专利名称：：TGF-β活化反应阻碍物质的制作方法
技术领域：
：本发明涉及阻碍TGF-(3活化反应的物质。
背景技术：
：转化生长因子(TransformingGrowthFactor(TGF)-|3)Mil强力促驻间充质细胞的细胞外基质产生同时抑制上皮细胞的增殖，导致肝纤维似肝硬化、动脉硬化、肺纤维症、硬皮症、肾机能不全(肾小球肾炎)、骨髓纤维化等硬化性疾病、类风湿性关节炎、增殖性玻璃体视网膜病变等病态；另外由于其抑制皮肤角化细胞的增殖、机能，诱导凋亡，因此与脱毛关系密切；财卜其也抑制免疫细胞的机能等，是一种表现出多种生物活性的分子量为25kD的同型二聚体多功能细胞因子。由使用针对TGF-J3的中和抗体的动t^莫型的研究可知，Mil抑制TGF-P的功能能够预防、治疗硬化性疾病。例如文献报道可以通过fOTTGF-P的中和抗体、TGF-(3受体的抗体的抗体疗法^M[吏用显性失活TGF-|3受体基因或可溶性TGF-P受体基因的基因治疗狄口制止TGF-(3的作用(日本特开2004-121001号公报；Schuppan等人，Digestion59:385-390,1998;Qi等人，ProcNatlAcadSciUSA96:2345-2349,1999;Ueno等人，HumGeneTher11:3342,2000)。但是，在抗体疗法或基因治疗中在必要量和给药方法方面存在问题，不能马上在临床应用。因此，进行了基于TGF-卩的作用机理的低好阻碍齐啲开发。本发明的研究者在动物模型上研究发现低分子化合物cytoxazone(iM卜M)l抑制TGF-P的信号传导31^柳制肝脏疾病的病态形成(国际公开^V02005/039570号)，但是尚未鉴定出Cytoxazone直接作用的耙蛋白。另外，着眼于TGF-卩作为潜活形式被产生出来、由于穀U蛋白酶的作用而转换为活性型分子(TGF-P活化反应)，在动物模型上研究显，逝OT低M合成蛋白酶抑制剂(Okuno等人，Gastroenterology120:18784-1800,2001)或抗体(日本特开2003-252792号公报；Akita等人，Gastroenterology123:352-364，32002)阻碍TGF-|3的活化反应，有可能能够预防疾病。但是现在的蛋白酶抑制剂的抑制谱宽，用于人体有可能有副作用。另外现在的抗体由于有效浓度比较高，用于人时由于必须要大量纯化抗体，费用可能会比駄。另外，本发明人在世界范围内首次测定了上述的TGF-卩活化反应时被切断的部位，成功制备了识别所述切断面的抗体，并且〗顿该抗体证明了在人肝疾病中蛋白存TGF-P活化反应在发挥作用(国际公开WO2005/023870号)。过去，报告了一禾中由8-17个氨基酸组成的肽，其能在永生化毛乳头细胞株中抑制TGF-卩的产生(日本特开2005-239695号公报)，但是没有揭示包括是否抑制基因表达、是否抑制活化反应的作用机制以及在体内的有效性。另外，美国阿拉巴马大学的Murphy-UMch的研究小组ffl^t糖蛋白血小板反应蛋白1引起的附着型TGF-I3活化反应的研究发现，血小板反应蛋白1的第412415的序列KRFK与LAP的第54-57的序列LSKL结合弓|起活化，并且发现合成肽KRFK活化TGF-卩，而合成肽LSKL抑制TGF-|3活化反应(Schultz-Cheny等人，J.Biol.Chem.270:7304-7310,1995;Crawford等人，Cell93:1159-1170,1998;Ribeiro等人，J.Biol.Chem.274:13586-13593,1999;Murphy-UllrichandPoczatekCytokine&GrowthFactorReviews11:59-69,2000)。作为LAP的第54-57的序列的LSKL，与本发明人测定的纤溶酶切断部位K56-L57—致。血小板反应蛋白1M31与该部分结合^l过蛋白酶切断该部分阻碍该部分与活性型TGF-pi肝间糊哄价结合，结果活性型TGF-pi肝从潜复合体中释放出来，即该部分为引起TGF-(31活化反应的部分。但是，通过本发明的研究者的重复i(验，没有再现合劍太KRFK诱导TGF-(3活化反应以及合成肽LSKL抑制TGF-P活化反应。Muiphy-Ullrich等揭示了血小板反应蛋白1依存附着型TGF-P活化反应与肺^I夷脏的病态形成的关系，但是没有研究与肝病的关系。
发明内容本发明的课题在于解决上述现有技术的问题。即本发明要解决的技术问题是提供能够阻碍TGF-(3活化反应的物质，特别是提供育,阻碍TGF-P活化反应本发明人为解决战技术问^it行了深入研究，在本发明人的TGF-(3在肝脏通过称为纤溶酶、血浆mi太释放酶的蛋白酶被活化，从而发挥生物活性这一过去的发现基础上，成功地合成了會嫩在低浓度稳定地抑制纤溶隞血浆激肽释放謝衣存性TGF-(3活化反应的肽，从而完成了本发明。艮P，M31本发明提供(1)包含11~50个氨基酸残基的肽，该肽含有Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro(式中XI至X4分别独立地表示任意的氨基酸残基，XI-X2-X3-X4新Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基,列。(2)如(1)所述的肽，其中X1和X3为碱性氨基酸以外的氨基酸残基。(3)包含ll50个氨基l^戋基的肽，其含有下记的(i)至(iv)中的任意的氨基酸序列。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(4)如(1)~(3)中任一项所述的肽，其长度为1120个氨基^^基。(5)肽，其包含Gln-Ue-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro(式中XI至X4分别独立i條示任意的氨基酸残基，Xl-X2-X3-X4标Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基,列。(6)活性型TGF-P生成抑制剂，其含有(1)(5)中任一项所述的肽。(7)用于治疗和/或预防与TGF-卩相关的病态的药物，其含有(1)(5)中任一项所述的肽。