专利名称：一种去氢臭葱素的制备方法
技术领域：
本发明属于天然植物萃取领域，具体涉及一种去氢臭葱素的制备方法。
背景技术：
去氢臭葱素(Dehydroodorin),分子式C18H22N2O2,分子量298. 39。去氢臭葱素是从楝科(Meliaceae)米仔兰叶中萃取分离的一种吡咯生物碱类化合物。实验研究表明，去氢臭葱素具有细胞毒活性。对P388淋巴白血病细胞的ED50为3. 86μ g/ml。米仔兰微温，归肺、胃、肝经，具有祛风湿、散瘀肿的功效，主治风湿关节痛、跌打损伤、痈疽肿毒等症。米仔兰枝叶含三萜类成分米仔兰醇(aglaiol)，米仔兰酮二醇(aglaiondiol),米仔兰三酸(aglaitriol)及其异构体和米仔兰酮(aglaione),并含生物 碱米仔兰碱(odorine),米仔兰酸碱(odorinol),去氢臭葱素(Dehydroodorin),以及苯并呋喃类化合物洛克米兰醇(rocaglaol),洛克米兰酰胺(rocaglamide),去甲基洛克米兰酰胺(desmethylrocaglamide)和洛克米兰酸甲酯(methyl rocaglate),另含一种卩密唳酮类化合物米仔兰唳(aglaidin)。米仔兰叶全年可采,资源丰富。目前，国内尚未见去氢臭葱素的萃取纯化方法方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种去氢臭葱素的制备方法，该方法操作简单、生产周期短、安全环保，可快速大量分离高纯度去氢臭葱素。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下
(1)萃取取米仔兰叶粉碎成粗粉，与8-12倍量70-95%的乙醇溶液混合后，空化混悬20-50min，进行负压空化混悬固液萃取1_2次，得到萃取液；
(2)氧化铝柱层析上述萃取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩；
(3)高速逆流色谱仪分离上述浓缩液采用高速逆流色谱仪分离，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-O. 2MHC1为两相溶剂系统，紫外检测器在线监测，收集去氢臭葱素组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得去氢臭葱素粗晶；
(4)重结晶将去氢臭葱素粗晶用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体。步骤(I)所述乙醇溶液浓度为85%。步骤(2)所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4_6倍。步骤(3)所述正己烷-乙酸乙酯-甲醇-O. 2MHC1体积比为(2_3· 5): (4_7): (1_3):(8-11)，紫外检测波长为282nm。本发明的优点在于1)操作简单、耗时短，易于产业化放大；2)采用负压空化混悬固液萃取的方法对植物原料中的蓖麻碱进行提取，时间短，效率高；3)柱层析和高速逆流色谱等步骤，易操作，可以快速得到高纯度产品；4)具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为去氢臭葱素的进一步开发提供药理原料和实践支持。
具体实施例方式 下面结合具体实施例对本发明进一步说明
实施例I:
取米仔兰叶1kg，粉碎成粗粉，与8L85%的乙醇溶液混合后，空化混悬50min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，萃取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝(120目)拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、O. 2MHC1按体积比为3 5 3 8混合，静置分层，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节900r/min，取下相溶解粗品注入色谱仪，紫外在线检测，检测波长为282nm，收集目标成分，减压回收试剂得去氢臭葱素粗晶，用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体，经HPLC检测， 纯度97. 5%。实施例2:
取米仔兰叶1kg，粉碎成粗粉，与10L85%的乙醇溶液混合后，空化混悬20min，进行负压空化混悬固液萃取I次，得到萃取液，萃取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(80目)拌匀、干燥后装柱，用4倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、O. 2MHC1按体积比为2.5 :5 2 :10混合，静置分层，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节900r/min，取下相溶解粗品注入色谱仪，紫外在线检测，检测波长为282nm，收集目标成分，减压回收试剂得去氢臭葱素粗晶，用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体，经HPLC检测，纯度
97.2%。实施例3:
取米仔兰叶10kg，粉碎成粗粉，与120L85%的乙醇溶液混合后，空化混悬30min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，萃取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(100目)拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、O. 2MHC1按体积比为2 4 1 8混合，静置分层，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节950r/min，取下相溶解粗品注入色谱仪，紫外在线检测，检测波长为282nm，收集目标成分，减压回收试剂得去氢臭葱素粗晶，用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体，经HPLC检测，纯度
98.1%。实施例4:
取米仔兰叶10kg，粉碎成粗粉，与100L85%的乙醇溶液混合后，空化混悬35min，进行负压空化混悬固液萃取I次，得到萃取液，萃取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(100目)拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、O. 2MHC1按体积比为3. 5 7 3 11混合，静置分层，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节900r/min，取下相溶解粗品注入色谱仪，紫外在线检测，检测波长为282nm，收集目标成分，减压回收试剂得去氢臭葱素粗晶，用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体，经HPLC检测，纯度 97. 0%。
权利要求
1.一种去氢臭葱素的制备方法，其特征在于它包括以下步骤 (1)萃取取米仔兰叶粉碎成粗粉，与8-12倍量70-95%的こ醇溶液混合后，空化混悬20-50min，进行负压空化混悬固液萃取1_2次，得到萃取液； (2)氧化铝柱层析上述萃取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩； (3)高速逆流色谱仪分离上述浓缩液采用高速逆流色谱仪分离，以正己烷-こ酸こ酷-甲醇-O. 2MHC1为两相溶剂系统，紫外检测器在线监测，收集去氢臭葱素组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得去氢臭葱素粗晶； (4)重结晶将去氢臭葱素粗晶用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体。
2.根据权利要求I所述的去氢臭葱素的制备方法，其特征在于步骤(I)所述こ醇溶液浓度为85%。
3.根据权利要求I所述的去氢臭葱素的制备方法，其特征在于步骤(2)所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为I: I，用量为柱体积的4-6倍。
4.根据权利要求I所述的去氢臭葱素的制备方法，其特征在于步骤(3)所述正己烷-こ酸こ酯-甲醇-O. 2MHC1体积比为(2-3. 5) : (4-7) : (1-3) : (8-11)，紫外检测波长为282nm。
全文摘要
本发明公开了一种去氢臭葱素的制备方法，其制备方法是(1)取米仔兰叶粗粉，与70-95%的乙醇溶液混合后，进行负压空化混悬固液萃取，得到萃取液；(2)将萃取液浓缩，再经氧化铝柱层析；(3)高速逆流色谱仪分离；(4)甲醇重结晶，得到高纯度的去氢臭葱素产品。本发明方法简单、得率高，可得到高纯度产品，具有较高的经济价值和学术价值。
文档编号C07D207/14GK102838521SQ20121037340
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司