专利名称：一种制备黑蔓素g-1的方法
技术领域：
本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种制备黑蔓素G-I的方法。
背景技术：
黑蔓素G-I (Triptogelin G-1)是一种倍半職类化合物,分子式为C26H34O5,分子量为426. 55。为白色粉末，mp. 137-139°C。来源于卫矛科大芽南蛇藤、南蛇藤、冠叶南蛇藤、黑蔓雷公藤等植物中，其中以大芽南蛇藤含量较高。杨华等对大芽南蛇藤水解产物的生物活性研究表明，药理研究表明，黑蔓素G-I具有杀虫活性，可作为拒食剂。经文献检索，尚未发现黑蔓素G-I的工业提取纯化方法的相关报道
发明内容
本发明的目的在于提供一种制备黑蔓素G-I的方法。本发明提供的从大芽南蛇藤种子中提取制备黑蔓素G-I的方法步骤如下
(1)将大芽南蛇藤种子药材粉碎，用乙醇微波提取2-3次，每次10-60min，合并提取液旋转蒸发浓缩得到浸膏；
(2)将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液分散，乙酸乙酯和水的体积比为8:2，静置分层10-24h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物，将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液溶解，过滤，正己烷和甲醇的体积比为2:1，滤液静置分层4-8h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物；
(3)甲醇萃取物通过硅胶柱层析，以正庚烷-乙醚为洗脱剂进行梯度洗脱，得到黑蔓素G-I流分；
(4)将黑蔓素G-I流分浓缩后用等体积甲醇分散，以尼龙膜过滤，经制备液相ODSRP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩得到黑蔓素G-I。所述步骤(I)中大芽南蛇藤种子粉碎过20-60目筛。所述步骤(3 )中正庚烷-乙醚梯度洗脱是按正庚烷-乙醚体积比10:1、5:1、3:2进行梯度洗脱。所述步骤(4)中尼龙膜为孔径0.45 μ m的尼龙膜。所述步骤(4 )中甲醇和水的混合溶液是用73%甲醇水溶液。本发明的特点在于首次从大芽南蛇藤种子中分离得到黑蔓素G-1，制备方法简单、采用乙醇微波提取，进一步用双水相萃取和柱层析纯化结晶，以及制备液相分离纯化得到高纯度的晶体，为大规模自动化生产提供了可能，节省了分离时间，提高了分离率。
具体实施例方式 下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但本发明不限于此。实施例I :
将5kg干燥的大芽南蛇藤种子茎叶粉碎过40目筛，用85%乙醇微波提取3次，每次30min，合并提取液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的体积比为8:2)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层20h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的体积比为2:1)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层4h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析(甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:3)，按正庚烷-乙醚体积比10:1、5: I、3:2进行梯度洗脱，每个梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的组分，旋转蒸发，浓缩得到黑蔓素G-1，纯度约为81%，进一步，用少量甲醇完全溶解所得产物，用O. 45 μ m尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以73%甲醇水溶液进行洗脱，浓缩得到纯度大于98%的黑蔓素G-I纯品。实施例2:
将5kg干燥的大芽南蛇藤种子茎叶粉碎过20目筛，用90%乙醇微波提取2次，每次60min，合并提取液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的体积比为8:2)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层10h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的体积比为2:1)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层5h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取 物通过硅胶柱层析(甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:4)，按正庚烷-乙醚体积比10:1、5:1、3:2进行梯度洗脱，每个梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的组分，旋转蒸发，浓缩得到黑蔓素G-I，纯度约为82%，进一步，用少量甲醇完全溶解所得产物，用O. 45 μ m尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以73%甲醇水溶液进行洗脱，浓缩得到纯度大于98%的黑蔓素G-I纯品。实施例3
将5kg干燥的大芽南蛇藤种子茎叶粉碎过60目筛，用80%乙醇微波提取4次，每次lOmin，合并提取液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的体积比为8:2)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层14h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的体积比为2:1)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层8h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析(甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:3)，按正庚烷-乙醚体积比10:1、5: I、3:2进行梯度洗脱，每个梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的组分，旋转蒸发，浓缩得到黑蔓素G-I，纯度约为80%，进一步，用少量甲醇完全溶解所得产物，用O. 45 μ m尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以73%甲醇水溶液进行洗脱，浓缩得到纯度大于98%的黑蔓素G-I纯品。实施例4:
将5kg干燥的大芽南蛇藤种子茎叶粉碎过20目筛，用75%乙醇微波提取2次，每次40min，合并提取液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的体积比为8:2)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层24h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的体积比为2:1)搅拌溶解，过滤，滤液静置分层6h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析(甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:5)，按正庚烷-乙醚体积比10:1、5: I、3:2进行梯度洗脱，每个梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的组分，旋转蒸发，浓缩得到黑蔓素G-I，纯度约为83%，进一步，用少量甲醇完全溶解所得产物，用O. 45 μ m尼龙膜过滤，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以73%甲醇水溶液进行洗脱，浓缩得到纯度大于98%的黑蔓素G-I纯品。 ·
权利要求
1.一种制备黑蔓素G-I的方法，其特征在于该方法包括以下步骤 (1)将大芽南蛇藤种子药材粉碎，用こ醇微波提取2-3次，每次10-60min，合并提取液旋转蒸发浓缩得到浸膏； (2)将浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液分散，こ酸こ酯和水的体积比为8:2，静置分层10-24h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到こ酸こ酯萃取物，将こ酸こ酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液溶解，过滤，正己烷和甲醇的体积比为2:1，滤液静置分层4-8h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物； (3)甲醇萃取物通过硅胶柱层析，以正庚烷-こ醚为洗脱剂进行梯度洗脱，得到黑蔓素G-I流分； (4)将黑蔓素G-I流分浓缩后用等体积甲醇分散，以尼龙膜过滤，经制备液相ODSRP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩得到黑蔓素G-I。
2.如权利要求I所述的ー种制备黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步骤(I)中大芽南蛇藤种子粉碎过20-60目筛。
3.如权利要求I所述的ー种制备黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步骤(3)中正庚烷-こ醚梯度洗脱是按正庚烷-こ醚体积比10:1、5:1、3:2进行梯度洗脱。
4.如权利要求I所述的ー种制备黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步骤(4)中尼龙膜为孔径O. 45 μ m的尼龙膜。
5.如权利要求I所述的ー种制备黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步骤(4)中甲醇和水的混合溶液是用73%甲醇水溶液。
全文摘要
本发明公开了一种制备黑蔓素G-1的方法，它是将大芽南蛇藤种子作原料，用乙醇提取，将提取液浓缩后得到浸膏，先用乙酸乙酯-水体系分配，取上相减压回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物，将乙酸乙酯萃取物再用正己烷-甲醇体系分配，取下相减压浓缩得到甲醇萃取物，通过硅胶柱色谱，以正庚烷-乙醚洗脱梯度洗脱，收集含黑蔓素G-1流分，浓缩后用等体积甲醇分散，以尼龙膜过滤，经制备液相ODSRP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩得到黑蔓素G-1。
文档编号C07D307/94GK102838573SQ20121037340
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司