专利名称：一种从大青叶中制备靛玉红的方法
技术领域：
本发明涉及一种从大青叶中制备靛玉红的方法，该方法是一种采用酸化醇提、氧 化铝短柱分离、重结晶制备靛玉红的方法。
背景技术：
靛玉红又叫炮弹树碱B。分子式C16H10N202分子量262·26性状暗红色针状结晶，mp 356 358°C溶于乙酸乙酯、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙 醚，微溶于乙醇和醋酸，不溶于水。靛玉红为一双吲哚类生物碱。对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病 细胞；在其作用下，变性坏死的细胞多呈肿胀、溶解性坏死。实验研究发现，靛玉红还能增强 动物的单核巨噬细胞系统的吞噬能力。靛玉红为我国首创的新型结构的抗白血病药物。目前国内用于研究的靛玉红有3种来源即从中药大青叶和青黛中提取的天然产 物、半合成、全合成靛玉红。现有从大青叶制备靛玉红的工艺研究很少，公开方法也不详细。如谢国祥等在《中 成药》第28卷第6期2006年发表的“大青叶中靛玉红的提取分离工艺研究”，文献中所公 开的方法是采用95%的乙醇，浓缩成浸膏，加3倍量水溶解，水溶液过大孔树脂柱。取上清 液浓缩至干，碱性氧化铝以氯仿一醋酸乙酯洗脱，洗脱液经浓缩得紫红色末，用甲醇.乙酸 乙酯重结晶。该工艺周期长、生产成本高，况且靛玉红不溶于水，在大孔树脂吸附步骤很难 实现，氧化铝柱分离装柱步骤，没有详细的公开操作。其他文献多是介绍利用超声、微波、超 临界C02萃取等手段提高提取率和缩短提取时间，如李慧等人在《第四军医大学学报》上发 表的“大青叶中靛玉红的超临界萃取工艺及含量测定”，文献所公开的方法只是详细介绍超 临界萃取的步骤，提取率介绍。
发明内容
本发明是提供一种从大青叶中制备靛玉红的新方法。该方法简单易操作，提高收 率，缩短生产周期。本发明的目的是这样来实现的一种从大青叶中制备靛玉红的方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将大青叶原料粉碎20-40目，加入2-3%盐酸溶液浸湿，加入60_80%甲 醇溶液提取2-3次，合并提取液；2)将上述第一次或前两次提取液合并加入其量的0. 5-1 %活性炭回流脱色，滤 过，加入浓氨水调节PH至9-10，放置结晶，滤出结晶，热水洗涤中性，得粗结晶，母液调至中 性，做提取溶液用；3)柱分离将上述结晶物干燥分水，加入氧化铝拌样，装入短粗柱，二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶液梯度洗脱，收集紫红色洗脱液，减压回收试剂至1/4-1/5，放置结晶；4)重结晶将上述结晶物滤出，依次用乙酸乙酯甲醇混合溶液、乙酸乙酯重结晶， 干燥即得。所述提取条件每次乙醇加入原料的6-10倍量，回流提取，提取时间1-2小时。所述柱分离条件氧化铝为120-160目中性氧化铝，粗结晶和氧化铝1 1_2混 合拌样，再和纯净氧化铝1 5-7装柱，先3-4倍柱体积二氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗 脱，再用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红色色液体流出，改用二氯甲烷和乙酸乙酯 1 2-3洗脱至无红色液体流出。所述的重结晶条件乙酸乙酯回流饱和溶解再加入其体积的1/10-1/15甲醇结 晶，乙酸乙酯回流饱和溶解结晶。综上所述，本发明存在以下优点盐酸溶液浸湿原料，有利提高提取率，缩短提取 时间；氨水调节PH，有利于靛玉红结晶，减少了杂质的析出，减少了后序氧化铝和洗脱剂的 用量，母液无需浓缩直接加入原料作提取溶剂，降低能耗和提取成本；不同极性洗脱剂洗 脱，除杂效果好，不同试剂结晶，产品含量高。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 取大青叶挑拣无杂质，粉碎20目，称取20kg加入500L提取罐，用5L2%盐酸溶液 浸湿后加入200L80%甲醇溶液，回流提取2小时，抽滤溶液，再加入160L80%甲醇溶液，回 流提取1小时，抽滤溶液，合并，得提取液320L，继续加入120L80%甲醇溶液回流提取1小 时，套入下次提取用。提取液加入3. 2kg活性炭脱色1小时，过滤，溶液滴加浓氨水调节PH 至10，放置结晶10小时。滤出得粗结晶，热水洗涤结晶物至中性，干燥得固体500g粉碎加 lkgl20-160目中性氧化铝混合均勻，先在直径40cm短粗柱底部加2. 5kg纯净氧化铝再加 入混合氧化铝，200目不锈钢筛网覆盖顶部压实。