专利名称：：获得供解毒治疗使用的高效人白蛋白的方法
技术领域：
：本发明涉及获得具有高容量的人白蛋白的方法，该方法用于运输分子例如在解毒治疗或细胞培养等或其他应用之中。本发明是以实验为基础用作净化具有高结合容量和运输分子的人白蛋白并藉此通过去除血液中的毒素来提高解毒治疗的功效，优选通过白蛋白注入、单采血浆术及通过体外系统替换白蛋白。单采血浆术根据本发明该方法包括，获得用于病毒的灭活治疗用途并具有高结合容量、不含稳定剂，或含有特定稳定剂以使其保持高结合容量的白蛋白溶液。本发明的基本性质定义于权利要求1中。从属权利要求2到22定义本发明的其他优选方面。
背景技术：
：在数量上，白蛋白是人血浆中最重要的蛋白质，并且对于血液的胶体渗透压的保持起着基础性的作用。白蛋白还具有其他的性质，例如其抗氧化剂和抗自由基活动性以及其与不同的内生和外生物质，例如在其他配体中的脂类物质、脂肪酸、胆盐、药物和有毒物质结合的亲合力。根据几位作者，已经指出了白蛋白作为患有严重白蛋白不足、低血容量症(hypovolaemia)或休克(严重烧伤、外伤或溢血)、由慢性肾病和肝脏硬化导致的低蛋白血症的病人，以及在心肺分流术、急性呼吸急迫综合症(acuterespiratorydistresssyndrome)、血液透析和高胆红素血症的情况中作为替代疗法的治疗用途。白蛋白还用于腹水、急性肾病、急性肾病综合征、胰腺炎、腹内传染和急性肝功能不全的治疗。作为在血液中主要的运输分子，血清白蛋白具有对于亲脂性物质如脂肪酸、胆红素等的特殊结合位点。大多数白蛋白配体与两个结合位点I或II中的一个结合。游离脂肪酸、金属离子如铜和胆红素有选择地与特定结合区域结合。这些物质通常由白蛋白运输到肝脏并被降解。在肝功能衰竭的情况下，这些有毒物质留下来与白蛋白结合使其结合容量饱和，并引起血液中毒素水平的增加，其在组织中累积并且导致可以造成病人死亡的多器官功能衰竭。在这些情况下可以通过得益于市售治疗用白蛋白的结合容量的体外肝脏支援系统来进行治疗。如果拥有具有更高的结合容量白蛋白会在这类治疗中更加有效。白蛋白获得和运输大量不同的物质，如代谢产物、金属、毒素、脂肪酸、激素等的容量，使得这种蛋白质非常重要。根据科恩法(Cohn等.JAmChemSoc,1946,68,459-475)从人血浆中获得白蛋白的方法通常以血浆的乙醇分流法的馏分V(FrV)开始。虽然该方法不常见，但是也可以使用其他原料，例如该科恩分部分馏法的上清液(S/N)，如馏分IV的S/N或馏分II+III的S/N,包括纯化中的额外步骤例如离子交换色谱法为。以这些具有>90-95%的白蛋白纯度级别的科恩分部分离法中间产物开始的纯化方法，通常是基于由存在于溶液中的乙醇的作用析出的聚合物、聚集物及其他化合物如脂蛋白的分离。为了这些化合物的最佳分离，可向悬浮液中适当地加入白蛋白的过滤助剂(硅藻土)和Z或不溶性无机硅酸盐(斑脱土)或硅胶是可取的。可选择地，根据起始原料的蛋白质污染物的类型，可适当的加入离子交换剂以保持避免白蛋白吸附作用的条件。随后，通过在超细过滤设备中渗滤从溶液中去除乙醇，其还可以提供金属离子和有机羧酸阴离子如柠檬酸盐的去除(西班牙专利P2.101.390)。该超细过滤还提供白蛋白溶液达到所需的浓度。另外，进行溶液的热处理(优选在56。C到63。C之间热沖击)，以使任何残留在白蛋白溶液中的可能使最终产品不稳定的热不稳定的化合物变性和不溶解。该热处理对于降低白蛋白的常见污染物之一的前激肽释放酶激活剂(PKA)的活性也是有用的。已描述了白蛋白纯化的不同方法，关于步骤的前后顺序或增加额外的纯化步骤，纯化其按照如上所述的情况表现出变化。其他方法包括例如美国专利5.346.992或欧洲专利0367220通过以馏份V或馏分IV的上清液起始的离子交换色i普法纯化白蛋白。