(8)肝再生剂或肝纤维化抑制剂，其含有(1)(5)中任一项所述的肽。在活体内，特别是在肝脏疾病的病态形成过程中，TGF-P的特定部位被蛋白酶切断，释放出活性型TGF-P。活性型TGF-P诱导肝纤维俗肝硬化，抑制肝细胞的增殖、即肝再生。本发明的肽作为作用于该切断部位的蛋白酶的诱饵，竞争性地抑制TGF-P活化反应，能够高效地抑制与TGF-P相关的病态的形成。图1表示QP肽、QPA肽和T200肽。图2表示来自TGF-P活化蛋白酶切断序列的月M肝星状细胞的活化抑制。图3g来自TGF-p活化蛋白酶切断序列的月树肝再生不全的改善(照片)。图4g来自TGF-P活化蛋白酶切断序列的月树肝再生不全的改善(数值化)。图5表示QPQ肽的序列。图6表示QP肽和QPQ肽对LAP切断反应的抑制。图7表示QP肽、QPA肽、QPQ肽、T200肽对培养肝星状细胞的转化的影响的观察结果。图8表示^^牛培养基中的活性型TGF-卩生成量的测定结果。图9表示QP肽、QPA肽和QPQ月M肝再生不全的改善(照片)。图10表示QP肽、QPA肽和QPQli!^t肝再生不全的改善(数值化)。图11表示肝组织中的TGF-(31生成量的测定结果。具体实施例方式以下，详细说明本发明的实施方式。转化生长因子(TransformingGrowthFacto《TGF)"P)与各种5更化性疾病、类风湿性关节炎、增殖性玻璃体视网膜病变的病态形成相关、与脱毛关系密切、抑制免疫细胞的机能；另外它也能通过抑制蛋白酶的过量产生而防止肺组织分解而导致肺气肿、抑制癌细胞的增殖等，是一种显示多种生物活性的分子量为25kD的同型二聚体多功能细胞因子。人类存在TGFH31—P3的3种异构体(isoform)。TGF-P作为不能与受体结合的分子量约300kD的无活性潜在型产生，在耙细胞表面或其周围被活化，成为能与受体结合的活性型，进而发挥作用。TGF-p对革巴细胞的作用通过称为Smad的担当信号传导的一系列蛋白的磷謝^各传达。首先，活性型TGF-P与靶细胞表面存在的II型TGF-P受体结合，形成包含2肝n型受体与2舒I型TGF-(3受体的受体复合物，n型受俐每I型受体磷酸化。接着，磷酸化的I型受糊每Smad2或Smad3磷酸化，磷酸化的Smad2或Smad3与Smad4形成复合物，转移至核，与目标基因启动子区蹄在的称为CAGAbox的耙序列结合，与辅激活物一同诱导耙基因的转录表达。本发明人发现潜在型TGF-(3在肝脏由于蛋白酶的切断而活化，发挥出强的纤维形成诱导能力、肝细胞增殖抑制能力，因此导致肝纤维俗肝硬化、肝再生不全(肝再生不全)；并且报道了使用蛋白酶抑制齐柳制TGF-p的活性會,抑制病态形成(OkunoM等，Gastroenterology2001;120:1784-1800;AkitaK等，Gastroenterology2002;123:352-364)。基于以上认识，报道了使用抗蛋白酶的抗体的治疗法(日本特开2003-252792号公报)。接着，将抑制TGF-p的信号传导的物质与抑制TGF-P活化的蛋白酶抑制剂并用，以期肖滩取得协同的病态形成抑制效果，筛选TGF-(3信号传导抑制物质。结果，发现了具有囌唑烷酮环的cytox氾one，报告了{顿cytoxazone的基于抑制TGF-(3的信号转导ffi^各的TGF-P相关疾病的治疗法、预防法(国际公开WO2005/039570号公报)。另外，测定了在蛋白酶依存TGF-(3活化反应的M^呈中纤溶酶、血浆mH太释放酶所切断的位点为潜在型TGF"P1好的N末端侧LAP(Latencyassociatedprotein)序列的Lys56和Leu57之间以及Arg58和Leu59之间，成功制备了特异性识别切断面的抗体，即病态组织-异构懒寺异性活化反应识别抗体(国际公开WO2005/023870号公报)。本发明确认含有潜在性TGF-(31針中的纤溶酶、血浆MH太释放酶的切断位点Lys56与Leu57以及Arg58和Leu59的包含由Gln52至Pro62的11个氨基酸的序歹啲合成肽(称其为QP肽)、将Lys56与Leu57以及Arg58和Leu59全部替换为Ala使其不被蛋白酶切断的变异肽(称其为QPA肽)、将Lys56与Leu57以及Arg58和Leu59全部替换为Gln使其不被蛋白酶切断的变异肽(称其为QPQ肽)通过竞争性抑制纤溶酶/血浆激肽释放酶依存TGF-卩活化反应，招氐浓度稳定抑制活性型TGF-p的生成，抑制肝病的病态形成，奠定了基于TGF-p活化反应的特异性抑制的TGF-卩相关疾病的治疗法、预防法开发的基础。本发明的肽为含有Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro表示的氨基酸序列、包含11-50个氨基酸残基的肽。上式中X1至X4分另鹏立地表示任意的氨基酸残基可列举天然型的20种氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬翻安、谷氨醐安、赖氨酸、精氨酸、胱氨酸、藤酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸、脯氨酸)。但是Xl-X2-X3-X4标Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列。为了使其不易受到TGF-(3活化蛋白酶的活性的影响，皿X1和X3为碱性氨基酸以夕卜的氨基酸残基。此处，碱性氨基酸表示赖氨酸、精氨酸、组氨酸。本发明的肽的长度为1150个氨基,基即没有特别柳蹄U;雌11~30个氨基酸残基；更雌1120个氨基,基；进一步雌1115个氨基酸残基;特别imil个氮基酸残基。本发明的肽比11个氨基酸长时，向Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro表示的氮基,列的N末端侧和/或C末端侧附加氨基,列。作为附力啲氨基,歹何以选择以下记载的TGFjl、TGF-P2或TGF-P3的画了下划线的氨基,歹啲N鄉侧和/或C末端侧的氨基酸序列或其一部分。