一种金龟子绿僵菌菌株在制备杀稻叶蝉的药剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种金龟子绿僵菌菌株的新应用，具体涉及一种金龟子绿僵菌菌株在 制备杀稻叶蝉的药剂中的应用及其制剂，属于生物农药领域。
【背景技术】
[0002] 稻叶蝉俗称浮沉子，是我国水稻的重要害虫，广泛分布于各稻区，除直接取食危害 外，还传播水稻病毒病，后者的危害常超过直接吸食。国内常见的稻田叶蝉有10多种，以黑 尾叶蝉、大青叶蝉发生最普遍。稻叶蝉在稻区主要危害水稻，北方无稻地区主要危害小麦， 此外，还危害菱白、甘蔗等禾本科植物，严重的威胁着我国农业生产。目前，主要施用广谱性 化学农药控制稻叶蝉，不仅直接影响人体健康和水产养殖业的安全，而且由于稻叶蝉产生 抗药性和化学农药大量杀伤稻叶蝉天敌，破坏稻田生态平衡，严重削弱田间自然控制能力， 容易导致稻叶蝉的再猖獗、难以控制。采用安全的微生物制剂替代化学农药成为稻叶蝉控 制的重要发展方向。
[0003] 昆虫病原真菌是最重要的杀虫微生物类群，具有安全、持续控制和昆虫不易产生 抗药性的优点。绿僵菌（Metarhizium)是最早用于防治害虫的昆虫病原真菌之一，能感 染全世界约有200多种昆虫。利用它来防治害虫的研宄与实践已愈百年，但尚未控制稻叶 蝉登记的绿僵菌制剂，主要原因是缺乏高毒力杀虫真菌菌株和相应制剂。金龟子绿僵菌 CQMa421是一株从自然感染的稻纵卷叶螟僵虫上分离筛选出的一株生产性状好、对稻纵卷 叶螟具有高毒力杀虫真菌，已在中国专利CN102212483中公开，该菌株于2011年02月25 日，在北京市朝阳区北辰西路1号院3号、中国科学院微生物研宄所的中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏编号：CGMCCN0. 4609,分类命名：金龟子绿 僵菌小抱变种Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae?该菌株及其制剂对稻叶蝴的毒 力与防治效果未见报道。
[0004] 可湿性粉剂是一种最基本的农药剂型，可制成悬浊液，进行喷雾。杀虫真菌可湿性 粉剂是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性剂和填充料，通过过筛制成。由于真菌孢子 活性受润湿剂的影响，制剂中往往减少表面活性剂的用量，导致湿润分散效果差，同时产品 贮存期仍较短，防效受紫外影响大。因此，筛选驯化高毒力菌株和研制湿润分散特性良好、 防效稳定的真菌杀虫剂可湿性粉剂，延长其贮存稳定性，从而促进真菌杀虫剂在防治稻叶 蝉中的应用，有利于减少水稻生产中化学农药的用量。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一目的在于提供一种金龟子绿僵菌菌株在杀稻叶蝉中的应用。
[0006] 本发明第二目的在于提供一种金龟子绿僵菌制剂，该制剂耐紫外照射、保存期长、 防效好。
[0007] 本发明第三目的在于提供一种增强金龟子绿僵菌毒力，而不影响其产孢和耐热特 性和对稻纵卷叶螟的毒力的方法。
[0008] 本发明目的是通过如下技术方案实现的： 金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备预防或防治稻叶蝉的药剂中的应用，该菌株对稻叶 蝉具有侵染作用，致死率可达到56. 9%。
[0009] 不同的绿僵菌菌株对不同的虫害有防治作用，如公开报道：金龟子绿僵菌 FI-1045菌株能侵染甘鹿赂螬（Anoplophoraglabripennis)，金龟子绿僵菌AESALQ818菌 株能侵染埃及斑蚊（Aedesaegypti)，金龟子绿僵菌EAMb09/01-Su菌株能侵染地中海果 实幡，金龟子绿僵菌H3RL526菌株能侵染萝卜财（Lipaphiserysimi)，金龟子绿僵菌M2菌 株能侵染螺旋粉虱（AleurodicusdispersusRussell)，金龟子绿僵菌ICIPE-30菌株能侵 染冈比亚按蚊（anophelesgambiae)，金龟子绿僵菌ESC1菌株能侵染白蚁，金龟子绿僵 菌ATCC62146能侵染甜菜根蛆（sugarbeetrootmaggot)，金龟子绿僵菌M105菌株能侵 染虫皇虫，金龟子绿僵菌广谱菌株F-52能侵染赂螬（Anoplophoraglabripennis)、核桃象 甲、光滑足距小蠹（Xylosandrusgermanus)，金龟子绿僵菌广谱菌株549能侵染烟草天蛾 (Manducasexta)、埃及斑蚊（Aedesaegypti)，罗伯茨绿僵菌广谱菌株ARSEF23能侵染虫皇 虫、鳞翅目幼虫、甲虫等。
[0010] 优选地，上述防治稻叶蝉的药剂由绿僵菌CQMa421干孢子粉35-52%、硅藻土 40-50%、纳米硅1-2%、羧甲基纤维素钠3-5%、0-30 2-4%和HEL-40 2-4%组成，均以重量百 分比。
