对类风湿关节炎的治疗的制作方法

对类风湿关节炎的治疗的制作方法
【专利摘要】治疗类风湿关节炎(RA)以在患者中提供临床益处，这些益处包括将DAS28-CRP减少超过1.2和/或由ACR2O、ACR5O或ACR70确定的改善，治疗包括给予靶向粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子受体α(GM-CSFRO)的Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序的治疗性抗体马威利姆单抗(mavrilimumab)或其他抑制剂。使用GM-CSFRO抑制剂如马威利姆单抗以增强在接受稳定剂量的DMARD、尤其是甲氨蝶吟的RA患者中的临床益处。
【专利说明】对类风湿关节炎的治疗
发明领域
[0001]本发明涉及通过给予一种抑制剂如治疗性抗体马威利姆单抗(mavrilimumab),通过抑制粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子受体α亚单元(GM-CSFRa )的生物效应来治疗类风湿关节炎。
[0002]直量
[0003]类风湿关节炎(RA)是一种慢性炎症的以及破坏性的关节疾病，它影响了工业化世界中大约1%的人口。它对女人的影响比对男人的多大约3倍，并且通常在40-60岁之间发作。RA的特征在于滑膜的增生和炎症、滑液内的炎症、以及周围骨骼和软骨的渐进性破坏。它是一种痛苦的病症，可引起严重的残疾并最终影响一个人进行日常任务的能力。RA的影响在个体之间不同，但该疾病可以很迅速地进展，引起关节附近软骨和骨骼的肿胀和损坏。任一关节都可被影响，但常常是手、脚和腕。内部器官如肺、心脏和眼睛也可受影响。
[0004]RA的起因还是未知的，尽管研究已经解释了潜藏于该疾病中的炎症性过程的一些方面。RA被认为是通过T细胞介导的抗原特异性过程启动和驱使的。简要地说，在易感的宿主体内的一种未识别的抗原的存在被认为启动了 T细胞应答，该T细胞应答引起T细胞细胞因子的产生与随之发生的炎性细胞的募集，这些炎性细胞包括嗜中性细胞、巨噬细胞和B细胞。
[0005]许多促炎性和抗炎性细胞因子在患类风湿病的关节中产生。疾病进展、再活化和沉默是经由该关节内的细胞因子产生中的动力学变化介导的。具体地，TNF-a和IL-1被认为在RA的发病机理中起到关键作用。
[0006]GM-CSF是被认为是通过嗜中性细胞和巨噬细胞的活化、分化和存活而贡献于RA的发病机理的I型促炎细胞因子。在啮齿动物模型中的研究提出在RA的发展和进展中关于GM-CSF的一个中心的和非冗余的作用[1，2，3，4，5]。例如，在小鼠的胶原诱导性关节炎(CIA)和单关节的关节炎模型中，给予鼠类抗GM-CSF单克隆抗体(mAb)显著地减轻了疾病严重性。在该CIA模型中，mAb治疗在治疗既定疾病的进展、组织病理学以及显著降低关节IL-1和TNF-a水平中是有效的。另外，在关节炎发作之前的mAb治疗减弱了 CIA疾病严重性[5，6]。W02007/110631提出了通过使用一种治疗性抗体抑制GM-CSFR α的一种新的RA疗法。
[0007] 马威利姆单抗(CAM-3001)是靶向GM-CSFR的α亚单元的一种人类单克隆抗体。在32个患有RA的受试者中进行的马威利姆单抗的I期单一升静脉内剂量研究表明了足够的安全性和耐受性曲线，以及生物学活性的初始指示，如急性期反应体的正常化和在具有中等疾病活性的患者中28-关节评价疾病活性评分(DAS28)的可能降低[7]。
[0008]RA的当前药物管理包括镇静剂治疗，尤其是镇痛药和非留体抗炎药(NSAID)，以及限制疾病严重性和进展的治疗，包括疾病缓解药(DMARD)和生物制品。使用DMARD建立的RA的管理包括给予单一的DMARD，例如甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、羟基氯喹或来氟米特、以及它们的组合使用，例如甲氨蝶呤可以与柳氮磺吡啶和/或羟基氯喹组合。甲氨蝶呤是一种抗代谢药和抗叶酸剂，尽管它对RA的功效被认为是归于T细胞活化的抑制和黏附分子(ICAM-1)的表达[8]。
[0009]对于RA的生物试剂的临床使用主要涉及TNF α的抑制剂。这些包括英利昔单抗(Remicade (类克)?)、依那西普(Hnhrel (悉博)《)、阿达木单
抗(Humira (修美乐)*)、培舍珠单抗(Cimzia (塞妥珠)++?+')和戈利木单抗
(Simponi (?普尼)?)。英利昔单抗是通过静脉内输注给予，而其他四种是由患者在
家里皮下注射的。还已经开发了一种抗白细胞介素I抑制剂，Kineret (阿那白滞素)K
近来，抗B淋巴细胞药物利妥昔单抗(Mabthera (美罗华)?-或Rituxan (瑞图宣)?)已经