先用12L 二氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗 脱，洗脱完毕，改用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红色色液体流出，再用二氯甲烷和 乙酸乙酯1 2洗脱至无红色液体流出，收集红色液体，回收试剂至原体积的1/4，放置结 晶，以上洗脱溶液分别回收下次使用。滤结晶物23g，用乙酸乙酯回流饱和溶解再缓慢加入 其体积1/10的99%甲醇放置结晶，滤过，结晶物再用乙酸乙酯回流饱和溶解放置结晶，得 产品15g，含量98%。实施例2 取大青叶挑拣无杂质，粉碎40目，称取20kg加入500L提取罐，用5L3%盐酸溶液 浸湿后加入200L60%甲醇溶液，回流提取2小时，抽滤溶液，再加入120L60%甲醇溶液，回 流提取1小时，抽滤溶液，合并，得提取液280L，继续加入120L60%甲醇溶液回流提取1小 时，套入下次提取用。提取液加入1. 4kg活性炭脱色0. 5小时，过滤，溶液滴加浓氨水调节 PH至9，放置结晶8小时。滤出得粗结晶，热水洗涤结晶物至中性，干燥得固体510g粉碎加 510gl20-160目中性氧化铝混合均勻，先在直径40cm短粗柱底部加3. 5kg纯净氧化铝再加 入混合氧化铝，200目不锈钢筛网覆盖顶部压实。先用15L 二氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗脱，洗脱完毕，改用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红色色液体流出，再用二氯甲烷和乙酸乙酯1 3洗脱至无红色液体流出，收集红色液体，回收试剂至原体积的1/5，放置结 晶，以上洗脱溶液分别回收下次使用。滤结晶物26g，用乙酸乙酯回流饱和溶解再缓慢加入 其体积1/15的99%甲醇放置结晶，滤过，结晶物再用乙酸乙酯回流饱和溶解放置结晶，得 产品14g，含量98. 1%0实施例3 取大青叶挑拣无杂质，粉碎20目，称取20kg加入500L提取罐，用5L3%盐酸溶 液浸湿后加入200L80%甲醇溶液，回流提取2小时，抽滤溶液，得提取液160L，继续加入 120L80%甲醇溶液回流提取1小时，套入下次提取用。提取液加入1. 6kg活性炭脱色1小 时，过滤，溶液滴加浓氨水调节PH至10，放置结晶12小时。滤出得粗结晶，热水洗涤结晶物 至中性，干燥得固体420g粉碎加800gl20-160目中性氧化铝混合均勻，先在直径40cm短粗 柱底部加2. 8kg纯净中性氧化铝再加入混合氧化铝，200目不锈钢筛网覆盖顶部压实。先 用16L 二氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗脱，洗脱完毕，改用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱 至紫红色色液体流出，再用二氯甲烷和乙酸乙酯1 2洗脱至无红色液体流出，收集红色液 体，回收试剂至原体积的1/5，放置结晶，以上洗脱溶液分别回收下次使用。滤结晶物18g， 用乙酸乙酯回流饱和溶解再缓慢加入其体积1/10的99%甲醇放置结晶，滤过，结晶物再用 乙酸乙酯回流饱和溶解放置结晶，得产品llg，含量98%。实施例4 取大青叶挑拣无杂质，粉碎40目，称取20kg加入500L提取罐，用5L2%盐酸溶 液浸湿后加入200L60%甲醇溶液，回流提取2小时，抽滤溶液，得提取液160L，继续加入 120L60%甲醇溶液回流提取1小时，套入下次提取用。提取液加入Ikg活性炭脱色1小时， 过滤，溶液滴加浓氨水调节PH至9，放置结晶8小时。滤出得粗结晶，热水洗涤结晶物至中 性，干燥得固体430g粉碎加430gl20-160目中性氧化铝混合均勻，先在直径40cm短粗柱底 部加3kg纯净中性氧化铝再加入混合氧化铝，200目不锈钢筛网覆盖顶部压实。先用IOL 二 氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗脱，洗脱完毕，改用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红色 色液体流出，再用二氯甲烷和乙酸乙酯1 2洗脱至无红色液体流出，收集红色液体，回收 试剂至原体积的1/4，放置结晶，以上洗脱溶液分别回收下次使用。滤结晶物16g，用乙酸乙 酯回流饱和溶解再缓慢加入其体积1/10的99%甲醇放置结晶，滤过，结晶物再用乙酸乙酯 回流饱和溶解放置结晶，得产品10g，含量98. 2%。实施例5 取大青叶挑拣无杂质，粉碎20目，称取IOkg加入500L提取罐，用2L2%盐酸溶液 浸湿后加入100L80%甲醇溶液，回流提取2小时，抽滤溶液，再加入80L80%甲醇溶液，回 流提取1小时，抽滤溶液，合并，得提取液160L，继续加入60L80%甲醇溶液回流提取1小 时，套入下次提取用。