例如，当为TGF-卩1时，Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro表示的氨基MJ^列的N^侧可以附加G、RG、IRG、息G、E息G、正AIRG、RIEAIRG、KRIEAIRG、RKRIEAIRG、KRKRIEAIRG、VKRKRIEAIRG、LVKRKRIEAIRG、ELVKRKRIEAIRG、MELVKRKRIEAIRG、DMELVKRKRIEAIRG、IDMELVKRKRIEAIRG、TIDMELVKRKRIEAIRG、KTTDMELVKRKR1EAIRG、CKTIDMELVKRKRIEAIRG或TCKTIDMELVKRKRIEAIRG表示的氨基,列。同样，当为TGF-f31时，Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro表示的氨基1W列的C末端侧可以附加P、PS、PSQ、PSQG、PSQGE、PSQGEV、PSQGEVP、PSQGEVPP、PSQGEVPPG、PSQGEVPPGP、PSQGEWPGPL、PSQGEVPPGPLP、PSQGEVPPGPLPE、PSQGEWPGPLPEA、PSQGEVPPGPLPEAV、PSQGEVPPGPLPEAVL、PSQGEWPGPLPEAVLA、PSQGEVPPGPLPEAVLAL、PSQGEVPPGPLPEAVLALY、PSQGEVPPGPLPEAVLALYN表示的氨基,列。当为TGF-卩2或TGF-卩3时，可以以下记氨基,歹伪基础，同样地附加氨基列。TGF-i31(N末端)-TCKTIDMELVKRKRIEAIRO"QILSKLRLASP-PSQGEVPPGPLPEAVLALYN-(C東端)(SEQIDNO.6)TGF-j32(N末端)-TCSTLDMDQFMRKRIEAIR(H3ILSKLKLTSP^EDYPEPEEVPPEVi:SIYNS-(C末端)(SEQIDN0-7)TGF-/33(N末端)-TCTTLDFGHIKKKRVEAIRG~QILSKLRLTSP-PEPTVMTHVPYQVLALYNST-(C末端〉(SEQIDNO.8)对本发明的肽中的氨基酸残基的种类没有特别限制，天然型氨基酸残基、非天然型氨基酸残基、或它们的衍生物均可。即氨基酸可以是L氮基酸，也可以是D-氨基酸，还可以是它们的混合物。另夕卜氨基酸辦中类可以是cx-氨基酸、(3-氨基酸、Y-氨基酸、S-氨基酸的任意一种，但作为天然型氨基酸的a-氨基酸。本说明书所述非天然型氨基酸是指构成天然型蛋白质的20种天然型氨基酸(甘氨酸、L"丙氨酸、L"缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L苏氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-天冬醐安、L-谷氨醐安、L-赖氨酸、L-精氨酸、L胱氨酸、L-驗酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸、L-脯氨酸)以外的全部氨基酸。具体而言，例如可以举出(1)天然型氨基酸中的原子被其它物质置换懼換)糊1=天然型氨基酸；(2)天然型氨基酸的侧链的旋光异构体(光学異性体.)；G)天然型氨基酸的侦赚导入取代基的非天然型氨基酸以及(4)将天然型氨基酸的侧链进行取代，使船K性、反应性、带电状态、M的大小、氢结合能等发生变化得到的非天然型氨基酸等。本说明书所述氨基酸的"衍生物"是指进行了化学修饰和生物学修饰等的氨基酸的衍生物。修饰的例子可以举出例如烷基化、酯化、卤素化、或氨基化等的官能团的导入、氧化、还原、加成或脱离等引起的官能团变换、糖化合物(单糖、J、驟糖或多糖)或脂质化合物等的导入、磷酸化或生物素化等，但不限于这些。上述的本发明的肽的形态可以是游离形态，也可以以酸加成盐或碱加成盐形式提供。作为酸加成盐，可以举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等无机酸盐；或者对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石,等有机酸盐。作为碱加成盐，可以举出例如钠盐、钾盐、药盐、镁盐等金属盐；铵盐；甲基铵盐、三乙基铵盐等有机铵盐。有时也与甘氨酸等氨基酸形成盐。另外也有在分子内形成平衡离子的情况。另外，肽或其盐有时作为水合物或蹄(j化物存在。±^肽具有多个不对称碳。对各不对称碳的立鹏型没有特殊限制，但氨基酸残基为L"氨基酸。基于这些不对称碳的旋光体(光鞭性体)、非对映异构体等立体异构体、立体异构体的任意混合物、外消旋体等均包含在本发明的范围内。本发明的肽可以通ffl^领域技术人员公知的常规方法合成。例如可以举出叠氮法、酰氯法、酸酐法、混合酸酐法、DCC法、活性酯法、羰基咪唑(力少求《夕'y—小)法、氧化还原法等。另外，其合成可以4柳固相合戯和液相合淑去中的任意一种。即可以舰使能构成本发明的肽的氨基酸与其余部分縮合，生成物有保护基时使保护基脱离来合成目的肽。縮合方法、保护基的脱离可以使用公知的任意方法(例如可以参照BodanszkyMandM.A.Ondetti,PeptideSynthesis,IntersciencePublishers,NewYork(1966)、SchroederandLuebke,ThePeptide,AcademicPress,NewYork(1965)、泉屋信夫等，肽的合成的基础和实验，丸善(1975)等)。反应后可以组合使用通常的纯化法，例如溶剂提取、蒸馏、柱色谱、液相色谱、重结晶等来纯化本发明的肽。另外本发明的肽的C末端通常是羧基(画COOH)或羧酸根(-COO—)，但C末端也可以是醐安(-CONH2)或酯(-COOR)。作为酯中的R，可列举碳原子数为1-12的烷基、碳原子数为3-10的环烷基、碳原子数为6-12的芳基、碳原子数为7-12的芳烷基等。本发明的肽也包含N末端的氨基被保护割呆护的肽或结^^辦连的糖肽等的复合肽等。本发明的肽的其它的制造方法可以是例如禾,编码本发明的肽的氨基,列的基因，采用遗传工程的手法在微生物细胞、植物细胞、动物细胞等宿主生产重组蛋白质(肽)的方法。得到的重组肽可以采用}过滤、反相HPLC、离子効奂柱纯化等通常的用于纯化蛋白质或肽的方法^it行纯化。本发明的肽由于显示TGF-(3产生抑制作用，會,作为TGF-P产生抑制剂使用。