，残渣加水IOmL溶解，用水饱和的正下醇振摇提取5次，每次20mL， 合并正下醇提取液，用氨试液洗涂3次，每次15mL，正下醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇 溶解并转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10化，注入高效液相色谱仪，进 行检测； 巧)测定结果：W每Ig本品含6-甲氧基-7-径基香豆素计，为0.14mg。
[0101] 采用气相色谱法对香草醒、马鞭草締酬进行含量测定： (1) 色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:化，1. OmL ?血-1;氨气，40mL ? mL-i;空气，400mL ? min-i;分流比：8:1;进样口溫度:250°C，检测器溫度300°C;程序升溫:初 始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备:取环己酬适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每ImL含12.5mg的溶 液，摇匀，作为内标溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密量取本品1.OmL,置IOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻 度，再精密量取1. OmL,置IOmL容量瓶中，精密加入内标溶液1. OmL,加无水乙醇稀释至刻度， 摇匀； (4) 对照品溶液的制备:精密称取香草醒对照品、马鞭草締酬对照品适量，加无水乙醇 溶解并稀释制成含香草醒〇.301mg ? ml/i及马鞭草締酬0.901mg ? ml/i的对照品储备溶液， 备用； 巧)测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10化，注入气相色谱仪，进行检 测； (6)测定结果:本品每Ig含香草醒为0.223mg，含马鞭草締酬为0.218mg。
[0102] 实施例4:片剂 取当归提取物，加入适量淀粉，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，包衣，即得。
[0103] 实施例5:片剂 取当归提取物，加入适量糊精，混匀，压片，即得。
[0104] 实施例6:硬胶囊剂 取当归提取物，加入适量糊精，混匀，制成颗粒，装入胶囊，制成硬胶囊剂，即得。
【主权项】
1. 一种具有抗肿瘤作用的当归提取物，其特征在于，该当归提取物是采用如下方法制 备的： (1) 将当归粉碎，置烘箱内40°C~50°C烘干3h~5h后，加15~25倍量50%~60%丙酮，于 60°C~70°C水浴回流提取2次~4次，每次70min~80min，合并提取液，回收丙酮，得到当归 总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏以氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在40°C~50°C水浴条件 下搅拌溶解，过滤，滤液在40°C~50°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3) 选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7~9,上样体积6BV ~8BV，水洗4BV~6BV除杂，以乙酸乙酯：丙酮=100:2的洗脱剂7BV~9BV洗脱，流速为2BV/h ~4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。2. 如权利要求1所述的当归提取物，其特征在于，该当归提取物是采用如下方法制备 的： (1) 将当归粉碎，置烘箱内40°C烘干5h后，加15倍量55%丙酮，于60°C水浴回流提取4次， 每次70min，合并提取液，回收丙酮，得到当归总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏以氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在50°C水浴条件下搅拌 溶解，过滤，滤液在50°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3) 选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7,上样体积8BV，水 洗4BV除杂，以乙酸乙酯：丙酮=100:2的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，洗脱液 浓缩，干燥，即得。3. 如权利要求1所述的当归提取物，其特征在于，该当归提取物是采用如下方法制备 的： (1) 将当归粉碎，置烘箱内50°C烘干3h后，加25倍量50%丙酮，于70°C水浴回流提取2次， 每次80min，合并提取液，回收丙酮，得到当归总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏以氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在40°C水浴条件下搅拌 溶解，过滤，滤液在40°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3) 选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:9,上样体积6BV，水 洗6BV除杂，以乙酸乙酯：丙酮=100:2的洗脱剂7BV洗脱，流速为4BV/h，收集洗脱液，洗脱液 浓缩，干燥，即得。4. 如权利要求1所述的当归提取物，其特征在于，该当归提取物是采用如下方法制备 的： (1) 将当归粉碎，置烘箱内45°C烘干4h后，加20倍量60%丙酮，于65°C水浴回流提取3次， 每次75min，合并提取液，回收丙酮，得到当归总提取物浸膏； (2) 将得到的当归总提取物浸膏以氯仿：甲醇=50:2的混合溶液在45°C水浴条件下搅拌 溶解，过滤，滤液在45°C水浴中减压浓缩后进行层析分离； (3) 选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8,上样体积7BV，水 洗5BV除杂，以乙酸乙酯：丙酮=100:2的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液 浓缩，干燥，即得。5. 