提取液加入800g活性炭脱色1小时，过滤，溶液滴加浓氨水调节PH 至10，放置结晶10小时。滤出得粗结晶，热水洗涤结晶物至中性，干燥得固体240g粉碎 480gl20-160目中性氧化铝混合均勻，先在直径20cm短粗柱底部加1. 6kg纯净中性氧化铝 再加入混合氧化铝，200目不锈钢筛网覆盖顶部压实。先用8L 二氯甲烷和乙酸乙酯20 1 洗脱，洗脱完毕，改用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红色色液体流出，再用二氯甲烷 和乙酸乙酯1 2洗脱至无红色液体流出，收集红色液体，回收试剂至原体积的1/4，放置结晶，以上洗脱溶液分别回收下次使用。滤结晶物9g，用乙酸乙酯回流饱和溶解再缓慢加入其 体积1/15的99%甲醇放置结晶，滤过，结晶物再用乙酸乙酯回流饱和溶解放置结晶，得产 品7g，含量98%。 实施例6:取大青叶挑拣无杂质，粉碎20目，称取IOkg加入500L提取罐，用2L3%盐酸溶 液浸湿后加入100L60%甲醇溶液，回流提取2小时，抽滤溶液，得提取液80L，继续加入 100L60%甲醇溶液回流提取1小时，套入下次提取用。提取液加入500g活性炭脱色1小时， 过滤，溶液滴加浓氨水调节PH至10，放置结晶15小时。滤出得粗结晶，热水洗涤结晶物至 中性，干燥得固体200g粉碎加400gl20-160目中性氧化铝混合均勻，先在直径20cm短粗柱 底部加Ikg纯净中性氧化铝再加入混合氧化铝，200目不锈钢筛网覆盖顶部压实。先用5L 二氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗脱，洗脱完毕，改用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红 色色液体流出，再用二氯甲烷和乙酸乙酯1 2洗脱至无红色液体流出，收集红色液体，回 收试剂至原体积的1/4，放置结晶，以上洗脱溶液分别回收下次使用。滤结晶物7g，用乙酸 乙酯回流饱和溶解再缓慢加入其体积1/10的99%甲醇放置结晶，滤过，结晶物再用乙酸乙 酯回流饱和溶解放置结晶，得产品5g，含量98%。
权利要求
一种从大青叶中制备靛玉红的方法，其特征在于包含以下步骤1)提取将大青叶原料粉碎20-40目，加入2-3％盐酸溶液浸湿，加入60-80％甲醇溶液提取2-3次；2)脱色结晶将上述第一次或前两次提取液合并加入其量的0.5-1％活性炭回流脱色，滤过，加入浓氨水调节PH至9-10，放置结晶，滤出结晶，热水洗涤中性，得粗结晶；3)柱分离将上述结晶物干燥分水，加入氧化铝拌样，装入短粗柱，二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶液梯度洗脱，收集紫红色洗脱液，减压回收试剂至1/4-1/5，放置结晶；4)重结晶将上述结晶物滤出，依次用乙酸乙酯甲醇混合溶液、乙酸乙酯重结晶，干燥即得。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述提取条件每次乙醇加入原料的 6-10倍量，回流提取，提取时间1-2小时。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述柱分离条件氧化铝为120-160目 中性氧化铝，粗结晶和氧化铝1 1-2混合拌样，再和纯净氧化铝1 5-7装柱，先3-4倍 柱体积二氯甲烷和乙酸乙酯20 1洗脱，再用二氯甲烷和乙酸乙酯10 3洗脱至紫红色 色液体流出，改用二氯甲烷和乙酸乙酯1 2-3洗脱至无红色液体流出。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的重结晶条件乙酸乙酯回流饱和 溶解再加入其体积的1/10-1/15甲醇结晶，乙酸乙酯回流饱和溶解结晶。
全文摘要
一种从大青叶制备靛玉红的新工艺是采用2-3％盐酸溶液浸湿原料，60-80％甲醇回流提取2-3次，第一次或前两次提取液活性炭脱色，浓氨水调节pH9-10，析出结晶，再和氧化铝1∶1-2拌样，装入短粗柱，二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶液梯度洗脱，收集靛玉红洗脱液，回收试剂至1/4-1/5，放置结晶，重结晶。该工艺简单易操作，所得产品含量高。
文档编号C07D209/36GK101817778SQ20091026445
公开日2010年9月1日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者刘东锋, 张翼, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司