[0011] -种金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由娃藻土 40-50%、纳米娃1-2%、羧甲基 纤维素钠3-5%、0-30 2-4%、HEL-40 2-4%和绿僵菌CQMa421干孢子粉35-52%组成，均以重 量百分比。
[0012] 上述各组分均为本领域明确的组分，0-30为平平加-30 (脂肪醇聚氧乙烯醚)， HEL-40为氢化蓖麻油与环氧乙烷缩合物，绿僵菌CQMa421在中国专利CN102212483中公开、 该菌株于2011年02月25日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保 藏、保藏编号：CGMCCN0. 4609 ;纳米娃为粒径为纳米级的娃等。
[0013] 上述0-30和HEL-40优选纯度>95%的0-30和HEL-40;上述羧甲基纤维素钠 (CMC)优选纯度大于95% ;上述硅藻土优选为白色至浅褐色疏松粉末，纯度大于85%，含水量 小于1% ;上述纳米硅优选为粒径小于50nm。上述绿僵菌CQMa421干孢子粉为纯孢子粉，含 孢量多150亿孢子/克，含水量< 5% ;以上均以质量百分含量计。
[0014] 上述金龟子绿僵菌制剂中纳米娃为惰性材料，通过疏水作用附着在真菌孢子疏水 表面，有效阻隔了制剂中高浓度（2-4wt%) 0-30和HEL-40的不良影响，有效保证了孢子的 生物活性。
[0015] 进一步优选地，本发明金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由娃藻土 40-45%、纳 米硅1.3-1.7%、羧甲基纤维素钠3-5%、〇-30 2-4%、冊1-40 2-4%和绿僵菌0〇1&1421干孢子 粉40-50%组成，均以重量百分比。
[0016] 上述绿僵菌CQMa421干孢子粉优选采用强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉，所 述强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：将金龟子绿僵菌CQMa421接种于 稻叶蝉幼虫，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的稻叶蝉，放入 28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜孢子，如上所述循 环接种14次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下，用接种环挑取 驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨苄青霉素的1/4SDA培养基平板上划线；将划线好 的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3-4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌 落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28°C恒温培养 10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌CQMa421母种，将CQMa421菌株母种接种在1/4SDA平 板上，28°C培养15天，收集成熟分生孢子制得绿僵菌CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龟子绿僵菌制剂的制备方法，是先将绿僵菌CQMa421干孢子粉和纳米硅在 混合机中混匀，再依次加入硅藻土、羧甲基纤维素钠、0-30 2-4%和HEL-40 2-4%，边加入边 搅拌，直至各组分完全混合均匀制得。
[0018] 一种增强金龟子绿僵菌毒力的方法，其特征在于：将金龟子绿僵菌CQMa421循环 接种于稻叶蝉2-3龄幼虫，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的 稻叶蝉，放入28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜孢 子，如上所述循环接种14次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下， 用接种环挑取驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨节青霉素的1/4SDA培养基平板上 划线，将划线好的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3 - 4日后挑选长出的典型而无杂 菌的菌落，在菌落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转