入试管斜面培养基中央， 28°C恒温培养10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌CQMa421母种。
[0019] 采用本发明增强毒力的方法驯化后的强毒力金龟子绿僵菌CQMa421菌株，对稻叶 蝉致死率可提高43. 1%、达到100% ;致死中时（LT5CI)为4. 0天，缩短48. 7%，效果非常突出。
[0020] 本发明具有如下的有益效果： 本发明金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治稻叶蝉的药剂中的应用，该菌株能侵染 稻叶蝉，致死率可达到56. 9%，采用本发明增强毒力的方法制得的金龟子绿僵菌CQMa421菌 株，其致死率可达到100%，提高43. 1%，LT5(I缩短48. 7%，效果非常突出。本发明金龟子绿僵 菌制剂中各成分的有效配合、起到了协同增效作用，采用本发明金龟子绿僵菌制剂兑水喷 雾，对稻叶蝉的田间防效达到80%以上，该制剂具有良好的润湿分散特性、润湿时间< 60s， 且保持了长期储存中的生物活性，贮存时间可达12个月，非常适于规模化生产和大面积推 广使用。
【具体实施方式】
[0021] 下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用 于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，在不背离本发明精神 和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0022] 若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0023] 实施例1CQMa421菌株经接种稻叶蝉驯化后的毒力、产孢特性与耐热特性 将CQMa421菌株接种在1/4SDA平板上，28°C培15天，收集成熟分生孢子，用0. 05%(W/V)吐温-80分散，配制成终浓度为1X107个孢子/ml的悬浮液。将室内饲养的稻叶蝉转入 长有麦苗的500ml三角瓶中，每瓶30-50只稻叶蝉，采用喷雾塔（POTTER，BURKARD公司）喷 雾接种，接种5瓶，每瓶接种0. 5ml。接种后在室温28°C，湿度50-70%的生侧室中。选择最 先感病死亡的稻叶蝉僵虫，放入28°C培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜 孢子，收集孢子；如上述接种稻叶蝉12-14次进行驯化。在无菌条件下，用接种环挑取驯化 后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨苄青霉素的1/4SDA培养基平板上划线；将划线好的培 养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3 - 4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌落边 缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28°C恒温培养10-15 天。驯化后的菌株按上述方法培养分生孢子，测定其对稻叶蝉毒力。按上述方法配制孢悬 液，采用点滴法接种2-3龄稻纵卷叶螟幼虫，每头试虫用微量点样器点滴药剂2y1，接种50 头，接种后在室温28°C，湿度50-70%的条件下饲养。以驯化前菌株为对照。重复3次，记录 死虫数，计算累计死亡率，用SPSS软件进行统计分析。
[0024] 产孢特性：取配置好CQMa421的孢子悬浮液100W接种在1/4SDA平板上，在28°C 温度的培养条件下培养15天，用直径为lcm的打孔器随机打取5个菌块，投入装有50ml 的0.05% (W/V)吐温-80的三角瓶中分散，利用血球计数板测定孢子浓度，计算单位面积上 的产孢量(孢子数/cm2)，以驯化前菌株为对照，设3次重复。用SPSS软件进行统计分析。
[0025] 耐热特性：取配置好CQMa421的孢子悬浮液。分别在50°C下分别处理5小时，各 取100W接种在1/4SDA平板上，在28°C温度下培养。设未热处理的分生孢子悬液为对照。 每一处理设三个重复。24小时后，显微镜镜检，数200-300个孢子，记录萌发的孢子数，计算 萌发率。以驯化前菌株为对照，设3次重复。用SPSS软件进行统计分析。
[0026] 表1CQMa421菌株经接种稻叶蝉驯化后的毒力、产孢特性与耐热特性
【主权项】
1. 金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治稻叶蝉的药剂中的应用。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述防治稻叶蝉的药剂由绿僵菌CQMa421 干孢子粉35-52%、硅藻土 40-50%、纳米硅1-2%、羧甲基纤维素钠3-5%、0-30 2-4%和 HEL-40 2-4%组成，均以重量百分比。
