组合物及其在抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，每年都有大量的人死于癌症。抗癌 药物的研发一直是药学研究的热点。抗肿瘤药物中有74%是天然产物或其衍生物，如紫杉 醇及其衍生物就是目前临床上应用效果比较好的抗肿瘤药物。因此，从天然产物中寻找化 合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物最有重要 价值。
[0003] 本发明涉及的化合物I是一个2011年发表（Ayumi Ohsaki et al.，2011. Salviskinone A, a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii. Tetrahedron Letters 52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我们对化合物I进行了结构修饰， 获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制备了组合 物并对该组合物抗肿瘤活性进行了评价，其具有抗肿瘤活性。
【发明内容】
[0004] 本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合 物中化合物III和化合物IV的质量百分数分别为45%和55%。
[0005]
[0006] 药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗肿瘤作用。
[0007] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
【具体实施方式】
[0008] 实施例1化合物SalviskinoneA的制备
[0009] 化合物SalviskinoneA(I)的制备方法参照AyumiOhsaki等人发表的文献 (AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfrom Salviaprzewalskii.TetrahedronLetters52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0010]
[0011] 实施例2SalviskinoneA的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0012] 将化合物I (312mg，I.OOmmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化铵（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.OOmmol)和6mL的50 %氢氧化钠溶液。混合物在35 摄氏度搅拌12h。12h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取两次，合并有机相 溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤4次，再用无水硫酸钠干燥，最后减 压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮 =100:1.5, v/v)，收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% )〇
[0013] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，111)，6.37(8，111)，5.81(8，111)，4.51(8,211)，3. 84 (s，1H)，3. 79 (s，2H)，2. 15 (s，1H)，2. 04 (s，1H)，L 91 (s，1H)，L 65 (s，1H)，L 39 (s，3H)，L 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0014]13CNMR (125MHz, DMS0-d6) S 188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 I (s)，136. 40 (s)，134. 71 (s)，131. 25 (s)，128. 40 (s)，118. 83 (s)，72. 12 (s)，45. 49 (s)，37. 5 4 (s)，33. 58 (s)，31. 78 (s)，26. 17 (s)，25. 12 (s)，24. 66 (s)，23. 51 (s)，23. 17 (s)，22. 65 (s) ?
[0015]HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC22H28BrO3:419. 1222；found419. 1220.
[0016]
[0017] 实施例3SalviskinoneA的0-(二乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0018] 将化合物II (210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，碘化钾（84mg，0. 5mmol)和二乙胺（1460mg，20mmol)，混合物加热回流 8h。反应结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。依次用水和 饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗 品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1. 0, v/V)，收集棕色集 中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物III的黄色粉末（137. 7mg，67% )。
[0019] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) 8 6. 43 (d,J= 120. 3Hz, 2H), 5. 78 (s, 1H), 4. 23 (s, 2H), 3 ,98(s, 1H),3. 06 (s, 2H),2. 89(s, 4H),2. 11 (s, 1H),2. 01(s, 1H), 1.89(s, 1H), 1.64(s, 1H), I .34 (s, 3H), I. 14 (s, 6H), I. 04 (s, 6H), 0. 96 (s, 6H).
[0020]13CNMR (125MHz, DMS0-d6) S 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,52.96 (s) ,47.7 5 (s)，45. 55 (s)，37. 58 (s)，33. 65 (s)，26. 22 (s)，25. 20 (s)，24. 72 (s)，23. 55 (s)，23. 24 (s)， 22. 70 (s)，12. 35 (s) ?
[0021] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC26H38NO3:412. 2852;found:412. 2855。
[0022]
[0023] 实施例4 Salviskinone A的0-(吗啉基）乙基衍生物（IV)的合成
[0024] 将化合物II (210mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，鹏化钾（84mg，0. 5mmol)和吗啉（1742mg，20mmol)，混合物加热回流 12h。 反应结束后将反应液倒入30mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取4次，合并有机相。依次用水 和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物 粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:0. 5, v/v)，收集黄色 集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物IV的黄色粉末（121. lmg，57% )。
[0025] 1H NMR (500MHz, DMS〇-d6) 8 6. 41 (d, J = 108. 0Hz, 1H), 6. 29 (s, 1H), 5. 75 (s, 1H), 4 .21 (s, 2H), 3. 84 (s, 1H), 3. 52 (s, 4H), 3. 02 (s, 2H), 2. 47 (s, 4H), 2. 09 (s, 1H), 2. 00 (s, 1H), I .84 (s, 1H), I. 60 (s, 1H) ,1-31 (s, 3H), I. 02 (s, 6H), 0. 95 (s, 6H).
