专利名称：一种当归有效成分的提取方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分提取工艺。
背景技术：
药材当归为伞形科多年生草本植物的根，是著名的一味中药。目前从当归中进行提取所涉及的工艺主要包括上述最主要的三种活性成分，即 以藁本内酯为代表的脂溶性成分和以阿魏酸及当归多糖为代表的水溶性成分。相关的研究证实以藁本内酯为代表的当归脂溶性成分和以阿魏酸为代表的当归水溶性成分均不稳定， 容易发生脱氢、氧化、水解、降解等异构化反应，因此对提取、分离纯化和保存条件要求比较苛刻。基于中药当归有效成分阿魏酸的提取方法主要是传统的水蒸气蒸馏和有机溶剂提取。但是阿魏酸为热不稳定物质，长时间受热，会引起阿魏酸的分解，所以采用这种加热方式提取当归中阿魏酸的收率不高。当归挥发油的提取方法主要包括有机溶剂浸取法、水蒸汽蒸馏法、超临界(X)2萃取法。有机溶剂浸取法提取当归挥发油具有处理量大、能耗较低、易于连续操作等特点，但此法溶剂用量大，而且在处理过程中容易造成水溶性成分的损失。水蒸汽蒸馏法提取当归挥发油的收率较低，同时由于提取过程温度高，易造成对热不稳定及易氧化成分的破坏。当归多糖由D-半乳糖、L阿拉伯糖、D-木糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸等组成，目前当归多糖通常采用水煮醇沉的传统方法提取。中药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分。为了提高中药制剂的内在质量，增强其治疗效果，降低毒副作用，选用合理的提取工艺非常重要。目前当归活性部分常用的提取方法有传统水蒸气蒸馏提取和有机溶剂提取。这些传统方法已经走过了漫长的历史岁月，由于其合理适用的科学技术内核，绵延至今仍是当归提取常用的方法，但这些方法存在着明显的不足和问题，集中表现在，现代药理研究表明低极性类化合物 (包括挥发油)是当归发挥其某些药效的重要物质基础，然而传统采取水蒸汽蒸馏提取，如此高温不利于不稳定的低极性类化合物的提取，另外中药的药效不是来自某一单一的活性化学成分，而是来自多种活性成分之间的协同作用，甚至与某些非活性成分相关，但传统提取工艺大多针对某一种(或某一类)组分，并以某一组分(或某一类)组分的提取量为指标来对不同提取方法进行评价，因此药材的利用率不高，活性成分的收率低。超临界萃取、 超声和微波辅助提取等方法属于新技术在药材提取中的应用，其实现制药大生产还需要一定的时间，尽管可以避免高温高压对有效成分的破坏，但对设备要求较高，且制取设备前期投入较大，维护费用较高。另外，植物中药中有药用价值的成分往往是药用植物本身的一些次生代谢产物，而药用植物的绝大部分是它赖以生长发育的结构物质，如纤维素、半纤维素、木质素、果胶，不具有药用价值，不论是我国传统的中药炮制方法，还是现代大企业的提取工艺，都是采用水煮或用大量的有机溶剂设法将中药有药用价值的成分与无药用价值的结构物质分开，其局限是有效成分提取不充分或只针对某个或某些成分的提取，而使疗效降低，有限的中药资源大量浪费。尽管现有的工艺能满足现有企业中药材加工中当归活性成分的分离，但是，现有的工艺都是针对其中的某种药效成分，例如提取阿魏酸，不管是采用加热蒸馏或者有机溶剂提取，都会导致对藁本内酯的损失，即采用现有报道工艺提取阿魏酸后不能再提取藁本内酯；同样，不论是采用蒸馏法或者采用有机溶剂法提取藁本内酯，剩余残渣都不能用于阿魏酸的提取。
发明内容
