一种当归抗肿瘤药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物提取物领域，设及一种具有抗肿瘤作用的当归提取物药物。
【背景技术】
[0002] 当归是伞形科当归属植物当归Agelica sinensis (Oilv. )Diel的干燥根，为经典 的常用中药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便之功效。 肿瘤是一种发病率逐年上升的疾病，尤其恶性肿瘤已严重影响人类的生存。因此，寻找 有效抗癌药物是目前肿瘤研究的重点。目前，随着中药抗肿瘤作用的发现，从中药中开发有 效抗肿瘤药物已成为热点，当归也引起了学者关注，研究证实当归不同提取物能有效抑制 肿瘤生长，显示出一定抗肿瘤活性。当归成分除多糖，挥发油外，还有其他成分，其诸多成分 均有一定抗肿瘤活性。
[0003] 当归多糖抗肿瘤效应 1.1当归多糖 当归多糖(Angelicapolysaccharide，APS)为当归有效成分之一，中药多糖抗肿瘤W其 作用机制多方位、多环节、高效低毒影响肿瘤细胞增殖W及有较好抗肿瘤特点而被学者广 为关注。近年来，有关中药多糖抗肿瘤研究已取得重大进展。研究显示，当归多糖亦显示出 良好抗肿瘤效应，随着研究不断深入，已从当归中获得多种多糖组分，且不同多糖抗肿瘤机 制各异。
[0004] 1.1.1 APS-IcII 曹蔚等通过研究APS-IcII(Angelicapolysaccharide-IcII ,APS-IcII)抗肿瘤机制，证 实均一性APS-IcII对体外培养肿瘤细胞无增殖抑制作用，但对S180荷瘤小鼠肿瘤生长具抑 制效应，且能增加荷瘤机体免疫细胞数量和免疫器官质量，并刺激免疫细胞分泌TNF-a、比-le。此机制可能与APS-IcII参与荷瘤机体免疫调节直接促使肿瘤调亡或间接抑制肿瘤细胞 增殖有关，通过体液免疫和细胞免疫，作用于非特异性及特异性免疫细胞，综合实现体内抑 瘤作用。
[0005] 1.1.2 APS-bll 陈犧等从当归粗多糖中分离纯化到均一性杂多糖APS-bll，并探讨了 APS-WI体外抗肿 瘤机制，结果表明，APS-bll浓度范围为（3~lOOOmg/L)时，可对人结肠癌细胞SW-1116和人 肝癌细胞化pG2产生较为显著增殖抑制作用。研究证实，多数多糖抗肿瘤机制为通过直接促 进肿瘤细胞调亡或间接增强免疫功能实现抗肿瘤作用。APS-bll虽能对体外培养的多种肿 瘤细胞产生抑制，但其作用机制尚且不明，有待更为深入的研究。
[0006] 1.1.3 APS-3C 曹蔚等从当归中分离纯化得到新型酸性多糖APS-3C，用于研究其对体外培养肿瘤细胞 的毒性，结果表明，相比对照组APS-3C对人化La和化pG2细胞没有显著增殖抑制效应，而对 人白血病化-60及SWl 116肿瘤细胞有一定毒性。
[0007] 1.1.4 APS-2a 通过建立小鼠肉瘤S180移植模型，证实当归酸性多糖APS-2a对S180荷瘤小鼠具抑瘤作 用，能显著提高荷瘤机体胸腺和脾脏指数。运与APS-2a具一定免疫调节作用相关。但低剂量 APS-2a对小鼠肉瘤S180抑制效果最为显著，抑瘤率达49.49%(P<0.05)，APS-2a抑瘤作用与 剂量呈负相关性，此抑瘤机制较为特殊，有待进一步研究。
[000引 1.1.5 APS-3b 研究发现，当归酸性多糖APS-3b能显著抑制S180肿瘤生长，延长S180荷瘤小鼠生存时 间，运与APS-3b促进脾细胞增殖，上调脾细胞中IFN-gamma、化-6及比-2mRNA表达，促进腹膜 巨隧细胞产生TNF-alpha及NO相关。