3. -种金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由硅藻土 40-50%、纳米硅1-2%、羧甲基纤 维素钠3-5%、0-30 2-4%、HEL-40 2-4%和绿僵菌CQMa421干孢子粉35-52%组成，均以重量 百分比。
4. 如权利要求3所述的金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：所述0-30为平平加-30 (脂 肪醇聚氧乙烯醚)，HEL-40为氢化蓖麻油与环氧乙烷缩合物，；所述羧甲基纤维素钠为纯度 大于95% ;所述硅藻土为白色至浅褐色疏松粉末，纯度大于85%、含水量小于1% ;所述纳米硅 的粒径小于50nm ;所述绿僵菌CQMa421干孢子粉为纯孢子粉，含孢量多150亿孢子/克、含 水量< 5% ;以上均以质量百分含量计。
5. 如权利要求3或4所述金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：它是由硅藻土 40-45%、纳米 硅1.3-1.7%、羧甲基纤维素钠3-5%、〇-30 2-4%、冊1-40 2-4%和绿僵菌0〇1&1421干孢子粉 40-50%组成，均以重量百分比。
6. 如权利要求3、4或5所述金龟子绿僵菌制剂，其特征在于：所述绿僵菌CQMa421干 孢子粉为强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉，所述强毒力金龟子绿僵菌CQMa421孢子粉 由以下方法得到：将金龟子绿僵菌CQMa421接种于稻叶蝉成虫，接种后在28°C、湿度50-70% 的条件下饲养，将最先感病死亡的稻叶蝉，放入28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5 天，使其昆虫表面生长出新鲜孢子，如上所述循环接种14次得到驯化后的金龟子绿僵菌 CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下，用接种环挑取驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升 氨苄青霉素的1/4SDA培养基平板上划线；将划线好的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培 养；3 - 4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养 基一小块，转入试管斜面培养基中央，28°C恒温培养10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌 CQMa421母种，将CQMa421菌株母种接种在1/4SDA平板上，28°C培养15天，收集成熟分生孢 子制得绿僵菌CQMa421干孢子粉。
7. -种增强金龟子绿僵菌毒力的方法，其特征在于：将金龟子绿僵菌CQMa421接种于 稻叶蝉成虫，接种后在28°C、湿度50-70%的条件下饲养，将最先感病死亡的稻叶蝉，放入 28°C、湿度为50-70%培养箱中保湿培养3-5天，使其昆虫表面生长出新鲜孢子，如上所述循 环接种14次得到驯化后的金龟子绿僵菌CQMa421新鲜孢子；在无菌条件下，用接种环挑取 驯化后新鲜孢子在含有100微克/毫升氨苄青霉素的1/4SDA培养基平板上划线，将划线好 的培养皿翻转放置于28°C恒温箱中培养；3 - 4日后挑选长出的典型而无杂菌的菌落，在菌 落边缘用移菌针挑取带有菌丝的培养基一小块，转入试管斜面培养基中央，28°C恒温培养 10-15天得到强毒力的金龟子绿僵菌CQMa421母种。
【专利摘要】金龟子绿僵菌CQMa421菌株在制备防治稻叶蝉的药剂中的应用。本发明金龟子绿僵菌CQMa421菌株能侵染稻叶蝉，致死率可达到56.9%，采用本发明增强毒力的方法制得的金龟子绿僵菌CQMa421菌株，其致死率可达到100%，致死中时（LT50）缩短48.7%，效果非常突出。本发明金龟子绿僵菌制剂中各成分的有效配合、起到了协同增效作用，采用本发明金龟子绿僵菌制剂兑水喷雾，对稻叶蝉的田间防效达到80%以上，该制剂具有良好的抗紫外和润湿分散特性，且在储存、应用中有效保证了孢子的生物活性和防治效果，贮存时间长达12个月以上。CGMCC NO.460920110225
【IPC分类】A01N63-04, C12N1-14, C12R1-645, A01P7-04
【公开号】CN104745484
【申请号】CN201510084188
【发明人】夏玉先, 彭国雄
【申请人】重庆聚立信生物工程有限公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年2月16日