如权利要求1~4中任意一项所述的当归提取物，其特征在于，采用高效液相色谱法 对6-甲氧基-7-羟基香豆素进行含量测定： (1) 色谱条件:采用Hypersi IDs色谱柱;流动相：比例为20~40:60~80的乙腈-水;检测 波长：190~210nm;柱温：15~25°C;流速:0 · 5~1 · 5mL · min-1;进样量：5~20yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的6-甲氧基-7-羟基香豆素对照品适量，加 甲醇溶解制成对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密称取本发明当归提取物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶 剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液 洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4 )测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20yL，注入高效液相色谱 仪，进行检测。6. 如权利要求5所述的当归提取物，其特征在于，采用高效液谱法对6-甲氧基-7-羟基 香豆素进行含量测定： (1) 色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30: 70的乙腈-水；检测波长： 200nm;柱温：20°C;流速：1 · OmL · min-1;进样量：10yL; (2) 对照品溶液制备：精密称取80°C干燥至恒重的6-甲氧基-7-羟基香豆素对照品适 量，加甲醇溶解制成每lmL含0.2mg的对照品溶液； (3 )供试品溶液的制备:精密称取本发明当归提取物1 OmL，加甲醇40mL，加热回流4h，提 取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL， 合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇 溶解并转移至l〇mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入高效液相色谱仪，进 行检测。7. 如权利要求1~4中任意一项所述的当归提取物，其特征在于，采用气相色谱法对香 草醛、马鞭草烯酮进行含量测定： (1) 色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2，0.5~1.5mL · ml/1;氢气，30 ~50mL · mL-S空气，300~500mL · min-S分流比：5~15:1;进样口温度：240~260°C，检测 器温度:290~310°C;程序升温:初始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保 持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备:取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标 溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密量取本品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量 取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；（4)对照品溶液的制备： 精密称取香草醛对照品、马鞭草烯酮对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香草醛及 马鞭草烯酮的对照品储备溶液，备用； (5) 测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20yL，注入气相色谱仪，进 行检测。8. 如权利要求7所述的当归提取物，其特征在于，采用气相色谱法对香草醛、马鞭草烯 酮进行含量测定： (1)色谱条件：色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2，1.0mL · mL-S氢气，40mL · mL-1;空气，400mL · min-1;分流比：8:1;进样口温度:250°C，检测器温度300°C;程序升温:初 始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每lmL含12.5mg的溶 液，摇匀，作为内标溶液； (3) 供试品溶液的制备：精密量取本品1. OmL，置1 OmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻 度，再精密量取1. OmL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1. OmL，加无水乙醇稀释至刻度， 摇匀； (4) 对照品溶液的制备:精密称取香草醛对照品、马鞭草烯酮对照品适量，加无水乙醇 溶解并稀释制成含香草醛〇.301mg · ml/1及马鞭草稀酮0.901mg · ml/1的对照品储备溶液， 备用； (5) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10yL，注入气相色谱仪，进行检 测。9. 如权利要求1~4任意一项所述的当归提取物，其特征在于，该当归提取物采用药学 中常规的制药方法制备成口服药物制剂。10. 如权利要求1~4任意一项所述的当归提取物在制备治疗胆囊息肉药物或保健品中 的应用。
【专利摘要】本发明属于植物提取物领域，涉及一种具有抗肿瘤作用的当归提取物。该提取物是采用如下方法制备的：（1）将当归粉碎，置烘箱内烘干后，加50%～60%丙酮，于水浴回流提取，提取液回收丙酮，得到当归总提取物浸膏；（2）将得到的当归总提取物浸膏以氯仿<b>:</b>甲醇=50:2的混合溶液在水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在水浴中减压浓缩后进行层析分离；（3）选用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7～9，上样体积6BV～8BV，水洗4BV～6BV除杂，以乙酸乙酯:丙酮=100:2的洗脱剂7BV～9BV洗脱，流速为2BV/h～4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
【IPC分类】A61P1/16, A61K36/232, A23L33/105, A61P35/00, G01N30/02
【公开号】CN105535050
【申请号】CN201610050553
【发明人】韩涛
【申请人】甘肃中医药大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月26日