另外，本发明的肽由于显示TGF-I3产生抑制作用，育,用作治疗和/或预防与TGF-(3相关的鄉的药物。例如，育,用作肝再生f腿剂劍干纤维化抑制剂。作为与TGF-p相关的疾病，可以举出例如伴随着组织(肺、肝脏、肾脏、皮肤等)的纤维化的疾病，具体可以举出例如肺纤维化、肝硬化、肾疾病(肾炎、肾硬化病)、血管再狭窄、动脉硬化症、牛皮癣、硬皮病、先天性过敏症(7卜t。一)、瘢痕瘤或关节炎等。另外本发明的肽可以直接或以含有药物制造领域通常使用的各种固体载体、液体载体、乳化分散剂等的形式作为药tH顿。具体而言，将本发明的肽以医药组合物的形态〗柳时，其制剂総可以根据4顿目的或4顿对象适当选择，例如可以举出片抓丸剂、散剂、溶液剂、龍悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射剂(溶液剂、？昆悬剂等)等形态。另外，作为形成片齐'财使用的载体，可以4顿例如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳化转、高岭土、结晶纤维素、硅酸等赋形剂；含有水或醇类的淀粉、明胶、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、甲基纤维素(MC)、羟基丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、磷酸韩、聚乙烯吡咯烷酮等粘合剂；干燥淀粉、琼月謝、、昆布多糖粉、碳,钠、碳酸药、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖等崩解剂；白糖、甘油三硬脂酸酯、可可粉、氢化油糖(水素弒口油糖)的崩解控制剂；季胺碱、十二烷基硫酸钠、胶#^1犬硅酸等吸附剂；纯化滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇等润滑齐(傳。进一步地根据需要可以将片剂制成包有通常的包衣的片剂，例如糖衣片、明胶包衣片、肠溶包衣片^5U1片、多层片。另外将本发明的肽制成注射剂时，将溶液剂、乳剂和混悬剂进行杀菌，且与血液等张等；形成这些形态时，可以使用水、乙醇、丙二醇、乙氧基化异硬脂醇、聚氧化异硬脂醇(求y才年、乂化W只亍"/KT小:n—/"、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类等稀释剂；另外根据需要，可以配合使用亚硫酸氢钠、焦亚硫勝内等稳定抓羧甲基纤维素、藻酸钠、单硬脂酸铝等混悬抓氯化钠、葡萄糖、甘油等等张剂、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、氯丁醇等保存剂，另外还可配合使用溶液辅助剂、缓冲剂、无痛化剂等。上述各形态的医药组合物中，根据需要可以进一步地配合使用惯用的着色剂、香料、调味剂、甜味剂等，另外也可以含有其它药物有效成分。将本发明的肽用作药物时，4細时一般使雜药物中含有0.001-90重fi0/。，雌0.001-80重1%。本发明的肽，可以施与包括人类的哺乳动物。给药途径可以是经口施与也可以是非经口施与。本发明的肽的给药量应当根据患者的年龄、性别、体重、症状以及给药途径等条件的不同进行适宜的增减。一般而言，作为有$;分量，成人一日为lpg/kgl,000mg/kg左右的范围，优选10[ig/kg100mg/kg左右的范围。，的给药量可以一日一次施与也可以一日分成数次施与。另外给药时间以及给药间隔没有特别柳蹄ij，可以每天给药也可以间隔数日给药。以下ffl51实施例进一步具体说明本发明，但本发明不受实施例的限定。实施例实施例1:QP肽和QPA，M肝星状细胞的活化抑制按照已知的方^(OkunoM等，Gastroenterology2001;120:1784-1800)自雄性Wistar大鼠(体重350400g;JapanClea)的肝脏分离肝星状细胞，在每个3.5cm塑料培养皿中布放lxl()6个细胞，在lml含有10%胎牛血清(FCS;GIBCO公司制造)的Dulbecco'sModifiedEagle培养基(DMEM;SIGMA公司律U造)中培养。自分离肝星状细胞第一日起，向培养液中添加QP肽(Gln-Ile-Leu-Ser國Lys-Leu-Arg誦Leu-Ala-Ser-Pro)(SEQIDNO.9)、QPA肽(Gln-He國Leu-Ser曙Ala-Ala-Ala画Leu-Ala-Ser-Pro)(SEQIDNO.IO)以及作为对照的、偏离本发明人发现的TGF-卩活化控制区域(Gly51Arg110)(国际公开WO2005/023870号公报)的预想对TGF-P活化反应没有影响、并且报告具有TGF-(3活化能力的不含有丝氨酸蛋白酶、基质蛋白酶(近藤等，日本血栓止血学会志，2003:14:210-219;Annes等,JCellSci2003;116:217-224)的一般切断序列的包含11个氨基酸的潜在型TGF-piLAP序列的合成肽(Thr-Gly-Val-Val-Arg-Gln-Tip-Leu-Ser-Arg-Gly;将其称为T200肽)(SEQIDNO.11)(参见图l)，持续培养7天，在显微镜下观察各月树通过在塑料培养皿上培养诱发的肝星状细胞的转化(也称为肝星状细胞的活化)的影响。各肽配制成60mM储备7K溶液，溶解于培养基使终浓度为ImMo至分离第3日，在含有10。/。FCS的DMEM培养基中^i，在第4印每培养基换成含有终浓度为lmM的各肽的加入0.P/。牛血清白蛋白(BSA)的DMEM，将进一步培养2-4日的培养基作为条件培养基回收，用PROMEGA公司制造的ELISA试剂盒对条件培养基中存在的活性型TGF-pi的量进行定量，同时用显微镜(DMIRB;Leica公司制造)观察细胞的形态，并拍摄照片。MM微镜得到的观察结躲于图2。如图2所示，QPA肽显著抑制肝星4魏胞的活化(伴有含有维生素A的油滴的消失的絲变化)。与此相对，QP肽显示弱的抑制效果，T200肽没有显示抑制效果。进一步地，劍牛培养基中的活性型TGF-卩生成量的测定结^^表1。如表1所示，QPA肽显著地将条件培养基中的活性型TGF-卩量降低至对照的1/55(2%)。