美国专利4.288.154提出了从馏分II+m的上清液开始，也通过离子交换色谱法，具有在凝胶中预先过滤步骤的方法。通过目前已知方法从血浆中获得的用于治疗用途的人体白蛋白溶液以浓缩溶液的形式出现，一般具有15%到25%的总蛋白质，为高渗的并促使流体,人血管外向血管内间隙的流动，或者以3.5%到5%总蛋白质的等渗溶液的形式，其与血浆是等渗的。这些溶液的配方含有具有高于95%的总蛋白的纯度级别的白蛋白和稳定剂。当从人血浆库中获得白蛋白溶液时，就如对于其他的生物制品一样，不可避免来自病毒或其他病原体的传播感染的风险。尽管面临上述的风险，现在的治疗用的白蛋白仍被认为是一种安全的血液产品。这主要是由于白蛋白溶液是经过巴氏杀菌的(一般是最终的小瓶在60-63°C至少10小时的热处理)。自从1941年，通过分馏人血浆制备了第一例白蛋白溶液(Cohn等.Chem.Rev.1941,28,395)之日起，便开始了为使白蛋白溶液稳定的研究，而在1945年实现了以N-乙酰色氨酸、辛S交钠或二者的混合物来稳定白蛋白溶(ScatchardG,等，J.Clm.Invest.24:671-676,1945)。白蛋白溶液的稳定继续作为研究课题(FmlaysonJ.S.等，VoxSang.47:7-18,1984);(FinlaysonJ.S.等，VoxSang.47:28-40,1984)，然而直至今日仍没有重大变化，这一稳定形式被不同国家的规章制定机构所接受(例如欧洲药典；人白蛋白溶液专题论文0255)。因此，目前白蛋白的市售制品通常含有辛酸盐及氮乙酰色氨酸作为稳定剂，以避免在巴氏灭菌过程中的聚合并保证产品到保质期之前在贮存期间的稳定性。当捕获有毒化合物作为去除之前的机制，白蛋白的治疗效果发生的情况下，如在高胆红素血症的治疗中，其功效依赖于具有自由结合位点的白蛋白。在以婴儿中的高胆红素血症为模型的研究中，EbbesenF.(ActaPediatr.Scand.71:85-90,1982)证实，与单独以辛酸盐稳定的白蛋白相反，N-乙酰色氨酸强烈地取代胆红素，从而降低了以N-乙酰色氨酸和辛酸盐稳定的白蛋白的功效。尽管两种制品的任一种在防止由胆红素引发的脑病中都是有效的，但数据似乎显示以N-乙酰色氨酸来稳定可能不适于高胆红素血症的治疗，而证明以辛酸盐对白蛋白来稳定的优越性。在也是关于白蛋白与不同化合物，包括色氨酸和辛酸盐结合的亲和力和容量的其他研究中，已证实在不同化合物之间对于白蛋白结合位点存在竟争(Kragh-HansenU.Biochem.J.(1991)273,641-644))并且公认色氨酸在特定位点与白蛋白分子结合，而辛酸盐(石典苯腈辛酸酯)与白蛋白分子在不同位点结合，导致白蛋白与其他化合物结合的容量降低。目前毫无疑问的是这些稳定剂与至少是白蛋白结合位点n结合从而防碍经巴氏杀菌的白蛋白的输送功能，并可在这种的白蛋白静脉输注之后至少部分地抑止内源性配体(毒素等)的结合。已经作出了在为开发在纯化过程和最终组成中均避免乙酰色氨酸和/或辛酸钠的使用的白蛋白生产方法的方向上的尝试。世界知识产权组织专利WO2004071524涉及一种避免包含N-乙酰色氨酸和辛酸盐基团的稳定剂的白蛋白制备方法。因此我们选择通过用溶剂-清洁剂(SD)处理的病毒灭活步骤以代替巴氏灭菌法。使用SD处理在具有脂质包膜的病毒的去除中具有确定的巨大功效，但对于不带包膜的病毒没有显著效果。该方法的另一个缺点是对于除去SD灭活试剂的需要，其包括使这个过程复杂、延长并使其成本更高的萃取步骤。最后，如我们所见，PKA在白蛋白溶液中的存在通过加热被部分减少。由于该专利不包括热处理，其必然还包括特殊步骤以供这种物质的去除，使该过程甚至更加复杂。