一种用于治疗糖尿病的当归提取物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种当归提取物及含有该提取物的药物制 剂，该当归提取物可以应用于糖尿病的治疗。
【背景技术】
[0002] 当归是一味传统活血化瘀中药，以其藤汁红如鸡血而得名，药用历史悠久，始 见于《本草备要》，历代本草均有记载，《中国药典》规定其原植物为密花豆Spatholobus suberectusDunn，生于山野、深谷、疏林、密林中的阴湿处，它主要分布于广西、广东。当归 又名大血藤、血藤、血风藤、三叶当归，性温，味苦、甘，归肝、肾经。当归为中医治疗血症和风 湿的重要药物，广西龙州民间长期以来取其药汤治疗风湿性关节炎，疗效优异。
[0003] 当归化学成分复杂，主要含有黄酮类、萜类、甾醇类、木质素类及蒽醌类等 化学成分。目前分离得到的代表性化合物包括：表无羁砲醇（Friedelan-3 0 _〇1)、 胡萝卜戒（Daucosterol)、0 -谷留醇（0_sitosterol)、7-酮基-0-谷留醇 (7-0X0-0 -sitosterol)、刺芒柄花素（Formononetin)、芒柄花戒（Ononin)、樱黄素 (Prunetin)、阿佛洛莫生（Afrormosin)、大豆素（Daidzein)、3,7_ 二羟基-6-甲氧基二氢 黄酮醇、表儿茶精（Epicatechin)、异甘草戒元（Isoliquiritigenin)、3,4,2'，4' -四羟基 查耳酮、甘草查耳酮（Licochalcone)A、苜猪酸（Medicagol)、原儿茶酸（Protocatechuic acid)、9_甲氧基香豆雌酸（9-methoxycoumestrol)和木豆异黄酮（Cajanin)等。
[0004] 现代药理研究表明当归具有降血压、抗癌、抑菌、抗放射线的功效。近年来临床上 常用当归治疗贫血，各种原因（如放疗、化疗）引起的白细胞、血小板、红细胞等全血象减少 和再生障碍性贫血等疾病，且疗效较好。现代药理学研究证明，当归还具有降血糖、抗病毒、 免疫调节、对酪氨酸酶双向调节、抗炎、抗氧化、镇静催眠等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种当归提取物，其制备方法和液相分析方法，含有该提 取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗糖尿病的药物的用途。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] -种当归提取物，该提取物由以下方法制备：
[0008] (a)将干燥的当归用75%乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到 乙醇提取浓缩液；(b)将步骤（a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗10个 柱体积除去大极性成分，再用65 %乙醇洗脱12个柱体积，收集65 %洗脱液，减压浓缩，即得 当归提取物。
[0009] 进一步地，步骤（C)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0010] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的当归提取物的批间 差异，所述当归提取物的液相分析方法为：
[0011] 色谱柱：DiamonsilC18 柱（4. 6mmX250mm，5ym);
[0012] 流动相：A为乙腈，B为0. 1 %磷酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 2);
[0013] 梯度洗脱程序：0? 01 ~70min，A20% - 80% ;
[0014] 流动相流速：1.OmL?minS
[0015] 检测波长：240nm;
[0016] 柱温：30°C;
[0017] 进样量：10yL。
[0018] 药物制剂，含有治疗有效量的所述当归提取物和药学上可接受的载体。
[0019] 所述的当归提取物在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
[0020] 所述的药物制剂在制备治疗糖尿病的药物中的应用。
[0021] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0022] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明当归提取物，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0023] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0024] 本发明的优点：本发明通过对当归进行提取、除杂、富集处理，能得到具有糖尿病 治疗作用的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图谱，用于 控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0025] 图1为当归提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0027] 实施例1 :当归提取物制备
[0028] 药材来源：当归购自安徽亳州中药材市场，产地陕西。
[0029] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购 自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA;85 %磷酸为HPLC级，购于TEDIA; 色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。
[0030] 制备方法：将10kg干燥的当归用75%乙醇溶液热回流提取（25LX3次），合并提 取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（3L);将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至4L，依 次用石油醚（4LX3次）、乙酸乙酯（4LX3次）和水饱和的正丁醇（4LX3次）萃取，减压 浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物275g; (c)正丁醇萃取物用 1L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体积1. 5L)富集活性成分，先用10% 乙醇冲洗10个柱体积（15L)除去大极性成分，再用65%乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集 65%洗脱液，减压浓缩，即得当归提取物115g。
[0031] 实施例2:液相色谱分析
[0032] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的当归提取物5mg至50mL棕色容量瓶中， 加30mL20%乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加20%乙腈水溶液定容。
[0033] 分析方法：
[0034] 高效液相色谱仪：Agilent1260,二元栗；
[0035] 色谱柱：DiamonsilC18 柱（4. 6mmX250mm，5ym);
[0036] 流动相：A为乙腈，B为0. 1 %磷酸溶液（三乙胺调节pH值至6. 2);
[0037] 梯度洗脱程序：0? 01 ~70min，A20% - 80% ;
[0038] 流动相流速：1.OmL?minS
[0039] 检测波长：240nm;
[0040] 柱温：30°C;进样量：10yL。
[0041] 用制备的10批次的当归提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1~9号峰在10 批样品色谱图中均出现。因此标定9个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC质量控 制图谱，结果见图1。该10批次的提取物药理活性相似。
[0042] 实施例3 :当归提取物药理试验
[0043] 一、材料和方法
[0044] 1、材料
[0045] (1)实验样品：当归提取物（MGC)自制。
[0046] (2)实验动物：雄性昆明种小白鼠，体重（22±2)g，由南京大学动物中心提供。
[0047] (3)主要试剂：四氧嘧啶购自Sigma公司；消渴丸购自广州中药一厂；血糖试剂盒 购自北京中生生物工程技术公司；SOD，GSH-Px，MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所； TC，TG，HDL-C测试盒购自上海科欣生物技术研究所。
[0048] (4)主要仪器：ShimadzuUV-265FW紫外-可见分光光度计，日本。
[0049] 2、方法
[0050] (1)实验性四氧嘧