本发明目的是提供一种当归有效成分的提取方法。本发明是一种当归有效成分的提取方法，其步骤为(1)将干燥的当归块根在粉碎机中粉碎至100目颗粒；(2)称取粉碎后的当归，以1 8不同料液比或质量比加入pH5. 5的溶剂A溶液；(3)向(2)的溶液中再加入0. 3mg · mL—1的纤维素酶，充分搅拌；(4)将(3)所得溶液于55°C恒温条件下酶解6小时；(5)向(4)的溶液中再加入0. 3mg · mL-1的异淀粉酶，充分搅拌；(6)将(5)所得溶液继续在55°C进行恒温酶解，时间持续6小时；(7)酶解完成后减压过滤，所得滤液即为阿魏酸溶液，该溶液避光保存；(8)将(7)过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，每次加入8倍量的溶剂B，回流提取 2次，每次2小时；将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存；(9)将⑶过滤所得滤渣用于提取当归多糖，滤渣中加入15倍量的溶剂C，提取3 小时，提取温度为80士5°C ；(10)提取完成后用8层纱布过滤，弃去滤渣，将滤液体积浓缩5倍；(11)向(10)浓缩液中加入溶剂D，充分搅拌，至溶剂浓度达到75%，产生大量絮状沉淀，用离心机3000rpm离心10分钟，分离得到当归多糖。所述的溶剂A为冰醋酸；溶剂B为70%乙醇；溶剂C为蒸馏水；溶剂D为95%乙与传统方法相比，传统方法提取阿魏酸得率为0. 52mg/g,藁本内酯得率为 120. 6mg/g，多糖得率为76. 9mg/g，且阿魏酸与藁本内酯无法进行共提取；本发明阿魏酸得率为0. 55mg/g，藁本内酯得率为119. lmg/g，多糖得率为93. 6mg/g，本发明可实现当归中主要活性成分阿魏酸、藁本内酯的共提取以及后期当归多糖的提取。本发明的提取方法具有以下的优点由于生物酶的高效性和专一性，作用条件温和，本发明的提取条件更简单、设备更简化，既降低能耗又节约成本；相对已有技术，该方法在有效提阿魏酸得率的同时，实现对藁本内酯的共提取及后期当归多糖的提取，具有确保药物质量、降低提取成本、减少中药资源浪费。
图1是阿魏酸标准品HPLC色谱图，图2是样品中阿魏酸色谱图，图3是藁本内酯标准品HPLC色谱图，图4是样品中藁本内酯色谱图。
具体实施例方式本发明是一种当归有效成分的提取方法，其步骤为(1)将干燥的当归块根在粉碎机中粉碎至100目颗粒；(2)称取粉碎后的当归，以不同料液比或质量比加入pH5. 5的溶剂A溶液；(3)向(2)的溶液中再加入0. 3mg · mL—1的纤维素酶，充分搅拌；(4)将(3)所得溶液于55°C恒温条件下酶解6小时；(5)向(4)的溶液中再加入0. 3mg · mL—1的异淀粉酶，充分搅拌；(6)将(5)所得溶液继续在55°C进行恒温酶解，时间持续6小时；(7)酶解完成后减压过滤，所得滤液即为阿魏酸溶液，该溶液避光保存；(8)将(7)过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，每次加入8倍量的溶剂B，回流提取 2次，每次2小时；将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存；(9)将⑶过滤所得滤渣用于提取当归多糖，滤渣中加入15倍量的溶剂C，提取3 小时，提取温度为80士5°C ；(10)提取完成后用纱布过滤，弃去滤渣，将滤液体积浓缩5倍；(11)向(10)浓缩液中加入溶剂D，充分搅拌，至溶剂浓度达到75%，产生大量絮状沉淀，用离心机3000rpm离心10分钟，分离得到当归多糖。所述的溶剂A为冰醋酸；溶剂B为70%乙醇；溶剂C为蒸馏水；溶剂D为95%乙以上所述的复合酶为纤维素酶，或者果胶酶，或者异淀粉酶，或者木聚糖酶，或者以上所述的两种或两种以上的组合。所述的复合酶优选的是纤维素酶和异淀粉酶，按1 1的比例组合。对本发明的方法采用HPLC法检测当归中主要活性成分1、用HPLC法对酶法提取阿魏酸的提取率变化进行检测，色谱条件为，色谱柱0DS 反向柱 G.6ymX250mm，5ym)；流动相甲醇-0.085% 磷酸(55 45, ν/ν)；流速1ml/ min ；进样量20 μ 1 ；检测波长322nm ；柱温室温。