3-1回收率测定结果(n=9，％)
结果表明，本方法的回收率较好，香草醒的回收率分别在99.4%~100.2%，马鞭草締酬 的回收率在98.1%~100.7%之间，相对标准偏差分别为0.28%与0.86%，本测定方法能满足本 发明当归提取物中香草醒与马鞭草締酬的含量测定。
[0081] 3.10定量限与检测限 采用"信噪比法"来确定本研究的定量限和检测限，取线性标准溶液适量，采用加无水 乙醇逐步稀释法进行稀释，当进样浓度为6.27、9.9化g . m[i时，取化L进样，连续进样3次， 得到香草醒、内标、马鞭草締酬信噪比平均值分别接近10.0,可W W此浓度为定量限;继续 稀释进样，当进样浓度为1.044、1.65yg . ml/i，连续进样3次，得到香草醒、内标、马鞭草締酬 信噪比平均值接近3.0，可W W此浓度为检测限。
[0082] 3.11耐用性试验 经不同色谱柱考察和溶液稳定性考察，W及柱溫，进样口溫度和检测器溫度考察，表明 本方法耐用性良好，适用于本发明当归提取物中两组分的含量测定。
[0083] 3.11.1色谱柱的影响 选用3根不同商品规格的色谱柱，测定同一批样品的含量，计算含量值的RSD%分别为 1.3、1.7、1.6。结果表明，样品用不同的PEG色谱柱测定含量，香草醒、马鞭草締酬与内标均 可有效分离，说明方法耐用性良好。
[0084] 3.11.2柱溫的影响 柱溫对分离的影响主要为影响主峰的出峰时间，溫度越高，主峰出峰时间越短，在第一 阶段为80°C时，香草醒主峰香草醒与杂质峰能保证基线分离，第二阶段120°C时马鞭草締酬 主峰与杂质峰能保证基线分离，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。
[008引3.11.3进样口溫度的影响 进样口溫度高于柱溫时，香草醒与杂质峰能够保证基线分离，马鞭草締酬与杂质分离 良好，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。
[0086] 3.11.4检测器溫度的影响 检测器溫度高于进样口溫度时，香草醒与杂质峰能够保证基线分离，马鞭草締酬与杂 质分离良好，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。
[0087] 3.12样品含量测定结果 经过方法学验证，本含量测定方法操作简便、准确度高、重现性好，能更有效地控制产 品质量。因此应用该方法对10批样品，按照前述方法采用内标法进行含量测定，结果见表3- 2。
[0088] 表3-2样品含量测定结果
4讨论 4.1系统适应性试验 在本试验气相色谱系统下，分别吸取样品测定用混合对照品溶液、供试品溶液与阴性 对照溶液各化L，记录色谱图。巧巾组分与内标物均能够较好地分离，阴性无干扰。该系统适 应性结果见表3-3。
[0089] 表3-3系统适应性试验
4.2内标物的选择 曾试用过环己酬、糞、联苯、水杨酸甲醋等，因样品挥发性成分多，结果W环己酬的保留 时间及分离效果最合适。
[0090] 4.3柱溫的选择 香草醒、环己酬和马鞭草締酬的沸点相差比较大，柱溫低时，马鞭草締酬的保留时间过 长，柱溫高时，香草醒与杂质不能有效分离，经采用两段程序升溫方式能满足两种成分的同 时分析。
[0091] 4.4本品的含量限度 由10批次产品测定结果，暂定本品的含量限度为：本品每Ig含香草醒不得少于 0.200mg，含马鞭草締酬不得少于0.200mg。
[0092] 本方法对巧巾成分同时进行分离与检测，方法快速、灵敏，分离度好、专属性好，能 有效地控制药品质量。
[0093]
【具体实施方式】： 实施例1: (1) 将当归粉碎20kg，置烘箱内45°C烘干4h后，加20倍量60%丙酬，于65°C水浴回流提取 3次，每次75min，合并提取液，回收丙酬，得到当归总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏W氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在45°C水浴条件下揽拌 溶解，过滤，滤液在45°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3)选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8,上样体积7BV，水 洗5BV除杂，W乙酸乙醋：丙酬=100:2的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BVA，收集洗脱液，洗脱液 浓缩，干燥，得本发明当归提取物10.4g。
[0094]含量测定： 采用高效液谱法对6-甲氧基-7-径基香豆素进行含量测定： (1) 色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30:70的乙腊-7jC;检测波长： 200nm;柱溫:20°C;流速：1. OmL ? min-i;进样量：10化； (2) 对照品溶液制备：精密称取80°C干燥至恒重的6-甲氧基-7-径基香豆素对照品适 量，加甲醇溶解制成每ImL含0.2mg的对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密称取本发明当归提取物IOmL,加甲醇40mL，加热回流地，提 取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水IOmL溶解，用水饱和的正下醇振摇提取5次，每次20mL， 合并正下醇提取液，用氨试液洗涂3次，每次15mL，正下醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇 溶解并转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10化，注入高效液相色谱仪，进 行检测； 巧)测定结果：W每Ig本品含6-甲氧基-7-径基香豆素计，为0.15mg。