被批准用于治疗抗TNF疗法失败的RA患者。Mabthera (美罗华)《是作为相隔14天的两
次输注的一种初治给予的。经历了持续高达六个月的改善的那些患者可以进而进行重复输注。
[0010]尽管有这些进展，RA代表了一个显著的未满足的医疗需要。虽然早期的诊断和治疗可以改善长期预后，但是目前RA尚不可治愈。需要改善的疗法以减少该疾病的严重性和进展，并改善患者的生活质量。
[0011]由Campbell (坎贝尔)等人[9]的一个最新综述讨论了用于治疗RA的下一代单克隆抗体的开发。
[0012]对RA被控制的程度的一个测量是疾病活性得分(DAS) [10]。DAS是通过执业医师基于各种确认的疾病活性(包括RA的体征)的测量来计算的。DAS的减小反映疾病严重性的减小。DAS小于2.6指示疾病缓解。DAS在2.6和3.2之间指示低的疾病活性。DAS大于
3.2指示疾病活性的增加，并且在此水平可评估患者的疗法以确定疗法中的变化是否得以保证。DAS大于5.1指示严重的疾病活性。在计算DAS中的可变性可以包括评价患者不同数量的关节以及监测不同的血液组分。DAS28是疾病活性得分，其中身体中28个关节被评价以确定压痛关节数目以及肿胀关节数目[11]。当DAS28计算包括测量C-反应蛋白(CRP)而不是红细胞沉降率(ESR)时，它被称为DAS28-CRP[12]，[13]。CRP被认为是比ESR更直接的炎症量度，并且对短期变化更敏感[14]。CRP产生与RA的放射学进展是相关的[15]并且被认为在测量RA疾病活性上至少与ESR —样有效[16，17]。
[0013]美国风湿病学会(ACR)在对RA进行分类上提出了一系列标准。常用的标准是ACR1987修订标准[18]。根据ACR标准进行RA诊断需要患者满足最小数目的所列标准，如压痛关节计数或肿胀关节计数、硬挺度、疼痛、射线照相指示和血清类风湿因子测量。ACR20、ACR50和ACR70是常用的测量以显示RA疗法的功效，尤其在临床试验中。ACR20表示测量的ACR标准中20%的改善。类似的，ACR50表示测量的ACR标准中50%的改善，并且ACR70表示测量的ACR标准中70%的改善。
[0014]对RA患者中残疾的单独患者报告的测量是健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI)。HAQ-DI得分表示在患者报告的进行日常任务的能力方面的身体机能，包括他们在进行活动中经受的困难水平。通过记录患者进行日常活动的能力，该HAQ-DI得分可被用作对他们生活质量的一种测量。
[0015]发明简沭
[0016]本 发明涉及对于RA的治疗以提供临床益处，包括减少DAS28-CRP和增加获得临床益处的患者的数目，如由ACR20、ACR50和ACR70确定的。另外，本发明涉及改善RA患者的身体机能的方法和组合物，如通过HAQ-DI确定的。
[0017]在此第一次报导的是来自2期临床试验的显著的阳性结果，其中RA患者接受抗-GMCSFRa抗体马威利姆单抗。
[0018]在这一双盲试验中，将根据DAS28-CRP具有至少中等的疾病活性的并已经经受稳定剂量的甲氨蝶呤治疗的RA患者随机化到不同皮下剂量的马威利姆单抗或安慰剂组。在用IOOmg剂量的马威利姆单抗治疗的组中，实现DAS28-CRP减少超过1.2的患者的比例是对照组的大约两倍。ACR得分连同它们的单独组分也显示了相似大小的显著改善。在欧洲临床试验的最高剂量组(IOOmg)中，在第85天，DAS28缓解标准在23.1%的患者中得到满足，与安慰剂组中6.7%的患者形成对比。对于组合的欧洲和日本临床试验，在第85天对于IOOmg剂量的DA28缓解标准在23.4%的患者中得到满足，与给定的安慰剂组中7.6%的患者形成对比。在本研究中，在治疗期间或在12周继而进行的时期期间，在呼吸机能参数、机会性感染、严重的过敏反应或实验室异常上未观察到改变，指示良好的安全性特性。
[0019]此研究首次显示:在RA治疗中靶向GM-CSFRa可提供潜在的新的治疗选择，同时提供反应的快速和意义深远的开始，尤其在更高的剂量组类中。
[0020]马威利姆单抗是一种人类IgG4单克隆抗体，它被设计为通过靶向GM-CSFR α来调节巨噬细胞活化、分化和存活。它是GM-CSFR α的生物活性的有力的中和剂，并且不希望受理论约束，可通过结合GM-CSFRa而对在RA患者的滑膜关节内的白细胞发挥治疗效果，导致减少的细胞存活和活化。W02007/110631报导马威利姆单抗和它的变体的分离和表征，这些变体共有高效能地中和GM-CSFRa的生物活性的能力。认为这些抗体的功能特性至少在部分上可归因于结合在如SEQ ID NO: 206所示的人类的GM-CSFR α的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，由此抑制GM-CSFR α和其配体GM-CSF之间的关联。