与此相对，没有观察到显著的星糊胞活化抑制活性的T200肽将条12件培养基中的活性型TGF-(3量M^、至对照的74%。表1:来自TGF-(3活化蛋白酶切断序列的月太对伴有肝星状细胞活化的活性型TGF-pi生成的抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由以上结果可知，QPA肽抑制纤溶藤血浆激肽释放酶引起的TGF-p活化反应，抑制肝星状细胞的活化。实施例2:QP肽和QPAftW肝再生不全的改善接着，使用已经证明血浆^H太释放^^存TGF-P活化反应为其原因的肝再生不全的动物模型，即内毒素(LPS)前施与部分肝切除肝再生不全模型小鼠(Akita等.，Gastroenterology2002;123:352-364)，进行评价QP肽和QPA肽在体内的効深的动物实验。i力验引入26只出生后五周龄的雄性C3H/HeN系小鼠。在检疫、环境驯化后按照分组当天的体重分组如下。即分成施与盐7jC(Saline)的盐7jC施与组(Gl:n=6)、施与LPS的盐7k施与组(G2:n=6)、施与LPS的QP肽施与组(G3:n=4)、施与LPS的QPA肽施与组(G4:n=4)和施与LPS的T200肽施与组(G5:n=6)的5组(表2)。it验开始后，腹腔内施与LPS7吗(Gl为盐水)，48小时后对全部小鼠进行肝脏部分切除。再过48小时后，将生存的供试动物全部剖检。剖检时，在采血后，将各组1-3只在用4%多聚甲醛(PFA)进行全身灌流后摘出肝脏，将全叶用包埋齐lfTissueMount"冷冻包埋。另夕卜对于剩余的1-3只，不进行全身灌流，一部分用福尔马林固定，其余采取后作为冷冻试样(mRNA用和蛋白定量用)。对于进行了福尔马林固定的脏器，制成块，与冷冻i辦一起在-8(TC的低温冰箱保存。表2:试验组的构成<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>i^验材料和方法如下。1.诱发物质1.l诱发物质名称脂多糖类(Lipopolysaccharides)(LPS;来自Escherichiacoli0111:B4)(SIGMA公司制)保存方法冷藏、遮光、密闭1.2翻U名称灭菌生理食盐水(嫁制药株式会社制)2受试物质2.1QP肽名称TGF-piLAP肽氨基,列N-52QILSKLRLASP62誦C保存方法冷藏2.2QPA肽名称TGF-卩1LAP肽(N-52QILSKLRLASP62-C的突^l太)氨基,列N-52QILSAAAAASP62國C保存方法冷藏2.3T200肽名称TGF-P1LAP肽(与活化反应无关的部分的肽)氨基,列N-200TGVVRQWLSRG210-C保存方法冷藏3.供试动物动物种小鼠系统C3H/HeNSlc供给源日本工7工/^一株式会社，静冈微生物学品质无特定病原(SpecificPathogenFree,SPF)性别雄周龄弓l入时5周龄(供试时6周龄)4.动物的饲养管理在将弓l入的动物在新的饲养环境别l化的同时，从笼子外面以能够确认的程度每^a见察动物的状态，确认其一般状态(一般状態)良好。饲养时间弓1入后5天试验时间8天5.供试动物的分组5.1实施时间动物引入7天后5.2分组方法考虑动物引入5天后的全部动物的体重，4柳分组系统Statlight針l分组(二、;/夕厶7株式会社，东京)按照随机分组法进行分组。5.3笼子的识别粘贴写明组名、试验编号、系统名、施与样品名、有无灌流、个体编号、引入编号和笼子编号的标签。6.动物的识别分组后，进行单饲养(単飼育)。由于可以通过笼子謝Ti只别，故此不再进行各个体的识别。7.诱发物质的施与7.1LPS施与样品的配制配制频率1次(用时配制)配制方法向l只装入5mgLPS的小瓶(/MT/WfS)中添加少量的盐水使其溶解。接着转移至其它容器，继续添加盐水至总量为5ml。此为l^nl的溶液。自该溶液准确量取350^1，将其加入装入了4.65ml灭菌生理食盐7JC的容器。随后用0.22,的滤器灭菌过滤后，作为施与样品。7.2LPS施与方法施与量7pg/头施与路径腹腔内施与施与容量0.1mJ/头施与次数1次(单次)施与时间肝部分切除48小时前对象动物G2G5(G1施与盐水)8.受试物质的施与8.1肽施与样品的配制配制频率l次配制方法用盐7j^t解，使达到2mg/ml，用作施与样品。保存方法^ffl前在冰箱(设定为4")保存。8.2肽的施与方法施与量200pg/头施与路径静脉内施与施与容量o.lmV头施与时间肝部分切除的50、38、24、14、2小时前以及10、24、34小时后施与次数2W日，4天(原则上9:00和19:00)，计8次。对象动物G3G5(G1、G2施与盐;R)9.肝部分切除(2/3partialhepatectomy;PH)9.1处置方法将小鼠进行乙醚吸入麻醉，自胸部至腹部剃毛，背位固定后用聚烯吡酮碘消毒手术部皮肤。切开腹部，自切开口取出肝外侧左叶、内侧右叶、内侧左叶至体外，用线系住这些肝叶的根部，切除取出至体外的肝脏。擦去血液，用年77—示、，于年7封闭腹部，用聚烯吡酮碘消毒皮肤，处置完成。9.2处置只数全部26只9.3处置时间LPS施与48小时后10.—般状态观察和体重测定10.1—般状态观察试验开始后，每日一次，观察全部个体的一般状态，发现异常时进行详细记录。10.2体重测定it验开始后，每日一次以上测定全部个体的体重，保存记录(打印纸)，进行统计。11.剖检11.1剖检时间PH48小时后11.2剖检方法3M:腹腔内施与戊巴比妥钠40mg/kg将小鼠麻醉后，用未处理注射:tl通过腹部大动脉尽可能采集血液，使其失血致死。采血后，将各组l-3只在用4。/。PFA进行全身灌流后摘出肝脏，全叶用包埋剂"TissueMount"冷冻包埋。另外对于其余的1-3只，不进行全身灌流，一部分用10%中性缓冲福尔马#^浸渍固定，其余作为冷冻i辦(mRNA用和蛋白定4il)在液氮中冷冻。11.3血液的处理将血液在采血后1小时内用3,000r.p.m,10併中7賴口(设定为4。C)离心分离。采集血清至其它容器，冷冻保存(设定为-8(TC)至提出时。12.病理组织标本的制作制作脏器肝脏制作标本石蜡块制作方法10%中性缓冲福尔马林液固定后，将肝脏切出，按照常规方法进4亍^7K、石蜡包埋。