基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒的制作方法

本实用新型涉及一种胃蛋白酶原(PG)磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，属于免疫检测分析技术和纳米生物技术领域

背景技术：

胃蛋白酶原(Pesinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，人胃蛋白酶原可分为两种生化和免疫活性特征不同的胃蛋白酶原群：胃蛋白酶原Ⅰ(简称PGⅠ)和胃蛋白酶原II(简称PGII)，PGⅠ主要由胃底腺的主细胞和颈黏液细胞分泌，大部分进入胃腔，少量进入血液循环，PGII来源于全胃腺和远端十二指肠Brunner氏腺，胃粘膜合成的PGII约为总量的25％。PGII大部分进入消化道，少量进入血液循环，因此PG被称为“反映胃部状态和功能的指针”，其水平的变化可以直接反映胃粘膜和十二指肠状态和细胞数量的改变。国内外临床研究指出，PG与胃底粘膜病变的相关性较大，测定PG含量有助检测出十二指肠溃疡、萎缩性胃炎，胃炎，胃癌等其他消化道疾病，供临床检测和体检筛查需要，PG检测作为非侵入性方法，降低患者痛苦，简便、经济、具有普查价值。

胃蛋白酶原(PG)对胃部疾病的发展历程，一般可表述为：浅表性胃炎—胃粘膜糜烂溃疡—萎缩性胃炎—胃癌，及其它疾病具有良好的诊断和筛选作用。胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ检测试纸盒用于检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ的含量，具有简便、快速的优势，避免了X-射线对人体的侵害和胃镜的不便；但现有技术中的胃蛋白酶原检测试纸盒都为单一检测盒，即只能单独单次对胃蛋白酶原I或胃蛋白酶原II进行检测，而在实际操作中，有时候需要检测同一样品液体中的胃蛋白酶原I和II，以获得同一样品液体中的胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的含量之比或二者的其他比值PGI/PGII，如果PGI/PGII比值低于6，则萎缩性胃炎和胃癌的风险增加，若采用胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II单独的检测，在检测过程中难免会有误差，若胃蛋白酶原I产生一个正的误差，胃蛋白酶原II产生一个负的误差，在计算PGI/PGII比值时会出现误差放大的情况，将会导致胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II的检测所得比值与实际比值存在误差，致使结果不准确。

对于胃蛋白酶原的检测，目前临床常用的方法包括：乳胶增强免疫比浊法、酶联免疫法(ELISA)、化学发光法(CLIA)以及时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)。乳胶增强免疫比浊法，操作简单，可以全自动化，但是，其灵敏度不高，无法实现精确定量；ELISA法和TRFIA法虽然能够准确定量，但操作过程复杂，且不适合单人份和较小批量检测使用。CLIA法以进口试剂为主，成本较高，技术成熟度在国内相对弱。

时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是继放射免疫分析之后标记物发展的一个新里程碑，已成为生物医学研究和临床超微量生化检验中一项最有发展前景的分析手段。TRFIA以稀土离子作为标记物，具有制备简单、存储时间长、无放射性污染、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰和应用范围广泛等优点。时间分辨双标记技术是利用不同镧系离子间的荧光波长和荧光衰变时间不同，用两种镧系元素分别标记不同的抗体，来检测不同的抗原，该方法能省时、省工、省试剂和样品，具有经济和高效等突出优点。特别适用于多项目的联合筛查实验和一些珍贵样品的检测，是标记免疫学分析的发展方向。镧系元素中Eu3+和Sm3+是常用于双重标记分析的两个镧系离子，均能利用β-NTA螯合剂进行解离和增强荧光强度。Eu3+和Sm3+的最大发射波长分别为615nm和643nm，由于窄峰发射，能够充分分辨。而且两者荧光寿命相差显著，分别为820μs和88μs，检测时彼此的干扰比较小。TRFIA是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，相对于后两者化学发光免疫技术具有高灵敏度、高特异性，操作简便、快速，标记结合物稳定，同时无放射性同位素损伤和污染等特点，因此近年来在临床检测分析中被广泛推广使用。现有技术中配套设置的时间分辨荧光免疫分析的检测试剂盒，都是采用将各种试剂瓶、盛装抗体的试剂瓶和微孔板简单收纳的方式将其放入试剂盒内部，对试剂盒不进行任何的辅助设置。但是，对于上述检测试剂盒而言，试剂盒内的试剂瓶、和微孔板在运输过程中容易发生错位和相互碰撞，不仅不利于试剂盒内试剂、抗体和微孔板保存，而且摩擦或碰撞过程中可能导致试剂瓶、抗体瓶和微孔板的外壳发生磨损，使得试剂瓶产生裂痕或发生破裂，导致试剂瓶内的有效物质流淌到瓶外发生混合，或试剂瓶内进入空气影响试剂或抗体的质量，进而使得试剂盒内试剂盒内试剂、抗体或微孔板失效。