[0095] 采用气相色谱法对香草醒、马鞭草締酬进行含量测定： (1) 色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:化，1. OmL ?血-1;氨气，40mL ? mL-i;空气，400mL ? min-i;分流比：8:1;进样口溫度:250°C，检测器溫度300°C;程序升溫:初 始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备:取环己酬适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每ImL含12.5mg的溶 液，摇匀，作为内标溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密量取本品1.OmL,置IOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻 度，再精密量取1. OmL,置IOmL容量瓶中，精密加入内标溶液1. OmL,加无水乙醇稀释至刻度， 摇匀； (4) 对照品溶液的制备:精密称取香草醒对照品、马鞭草締酬对照品适量，加无水乙醇 溶解并稀释制成含香草醒〇.301mg ? ml/i及马鞭草締酬0.901mg ? ml/i的对照品储备溶液， 备用； 巧)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10化，注入气相色谱仪，进行检 测； (6)测定结果:本品每Ig含香草醒为0.210mg，含马鞭草締酬为0.212mg。
[0096] 实施例2: (1) 将当归粉碎20kg，置烘箱内40°C烘干化后，加15倍量55%丙酬，于60°C水浴回流提取 4次，每次70min，合并提取液，回收丙酬，得到当归总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏W氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在50°C水浴条件下揽拌 溶解，过滤，滤液在50°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3) 选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7,上样体积8BV，水 洗4BV除杂，W乙酸乙醋：丙酬=100:2的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BVA，收集洗脱液，洗脱液 浓缩，干燥，得本发明当归提取物10.2g。
[0097] 含量测定： 采用高效液谱法对6-甲氧基-7-?基香豆素进行含量测定： (1) 色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30:70的乙腊-7jC;检测波长： 200nm;柱溫:20°C;流速：1. OmL ? min-i;进样量：10化； (2) 对照品溶液制备：精密称取80°C干燥至恒重的6-甲氧基-7-径基香豆素对照品适 量，加甲醇溶解制成每ImL含0.2mg的对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密称取本发明当归提取物IOmL,加甲醇40mL，加热回流地，提 取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水IOmL溶解，用水饱和的正下醇振摇提取5次，每次20mL， 合并正下醇提取液，用氨试液洗涂3次，每次15mL，正下醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇 溶解并转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10化，注入高效液相色谱仪，进 行检测； 巧)测定结果：W每Ig本品含6-甲氧基-7-径基香豆素计，为0.14mg。
[0098] 采用气相色谱法对香草醒、马鞭草締酬进行含量测定： (1) 色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:化，1. OmL ?血-1;氨气，40mL ? mL-i;空气，400mL ? min-i;分流比：8:1;进样口溫度:250°C，检测器溫度300°C;程序升溫:初 始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备:取环己酬适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每ImL含12.5mg的溶 液，摇匀，作为内标溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密量取本品1.OmL,置IOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻 度，再精密量取1. OmL,置IOmL容量瓶中，精密加入内标溶液1. OmL,加无水乙醇稀释至刻度， 摇匀； (4) 对照品溶液的制备:精密称取香草醒对照品、马鞭草締酬对照品适量，加无水乙醇 溶解并稀释制成含香草醒〇.301mg ? ml/i及马鞭草締酬0.901mg ? ml/i的对照品储备溶液， 备用； 巧)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10化，注入气相色谱仪，进行检 测； (6)测定结果:本品每Ig含香草醒为0.211mg，含马鞭草締酬为0.213mg。
[0099] 实施例3: (1) 将当归粉碎20kg，置烘箱内50°C烘干化后，加25倍量50%丙酬，于70°C水浴回流提取 2次，每次80min，合并提取液，回收丙酬，得到当归总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏W氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在40°C水浴条件下揽拌 溶解，过滤，滤液在40°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3) 选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:9,上样体积6BV，水 洗6BV除杂，W乙酸乙醋：丙酬=100:2的洗脱剂7BV洗脱，流速为4BVA，收集洗脱液，洗脱液 浓缩，干燥，得本发明当归提取物9. Sg。
[0誦]含量测定： 采用高效液谱法对6-甲氧基-7-径基香豆素进行含量测定： (1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30:70的乙腊-7jC;检测波长： 200nm;柱溫:20°C;流速：1.0 mL ? min-1;进样量：10化； (2) 对照品溶液制备：精密称取80°C干燥至恒重的6-甲氧基-7-径基香豆素对照品适 量，加甲醇溶解制成每ImL含0.2mg的对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密称取本发明当归提取物IOmL,加甲醇40mL，加热回流地，提 取液回流溶剂并浓缩至干