13.组织切片的制作和染色将包埋的肝组织用轮转式切片机(Leica社)制成厚度为5,的肝组织切片。增殖细胞核抗原PCNA(proliferating^el1NuclearAntigen;增殖细胞的标记)的染色使用匕7卜77^乂试剂盒(二于1^^一才寸,^>^社)按照已经报道(GreenwellA等，Cancerlett1991;59:251-256)的方法进行。即按照试剂^^f附带的说明书，将除去石蜡的肝组织切片(厚度5叫)按照以下的操作进行染色。在95。C水浴中与柠檬酸缓冲液pH6温育10倂中。-在室温与3%过氧化氢7]<:温育20併中。(以下，在加湿室内、室温)-与试剂盒附带的封闭缓冲液温育60併中。.与小鼠抗大鼠PCNA单克隆抗体(Dako社制)原液温育10射中(一抗)。，与试剂盒附带的封闭缓冲液温育10倂中。与试剂盒附带的单染色小鼠MAX-PO(M)温育10併中(二抗)。与二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)混合液(X夕夕一社帝U)温育4分30秒使其显色。*，各操作步骤之间分别用PBS洗涤3次。与苏木精溶液(补一化学药品社製)温育20秒，与四硼M溶液温育1分钟，进行核的对比染色后用MMQ过滤7K洗净。用Leica社制DMIRB显微镜以200x倍率观察，拍摄照片，同时，以n=8对各标本的PCNA阳性细胞百分率进行评价。14.肝组织TGF-pi量的测定按照OkunoM等的方法(OkunoM等,Gastroenterology2001;120:1784-1800)由11.2中为蛋白质定量用制备的肝组织约100mg配制肝提取液，用PROMEGA社制的ELISA试剂誠提取液中存在的TGF-pi的量进行定量。TGF-P的量以pg/mg蛋白质量^^。(一般状态的观察结果)对于施与LPS的组，施与12小时后的观察确认自发运动的M^、以放毛。其后随时间的推移这些症状有所恢复，至PH处置前完全咴复。PH处置后，观察到一部分个体出5鹏伏、自发运动M^、、術显斷氐和鸵背(円背位)的症状，也确认了死亡例。认为这些症状是PH处置的影响。(染色结果)染色结果如图3所示。ffl31向小鼠施与QP肽、QPA肽，明显改善了LPS前施与诱发的肝再生不全(已经证明血浆激肽释放酶依存性TGF-卩活化反应是其原因)。与此相对，T200肽没有显示改善效果。(定量结果)将id^的染色结果用PCNA阳性肝细胞百分率进行定量，结果如图4所示。涯过向小鼠施与QP肽，LPS前施与诱发的肝再生不全(PCNA阳性细胞的比率从40%减少至25%，己经证明血浆mH太释放^f^存性TGF-P活化反应是其原因，Akita等人，Gastroenterology123:352-364,2002)得到完全改善。进一步地，施与QPA肽得到了PCNA阳性细胞的比率提高至47%的结果，显示具有肝再生不全改善效果和肝再生，效果。与此相对，T200肽完全没有显示改善效果。(肝组织TGF-f31量定量结果)肝组织中的TGF-J31生成量的测定结果如表3所示。通过LPS前施与，肝组织TGF-pi量提高至对照组的值的约6.5倍;QPA肽将其^^至对照组的值的约1.4倍。与此相对，T200肽仅将TGF-pi量M^至对照组的值的约3倍。表3:来源于TGF-(3活化蛋白酶切断序列的肽对与肝再生不全相伴随的肝组织TGF-pi生成的抑制M样品肝TGF41含量(pg/mg蛋白)船K+;PH盐水LPS+州盐7jCLPS+PHQPA肽46±4i10±11」*LPS+PHT200肽*P<0.05(总结考熟以上的结果显示，作为TGF-(3活化蛋白酶弓l起的来自潜在型TGF-(31的LAP部分的切断序列的肽的QP肽和QPA肽，在低浓度抑制作为肝病原因的蛋白酶依存性TGF-P活化反应，抑制活性型TGF-P的生成，改善肝再生。就其效果而言，QPA肽比QP肽强。其原因是QPA肽不被蛋白酶戶;t刀断，可以在更低浓度安全且有效地发挥阻碍活性。期待QPA肽切断对照组的内源性基础TGF-P活化反应。通逝OT本肽，使在现有技术中困难的稳定地抑制TGF-p活化反应成为可能，可期待本B太及其衍生物被开发为针对以各种硬化性疾病为fW的TGF-P相关疾病的预防药、治疗药。实施例3QP肽、和QPQ肽对LAP切断反应的阻碍在将重组人LAP(R&D社)2pg(终浓度66pg/ml)与终浓度20pg/ml的血浆mi太释放酶(SIGMA社制)温育时，添加终浓度为2.5mg/ml的QP肽、QPA肽、T200肽、QPQ肽(SEQIDNO.4)，在37。C温育40併中后，通过采用13.5%聚丙烯翻安IH交的电泳(室温，27mA，50併中)，分离LAP(^量41kDa)和LAP分解产物(分子量38kDa)以及作为添加剂{顿的BSA(终浓度0.3mg/ml，好量80kDa)。将用半干转印装置分离的各蛋白质、懒军产物转印至PVDF膜，按照秋田等人的方法(Gastroenterology123;352-364,2002)，与终浓度为5pg/ml的抗LAP小鼠单克隆抗^(R&D社)或终浓度为20^ml的抗L59切断面识别小鼠单克隆抗体(自帝U，国际公开WO2005/023870号公报)在室温温育60併中后，与终浓度为lpg/ml的辣根过氧化物酶结合山羊抗小鼠二次抗体(JacksonImmunoResearchLaboratories社)在室温反应60併中，用ECLplus试剂(GEHealthcare社)使其显色，对各肽对LAP带的减弱以及LAP分解产物生成的影响进行半定量(图6)。结果显示，QP肽明显抑制LAP的切断反应(板A出现的LAP带的减弱以及板B出现的LAP分解产物生成)(第3泳道)；与QP肽相比，QPQ肽更强地阻碍LAP的切断反应(第6泳道)；与此相对，QPA肽禾口T200肽显示弱的阻碍效果(第4泳道；第5泳道)。实施例4按照实施例1记载的方法，观察QP肽、QPA肽、QPQ肽禾口T200肽对通过在塑料培养皿上培养诱发的培养肝星状细胞的转化的影响。将各肽溶解于培养基，使终浓度为0.5mM(约500^ig/ml)。至分离第1日，在含有10%FCS的DMEM培养基中处理，在第2日，将培养SI奂成含有终浓度为0.5mM的各肽的加入0.iy。