为此，本实用新型提供了一种基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，通过在试剂盒内部设置辅助装置，重新收纳试剂瓶、盛装抗体的试剂瓶、微孔板，避免试剂盒内的试剂瓶和微孔板在运输过程中容易发生错位和相互碰撞，使得试剂盒内的试剂、抗体保存完好，且稳定性高，同时具有方便使用、操作简单的优势。

技术实现要素：

因此，本实用新型要解决的技术问题在于提供一种方便使用、操作简单、稳定性好且检测更加准确可靠、灵敏度和特异性灵敏度高的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

为此，本实用新型提供了一种基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其包括盒体，与所述盒体相连接的用于对所述盒体进行封闭的盒盖，所述盒体底部设有第一固定板，所述第一固定板上设置有分别竖直放置有增强液试剂瓶、浓缩清洗液试剂瓶和反应缓冲液试剂瓶的大小适配的多个第一凹槽，以及分别竖直放置有包被PG单克隆抗体的磁微粒试剂瓶、PG的校准品试剂瓶、铕标记PGⅠ单抗溶液试剂瓶和钐标记的PGII单抗溶液试剂瓶的大小适配的多个第二凹槽；位于所述盒体内腔的下方设有抽屉，所述抽屉内容置有微孔板。

所述的试剂盒，所述抽屉内设置有第二固定板，所述第二固定板上设有水平放置有所述微孔板的第三凹槽。

所述的试剂盒，所述抽屉的拉板上设置有把手。

所述的试剂盒，所述拉板的上边缘通过连接装置与所述盒体连接。

所述的试剂盒，所述抽屉的拉板的上边缘与所述所述盒体等高，所述拉板的上边缘转动连接有卡板，所述卡板可以旋转扣在所述盒体上将所述抽屉固定在所述盒体上。

所述的试剂盒，所述第一凹槽、第二凹槽依次沿所述第一固定板的长度方向排列设置。

所述的试剂盒，所述第一固定板和所述第二固定板上分别设有若干冷却槽，所述冷却槽内置有冰袋。

所述的试剂盒，所述微孔板由可拆式酶标板和放置在其上的酶标条组成。

所述的试剂盒，所述微孔板为透明的96孔板。

所述的试剂盒，所述微孔板具有锡箔袋外包装，在所述锡箔袋外包装内部还设置有干燥剂袋。

上述试剂瓶为市售产品，所述试剂瓶中盛装的反应缓冲液试剂、浓缩清洗液试剂、增强液试剂、包被PG单克隆抗体的磁微粒试剂、若干PG的校准品试剂、铕标记PGⅠ单抗溶液试剂和钐标记的PGII单抗溶液试剂为市售产品，在本实用新型中上述试剂均由江苏省原子医学研究所提供。