美国专利5.919.907也涉及为获得具有更大结合容量的白蛋白的尝试，其通过研发避免巴氏灭菌的方法从而加入N-乙酰色氨酸和辛酸盐基团。该方法利用珙化合物的抗微生物的能力，由于白蛋白对于碘的亲和力而这样白蛋白的这种能力使其抗微生物效果失效，根据所述发明，该方法要求加入足够量的碘化合物以使白蛋白的结合容量饱和并且还要达到足够的具有抗微生物效果的游离的碘留存于溶液中。考虑到这一点，该方法的再生性似乎不易实现，而这方面对于病原体的去除步骤很重要。此外，该方法要求去除灭活试剂，其也包括使这个过程复杂、延长并使其成本更高的萃取步骤。在所迷专利中没有提及，应当考虑的另一个方面^PKA在白蛋白溶液中的存在。在以往的情况下，当不进行热处理时，必须包括特殊步骤以供PKA的去除，其使过程复杂化。
发明内容通过进行的研究，发明人证实了在辛酸钠和白蛋白分子之间的结合是难以逆转的，其导致通过以辛酸盐稳定的白蛋白可供与毒素结合的较小容量。另外，研究者已经证实在N-乙酰色氨酸和白蛋白(根据科恩法及其改进方法制备供治疗用途的)之间的结合更容易是可逆的。以N-乙酰色氨酸且不含辛酸盐来稳定的可能性使得一种包括通过巴氏灭菌的病毒灭活步骤的获得白蛋白的方法可以进行，从而在至少一种氨基酸和氯化钠的存在下使白蛋白稳定，却不加入脂肪酸。出人意料地，对这种经过巴氏杀菌的白蛋白包括彻底透析(渗滤)法的纯化方法的执行导致经过巴氏杀菌的白蛋白更大的结合容量。根据本发明描述的方法，作为方法的中间阶段来进行通过巴氏灭菌来对病毒灭活的步骤是可能的。这样我们就可以保持由治疗用白蛋白证明的对于病原体传播的可能风险至今已知的极好的安全等级并实现PKA的减少。通过本发明中开发的方法，获得包括存在于血浆中的普通白蛋白的结合容量的优异的结合容量的白蛋白也是可能的，因为开发的方法减少了与降低白蛋白结合容量的与天然状态的白蛋白紧密结合的化合物(特别是脂类物质和脂肪酸)，并因而使其作为物质的捕获者和运输者的功效更低，例如在细胞培养和解毒治疗中。当在该方法的中间阶段进行巴氏灭菌时该方法还使得加入的稳定剂减少。如此制备的白蛋白具有非常高的容量以结合和运输分子及有关化合物。为制备这种高结合容量白蛋白我们可以从部分纯化的白蛋白浓縮液开始，例如在糊状物(作为冷凝物)中。这种白蛋白的起始原料可以是通过科恩法(或其变化形式)由乙醇分馏法获得的馏分V或馏份VR(再次冷凝物)，或者通过其他可获得同等纯度的白蛋白，典型地^95。/。的白蛋白的分馏方法。白蛋白的其他来源可以从这种科恩分部分馏法的乙醇上清液(S/N)中获得，例如馏分IV的S/N，或从馏分IV(1)+IV(4)的S/N,或从馏分IV(4),或从其他上清液(馏分IV(l)的S/N或馏分II+m的S/N)中，对此包括了额外的步骤，例如色谱分离，以达到要求的纯度等级(^95%的白蛋白)。将如此纯化的白蛋白溶解于水的介质中至超过l。/。的浓度，且典型地至8±2%(p/p),得到的pH典型地为4.7士0.5，而从而接近于白蛋白本身的等电点。如果白蛋白源自馏份V或科恩部分馏法的上清液，剩余的乙醇含量一般26%。要么则将乙醇加至提到的6%的最小值。在加入乙醇的期间或在起始原料的溶解期间，将悬浮液冷却至-3。C到10。C之间的温度且保持在此温度范围内以防止水醇介质的变性。在此条件下将析出的化合物留作沉淀，将过滤助剂(硅藻土)和/或不溶性无机硅酸盐(斑脱土)或硅胶加入白蛋白悬浮液。可选择地，取决于原材料的蛋白质污染物的类型，可加入珍珠岩类型的无机离子交换剂或具有氨基/铵(DEAE、QAE)集团的合成物质，例如DEAE-葡聚糖凝胶(DEAE-Sephadex)，pH保持在4.2-5.2之间，以避免白蛋白自身的吸附作用。