[0021]因此，在一个第一方面，本发明是一种在患者中治疗RA以提供临床益处的方法，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)测量的，后者由1987ACR标准确定,该方法包括向该患者给予一种组合物,该组合物包括一个治疗有效量的一种GM-CSFRα抑制剂。
[0022]根据本发明的一种另外的方法是一种改善RA患者的身体机能的方法，如通过HAQ-DI确定的,该方法包括向该患者给予一种组合物,该组合物包括一个治疗有效量的一种GM-CSFR α抑制剂。
[0023]优选地，该抑制剂是马威利姆单抗。也可使用马威利姆单抗的变体，并且在此描述了这些变体。本发明涵盖抗体分子或其他抑制剂的使用，这些抗体分子或其他抑制剂共有马威利姆单抗的功能特性，如以下的任一种或多种:结合至GM-CSFRa的胞外域，抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，结合在如SEQ ID NO: 206所示的人类GM-CSFR α的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序,和/或在一个表面等离子体共振测定中，以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
[0024]在一个第二方面，本发明是一种包括GM-CSFR α抑制剂的组合物，用于在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法中使用，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过
1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)测量的，后者由1987ACR标准确定，和/或用于在一种改善RA患者的身 体机能(如通过HAQ-DI确定的)的方法中使用。[0025]在一个第三方面，本发明是一种包括以下的产品或试剂盒:
[0026](i) 一种被封装在一个容器中的包括该GM-CSFRa抑制剂的组合物，以及
[0027](ii)关于在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法中使用该抑制剂的一个包装说明书或有说明的标签，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)测量的，后者由1987ACR标准确定，和/或关于在一种改善RA患者的身体机能(如通过HAQ-DI确定的)的方法中使用的包装说明书或有说明的标签，其中该方法包括向该患者给予一个治疗有效量的该抑制剂。
[0028]在这样一种产品或试剂盒中，这些组件总体上为无菌的并且处于密封小瓶或其他容器中。
[0029]待治疗的患者可患有RA，如根据1987ACR标准确定的。该患者可在治疗之前对于类风湿因子(RF)和/或抗环瓜氨酸肽(CCP)IgG抗体测试呈阳性。RF阳性和抗CCP抗体阳性状态证实RA的诊断。该患者可患有RA持续至少5年或至少7年的时间，例如在5和10年之间。
[0030]待治疗的患者可具有在至少3.2或至少5.1的基线DAS28-CRP，如在开始用该GM-CSFRa抑制剂治疗之前测量的。已显示根据本发明的抑制剂在甚至患有严重RA的患者中也是有效的，这些患者包括在治疗之前具有大于5.1的基线DAS28-CRP的患者。
[0031]治疗的患者可接受一个稳定剂量的DMARD，如甲氨蝶呤，与用本发明的GM-CSFRa抑制剂的治疗组合。优选地，在用根据本发明的抑制剂的疗法开始之前，治疗的患者将已经接受了一个稳定剂量的DMARD，例如甲氨蝶呤持续至少4周。优选地甲氨蝶呤的剂量是每周7.5至25mg之间。
[0032]优选地，待用根据本发明的一种抑制剂治疗的患者不患有呼吸道疾病。在给予GM-CSFRa抑制剂之前可对患者进行测试以确认他们不患有医学上显著的呼吸道疾病，例如肺炎。针对呼吸道疾病的测试的方法包括胸部X光片以及通过肺呼吸量测定法以及一氧化碳弥散量(DLCO)来评价肺功能。优选地患者也不患有临床上显著的慢性或复发性感染，如丙型肝炎或慢性活动性乙型肝炎感染。可在根据本发明的治疗之前针对这类感染对患者进行测试。
[0033]当在此参照“一个患者”说明治疗和临床益处时，应理解这可包括治疗一组患者。优选地患者是成年人。患者可以是例如从18至80岁的年龄。
[0034]此处所述的这些方法中实现的临床益处可包括以下效果中的任一个或多个。
[0035]该临床益处可以是DAS28-CRP减少超过1.2。DAS28-CRP的减少可以在至少40%、至少50%或至少60%的治疗患者中实现。该临床益处可包括与未用该抑制剂治疗的对照患者相比，增加了实现DAS28-CRP减少超过1.2的患者的比例。