在此色谱条件下，目标峰与样品中杂质峰得到较好分离。阿魏酸标准品色谱图、样品中阿魏酸色谱图如图1、2所示。制作标准曲线准确称取FA标准品lmg，溶解于Iml流动相中，配制成1000 μ g/ml标准储备液。取适量标准储备液用流动相稀释成浓度分别为0.5、l、5、10、25、50、100yg/ml的标准溶液， 分别进样检测。以标准品浓度为横坐标，HPLC峰面积为纵坐标进行线性回归，制作阿魏酸标准曲线。该方法所得回归方程为y = 117053x+32234,相关性R2 = 0. 9999，结果表明HPLC 法可准确检测样品中阿魏酸含量。2、用HPLC法对当归中藁本内酯的提取率变化进行检测，色谱条件为，色谱柱0DS 反向柱(4. 6 μ mX 250mm，5 μ m)；流动相甲醇-水(70 30，ν/ν)；流速lml/min，进样量 2(^1;检测波长32711111[1]。在此色谱条件下，目标峰与样品中杂质峰得到较好分离。藁本内酯标准品色谱图、样品中藁本内酯色谱图如图3、4所示。
制作标准曲线准确称取藁本内酯标准品lmg，加入500 μ 1流动相溶解，并梯度稀释得浓度为5、 10、25、50、100、250、500、1000、2000μ g/ml的标准溶液，进样检测。以稿本内酯浓度为横坐标，HPLC峰面积为纵坐标进行线性回归，制作藁本内酯标准曲线。该方法所得回归方程为y = 3453. 3χ-4070. 2，相关性R2 = 0. 9997，结果表明HPLC 法可准确检测样品中藁本内酯含量。下面用更为具体的实施例进一步展开本发明。实施例1酶法提取当归中主要活性成分称取粉碎后的当归粉10g，以料液比为1 8的比例(质量比)加入pH5.5的冰醋酸溶液，再加入0. 3mg · mL-1的纤维素酶，充分搅拌，于55°C恒温下酶解他；再加入 0. 3mg · mL-1的异淀粉酶，充分搅拌，继续55°C恒温酶解他。酶解完成后减压过滤，所得滤液即为阿魏酸溶液，该溶液避光保存，并用HPLC法检测阿魏酸得率。将过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，以传统醇提法(即70%乙醇回流提取2次，2h/次)进行提取，将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存，并用HPLC法检测藁本内酯得率。本步骤所得滤渣继而用传统水提醇沉法提取当归多糖，用硫酸-苯酚法检测多糖得率。本发明中阿魏酸得率为0. 55mg/g,藁本内酯得率为119. lmg/g,多糖得率为 93. 6mg/g,当归中主要活性成分的得率均与传统方法相当，但对原药材的利用率远高于传统方法。实施例2复合酶法提取当归中主要活性成分称取粉碎后的当归粉10g，以料液比为1 8的比例(质量比)加入pH5.5的冰醋酸溶液，再加入0. 2mg · mL-1的纤维素酶，充分搅拌，于55°C恒温下酶解5h，再加入 0. 2mg · mL-1的果胶酶，充分搅拌，继续55°C恒温酶解证。酶解完成后减压过滤，所得滤液即为阿魏酸溶液，该溶液避光保存，并用HPLC法检测阿魏酸得率。将过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，以传统醇提法(即70%乙醇回流提取2次，2h/次)进行提取，将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存，并用HPLC法检测藁本内酯得率。本步骤所得滤渣继而用传统水提醇沉法提取当归多糖，用硫酸-苯酚法检测多糖得率。本发明中阿魏酸得率为0. 52mg/g,藁本内酯得率为121. 