专利名称：一种双标记2-NP-AHD-(<sup>13</sup>C,<sup>15</sup>N<sub>2</sub>)的合成方法
技术领域：
本发明涉及稳定同位素标记的有机化合物的制备方法，尤其是涉及一种双标记 2-NP-AHD- (13C, 15N2)的合成方法。
背景技术：
呋喃妥因是硝基呋喃类抗菌药物，主要用于肾炎、肾盂炎、膀胱炎、尿道炎等。由于价格低廉，所以应用广泛。但是其具有潜在致癌和诱导有机体产生突变的性质。出于安全性考虑，世界上绝大多数国家包括中国、欧盟、美国等规定在动物食用组织中不允许有硝基呋喃类兽药的残留。如欧盟已于1995年禁止在食用动物中使用硝基呋喃类抗生素，并将其列为A类禁用药物(EEC/1442/95和EEC/^901/93)，我国也于2002年颁布了禁止使用硝基呋喃类兽药的禁令。呋喃妥因在动物体内代谢速度快，半衰期短，难以检出原药残留。代谢产物可稳定存在数月，所以残留检测以代谢物作为指示该类药物残留的标识物。呋喃妥因的代谢物为 AHD(1-氨基海因)。为了使化合物在高噪音背景下，增加特征碎片离子的选择性，提高质谱响应及其灵敏度，必须增加分子质量，所以采用2-硝基苯甲醛衍生化氨基增加代谢物的离子化效率。为了避免由于食品复杂的基质效应、前处理和质谱检测器等因素对分析方法测定结果的影响，大部分兽药残留检测方法均使用同位素内标，有效的校正了方法中出现的误差，显著提高了检测方法的稳定性。双标记2-NP-AHD-(13CZ5N2)作为同位素内标物可以有效而且准确的检测呋喃妥因的代谢物。目前，合成 AHD 的方法有 Norwich 制药公司(Brit. Patent 757822 to Norwich Pharmacal Company, 1954)以水合胼为原料制备，不足之处在于该法使用过量6倍的有毒水合胼，对环境和人体带来了严重的危害，收率也只有35 40% ；张瑞仁等(张瑞仁，王旭， 王桂艳.1-氨基乙内酰脲的合成工艺改进[J].黑龙江医药科学.2006 59)采用水合胼为原料，使用丙酮做保护基团，操作简单，不足之处在于收率偏低(49%)。我们采用以双标记氨基脲_(13C，^N2)为原料，用苯甲醛对碱性较强的水合胼的两个活泼氢加以保护，再与氯乙酸酯类化合物进行缩合反应，再用盐酸水解，反应液直接和2-硝基苯甲醛反应，即可得到双标记2-NP-AHD-(13CN2)。该方法操作简单，并且不需要提纯AHD，直接参与下一步反应，提高收率至62%，并且同位素丰度不下降。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可以有效而且准确的检测呋喃妥因的代谢物AHD，提供了一种方法简单、可行并适合批量生产的双标记 2-NP-AHD-(13C, 15N2)内标物的有机合成方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现一种双标记2-NP-AHD_(13C，15N2)的合成方法，其特征在于，该方法以双标记氨基脲_(13C，15N2)为原料，经过和苯甲醛反应，对碱性较强的水合胼的两个活泼氢加以保护，再与氯乙酸酯类化合物进行缩合反应，再用盐酸水解，反应液直接和2-硝基苯甲醛反应，即可得到双标记2-NP-AHD-(1VZ5N2)。反应路线如下
权利要求
1.一种双标记2-NP-AHD-(13CZ5N2)的合成方法，其特征在于，该方法以双标记氨基脲_(13C，15N2)为原料，经过和苯甲醛反应，对碱性较强的水合胼的两个活泼氢加以保护，再与氯乙酸酯类化合物进行缩合反应，再用盐酸水解，反应液直接和2-硝基苯甲醛反应，即可得到双标记2-NP-AHD-(1VZ5N2)。