[0036]该临床益处可包括RA的缓解。典型地，缓解是通过DAS28-CRP小于2.6定义的。缓解可在至少10%的患者、或至少20%的患者中实现。与未用根据本发明的GM-CSFRa抑制剂治疗的患者相比，在此所述的治疗的患者中开始缓解的时间可被减少。达到缓解的时间可被减少大约50%。
[0037]该临床益处可以是治疗功效提高至少20%、至少50%或至少70%，如通过1987ACR标准确定的，即，该临床益处可以是对应地实现ACR20、ACR50或ACR70。优选地，该临床益处包括在至少40%、50%、60%或70%的患者中达到ACR20。它可包括在至少20%或至少30%的患者中实现ACR50。它可包括在至少5%、10%或15%的患者中实现ACR70。
[0038]对RA患者特别具有价值的临床益处的一个形式是他们执行日常活动的能力的改善。本发明的方法可包括改善患者自我评估的残疾，这由健康评估问卷(称为HAQ-DI)测量。包括为RA患者提供临床益处的方法(其中该临床益处包括改善RA患者的身体机能,如通过HAQ-DI确定的)、以及用于在这类方法中使用的组合物和试剂盒是本发明的所有方面。临床益处可包括改善RA患者的身体机能，如通过HAQ-DI确定的。优选地，HAQ-DI的统计学上显著的改善是在开始根据本发明的治疗的十二周、十周、八周或六周内实现的，更优选地是在四周内实现的，或更优选地是在二周内实现的。该改善可以是HAQ-DI上至少0.25的提高，即在患者的HAQ-DI得分上减少0.25或更多。优选地，该改善是HAQ-DI得分上至少提高0.30,0.40或0.45。改善总体上是参照用根据本发明的一种抑制剂治疗之前患者的基线平均HAQ-DI得分测量的。在治疗一组患者时，该改善可在至少50%、至少60%或至少70%的治疗患者中观察到。
[0039]与未用根据本发明的一种抑制剂治疗的患者相比，在治疗的患者中可更快地实现该临床益处。例如，用根据本发明的一种抑制剂与甲氨蝶呤组合治疗的患者可比单独用甲氨蝶呤治疗的患者更快地实现临床益处。与未用该抑制剂治疗的患者相比，开始反应的时间或实现临床益处之前的治疗时期可被减少至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%。优选地，该临床益处是在85天之内实现的。因此，例如，DAS28-CRP可在85天之内被减少超过1.2。更优选地，反应开始是在2周之内发生。因此，临床益处可在用该抑制剂治疗14天之内实现。[0040]呈现在此的来自该临床试验的数据显示，根据本发明的一种抑制剂与治疗作用的早发性相关联。早在第2周的时候就观察到了 DAS28-CRP反应的快速开始，并且在29天时该差异变得显著。在第8天时观察到疼痛的改善，并且在第29天时观察到肿胀和压痛关节改善。
[0041]可在利用该抑制剂的疗程中和/或之后监测患者以评估临床益处的水平，例如通过测量DAS28-CRP和/或根据ACR标准确定临床益处和/或测量HAQ-DI。该方法可包括确定实现了该临床益处，例如DAS28-CRP的限定减少、和/或ACR20、ACR50或ACR70的实现得以满足、和/或提高了 HAQ-DI得分，如此处其他地方所讨论的。
[0042]相对于未用根据本发明的一种抑制剂治疗的患者，临床益处可被增强。例如，该方法可包括通过给予该抑制剂与一种或多种另外的治疗剂(例如DMARD，如甲氨蝶呤)的组合来治疗患者以提供与接受其他的一种或多种治疗剂(例如该DMARD)并且不是该抑制剂的患者相比增强的临床益处。该增强的临床益处可以是更大比例的用该抑制剂治疗的患者。优选地，与未用该抑制剂治疗的患者(例如仅接受了 DMARD的患者)相比，至少多出20%的用如此处所述的一种抑制剂(例如与DMARD如甲氨蝶呤组合)治疗的患者实现了该临床益处。
[0043]此处所述的方法可包括将该抑制剂以一个治疗有效量给予该患者。可以按30至150mg之间、优选90mg至llOmg、更优选IOOmg的一个剂量给予该抑制剂。优选地，这些剂量是用于皮下给予的，优选地是处于Iml的体积。优选地，该剂量是以14天的间隔(即在第I天、第15天、第29天等)给予。可替代地，剂量可以按28天的间隔给予。可能的剂量和给药的另外的详情在此在别处描述。该方法可包括将该抑制剂给予该患者，优选地以14天的间隔服药，持续至少85天的时间，尽管治疗优选地在85天之后继续进行，并且患者可无限期的维持治疗(其条件是他们被适当地监测)。优选地临床益处是在治疗第85天，更优选在治疗第14天实现的。优选地临床益处是在用该抑制剂治疗仅一剂之后或仅两剂之后实现。