3mg/g,多糖得率为 90.lmg/g,实施例3复合酶法提取当归中主要活性成分称取粉碎后的当归粉10g，以料液比为1 8的比例(质量比)加入pH5.5的冰醋酸溶液，再加入0. 3mg · mL-1的纤维素酶，充分搅拌，于55°C恒温下酶解5h，再加入 0. 3mg · mL-1的木聚糖酶，充分搅拌，继续55°C恒温酶解证。酶解完成后减压过滤，所得滤液即为阿魏酸溶液，该溶液避光保存，并用HPLC法检测阿魏酸得率。将过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，以传统醇提法(即70%乙醇回流提取2次，2h/次)进行提取，将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存，并用HPLC法检测藁本内酯得率。本步骤所得滤渣继而用传统水提醇沉法提取当归多糖，用硫酸-苯酚法检测多糖得率。 本发明中阿魏酸得率为0. 51mg/g,藁本内酯得率为118. 2mg/g,多糖得率为 87. 3mg/g。
权利要求
1.一种当归有效成分的提取方法，其步骤为(1)将干燥的当归块根在粉碎机中粉碎至100目颗粒；(2)称取粉碎后的当归，以1 8的料液比或质量比加入pH5. 5的溶剂A溶液；(3)向O)的溶液中再加入0.3mg · mL—1的纤维素酶，充分搅拌；(4)将(3)所得溶液于55°C恒温条件下酶解6小时；(5)向的溶液中再加入0.3mg · mL—1的异淀粉酶，充分搅拌；(6)将(5)所得溶液继续在55°C进行恒温酶解，时间持续6小时；(7)酶解完成后减压过滤，所得滤液即为阿魏酸溶液，该溶液避光保存；(8)将(7)过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，每次加入8倍量的溶剂B，回流提取2次， 每次2小时；将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存；(9)将( 过滤所得滤渣用于提取当归多糖，滤渣中加入15倍量的溶剂C，提取3小时， 提取温度为80 士 5°C ；(10)提取完成后用纱布过滤，弃去滤渣，将滤液体积浓缩5倍；(11)向(10)浓缩液中加入溶剂D，充分搅拌，至溶剂浓度达到75%，产生大量絮状沉淀，用离心机3000rpm离心10分钟，分离得到当归多糖；所述的溶剂A为冰醋酸；溶剂B为70%乙醇；溶剂C为蒸馏水；溶剂D为95%乙醇。
2.根据权利要求1所述的当归有效成分的提取方法，其特征在于所述的复合酶为纤维素酶，或者果胶酶，或者异淀粉酶，或者木聚糖酶，或者以上所述的两种或两种以上的组合。
3.根据权利要求1所述的当归有效成分的提取方法，其特征在于所述的复合酶优选的是纤维素酶和异淀粉酶，按1 1的比例组合。
全文摘要
一种当归有效成分的提取方法，将粉碎的当归加入pH5.5的溶剂A溶液，向该溶液中再加入0.3mg·mL-1的纤维素酶，将所得溶液于55℃恒温条件下酶解6小时，在溶液中再加入0.3mg·mL-1的异淀粉酶，然后将所得溶液继续在55℃进行恒温酶解，时间持续6小时，酶解完成后减压过滤，所得滤液避光保存；将过滤所得滤渣用于提取藁本内酯，每次加入8倍量的溶剂B，回流提取2次，每次2小时；将初次滤液与第二次滤液合并，合并后的滤液即为藁本内酯溶液，该溶液避光低温保存；将过滤所得滤渣用于提取当归多糖，滤渣中加入15倍量的溶剂C进行提取，将滤液体积浓缩，向浓缩液中加入溶剂D，至溶剂浓度达到75％，用离心机分离得到当归多糖。
文档编号C07C51/42GK102381962SQ20111031810
公开日2012年3月21日 申请日期2011年10月19日 优先权日2011年10月19日
发明者张应鹏, 张新国, 李春雷, 王强林 申请人:兰州理工大学