[0009] 1.1.6 APS 郑敏等用APS研究了对人白血病K562细胞的增殖与分化作用，得出结论，APS对K562细 胞增殖有显著抑制作用，并可降低K562细胞C-MYC表达水平，促进其向红、粒细胞方向分化， 运与APS阻止K562细胞由G0/G1过渡至S、G2+M期，影响参与K562细胞增殖与分化的相关基 因而产生抗肿瘤作用有关。华自森等证实APS能够抑制K562细胞增殖、诱导其调亡并促进其 分化，运与APS使K562细胞核中STAT3表达减少，影响JAK2/STAT3核转位活化和信号分子表 达相关。可见，AI^是一类极具价值、并具前景的抗肿瘤药物。
[0010] 1.1.7 硫酸醋化APS 吴素珍等通过建立S180小鼠模型研究了硫酸醋化当归多糖（SPAS)的抗肿瘤作用。证 实，当归多糖经硫酸醋化后，能延长荷瘤小鼠存活期，并能使小鼠移植性肿瘤S180生长受到 抑制，与阴性对照组相比肿瘤重量明显较轻。运可能与多糖经硫酸醋化作用后，具有一定细 胞毒作用，并对机体非特异性和特异性免疫功能有一定促进作用相关;分子结构和空间构 象发生变化，生物活性也随着改变有关，但硫酸醋化当归多糖抗肿瘤机理是否与此相关，尚 有待更为深入的研究。
[0011] 当归挥发油的抗肿瘤效应 2.1当归挥发油 当归挥发油做为当归重要成分之一，具有多样化学组成及良好药理活性，有关当归挥 发油抗肿瘤作用研究，报道日益增加，现做出归纳总结，W便为当归挥发油后续深入研究提 供依据。
[0012] 2.1.1 当归内醋(ASDL) 当归内醋(ASDL)为当归挥发油成分之一，龙锐通过建立荷瘤小鼠肥2肝癌模型，研究了 AS化抗肿瘤效应。结果表明，ASDL具显著抑制小鼠 H22肝癌移植瘤的生长作用，有良好抗肿 瘤活性，AS化的抑瘤作用是通过增加胸腺和脾脏系数，增强淋己细胞增殖、巨隧细胞吞隧功 能、CTL和NK细胞活性而实现。
[0013] 2.1.2当归乙醇提取物 将当归挥发油成分之一正下締基苯献(n-buty Iidenephthal ide，n-BP)作用于人前列 腺癌细胞PC-3和LN化P。结果显示，n-BP能通过提高细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子及降 低检验点蛋白表达，而使两种细胞均停滞于G0/G1期，且能受内质网应激诱导调节而产生细 胞毒作用，亦能抑制荷LNCaP瘤裸鼠体内肿瘤生长，抑瘤率达68%。从当归中用氯仿提取n-BP 之后，用于对体内外多形性成胶质细胞瘤(GBM)抗肿瘤效应研究。发现，n-BP在体外，通过触 发p53蛋白依赖性及非依赖途径而引起肿瘤细胞调亡;在体内，通过上调p21和p27表达而减 少Rb蛋白憐酸化，下调肿瘤细胞周期调控因子使肿瘤细胞停留在GO/Gl期，W发挥抗肿瘤效 应。研究表明，体外适量n-BP能显著抑制人肺癌A549端粒酶活性及hTERTmRNA表达，从而对 其产生生长抑制作用；体内试验发现，n-BP对荷A549瘤裸鼠亦能产生生长抑制作用。可见， n-BP在体内外均能对发挥抗肿瘤效应。
[0014] 2.1.3当归蔓本内醋 研究显示，用甲醇从当归中提取的一种新型蔓本内醋对癌细胞K562、L1210具有很强细 胞毒作用，IC50分别达到了（4.78±0.18)皿〇1/1，（2.27±0.10)皿〇1/1。蔓本内醋对人结肠 癌细胞HT-29具有细胞毒和增殖抑制作用，对HT-29细胞增殖抑制作用强于对人正常结肠细 胞CCD-18CO的细胞毒作用，对前者细胞IC50为(60.63±6.79)，表明，蔓本内醋的抗癌活性 主要是通过抑制癌细胞增殖实现的。蔓本内醋对人恶性胶质瘤T98G细胞转移具有显著抑制 效应，并与剂量成正相关，此机制与调节巧巾化oGTPases(化oA，RaclandCdc42)的表达有关， 可见，蔓本内醋通过调节化oGTPases表达，W抑制癌细胞转移的方式，也可能发挥抗肿瘤效 应。
