专利名称：一种制备白花丹苷a的方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种制备白花丹苷A的方法。
背景技术：
白花丹苷A (Plumbaside A)为酚苷类物质，CAS 号 126582-70-5，分子式 C17H20O8,分子量352. 34。白花丹苷A来源于白花丹科(Plumbaginaceae)小蓝雪花的全草，具有免疫促进作用，体外在浓度为100 lpg/ml时能提高T-淋巴细胞的增殖能力。小蓝雪花为白花丹科蓝雪花属落叶灌木，我国特产。分布于四川西部和西藏东部，南至云南中部，北达甘肃文县；生于干热河谷的岩壁和砾石或砂质基地上，多见于山麓、路边、河边向阳处。全株治主治风湿麻木；脘腹胁痛；跌打损伤；骨折；脉管炎；腮腺炎。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备白花丹苷A的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的
(1)取小蓝雪花全草粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解1-3天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，过滤后得到提取液；
(2)提取液用超滤膜超滤，透过液加入聚酰胺色谱柱，用乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物；
(3 )把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得白花丹苷A。步骤(I)中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的
2-5%0。步骤(2)中所述的超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素超滤膜。步骤(2)中所述的聚酰胺树脂为200-400目，乙醇水溶液浓度为60_75%，用量是
3-6BV。步骤(3)中所述的高速逆流色谱的溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水，比例为45-50:1-2:47-51，下相为流动相，上相为固定相。本发明采用生物酶发酵，可以缩短提取周期，提高提取率；采用膜过滤技术分离，物理方法除杂，操作简单，不污染环境；采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，制备量大。
具体实施例方式
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明。 实施例I :
取纤维酶5g溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解3天，酶解原料用70°C温水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液过滤后用截留分子量2000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用4BV60%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物20g。取乙酸乙酯、甲醇、水按45:1:47混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A2. Og,经HPLC检测，纯度98. 9%。实施例2:
取淀粉酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解I天，酶解原料用60°C温水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用6BV65%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:2:51混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机SOOrpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A2. 5g，经HPLC检测，纯度98. 1%。实施例3
取淀粉酶5和果胶酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解I天，酶解原料用60°C温水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用3BV70%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:1:50混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机850rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2. 5ml/min,同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A2. 7g，经HPLC检测，纯度98. 7%。实施例4:
取淀粉酶25g溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解2天，酶解原料用80°C温水浸泡提取2次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用5BV60%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:2:48混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机SOOrpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A3. Ig,经HPLC检测，纯度98. 2%。实施例5:
取淀粉酶5和果胶酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解I天，酶解原料用60°C温水浸泡提取3次，每次加20kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用3BV75%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物19g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:1:49混合，充分分层后，取上相 注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A3. 5g，经HPLC检测，纯度98. 0%。
权利要求
1.一种制备白花丹苷A的方法，其特征在于以下步骤 (1)取小蓝雪花全草粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解1-3天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，过滤后得到提取液； (2)提取液用超滤膜超滤，透过液加入聚酰胺色谱柱，用こ醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物； (3 )把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得白花丹苷A。
2.据权利要求I所述的制备白花丹苷A的方法，其特征在于步骤(I)中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的2-5%。。
3.根据权利要求I所述的制备白花丹苷A的方法，其特征在于步骤(2)中所述的超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素超滤膜。
4.根据权利要求I所述的制备白花丹苷A的方法，其特征在于步骤(2)中所述的聚酰胺树脂为200-400目，こ醇水溶液浓度为60-75%，用量是3-6BV。
5.根据权利要求I所述的制备白花丹苷A的方法，其特征在于步骤(3)中所述的高速逆流色谱的溶剂系统为こ酸こ酷-甲醇-水，比例为45-50:1-2:47-51，下相为流动相，上相为固定相。
全文摘要
本发明公开了一种制备白花丹苷A的方法。方法步骤如下(1)取小蓝雪花全草粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解1-3天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，过滤后得到提取液；(2)提取液用超滤膜超滤，透过液加入聚酰胺色谱柱，用乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物；(3)把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得白花丹苷A。采用本发明制备白花丹苷A，方法操作简单、效率高、制备量大，所得产品纯度高。
文档编号C07H1/08GK102659862SQ201210122808
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月25日 优先权日2012年4月25日
发明者万冬梅, 刘东锋 申请人:南京泽朗医药科技有限公司