在冷却盐后，从溶液中沉淀出MLK-IPAM。滤去固体，用MEK洗涤，并用于下一步骤。根据纯度，任选从MEK中再结晶出固体，并任选干燥。实施例4:通过结晶二正丙胺盐，纯化『R-(E)l-l-『『f3-『2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基l苯基l-3-〖2-(卜羟基-l-曱基乙基)苯基l丙基l硫基l甲基l环丙烷乙酸使粗[11-问]-1-[[[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-羟基-1-曱基乙基)苯基]丙基]硫基]曱基]环丙烷乙酸异丙基胺盐(8.51g)溶解于曱苯(40ml)和THF(10ml)的混合物中，并用冰醋酸(1.42g)处理，调节pH至5-6。搅拌反应混合物40分钟并用水(20ml)洗涤。分离并弃去含水相。室温下，将二正丙胺(2.74g)加至有机相，搅拌透明反应溶液0.5h。在55。C,减压(20mbar)下，经蒸发除去挥发物。使残余物，重油溶解于曱苯(40ml)，再用甲苯汽提残余THF。40。C下，使残余物溶解于曱苯(35ml)。逐渐冷却透明溶液至25°C,诱发结晶。保持混合物于该温度下0.5h，再緩慢冷却至0。C。彻夜搅拌该悬液并过滤。用冷(0。)甲苯洗涤滤饼，得到7.3g湿产物。在50。C、减压(20mbar)下，干燥湿产物3.5h,得到浅白色固体的7.2g干燥晶体产物(纯度99.7。/。)。相对于MKT的分离率为53%。实施例5:经结晶二正丙胺盐，纯化〖R-(E)l-l-[〖「3-『2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基l苯基l-3-〖2-(l-羟基-l-曱基乙基)苯基l丙基l硫基l曱基l环丙烷乙酸实施例1的孟鲁司特酸也可直接转化为二正丙胺盐。蒸发经实施例1得到的有机溶液至干燥，如实施例4中的那样，使残余物溶解于曱苯。进行实施例3的余下步骤，生成二正丙胺盐。MLK-D的量从0.95%被降低至0.03-0.08%重量水平。MLK-SO的量被减少至0.04-0.06%重量水平。实施例6:晶状1-〖〖『101)-『3『2-(7-氯-2-喹啉基)-乙烯基1苯基1-3-『2-(1-羟基-1-甲基乙基)苯基l丙基l硫基l曱基l环丙基乙酸二正丙窗盐(MLK-DPA)的制备室温下，使500gMLK-IPAM溶解于2LTHF，加入1L酒石酸水溶液(7.5%)，使pH达到3-5。分离各相，弃去水相。低于—60°C，真空下，蒸馏除去THF,直到干燥。通过加入甲苯溶解残^勿(粘性泡沫)，并冷却。加入118g二正丙胺(DPA),进一步冷却后，用最终的布晶种诱发粗盐MLK-DPA沉淀。过滤固体，用曱苯洗涤两次，未经干燥从曱苯中再结晶。45-55。C下，在真空箱中干燥结晶出的MLK-DPA。实施例7:fR-(E)l-l-m3-『2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基l苯基l-3-『2-n-羟基-1-甲基乙基)苯基l丙基l硫基l曱基l环丙烷乙酸钠盐的制备将甲苯(225ml)和孟鲁司特二正丙胺盐(45g)装入配有机械搅拌器的500ml烧瓶中。室温下搅拌悬液30分钟。向悬液加入叔丁醇钠(6.5g),30-40°C下搅拌反应混合物30分钟。加入活性碳(2g)，经活性;友过滤溶液。将混合物分批加至容纳庚烷(630ml)的烧瓶中，形成沉淀，室温下，再搅拌混合物1小时。经过滤收集孟鲁司特钠盐晶体，用庚烷洗涤，在45。C、减压下干燥。得到作为含有大于1。/。水的非晶形原料的孟鲁司特钠(32g)。MLK-D的量被减少至不能捡出的水平。实施例8:MLK-D的分离经快速层析法从实施例3-5的残余物中分离MLK-D。流动相为CHCl3:乙醚(8:2)。经45°C、减压下，蒸发溶剂，浓缩来自实施例3-5的反应的母液(ML)。室温下，用少量MeOH溶解油状残余物，彻夜搅拌。过滤MLK-H沉淀，再次于45。C、减压下，蒸发溶剂，浓缩ML。使残余物溶解于最小量的CHCl3:乙醚(8:2),再装在硅胶上。收集多个流分，得到MLK-D样品。实施例9:作为参比标准和参比标记的MLK-D的用途只用安瓿烧瓶和管形瓶制备在稀释液中含有0.025mg/ml孟鲁司特钠(MLK-Na)标准和0.025mg/mlMLK-D标记的混合物。