[0044]如由此处报导的试验数据所示的，在该临床试验中，通过用一种抑制剂治疗获得的临床益处被维持直至至少该85天疗程结束。因此，当根据本发明已实现临床益处时，该益处可在用该抑制剂继续治疗的时期中维持，例如根据本发明的治疗的结果可在该患者身上通过用该抑制剂继续治疗而维持至少一个月、两个月、三个月、六个月、一年或更久的一个时期。
[0045]该抑制剂可以通过任何适合的方法给予。对于抗体给予的典型的方法是皮下或静脉内递送。优选地，该抑制剂被配制为用于皮下或静脉内给药。
[0046]治疗RA的方法可包括将一种组合物与一种或多种另外的治疗剂组合给予该患者，该组合物包括根据本发明的一种抑制剂。另外的治疗剂可包括以下的任一种或多种:
[0047]镇痛药；
[0048]NSAID ； [0049]甾体类；
[0050]‘用于治疗RA’的DMARD，例如甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、羟基氯喹、来氟米特。生物的DMARD包括TNF α抑制剂，例如英利昔单抗(Remicade (类克)?)、
依那西普(Hnbrel (&博)*)、阿达木单抗(Humira (修美乐)⑩)、培舍珠单抗
(Cimzia (塞妥珠)*)、戈利木单抗(Simponi (辛普尼)*) , IL-1抑制剂例如Kineret
(阿那白滞素以及抗-B淋巴细胞剂例如利妥昔单抗、阿巴西普(Humira (修美乐)_)或托珠单抗。
[0051]优选地该方法包括将该抑制剂与甲氨蝶呤组合给予该患者。优选地甲氨蝶呤是以每周7.5至25mg的剂量给予的。
[0052]详细说明
[0053]下列编号条款代表本发明的各方面:
[0054]1.一种在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)测量的，后者由1987美国风湿病学会(ACR)标准确定，
[0055]该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括一个治疗有效量的一种GM-CSFR α抑制剂，
[0056]其中，该抑制剂任选地结合在人类GM-CSFRa序列SEQ ID NO: 206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFRa，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂任选地以5ηΜ的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFR α胞外域。
[0057]2.包括一种GM-CSFRα抑制剂的一种组合物，用于在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法中使用，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)测量的，后者由1987ACR标准确定，其中，该抑制剂任选地结合在人类GM-CSFR α 序列 SEQ ID NO: 206 的 226 至 230 位的一个 Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln 基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFRa，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂任选地以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
[0058]3.一种产品，包含
[0059](i)被封装在一个容器中的包括一种GM-CSFRa抑制剂的一种组合物，其中该抑制剂任选地结合在人类GM-CSFRa序列SEQ ID NO:206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂任选地以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFR α胞外域；以及
[0060](ii)关于将该抑制剂在一种在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法中使用的一个包装说明书或有说明的标签，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)测量的，后者由1987ACR标准确定，
[0061]并且，其中该方法包括向该患者给予一个治疗有效量的该抑制剂。
[0062]4.根据条款I所述的方法，根据条款2所述的组合物或根据条款3所述的产品，其中该临床益处包括DAS28-CRP减少超过1.2。
[0063]5.根据条款4所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括监测治疗后的患者，测量DAS28-CRP并确定治疗已将该DAS28-CRP减少超过1.2。