[0026] 13C NMR (125MHz, DMS0-d6) S 188. 17 (s)，183. 78 (s)，154. 44 (s)，147. 61 (s)，140. 2 3 (s)，136. 50 (s)，134. 79 (s)，131. 31 (s)，128. 44 (s)，118. 85 (s) ,69.31 (s) ,66.84 (s) ,54.7 6 (s)，52. 97 (s)，45. 54 (s)，37. 62 (s)，33. 64 (s)，26. 21 (s)，25. 19 (s)，24. 71 (s)，23. 59 (s)， 23. 23 (s)，22. 69 (s) ?
[0027] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C26H36NO4:426. 2644 ;found:426. 2641。
[0028]
[0029] 实施例5体外抗肿瘤活性筛选
[0030] 筛选细胞株为H印G2 (人肝癌细胞），PANC-I (人胰腺癌），MCF-7 (人乳腺癌细胞）， SW620 (人结肠癌细胞），A549 (人肺癌细胞），HGC-27 (人胃癌细胞），L02 (人正常肝实质细 胞）。
[0031] 组合物的制备：将45mg化合物III的粉末和55mg化合物IV的粉末装入带盖的小 管中并用涡轮搅拌仪混合即得到IOOmg组合物。
[0032] 实验方法：
[0033] 取对数生长期状态良好的细胞，胰蛋白酶消化，制成5X IO4细胞/mL的悬液。将 细胞悬液移入96孔培养板，每孔IOOy L，置37°C、5% CO2条件下培养24h。
[0034] 将受试化合物III、化合物IV和组合物分别用DMSO配制成一定浓度的母液，再用 RPMI1640培养基将衍生物母液稀释成不同作用浓度的稀释液。移去旧培养基，加入不同浓 度的含药培养基，每孔l〇〇y L。另设空白对照组。药物作用48h后，吸弃含药培养基，于每 孔加入无血清、无酚红1640培养基100 y L，再加入MTT溶液（5mg/mL) 10 y L，继续温育4h。
[0035] 吸去各孔内上清液，每孔加入DMSO 150 y L，暗处振荡lOmin，使结晶物充分溶解， 酶标仪测定490nm处各孔的光吸收值（OD值），计算细胞的增殖抑制率：抑制率（％ )= (1-用药组平均OD值/空白对照组平均OD值）X 100%。应用SPSS16. 0软件进行数据处 理并计算癌细胞增殖的半数抑制浓度（IC5。)，结果见表1。
[0036] 表1化合物或组合物对7种癌细胞的体外增殖抑制作用
[0037]
[0038] 如表1结果所示，组合物对不同的肿瘤细胞均具有一定的增殖抑制作用；而对于 正常的肝实质细胞L02的IC 5。非常大（MO yM)、没有增殖抑制作用，说明安全性非常高。化 合物III和化合物IV对于所有肿瘤细胞没有增殖抑制作用。组合物表现出较好的抗癌活 性，具有开发抗癌药物的潜力。
[0039] 实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
[0040] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0041] 实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0042] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100 粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为45%和55%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为：将化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照质量百分数分别为45%和55%充分混合。3. 如权利要求1所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用，其特征为：所述肿瘤为消化系 统肿瘤。5. 如权利要求4所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用，其特征为：所述消化系统肿瘤 为肝癌、膜腺癌、结肠癌或者胃癌。6. 如权利要求3所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用，其特征为：所述肿瘤为乳腺癌 或者肺癌。
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物及其在抗肿瘤药物中的应用。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有抗肿瘤的作用，具有开发抗肿瘤药物的价值。
【IPC分类】A61K31/5375, A61P35/00, A61K31/138
【公开号】CN105193818
【申请号】CN201510439220
【发明人】王卓婷
【申请人】南京赋海澳赛医药科技有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年7月23日