孟鲁司特钠的保留时间为约20分钟；MLK-D的保留时间为约33分钟。经溶解和稀释10mg孟鲁司特钠标准于10ml容量安瓿烧瓶中，制备标准溶液。用稀释液稀释该溶液至1/100，然后稀释至1/10。通过溶解和稀释10mg孟鲁司特钠样品于10ml容量安瓿烧瓶中，制备样品溶液。用25分钟停止时间注入标准溶液，样品溶液继续层析至最终梯度。经下式计算各杂质的面积%杂质=杂质面积x(MLK-Na)标准浓度x(MLK-Na)标准效价杂质浓度x(MLK-Na)标准面积保留时间为<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>HPLC法的检测限度为0.01%,量化限度为0.03%。实施例10:美国专利号5，614.632的重复<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>权利要求1.含有少于0.14％重量MLK-SO的孟鲁司特钠。2.含有少于0.10。/o重量MLK-D的孟鲁司特。3.—种制备纯孟鲁司特钠盐的方法，该方法包括提供孟鲁司特游离酸；使孟鲁司特游离酸转化为二正丙胺孟鲁司特盐；和使二正丙胺孟鲁司特盐转化为孟鲁司特钠盐。4.一种分离出的杂质，具有下列结构的[R-(E)]-l-[[[l-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-[2-(1-丙烯基)苯基]丙基]硫基]曱基]环丙烷乙酸(MLK曙D):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>5.含有少于0.14。/。重量MLK-SO的孟鲁司特钠。6.含有少于约0.10。/。重量MLK-D的孟鲁司特。7.—种确定在样品中存在]乜合物的方法，该方法包括以MLK-D作为参比标记进行HPLC或TLC。8.—种测定样品中存在MLK-D的方法，该方法包括以MLK-D作为参比标记进行HPLC或TLC,包括(a)在包含MLK-D的参比标记中，通过HPLC或TLC测定对应于MLK-D的保留时间；(b)在包含孟鲁司特钠和MLK-D的样品中，通过HPLC或TLC测定对应于MLK-D的保留时间；和(c)通过将步骤(a)的保留时间对步骤(b)的保留时间进行比较，确定样品中MLK-D的存在。9.一种确定样品中MLK-D的量的方法，该方法包括进行HPLC或TLC,其中的MLK-D被用作参比标准，特别地，该方法包括下列步骤(a)经HPLC或TLC测量对应于包含已知量MLK-D的参比标准中MLK-D的峰下面积；(b)经HPLC或TLC测量对应于包含MLK-D和孟鲁司特钠的样品中MLK-D的峰下面积；和(c)通过比较步骤(a)的面积与步骤(b)的面积，测定样品中MLK-D的量。10.—种由孟鲁司特钠制备孟鲁司特的方法，该钠盐经HPLC测定具有少于约0.10%面积的MLK-D,该方法包括以下步骤(a)得到一批或多批孟鲁司特钠的一个或多个样品；(b)测量各个样品中的MLK-D水平；(c)根据对取自各批的样品的测量，选择经HPLC测定具有约少于0.10%面积的MLK-D水平的来自步骤a)的那批;和(d)用所选择的批制备孟鲁司特钠。11.一种分离MLK-D的方法，该方法包括提供含有MLK-D、孟鲁司特游离酸和溶剂的溶液；从该溶液中沉淀出孟鲁司特游离酸；和分离MLK-D。12.根据权利要求ll的方法，其中的溶剂至少是醇、卣化烃、C5-Q芳香烃或酯之一。13.根据权利要求ll的方法，该方法还包括浓缩含有MLK-D的溶液。14.药物制剂，它包含MLK-Na和药学上可接受的赋形剂。15.—种制备药物制剂的方法，该方法包括使稳定的MLK-Na与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。16.本发明的稳定的MLK-Na在制备药用组合物中的用途。全文摘要本发明提供纯化孟鲁司特的方法，式I的孟鲁司特的新分离的杂质，其分离方法和用孟鲁司特杂质作为参比标记和参比标准的方法。文档编号C07D215/18GK101213177SQ200680024298公开日2008年7月2日申请日期2006年7月5日优先权日2005年7月5日发明者E·沙皮罗,G·斯特林鲍姆,K·陈申请人:特瓦制药工业有限公司