[0064]6.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括缓解类风湿关节炎或减少开始缓解的时间。
[0065]7.根据条款6所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括缓解至少10%或至少20%的患者的类风湿关节炎。
[0066]8.根据条款7所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括监测治疗后的患者，并观察类风湿关节炎的缓解。
[0067]9.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括改善至少20%的治疗功效(ACR20)，如通过1987ACR标准确定的。
[0068]10.根据条款9所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括改善至少50%的治疗功效(ACR50)，如通过1987ACR标准确定的。 [0069]11.根据条款10所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括改善至少70%的治疗功效(ACR70)，如通过1987ACR标准确定的。
[0070]12.根据条款9至11中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括监测治疗后的患者，根据1987ACR标准评价治疗功效并确定已经实现了 ACR20、ACR50或ACR70。
[0071]13.根据条款9至12中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括在至少20%或至少30%的患者中实现ACR50。
[0072]14.根据条款13所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括在至少5%、至少10%或至少15%的患者中实现ACR70。
[0073]15.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处是在85天之内实现的。
[0074]16.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括改善类风湿关节炎患者的身体机能，如通过HAQ-DI确定的。[0075]17.一种改善类风湿关节炎患者的身体机能的方法，如通过HAQ-DI确定的，
[0076]该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括一个治疗有效量的一种GM-CSFR α抑制剂，
[0077]其中，该抑制剂结合在人类GM-CSFRa序列SEQ ID NO: 206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
[0078]18.包括一种GM-CSFRa抑制剂的一种组合物，用于在改善RA患者的身体机能的方法中使用，如通过HAQ-DI确定的，
[0079]其中，该抑制剂结合在人类GM-CSFR a序列SEQ ID NO: 206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
[0080]19.一种产品，包含
[0081]⑴被封装在一个容器中的包括一种GM-CSFR a抑制剂的一种组合物，其中该抑制剂结合在人类GM-CSFR a序列SEQ ID NO: 206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并 抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域；以及
[0082](ii)关于在改善RA患者的身体机能的方法中使用该抑制剂的一个包装说明书或有说明的标签，该身体机能是如通过HAQ-DI确定的，
[0083]并且,其中该方法包括向该患者给予一个治疗有效量的该抑制剂。
[0084]20.根据条款16至19中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将HAQ-DI得分提高至少0.25。
[0085]21.根据条款20所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括监测治疗后的患者，测量HAQ-DI和确定已将该患者的HAQ-DI得分提高了至少0.25。
[0086]22.根据条款16至21中任一项所述的方法、组合物或产品，其中HAQ-DI的提高是在六周之内实现的。