当离子交换剂不存在时，可因此将悬浮液的pH提升至从4.2到7.5,且优选为调节至pH6.8-7.2。将使用具有达到粒度20.2pm的阻滞的网孔的过滤器深度过滤的悬浮液解释如下。滤液为基本不含变性蛋白质的不溶残渣和由乙醇析出的其他化合物(基本为脂蛋白)的白蛋白溶液。使获得的产品经由额定分子分离点(molecularcut-off)是在l和50kDa之间，且优选在10和30kDa之间聚醚砜膜(polyethersulphonemembranes)或等效物渗滤。以注射剂或优选以NaCl的浓度20.15M的盐溶液的渗滤可在见于源于之前步骤的滤液中的pH4.2到7.5的相同条件下完成，但优选，且取决于脂类物质的存在，将作出选择以调整至pH4.2-5.2。另外，含盐浓度还促进金属离子如铝或铁以及更强结合的有机羧酸的阴离子例如柠檬酸盐的解离。按照超滤的常规工艺我们进行浓缩的第一个阶段，达到蛋白质大约在8-15%之间且随后通过加入恒定体积的溶剂进行渗滤。渗滤溶液的量不得小于3份体积，且优选超过7份体积。调节至pH接近于中性的白蛋白溶液可以通过加入NaCl至20.15M的浓度和至少一种氨基酸来稳定，优选使用N-乙酰色氨酸的含量为每克20.096mmol的白蛋白的N-乙酰色氨酸。可将该经稳定的溶液通过穿过0.2pm孔径的绝对过滤来杀菌，作为中间产品成批收集并在该阶段中继续其巴氏灭菌。通过巴氏灭菌法的病毒灭活具有无论病毒是否带有脂质覆层均有效的优点，这对于化学处理，例如以SD，是明显的优势。将经过热处理的中间批次溶液通过过滤澄清并使其经过彻底渗滤以减少在前面的步骤中加入的稳定剂。第二渗滤步骤在与在热处理之前的初始阶段的操作在相同操作条件下进行，使得最终的白蛋白溶液达到等渗性(大约0.15MNaCl),并将蛋白质浓度调节至所需值，介于大约3.5%和25%之间。假定用作稳定剂的N-乙酰色氨酸经渗滤被以已指出的形式大量除去，则将渗滤溶液使用的体积倍数设定为残留稳定剂的量的函数。可选则地，有可能在方法中增加通过纳米过滤去除病毒的步骤。由纳米过滤去除病毒，如巴氏灭菌法，也是无论是否涉及包覆的病毒均有效的。纳米过滤的功效的是纳米过滤所采用的孔径的函数，取决于所要过滤的溶液。至于白蛋白溶液纳米过滤可能是以15nm的孔径，其可以确保病毒的显著减少到被认为的最小的量。作为对巴氏灭菌法的补充采用极小尺寸的孔的纳米过滤步骤的加入并不需要稳定剂的存在，因为获得的白蛋白的结合容量并不受此影响。另外巴氏灭菌法和纳米过滤的结合提高了产品的安全等级，如果更高等级是合适的。为了完成白蛋白的纳米过滤以使其对于可通过血液传播的那类病毒真正有效，包括最微小的，就需要所含化合物具有高分子量或其存在于产品中的聚集是非常离散的，因此在热处理之前时进行这一步骤是可取的。此时不同滤孔尺寸的市售纳米过滤器的使用已经描述过，其关于病毒的阻滞功效是根据所选择的孔径变化。为了白蛋白的应用，可使用50nm、35nm、20nm和15nm的过滤器，其也可以是连接为两个或更多的系列，形成孔径渐低的梯度。还可以实现具有相同孔径的双重纳米过滤，增加对可能的病原体的阻挡。蛋白质的浓缩条件根据纳米过滤器孔径变化。因此，对于小于15和20nm的尺寸充分稀释白蛋白至低于5。/。的浓度是可取的，且优选在0.5-2%之间。然而，当孔径在35到50nm之间或以上时，在白蛋白^5%的浓度直接过滤是可行的。室温(18-25°C)和约为中性的pH条件最宜于帮助过滤。无论如何在纳米过滤后通过超滤来浓缩对于调节至最终所需配方应当是必须的。本发明的高效白蛋白的一种可接受形式为冻千，对此不要求稳定剂的使用。为了白蛋白在溶液中的保存其稳定是必须的，这可以20.15M的氯化钠实现。如果其保持低温(在2到8。