专利名称：一种制备高纯度刺楸皂苷a的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备高纯度刺楸皂苷A的方法，特别是涉及一种应用高速逆流色谱方法制备高纯度刺楸皂苷A的方法。
背景技术：
刺楸皂苷A (kalopanaxsaponin Α)为二糖三萜皂苷，CAS号27013-91-8，分子式 C41H66O12,分子量750，无色针状结晶，熔点^5468°C。具有抗炎、镇痛和抗肿瘤作用。高速逆流色谱技术是一种不用任何同态载体的液、液色谱技术，其原理是基于组分在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而分离，其分离效率和速度可以与HPLC相媲美。HSCCC分离效率高，产品纯度高，不存在载体对样品的吸附和污染， 制备量大和溶剂消耗少，操作简单，能从极复杂的混合物中分离出特定的组分。被广泛应用天然产物分离制备中。现有高纯度刺楸皂苷A，多是采用填充柱色谱制备，如硅胶柱，凝胶柱和制备液相分离。采用硅胶柱和凝胶柱分离，样品损失严重，试剂用量大，重现性差，而制备液相分离， 制备量小。如孙振学在论文“刺楸的化学成分及总皂苷的含量测定研究”公开的方法为采用乙醇提取，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，并两次硅胶柱层析分离，从8kg原料中得到66mg 刺楸皂苷A。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种制备高纯度刺楸皂苷A的方法，方法简便而且收率高。为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案来实现的
一种制备高纯度刺楸皂苷A的方法，其特征在于以刺楸叶为原料，用80-90%甲醇浸泡提取，提取液浓缩，上NK-II大孔树脂分离，甲醇溶液梯度洗脱，洗脱浓缩干燥得浸膏，再采用高速逆流色谱仪两次分离制备，即得到高纯度刺楸皂苷A。所述甲醇溶液梯度洗脱为3-5BV20-30%甲醇溶液洗脱杂质，再用3_5BV50_70%甲醇溶液洗脱目标成分。所述高速逆流色谱溶剂系统可选正丁醇一乙酸乙酯一水溶液系统，比例1-2 5-7 6-8,以上相为流动相，下相为固定相。本发明的积极效果是方法采用高速逆流色谱分离，不仅解决了固体填充柱色谱收率低的技术缺陷，还节约试剂，操作简单，制备量大，是一种高效、快速的制备方法。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1取干燥的刺楸叶粉碎，称量^g，加入8倍量80%甲醇浸泡12小时，浸泡两次，提取液减压回收甲醇，加适量去离子水稀释，上NK-II大孔树脂柱吸附，取5BV20%甲醇溶液洗脱杂质，再用3BV70%甲醇溶液洗脱目标成分，洗脱浓缩干燥得浸膏90g。取正丁醇、乙酸乙酯、 水，按比例1 :5 :6在分液漏斗中充分混合，完全分层后，取下相为注入高速逆流色谱管中， 开转主机，调节转速800rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，流速调节为3ml/min，同时取流动相溶解浸膏，滤过，由进样阀进样，根据紫外检测器图谱，收集流分，再次分离，流分干燥，得到白色粉末刺楸皂苷A，经HPLC检测，含量98. 3%，收率83% (相当于原料中刺楸皂苷A的量)。实施例2
取干燥的刺楸叶粉碎，称量^g，加入5倍量90%甲醇浸泡6小时，浸泡3次，提取液减压回收甲醇，加适量去离子水稀释，上NK-II大孔树脂柱吸附，取;3BV30%甲醇溶液洗脱杂质， 再用5BV50%甲醇溶液洗脱目标成分，洗脱浓缩干燥得浸膏76g。取正丁醇、乙酸乙酯、水，按比例2 :7:8在分液漏斗中充分混合，完全分层后，取下相为注入高速逆流色谱管中，开转主机，调节转速700rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，流速调节为2ml/min，同时取流动相溶解浸膏，滤过，由进样阀进样，根据紫外检测器图谱，收集流分，再次分离，流分干燥， 得到白色粉末刺楸皂苷A，经HPLC检测，含量96. 8%，收率75%(相当于原料中刺楸皂苷A的量)。实施例3
取干燥的刺楸叶粉碎，称量^g，加入7倍量85%甲醇浸泡10小时，浸泡2次，提取液减压回收甲醇，加适量去离子水稀释，上NK-II大孔树脂柱吸附，取4BV25%甲醇溶液洗脱杂质，再用4BV65%甲醇溶液洗脱目标成分，洗脱浓缩干燥得浸膏81g。取正丁醇、乙酸乙酯、 水，按比例2:6 :7在分液漏斗中充分混合，完全分层后，取下相为注入高速逆流色谱管中， 开转主机，调节转速900rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，流速调节为lml/min，同时取流动相溶解浸膏，滤过，由进样阀进样，根据紫外检测器图谱，收集流分，再次分离，流分干燥，得到白色粉末刺楸皂苷A，经HPLC检测，含量97. 1%，收率78% (相当于原料中刺楸皂苷A的量)。
权利要求
1.一种制备高纯度刺楸皂苷A的方法，其特征在于以刺楸叶为原料，用80-90%甲醇浸泡提取，提取液浓缩，上NK-II大孔树脂分离，甲醇溶液梯度洗脱，洗脱浓缩干燥得浸膏， 再采用高速逆流色谱两次分离制备，即得到高纯度刺楸皂苷A。
2.根据权利要求1所述制备高纯度刺楸皂苷A的方法，其特征在于所述甲醇溶液梯度洗脱为3-5BV20-30%甲醇溶液洗脱杂质，再用3-5BV50-70%甲醇溶液洗脱目标成分。
3.根据权利要求1所述制备高纯度刺楸皂苷A的方法，其特征在于所述高速逆流色谱溶剂系统可选正丁醇一乙酸乙酯一水溶液系统，比例1-2 5-7 6-8,以上相为流动相，下相为固定相。
全文摘要
本发明涉及了一种制备高纯度刺楸皂苷A的方法，其特征在于以刺楸叶为原料，用80-90%甲醇浸泡提取，提取液浓缩，上NK-II大孔树脂分离，甲醇溶液梯度洗脱，洗脱浓缩干燥得浸膏，再采用高速逆流色谱两次分离制备，即得到高纯度刺楸皂苷A。本方法具有操作简单，样品损失小，制备量大等优点，所得产品纯度在95%以上。
文档编号C07H15/256GK102276680SQ20111022555
公开日2011年12月14日 申请日期2011年8月8日 优先权日2011年8月8日
发明者刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司