本实用新型相比现有技术的技术方案，具有如下优点：

(1)本实用新型所述的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其包括盒体，与所述盒体相连接的用于对所述盒体进行封闭的盒盖，所述盒体底部设有第一固定板，所述第一固定板上设置有分别竖直放置有增强液试剂瓶、浓缩清洗液试剂瓶和反应缓冲液试剂瓶的大小适配的多个第一凹槽，以及分别竖直放置有包被PG单克隆抗体的磁微粒试剂瓶、PG的校准品试剂瓶、铕标记PGⅠ单抗溶液试剂瓶和钐标记的PGII单抗溶液试剂瓶的大小适配的多个第二凹槽；位于所述盒体内腔的下方设有抽屉，所述抽屉内容置有微孔板；通过在所述盒体内设置的第一固定板上设置第一凹槽和第二凹槽，试剂瓶竖直嵌入所述第一凹槽或第二凹槽，不仅固定了试剂瓶，避免试剂瓶在所述盒体内与其他试剂瓶发生碰撞，保证试剂瓶内的试剂或抗体溶液保持完好，且稳定性好，又由于试剂瓶是竖直放置，极大的节省了所述盒体内的空间，使得所述试剂盒内部更加紧凑，缩小了所述试剂盒的体积，便于试剂盒的运输降低了成本，又通过在位于所述盒体内腔的下方设有抽屉，所述抽屉内容置有微孔板，以便于所述微孔板水平放置，不仅保证固定所述微孔板，避免微孔板在所述盒体内与其他试剂瓶发生碰撞，而且还极大的节省了所述盒体内的空间，使得所述试剂盒内部更加紧凑，缩小了所述试剂盒的体积，便于试剂盒的运输降低了成本，综上，本实用新型所述的试剂盒具有方便使用、操作简单、稳定性好，且具有更高的检测灵敏度和特异性，检测结果更加准确可靠，达到了较佳的性能参数；

通过所述基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒进行检测PGⅠ和PGII，由于所述试剂盒中的试剂瓶固定可靠，在运输过程中试剂瓶中的试剂、抗体保持完好，稳定性高，进而能够提供一种接近均相的反应体系，有利于检测的进行，大大缩短反应时间，提高检测灵敏度，大大减少了配对抗体用量以及提高检测的精密度和灵敏度，不超过0.5ng/mL的血清(浆)样本不需要稀释，可以直接检测，操作简单，同时还具有量程宽，样品浓度值介于0.5-100ng/mL的都能准确检测，检测时间短，从样品孵育到检测，约25min完成，样品需求量少，一次上样只需50μL。

(2)本实用新型所述的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，所述抽屉内设置有第二固定板，所述第二固定板上设有水平放置有所述微孔板的第三凹槽，通过将所述微孔板嵌入所述第二固定板中，可以固定所述微孔板，避免所述微孔板在所述抽屉内滑动，与所述盒体内壁发生碰撞，对所述微孔板造成磨损。

(3)本实用新型所述的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，通过在所述抽屉的拉板上设置有把手，便于拉出所述抽屉，方便使用。

(4)本实用新型所述的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，通过将所述第一凹槽、第二凹槽依次沿所述第一固定板的长度方向排列设置，达到了合理的利用所述盒体内部的空间，大大缩小了所述盒体的体积，便于所述试剂盒的运输，降低了成本。

(5)本实用新型所述的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，通过在所述第一固定板和所述第二固定板上分别设有若干冷却槽，所述冷却槽内置有冰袋，可以使得所述试剂盒内的试剂瓶中的试剂、抗体保持在低温状态下，便于保存，提高试剂、抗体的稳定性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本实用新型实施方式中所述的基于PG磁微粒的双时间分辨荧光免疫分析试剂盒结构示意图；

图2为本实用新型实施方式中所述的基于PG磁微粒的双时间分辨荧光免疫分析试剂盒结构示意图；

图3为本实用新型实施方式中所述的第一固定板结构示意图；

图4为本实用新型实施方式中所述的第二固定板结构示意图；

图5为本实用新型实施方式中所述的微孔板结构示意图；

图6为本实用新型实施方式中所述的试剂瓶结构示意图；

图7为本实用新型另一种实施方式中所述的基于PG磁微粒的双时间分辨荧光免疫分析试剂盒结构示意图；

图8为本实用新型实施另一种实施方式中所述的基于PG磁微粒的双时间分辨荧光免疫分析试剂盒结构示意图。

附图标记说明：

1-盒体，2-盒盖，3-第一固定板，4-增强液试剂瓶，5-浓缩清洗液试剂瓶，6-反应缓冲液试剂瓶，7-第一凹槽，8-包被PG单克隆抗体的磁微粒试剂瓶，9-PG的校准品试剂瓶，10-铕标记PGⅠ单抗溶液试剂瓶，11-钐标记的PGII单抗溶液试剂瓶，12-第二凹槽，13-抽屉，14-微孔板，15-第二固定板，16-第三凹槽，17-拉板，18-把手,19-冷却槽，20-卡板。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。