C之间)以这种形式稳定的白蛋白具有稳定性的标准水平。在白蛋白20.096mmol/克，优选白蛋白为0.16mmol/克的浓度，可以20.15M的氯化钠和N-乙酰氨酸盐来进行稳定的另一种形式。以此配方稳定的溶液具有可在低于或高至30。C的温度下以液体形式保存至少30个月的稳定性的标准水平，或在更高的温度下保存较短一些的时间。无论如何必须避免脂肪酸的掺入。为了确定白蛋白结合容量(ABiC)使用一种基于当将特定的荧光标记，例如丹磺肌氨酸(dansylsarcosin),与白蛋白的结合IT位点结合时在荧光发生方面的变化的方法。在稀释不同的白蛋白样品至相同的浓度并将其与标记一起培养之后，将未结合的标记分子经过滤分离，通过以荧光检测法考察游离丹磺肌氨酸的量(1激励=355nm和X发射460mn),结合容量计量如下%ABiC=基准白蛋白RFU-基准白色白蛋白RFU.100样品RFU-样品的白色RFU(RFU:相对荧光单位)通过这个方法确定了结合容量并将天然人血浆白蛋白的结合容量(100%)作为基准，我们认为高结合容量是在天然人血浆白蛋白的结合容量的至少80%以内。为施行本发明，将高白蛋白结合容量以百分比(％)形式定义为高于具有辛酸钠或辛酸钠和N-乙酰色氨酸的混合物稳定的市售白蛋白的ABiC值。本发明特别地由为获得经巴氏杀菌并具有高的分子结合容量的白蛋白溶液的方法组成，包括下列步骤a)第一次透析(渗滤)b)通过NaCl和至少一种氨基酸来稳定溶液c)力口热溶液d)第二次透析(渗滤)该方法可适用于任何独立来源的白蛋白溶液，或起始于人血浆，或是由重组或转基因方法获得的。获得具有对分子高结合容量的白蛋白溶液的方法包括加热白蛋白溶液(巴氏灭菌)，以杀灭病毒和减少PKA含量。该加热过程在61士2。C的温度下进行10.5士0.5小时。为了使白蛋白溶液可被加热，使用等于或大于0.15M的浓度的氯化钠(NaCl)和加入至少一种氨基酸将其稳定。该氨基酸优选为N-乙酰色氨酸，其量为每克白蛋白含有等于或大于0.096mmol的N-乙酰色氨酸。该方法特别地通过不向白蛋白溶液中加入脂肪酸。所描的获得对分子具有高结合容量的白蛋白溶液的方法，包括经渗滤去除与白蛋白连结而降低其结合容量的物质。这些与白蛋白连结的物质可以是在纯化以前已经与白蛋白结合的天然配体，或在纯化过程中加入的物质(稳定剂)。通过渗滤去除与白蛋白连结的物质是分两阶段进行。为了加热溶液，在稳定前进行的第一次渗滤步骤。第二次渗滤步骤是在加热溶液(巴氏灭菌)后进行。在第二次渗滤步骤中作为稳定剂加入的氨基酸被除去。在所描获得的对分子具有高结合容量的白蛋白溶液的方法中，渗滤步骤是在不小于3卩分体积和优选为7份体积的NaCl溶液中进行。在NaCl的溶液渗滤后，将其在水中进行渗滤调节溶液的盐的浓度至所需值。本发明的详细说明是参照下面的例子，然而，这并不局限本发明的范围。图l是作为稳定剂及其浓度的函数的白蛋白结合容量的对比；图2是不同白蛋白的结合容量的对比；图3是20%白蛋白结合容量的稳定性；图4是以0.15M氯化钠稳定的本发明的白蛋白的结合容量；图5是本发明的方法的流程图。具体实施例方式实施例1:通过N-乙酰色氨酸和辛酸钠稳定剂对白蛋白结合容量(ABiC)影响的7十比为了获得具有具有高结合容量的白蛋白，决定评估用于稳定市售制剂的辛酸钠和N-乙酰色氨酸的影响不经稳定的白蛋白结合容量的程度。为此按照设定的方法来确定ABiC，但将没有稳定剂的白蛋白作为基准。以递增的浓度制备单独的各辅料(N-乙酰色氨酸和辛酸盐)的溶液。以1毫升没有稳定剂的白蛋白(最终白蛋白浓度为1%)来温育各l毫升的各溶液。然后将l毫升丹磺肌氨酸加入各混合物且使用白蛋白结合容量计量方法跟踪正态过程。