[0015] 当归水提取物抗肿瘤效应 顾勤等探究了单味当归水煎液对小鼠黑素瘤B16-BL6细胞的影响及其机制，结果显示， 当归水煎液可显著抑制小鼠 B16-化6细胞增殖，减少肺转移结节数，降低肺转移程度。此机 理可能与当归水煎液通过提高E-cad表达、降低MMP-9和FN表达，从而抑制B16-化6细胞转 移、侵袭、粘附和运动能力相关。陈景华等考察当归经水提醇沉MEM培养液稀释后对共培养 的人黑素瘤细胞(A375)和角质形成细胞化aCaT)合成黑素能力的影响。证实，当归水提醇沉 物能显著抑制共培养细胞合成黑素，并与提取物浓度呈一定量效关系，此机制与酪氨酸酶 活力受到抑制，进而抑制共培养细胞体系的黑素合成有关。
[0016] 当归丙酬提取物抗肿瘤效应 用丙酬提取了当归脂溶性成分，研究其对多形性成胶质细胞瘤的药理效应活性，提取 物作用于GMB8410细胞及荷GMB8410瘤裸鼠体内，得出结论，当归丙酬提取物能通过降低调 亡蛋白组织蛋白酶B及VEGF的表达水平，在体外能对GMB8410细胞产生增殖抑制效应;体内 能够抑制脑肿瘤生长及其新生血管的形成，运可能与细胞周期受抑及调亡受促有关。
[0017] 小结 当归为伞形科植物当归的根，性甘、辛、溫，具补气生血、扶本固正之功效。临床中广泛 用于治疗多种病症，为最常用中药之一，当归具有良好抗肿瘤效应，但尚未成为抗肿瘤药物 应用与临床。
[0018] 当归多糖抗肿瘤研究已取得一定进展，值得更为深入研究，而其挥发油中仅较少 成分做了抗肿瘤作用研究，其他多种挥发油成分抗肿瘤作用却未见报道，有必要加大对当 归多糖、挥发油抗肿瘤作用的进一步研究，为开发当归临床药用价值提供依据。当归水煎液 抗肿瘤作用，虽取得了一定进展，但更有必要和现代科技手段相结合，改变水煎法提取药物 成分方式，建立水煎法所获取成分分离、提取、纯化方法。此外，当W当归丙酬提取物所具有 良好抗肿瘤效应为借鉴，拓展于不同有机溶剂提取物抗肿瘤活性研究。
[0019] W上综述表明，当归具有确切抗肿瘤活性。当归不同提取物在抗肿瘤方面显示出 良好药理活性是中药在抗肿瘤方面的独特性，相比化学药物而言，当归抗肿瘤，具高效低毒 特点，运在肿瘤治疗方面相比化疗法独具优越性，不仅能产生较好疗效，且能保护机体正常 组织细胞。说明充分开发当归还可为开拓抗肿瘤新型药物提供科学指导。当归具有多种化 学成分，但目前当归有效成分中仅报道了其多糖、挥发油、水煎液及丙酬提取物抗肿瘤效 应，而当归香豆素类，黄酬类，有机酸等化学成分尚没有抗肿瘤方面研究。有必要深入挖掘 当归有效抗肿瘤活性成分，运对充分开发利用当归极具意义，也能为挖掘抗肿瘤药物提供 思路、为开拓有效抗肿瘤药物奠定基础。
[0020] 本发明提供了一种治疗肿瘤的当归提取物，研究证明该提取物具有明显的抗肿瘤 作用。
【发明内容】
[0021] 本发明的目的是提供一种当归提取物。
[0022] 本发明的另一目的是提供该提取物的制备方法。
[0023] 本发明的还提供该提取物在制备治疗肿瘤W及胆囊息肉药物中的应用。
[0024] 本发明的目的是通过W下方式实现的： 一种具有抗肿瘤作用的当归提取物，该当归提取物是采用如下方法制备的： (1) 将当归粉碎，置烘箱内40°C~50°C烘干化~化后，加15~25倍量50%~60%丙酬，于 60°C~70°C水浴回流提取2次~4次，每次70min~80min，合并提取液，回收丙酬，得到