如图1-3、图5-6所示，本实用新型所述的基于PG磁微粒的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其包括盒体1，与所述盒体1相连接的用于对所述盒体1进行封闭的盒盖2，所述盒体1底部设有第一固定板3，所述第一固定板3上设置有分别竖直放置有增强液试剂瓶4、浓缩清洗液试剂瓶5和反应缓冲液试剂瓶6的大小适配的多个第一凹槽7，以及分别竖直放置有包被PG单克隆抗体的磁微粒试剂瓶8、PG的校准品试剂瓶9、铕标记PGⅠ单抗溶液试剂瓶10和钐标记的PGII单抗溶液试剂瓶11的大小适配的多个第二凹槽12；位于所述盒体1内腔的下方设有抽屉13，所述抽屉13内容置有微孔板14。

通过在所述盒体1内设置的第一固定板3上设置第一凹槽7和第二凹槽12，试剂瓶竖直嵌入所述第一凹槽7或第二凹槽12，不仅固定了试剂瓶，避免试剂瓶在所述盒体1内与其他试剂瓶发生碰撞，保证试剂瓶内的试剂、抗体保持完好、稳定，又由于试剂瓶是竖直放置，极大的节省了所述盒体1内的空间，使得所述试剂盒内部更加紧凑，缩小了所述试剂盒的体积，便于试剂盒的运输降低了成本，又通过在位于所述盒体1内腔的下方设有抽屉13，所述抽屉13内容置有微孔板14，以便于所述微孔板14水平放置，不仅保证固定所述微孔板14，避免所述微孔板14在所述盒体1内与其他试剂瓶发生碰撞，而且还极大的节省了所述盒体1内的空间，使得所述试剂盒内部更加紧凑，缩小了所述试剂盒的体积，便于试剂盒的运输降低了成本，综上，本实用新型所述的试剂盒具有方便使用、操作简单、稳定性好，且具有更高的检测灵敏度和特异性，检测结果更加准确可靠，达到了较佳的性能参数。

进一步的，如图2、图4所示，所述抽屉13内设置有第二固定板15，所述第二固定板15上设有水平放置有所述微孔板14的第三凹槽16，通过将所述微孔板14嵌入所述第二固定板15中，可以固定所述微孔板14，避免所述微孔板14在所述抽屉13内滑动，与所述盒体1内壁发生碰撞，对所述微孔板14造成磨损，而且还极大的节省了所述盒体1内的空间，使得所述试剂盒内部更加紧凑，缩小了所述试剂盒的体积，便于试剂盒的运输降低了成本。

进一步的，如图1所示，所述抽屉13的拉板17上设置有把手18。通过在所述抽屉13的拉板17上设置的把手18，可以方便拉出所述抽屉13，将所述微孔板14放入所述抽屉13内，方便使用。

进一步的，所述拉板17的上边缘通过连接装置与所述盒体1连接，可以在所述拉板17的上边缘设置磁性装置，在所述盒体1的对应位置设置所述磁性装置相配合的磁性装置，当所述拉板17的上边缘设置的磁性装置与所述盒体1的对应位置设置的磁性装置接触时，进而可以控制所述抽屉13固定在所述盒体1上，避免在运输过程中，所述抽屉13滑出，损坏所述抽屉13中装的药品试剂。进一步的，如图7-8所示，所述抽屉13的拉板17的上边缘与所述所述盒体1等高，所述拉板17的上边缘转动连接有卡板20，所述卡板20可以旋转扣在所述盒体1上将所述抽屉13固定在所述盒体1上。通过设置所述卡板20，可以将所述抽屉13固定在所述盒体1上，避免在运输过程中，所述抽屉13滑出，损坏所述抽屉13中盛装的药品试剂。

进一步的，如图3所示，所述第一凹槽7、第二凹槽11依次沿所述第一固定板3的长度方向排列设置，达到了合理的利用所述盒体内部的空间，大大缩小了所述盒1的体积，便于所述试剂盒的运输，降低了成本。

进一步的，如图3-4所示，所述第一固定板3和所述第二固定板15上分别设有若干冷却槽19，所述冷却槽19内置有冰袋，可以使得所述试剂盒内的试剂瓶中的试剂、抗体保持在低温状态下，便于保存，提高试剂、抗体的稳定性。

进一步的，所述微孔板14由可拆式酶标板和放置在其上的酶标条组成。

进一步的，所述微孔板14为透明的96孔板。

进一步的，所述微孔板14具有锡箔袋外包装，在所述锡箔袋外包装内部还设置有干燥剂袋。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。