得到的结果在图l显示，对于同样浓度的辅料，当加入辛酸盐时白蛋白结合容量比加入N-乙酰色氨酸时低。这些结果证明N-乙酰色氨酸相比辛酸盐对白蛋白更强的亲合力。实施例2:血浆白蛋白结合容量(ABiC)与不同的市售白蛋白浓缩液和与根据本发明中描述的方法制备的不含稳定剂和具有0.16mmol/g的N-乙酰色氨酸稳定的白蛋白的对比，得到的结果在图2显示。将天然血浆白蛋白所显示的结合容量(100%)(柱列A)作为基准白蛋白，我们观察到在具有稳定剂N-乙酰色氨酸和辛酸钠浓度为在0.064到0.096mmol/g的白蛋白之间的不同的市售白蛋白浓缩液中，结合容量的情况全都一致(48%至57%)(柱列B至G)并且与仅以辛酸钠(0.099mmol/g白蛋白)(52%)(柱列H)稳定的市售白蛋白一致。该结合容量小于的血浆白蛋白的结合容量。基于其与白蛋白的市售浓缩液的对比，根据本发明获得的不含稳定剂(127%)(柱列1)或在0.16mmol/g的N-乙酰色氨酸稳定的的白蛋白(80%)(柱列J)观察到更高的结合容量。结果一方面表明了所述获得具有优异结合容量的白蛋白的纯化方法的优点，另一方面则为由被分析的稳定剂辛酸钠和N-乙酰色氨酸引起的对结合白蛋白容量的可观的干扰。实施例3:白蛋白溶液的稳定性。将由本发明中所述方法获得的浓度在20%的白蛋白溶液，以0.15M的氯化钠和浓度在0.16mmolN-乙酰色氨酸盐/g白蛋白的稳定并按照与国际级别协调的，稳定性研究的现行规章Q5C"生物工艺学/生物制品"和QlA(R2)"新型药品、物质和产品的稳定性试验"，对其稳定性作出研究。图3给出了20%白蛋白结合容量的稳定性。所示3批白蛋白的实时稳定性数据显示产品保持稳定。特别地，在5。C士3。C和在3(TC士2。C下至少30个月的保存之后，结合容量未显示相对于研究开始时有可观的变化。事实上在5°C和30°C下观察到的在结合容量结果的波动随时间平行地发生，并且因此可归因于在不同时期进行的测试的实际变化性，而非该结合容量的真正变化。实施例4:通过本发明所述方法获得白蛋白溶液的稳定性，并以0.15M氯化钠稳定。在5。C、3(TC和4(TC的贮存温度下，所示的实时稳定性数据显示产品在5。C的温度下保持稳定。在此温度下，结合容量(图4)无论相对于研究开始时还是与以N-乙酰色氨酸稳定的白蛋白相比都未显示有大的变化。分子分布和混浊度数据(表l)也证明该白蛋白溶液的稳定性。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>图5给出了本发明的方法的流程图。正如可由前文领会的，借助于关于白蛋白的稳定性和与此相关的稳定剂的去除以及其对白蛋白的联合能力的影响的研究，发明人已证实使用具有供解毒治疗的高结合容量的人白蛋白的巨大优点。用于解毒治疗的人白蛋白的特征是这样的事实，所得的最终制剂完全没有稳定剂，或包括导致高结合容量的稳定剂。解毒治疗可以通过向患者注入白蛋白、通过对病人做白蛋白的单采血浆术和替换来施用，或者还可以在体外系统内施用。尽管已按照所示实施例在之前的描述中解释了本发明，后者并不试图的范围之内。权利要求1.获得具有高容量结合分子的人白蛋白溶液的方法，包括a)第一次透析(渗滤)b)通过NaCl和一种或多种氨基酸，不加入脂肪酸来稳定溶液，c)加热溶液d)第二次透析(渗滤)。2.根据权利要求l的获得白蛋白溶液的方法，其中白蛋白溶液是源自人血浆。3.根据权利要求1的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其包括加热白蛋白溶液(巴氏灭菌)，以失活病毒并减少PKA含量。4.根据权利要求3的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中溶液的加热(巴氏灭菌)在61±2°。