BSA的DMEM，将进一步培养2-7日的培养基作为斜牛培养基回收，用PROMEGA公司制造的ELISA试剂盒对^f牛培养基20中存在的活性型TGF-(31的量进行定量，同时用显微镜(DMIRB;Leica公司)观察细胞的形态并拍摄照片。Mii显微镜得到的观察结果示于图7。如图7所示，QP肽、QPA肽、QPQ肽显著抑制肝星状细胞的活化(伴有含有维生素A的油滴的消失的形^^变化)。特别是QPQ肽显示出最强的抑制^媒。与此相沐T200肽没有显示抑制交媒。此时的条件培养基中的活性型TGF-P生成量的测定结果示于图8。如图8所示，QP肽、QPA肽、QPQ肽分别抑制对照组细胞斜牛培养基中的活性型TGF-卩生成的55%、25%和90%。由以上结果可知，QPQ肽比QPA肽更强地抑制纤溶,血浆激肽释放酶引起的TGF-卩活化反应，抑制肝星状细胞的活化。实施例5:QP肽、以及QPA肽、QPQ月M肝再生不全的改善以下，按照实施例2记载的方法，使用LPS前施与部分肝切除肝再生不全模型小鼠，进行评价QP肽、以及QPA肽、QPQ肽、T200肽在体内对肝再生不全模型的^媒的动物实验。试验引入26只出生后五周龄的雄性C3H/HeN系小鼠。在检疫、环境驯化后按照分组当天的体重如表4分组。即分成施与盐水的盐7jC施与组(Gl:n=8)、施与LPS的盐7jC施与组(G2:n=8)、施与LPS的QP肽施与组(G3:n=8)、施与LPS的QPA肽施与组(G4:n=8)、施与LPS的QPQ肽施与组(G5:n=8)和施与LPS的T200肽施与组(G6:n=8)的6组。表4:<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>it验开始后，腹腔内施与LPS7pg(Gl为盐水)，48小时后对全部小鼠进行肝脏部分切除。再过48小时后，将生存的供试动物全部音啦。剖检时，在采血后，将各组4只在用4。/。PFA进行全身灌流后摘出肝脏，全叶用包埋剂"TissueMount"冷冻包埋。另夕卜对于剩余的4只，不进行全身灌流，一部分用福尔马林固定，其余采取后作为冷冻试样(mRNA用和蛋白定量用)。对于进行了福尔马林固定的脏器，制成块，与冷冻i辦一起在-8(TC的低温冰箱保存。受试物质QPQ肽名称TGF-(31肽氨基,列N-52QILSQQQQASP62-C保存方法7令藏LPS施与方法施与量7pg/头施与路径腹腔内施与施与容量O.lmJ/头施与次数1次(单次)施与时间肝部分切除的48小时前对象动物G2G6(G1施与盐水)受试物质的施与肽施与样品的配制配制频率l次配制方法用盐ZK^I军，j吏其为2mg/ml，用作施与样品。保存方法4OT前在冰箱(保存于4。C)。肽的施与方法施与量200pg/头施与路径静脉内施与施与容量0Jml/头施与时期肝部分切除的50、38、24、14、2小时前以及10、24、34小时后施与次数2欲日，4天(原则上9:00和19:00)，计8次。对象动物G2G6(G1、G2施与盐7夂)肝部分切除(2/3partialhepatectomy;PH)处置方法将小鼠进行乙醚吸入麻醉，自胸部至腹部剃毛，背位固定后将用聚烯吡酮碘消毒手术部皮肤。切开腹部，自切开口取出肝外侧左叶、内侧右叶、内侧左叶至体外，用线系住这些肝叶的根部，切除放置至体外的肝脏。擦去血液，用年77—求、乂于年7封闭腹部，用聚烯吡酮碘消毒舰，手术完成。处置只数全部48只23处置时间LPS施与48小时后剖检时间PH48小时后剖检方法M;腹腔内施与戊巴比妥钠40mg/kg将小鼠麻醉后，用未注射器通过腹部大动脉尽可麟集血液，使其失血致死。采血后，将各组4例在用4%PFA进行全身灌流后摘出肝脏，全叶用包埋齐J"TissueMount"冷冻包埋。对于其余的4例，不进行全身灌流，一部分用10%福尔马林液浸渍固定，其余作为冻结试样(mRNA用和蛋白定量用)在液氮中冷冻。肝组织TGF-卩1量的测定按照Okuno等人的方法(OkunoM等,Gastroenterology2001;120:1784-1800)将11.2中为蛋白质定量用制备的肝组织约30mg配制成肝提取液，用PROMEGA社制的ELISA试齐U盒对提取液中存在的TGF-卩1的量进行定量。TGF-卩量以pg/mg蛋白质量表示。其它同实施例2。(一般状态的观察结果)对于施与LPS的组，施与12小时后的观察确认自发运动的M^、和立毛。(染色结果)染色结果如图9所示。M31向小鼠施与QP肽、QPA肽、QPQ肽，明显改善LPS前施与诱发的(已经证明血浆mi太释放^^存性TGF-(3活化反应是其原因；Akita等.，Gastroenterology;123:352-364，2002)肝再生不全。QPQ肽、QPA肽、QP肽的改善交媒大体相同。与此相对，T200肽没有改善^媒。(定量结果)将战染色结果用PCNA阳性肝细胞百分率进行定量，结果如图10所示。ffi5i向小鼠施与QP肽、QPA肽、QPQ肽，改善了LPS前施与诱发的肝再生不全(PCNA的比率从55%减少至47%;已经证明血浆ll^太释放酶依存性TGF-(3活化反应是其原因；Akita等人，Gastroenterology123:352-364,2002)。进一步地，ffiil施与QP肽、QPA肽、QPQ肽，PCNA阳性的比率分别提高至66%、70%、64%，显示具有肝再生不全效果和肝再生鹏$娥。与此相沐T200肽完全没有改善效果(45%)。(肝组织TGF-(31量定量结果)肝组织中的TGF-(31生成量的观啶结果如图11所示。LPSIW与导致的肝组织TGF-(31量提高至约2.3倍；QP肽、QPA肽、QPQ肽分别将这种上升抑制至1.6倍、0.7倍、1.6倍。与此相沐T200肽没有抑制^T媒，甚至使其上升(3.1倍)。(总结考熟以上的结果显示，作为TGF-p活化蛋白酶引起的潜在型TGF-pi的LAP部分的切断序列来源的QP肽、QPA肽和QPQ肽，在低浓度抑制作为肝病原因的蛋白斷衣存性TGF-(3活化反应，抑制活化TGF-P的生成，改善肝再生。在体外，QP肽形成酶基质复合物的育g力强，，军后消失，因此在细胞培养系、动物禾難显示轻微的阻碍活性。与此相对，由于QPA肽形成麟质复合物的能力比QP肽弱，且生成的^^质复合物不会被切断，稳定存在，因此在细胞培养系、动物模型中与QP肽相比，显示显著的阻碍作用。