专利名称：一类新颖的十字孢碱类似物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新颖的十字孢碱(Staurosporine)类似物及其制备方法和用途。 本发明用从中国海南三亚红树林的土壤样品中分离得到的链霉菌(Sti^ptomyces sp.) FMA,生产出结构新颖的上述类型的化合物。经体外细胞毒活性测试证实，此类化合物对白 血病细胞HL-60和肺癌细胞A549具有细胞毒活性，可作为细胞增殖抑制剂。
背景技术：
癌症是当今危害人类健康的主要疾病之一，严重威胁着人类的生命。世界卫 生组织报告，1996年因癌症死亡的人数占总死亡人数近12%，近20年间恶性肿瘤在死 因中构成比已由 12. 6%升至 17.9% (Janos B. , Bioactive microbial metabolites, J. Antibiot. 2005,58(1) :1_26)。在癌症治疗中，化学治疗成为了重要方法之一，特别是 对白血病、恶性淋巴瘤等具有较好的疗效；但传统的细胞毒类药物对于恶性实体瘤存在疗 效差、毒副作用大、易产生耐药性等问题，目前尚未有理想的治疗药物。因此各研究机构 及制药公司对针对细胞受体、关键基因和调控分子的分子靶向药物高度关注，特别是多靶 点联合阻断细胞信号传导的药物开发成为抗肿瘤药物新的发展方向。1977年，Furusaki 等人在一株曲霉Staurosporeus AM-2282 (ATCC 55006)中分离得到了第一个吲哚咔唑类 (indolecarbazole)生物碱，并通过Χ-ray确定了其结构为具有6，7_位骈有2_酮-吡咯 烷的吲哚咔唑母环结构以及一个吡喃糖环，该糖环通过碳氮键连接在母环的1-位和12-位 N 上。(Omura S.，Sasaki Y.，Iwai Y.，Takeshima H，Staurosporine, a potentially important gift from a microorganism, J. Antibiot. 1995,48 (7) :535_548.)。口引哚咔 唑类生物碱具有抗真菌、抗细菌、抑制蛋白激酶C、抑制血小板凝集以及抗肿瘤作用等多 种药理活性，其良好的蛋白激酶C(PKC)抑制活性及抗肿瘤活性是研究和报道的热点。在 过去的30年里，人们从不同的天然来源中分离得到了大量的吲哚咔唑类生物碱，并且已 经形成了具有广阔前景的一系列天然活性产物，其代表性的化合物有Aebeccamycins， Staurosporines, Acyriaflavins, tjipanazoles, K-252 系列，ΑΤ2433 系列等(Sanchez C, Mendez C, Salas J. A, Indolocarbazole natural products !occurrence, biosynthesis, and biological activity. Nat. Prod. Rep. 2006, 23 (6) : 1007-1045.)。目前已有 6 种吲哚 咔唑生物碱类PKC抑制剂进入了 I-III期临床研究，其中Lestaurtinib (Cephalon公司)已 被FDA于2006年4月核准作为孤儿药(患者人数少于20万人或盛行率小于万分之一)，用 于治疗急性骨髓性白血病(AML)，表明此类化合物具有广阔的成药前景(Clinical Trials, gov (a service ofthe US National Institutes of Health). Available at http:// clinicaltrials. gov ；Further information available at http://www. cephalon. com ； Undevia S.D.，Vogelzang N. J.，et al，Phase I clinical trial of CEP-2563 dihydro chloride,a receptor tyrosine kinase inhibitor，inpatients with refractory solid tumors. Invest. New Drugs，2004，22，449-458.)。本发明人从一株分离自海南三亚红树林 土壤样品的链霉菌Str印tomyces sp. FMA的发酵物中发现2个结构新颖的糖环为2，4-双苷
3化的吲哚咔唑生物碱，其对白血病细胞HL-60和肺癌细胞A549具有细胞毒活性，可作为细 胞增殖抑制剂。目前尚未见任何对这2个化合物的化学结构及细胞增殖抑制活性的报道， 因此市场上也尚未见有与此有关的药物。
发明内容
本发明旨在提供一类结构独特的、2-脱氧糖环为2，4-双苷化的具有细胞毒活性 的吲哚咔唑类生物碱。本发明的目的还在于提供这类新化合物的制备方法及其在制备细胞增殖抑制剂 中的用途。本发明首次从链霉菌Str印tomyces sp. FMA的发酵物中发现了一类具有细胞毒活 性的吲哚咔唑类生物碱，如式I所示
权利要求
一类新颖的十字孢碱类似物，其特征在于结构为式I其中R1～R8、X1、X2和M均可代表 H、 OH、 OMe、 NH2、 NO2、 F、 Cl、 Br、 I。G代表 H、 (CH2)nOY、 (CH2)nNH2、 (CH2)nAr(Y＝ H、Glycosyl、amino acids，n＝1 4)。X1、X2为 H、 OH、＝O。FSA00000122582800011.tif
2.权利要求1所述的式I化合物前药形式，如磷酸酯、氨基甲酸酯等，当以这种形式给 药时，其在体内转变为活性形式起效。
3.权利要求1所述的式I的2个天然产物——化合物1，其中R1 R8= -H，G = H, X1 X2 = -H，M = -0H,化合物 2，其中 R1 R8 = -H，G = H，X1 X2 = -H，M = -H，结构式 分别为
4.权利要求3所述的式I化合物的制备方法，其特征是液体发酵培养链霉菌 Streptomyces sp. FMA，获取含有上述式I化合物的发酵物，然后从发酵物中分离纯化出式 I化合物1和化合物2。
5.权利要求4所述的制备方法，将所述发酵物过滤后分为发酵液和菌丝体；发酵液部 分直接用等量乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，减压浓缩至干，得到发酵液的乙酸乙酯提取 物。菌丝体用80%丙酮水溶液超声破碎提取3次，合并提取液，减压浓缩至不含丙酮后，用 等量乙酸乙酯萃取三次，减压浓缩至干，得到菌丝体的乙酸乙酯萃取物。将发酵液和菌丝体 的乙酸乙酯提取物合并后得到总浸膏后，利用减压硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱色谱和 RP-18反相硅胶柱色谱，最后经HPLC分离纯化(甲醇-水65 35)洗脱得式I化合物1和 2。
6.权利要求5所述的式I化合物的微生物制备方法，其特征是以16SrRNA基因序列如 GenBank中登陆号为FJ261967的微生物菌株，通过发酵法制备。
7.权利要求1所述的式I化合物在制备细胞增殖抑制剂的用途。
8.权利要求1所述的式I化合物在制备细胞增殖药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一类新颖的十字孢碱类似物及其制备方法和用途。本发明用从中国海南三亚红树林的土壤样品中分离得到的链霉菌FMA(Streptomyces sp.FMA，菌种保藏编号CCTCC M 2010021)生产出2个结构新颖的上述类型的化合物。经体外细胞毒活性测试证实，该类化合物对白血病细胞HL-60和肺癌细胞A549具有细胞毒活性，可作为细胞增殖抑制剂。
文档编号C07D491/22GK101948472SQ201010185370
公开日2011年1月19日 申请日期2010年5月20日 优先权日2010年5月20日
发明者徐小雄, 朱伟明, 杨春丽, 林海鹏, 洪葵, 王乂, 隋金蕾 申请人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所;中国海洋大学