下进行。5.根据权利要求4的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中将溶液加热(巴氏灭菌)10.5土0.5小时。6.根据权利要求l的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中溶液以20.15M浓度的NaCl和至少一种氨基酸来稳定。7.根据权利要求6的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中氨基酸优选为N-乙酰色氨酸。8.根据权利要求7的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中N-乙酰色氨酸的量为每克白蛋白20.096mmol的N-乙酰色氨酸。9.根据权利要求1的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，包括通过渗滤去除与白蛋白结合而降低其结合容量的物质。10.根据权利要求9的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，包括两级渗滤以去除结合白蛋白而降低其结合容量的物质。11.根据权利要求9的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中与白蛋白结合的物质可以为在其纯化前已经与白蛋白结合的天然配体，或在纯化过程中加入的物质(稳定剂)。12.根据权利要求10的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中第一次渗滤步骤是在加热溶液稳定之前进行。13.根据权利要求10的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中第二次渗滤步骤是在溶液的加热(巴氏灭菌)后进行。14.根据权利要求l3的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中作为稳定剂加入的氨基酸的去除是在第二次渗滤步骤中进行。15.根据权利要求9的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中渗滤是在NaCl溶液进行。16.根据权利要求15的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中渗滤是在不小于3体积和优选为7体积的NaCl溶液中进行。17.根据权利要求15的获得具有高容量结合分子的白蛋白溶液的方法，其中在NaCl溶液渗滤后，在水中进行渗滤以调节溶液的盐浓度至期望值。18.根据权利要求1至17的方法获得的具有高容量结合分子的白蛋白溶液的用途，其用于制备解毒治疗的药品。19.根据权利要求18的用途，其特征在于通过白蛋白的输液来施用的。20.根据权利要求18的用途，其特征在于通过单采血浆术和白蛋白的替换来施用的。21.根据权利要求18的用途，其特征在于解毒治疗是通过体外系统进行。全文摘要获得供解毒治疗使用的高效人白蛋白的方法。该方法包括a)第一次透析(渗滤)；b)通过NaCl和至少一种氨基酸来稳定溶液；c)加热溶液；d)第二次透析(渗滤)。文档编号C07K1/00GK101492493SQ200810177028公开日2009年7月29日申请日期2008年11月12日优先权日2007年11月12日发明者皮尔·里斯托-德巴特,胡安-伊格纳西奥·霍尔克拉-捏托,蒙特塞拉特·科斯塔-里尔若拉申请人:基立福有限公司