在体外，蛋白酶序列非特异性地被T200肽捕获，因此显示弱结合活性。另外由于在细胞培养系、动物模型中与T200肽相比，QPA肽形成^^质复合物的能力高，所以与T200肽相比，QPA肽更加具有阻碍玄媒。QPQ肽由于维持高的KS质复合物形成能力，同时不会被切断，在体外、细胞培养系、动物模型等任意的评价体系中显示最强的阻碍活性。即QPQ肽比QP肽、QPA肽更能稳定地抑制与病态形成相伴的TGF-(3活化反应，可期待本肽及其衍生物被开发为针对以各种硬化性疾病为代表的TGF-(3相关疾病的预防药、治疗法。序列表〈110〉Riken<120〉TGF-/3活化反应阻碍物质〈130〉FA8105A〈160〉11<210>1〈211〉11〈212〉PRT〈213〉人工的(Artificial)〈220〉<223>合成肽(Syntheticp印tide)<220〉<221〉misc—feature〈222〉(5)..(8)〈223〉Xaa可以是任意氨基酸<400〉1GinlieLeuSerXaaXaaXaaXaaAlaSerPro1510〈210〉2<211〉11<212〉PRT〈213〉人工的〈220〉<223〉合成肽〈400〉2GinlieLeuSerAlaAlaAlaAlaAlaSerPro1510〈210〉3〈211〉11〈212〉PRT<213〉人工的〈220〉<223〉合成肽〈400〉3GinlieLeuSerAlaLeuAlaLeuAlaSerPro151026〈210〉4<211〉11<212>PRT<213〉人工的<220〉<223〉合成肽〈400〉4GinlieLeuSerGinGinGinGinAlaSerPro1510<210〉5〈211〉11<212〉PRT<213〉人工的〈220〉〈223〉合成肽〈400〉5GinlieLeuSerGinLeuGinLeuAlaSerPro1510<210>6〈211〉51〈212〉PRT〈213〉人(H丽n)<400〉6ThrCysLysThrlieAspMetGluLeuValLysArgLysArglieGlu151015AlalieArgGlyGinlieLeuSerLysLeuArgLeuAlaSerProPro202530SerGinGlyGluValProProGlyProLeuProGluAlaValLeuAla354045LeuTyrAsn50<210〉7〈211〉51<212〉PRT<213〉人<400〉7ThrCysSerThr1AlalieArgGly20GluAspTyrPro35TyrAsnSer50〈210〉8〈211〉51<212〉PRT〈213〉人<400>8ThrCysThrThr1AlalieArgGly20GluProThrVal35AsnSerThr50〈210〉9<211〉11〈212〉PRT〈213〉人工的〈220〉<223>合成肽〈400〉9GinlieLeuSer1〈210〉10<211〉11〈212〉PRT〈213〉人工的<220〉〈223〉合成肽LeuAspMetAspGin5GinlieLeuSerLys25GluProGluGluVal40PheMetArgLys10LeuLysLeuThrProProGluVal45ArgSer30lielieGlu15ProProSerlieLeuAspPheGlyHis5GinlieLeuSerLys25MetThrHisValPro40lieLysLysLys10LeuArgLeuThrTyrGinValLeu45ArgSer30AlaValGlu15ProProLeuTyrLysLeuArgLeuAlaSerPro510<400〉10GinlieLeuSerAlaAlaAlaLeuAlaSerPro1510〈210〉11〈211〉11〈212〉PRT<213>人工的〈220>〈223〉合成肽〈400〉11ThrGlyValValArgGinTrpLeuSerArgGly1510权利要求1.包含11～50个氨基酸残基的肽，该肽含有Gln-Ile-Leu-Ser-X1-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro(式中X1至X4分别独立地表示任意的氨基酸残基，X1-X2-X3-X4表示Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的肽，其中XI和X3为碱性氨基酸以外的氨基酸残基。3.包含ll50个氨基^gl基的肽，其含有下记(1)(4)中的任意的氨基,列，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>4.权利要求1~3中任一项所述的肽，其长度为1120个氨基酸残基。5.肽，其包含Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro(式中X1至X4分别独立地表示任意的氨基li^基，Xl-X2-X3-X4表示Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基酸序列。6.活鹏TGF-卩生成抑制剂，其含有权利要求1~5中任一项所述的肽。7.用于治疗和/或预防与TGF-P相关的病态的药物，其含有禾又利要求15中任一项所述的肽。8.肝再生teia剂劍干纤维化抑制剂，其含有权利要求15中任一项所述的全文摘要本发明的目的在于提供可阻碍TGF-β活化反应的物质，特别是提供可阻碍TGF-β活化反应的肽。通过本发明，提供包含11～50个氨基酸残基的肽，该肽含有Gln-Ile-Leu-Ser-X1-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro(式中X1至X4分别独立地表示任意的氨基酸残基，X1-X2-X3-X4表示Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基酸序列。文档编号C07K14/00GK101525373SQ20081010039公开日2009年9月9日申请日期2008年3月7日优先权日2007年3月8日发明者寺冈龙太郎,小岛聪一申请人:独立行政法人理化学研究所