2.根据权利要求1所述的一种双标记2-NP-AHD-("C，15N2)的合成方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤(1)将双标记氨基脲_(13C，15N2)溶于水溶液中，滴加到苯甲醛的乙醇溶液中，水浴反应后过滤，得到无色固体苯亚甲基缩氨基脲-C3c，1X)；(2)将苯亚甲基缩氨基脲_(13C，15N2)置于三口瓶中，加入等摩尔量的乙醇钠，加热至溶解，滴加氯乙酸酯类化合物，反应液回流lOmin，滴加乙醇钠，2min后滴加氯乙酸酯类化合物，反应lOmin，然后重复操作一次，反应回流，结束后浓缩至干，加入lmol/L HCl，过滤收集无色不溶固体，用DMF重结晶，可得无色晶体苯亚甲基氨基海因_(13C，1X)纯品；(3)将苯亚甲基氨基海因_(13C，1X)加入2 12mol/LHCl中水解，加热回流反应3 8小时；(4)在上述反应液中加入2-硝基苯甲醛，控制反应温度为40 80°C反应1 3小时， 冷却后过滤，用乙醇和少量水洗杂，无色固体真空干燥4小时，即得双标记2-NP-AHD-(13C，15N2)。
3.根据权利要求2所述的一种双标记2-NP-AHD-("C，15N2)的合成方法，其特征在于，步骤⑴中所述的双标记氨基脲_(13C，D与苯甲醛的摩尔比为1 2 ；水浴反应的反应温度为40 80°C ；反应时间为1 3小时。
4.根据权利要求2所述的一种双标记2-NP-AHD-("C，15N2)的合成方法，其特征在于，步骤⑴中所述的双标记氨基脲_(13C，15N2)与苯甲醛的摩尔比为1. 2 1. 5 ；水浴反应的反应温度为50 60°C ；反应时间为2小时。
5.根据权利要求2所述的一种双标记Z-NP-AHD-(13CZX)的合成方法，其特征在于， 步骤O)中所述的苯亚甲基缩氨基脲_(13c，1Xh乙醇钠与氯乙酸酯类化合物的摩尔比为 1:2: 1，加入方式为苯亚甲基缩氨基脲-(13C，15N2)与乙醇钠摩尔比1 1反应，接着加入 0. 5倍苯亚甲基缩氨基脲_(13C，15N2)摩尔数的氯乙酸酯类化合物，反应IOmin后加入0. 5倍苯亚甲基缩氨基脲-(1 ,1 )摩尔数的乙醇钠和0. 25倍的氯乙酸酯类化合物，反应IOmin 后重复操作一次，总的反应温度为40 100°C，反应时间为1 3小时。
6.根据权利要求2所述的一种双标记Z-NP-AHD-(13CZX)的合成方法，其特征在于， 步骤O)中所述的苯亚甲基缩氨基脲_(13c，1Xh乙醇钠与氯乙酸酯类化合物的摩尔比为 1:2: 1，加入方式为苯亚甲基缩氨基脲-(13C，15N2)与乙醇钠摩尔比1 1反应，接着加入 0. 5倍苯亚甲基缩氨基脲_(13C，15N2)摩尔数的氯乙酸酯类化合物，反应IOmin后加入0. 5倍苯亚甲基缩氨基脲-(1 ,1 )摩尔数的乙醇钠和0. 25倍的氯乙酸酯类化合物，反应IOmin 后重复操作一次，总的反应温度为70 80°C，反应时间为2小时。
7.根据权利要求2所述的一种双标记2-NP-AHD-("C，15N2)的合成方法，其特征在于，所述的氯乙酸酯类化合物为氯乙酸乙酯或氯乙酸甲酯。
8.根据权利要求2所述的一种双标记2-NP-AHD-("C，15N2)的合成方法，其特征在于，步骤(3)中所述的HCl浓度为6mol/L，水解时间为5小时。
9.根据权利要求2所述的一种双标记2-NP-AHD-("C，15N2)的合成方法，其特征在于，步骤⑷中所述的2-硝基苯甲醛与苯亚甲基氨基海因-(13CZ5N2)的摩尔比为1 1. 5。
10.根据权利要求2所述的一种双标记Z-NP-AHD-Cc/^g的合成方法，其特征在于， 步骤⑷中所述的反应温度为50 60°C，反应时间为2小时。
11.根据权利要求2所述的一种双标记Z-NP-AHD-Cc/^g的合成方法，其特征在于， 所述的乙醇钠为乙醇钠的无水乙醇溶液，无水乙醇是将乙醇先用活化的4A分子筛脱水，然后加入镁条和碘进行回流，最后重蒸出乙醇即为无水乙醇。
全文摘要
本发明涉及一种双标记2-NP-AHD-(13C，15N2)的合成方法，以双标记氨基脲-(13C，15N2)为原料，经过和苯甲醛反应，对碱性较强的水合肼的两个活泼氢加以保护，再与氯乙酸酯类化合物进行缩合反应，再用盐酸水解，反应液直接和2-硝基苯甲醛反应，即可得到双标记2-NP-AHD-(13C，15N2)。与现有技术相比，本发明提供了一种方法简单、可行并适合批量生产的双标记2-NP-AHD-(13C，15N2)内标物的有机合成方法，可以有效而且准确的检测呋喃妥因的代谢物AHD。
文档编号C07D233/80GK102336713SQ20111020220
公开日2012年2月1日 申请日期2011年7月19日 优先权日2011年7月19日
发明者张彰, 徐建飞, 杜晓宁, 王伟 申请人:上海化工研究院