[0087]23.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括以90至IlOmg之间的皮下剂量将该抑制剂给予该患者。
[0088]24.根据条款23所述的方法、组合物或产品，其中该剂量是lOOmg。
[0089]25.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该组合物被配制为用于皮下给予。
[0090]26.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将该组合物与一种或多种另外的治疗剂组合给予该患者。
[0091]27.根据条款26所述的方法、组合物或产品，其中该一种或多种另外的治疗剂包括一种或多种病情改善抗风湿药(DMARD)。
[0092]28.根据条款27所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将该组合物与甲氨蝶呤组合给予该患者。
[0093]29.根据条款28所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括以每周7.5至25mg的剂量给予甲氨蝶呤。[0094]30.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该类风湿关节炎患者是在给予GM-CSFRa抑制剂之前已经接受了一个稳定剂量的甲氨蝶呤持续至少4周的一位患者，并且其中该方法包括将该组合物与持续剂量的甲氨蝶呤组合给予该患者。
[0095]31.根据条款30所述的方法、组合物或产品，其中甲氨蝶呤的剂量是每周7.5至25mg。
[0096]32.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该患者在治疗之前具有至少3.2的基线DAS28-CRP。
[0097]33.根据条款32所述的方法、组合物或产品，其中该患者在治疗之前具有大于5.1的基线 DAS28-CRP。
[0098]34.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该患者在治疗之前对于类风湿因子和/或抗环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体测试呈阳性。
[0099]35.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将一个治疗有效量的该抑制剂以每两周一次的间隔给予该患者持续至少85天的时期。
[0100]36.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该患者是不患有医学上显著的呼吸道疾病的一位患者。
[0101]37.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抑制剂包括一种抗体分子。
[0102]38.根据条款37所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括一个抗体VH域，该VH域包括一组互补决定区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及一个框架，其中该组互补决定区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 173的一个CDRl、具有氨基酸序列SEQ ID NO: 4的一个⑶R2、以及具有选自由以下组成的组中的氨基酸序列的一个⑶R3:SEQ ID NO:5 ；SEQID NO: 15 ；SEQ ID NO:25 ；SEQ ID NO:35 ；SEQ ID NO:45 ；SEQ ID NO:55 ；SEQ ID NO:65 ；SEQID NO:75 ；SEQ ID NO:85 ；SEQ ID NO:95 ；SEQ ID NO: 105 ；SEQ ID NO: 115 ；SEQ ID NO: 125 ；SEQ ID NO: 135 ；SEQ ID NO: 145 ；SEQ ID NO: 155 ；SEQ ID NO: 165 ；SEQ ID NO: 175 ；SEQ IDNO: 185 ;和SEQ ID NO: 195 ;或包括具有一个或多个氨基酸置换的⑶R序列组。
[0103]39.根据条款37或条款38所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括一个抗体VH域，该VH域包括互补决定区CDR1、⑶R2和⑶R3以及一个框架，并且其中VH⑶R3中的卡巴特(Kabat)残基H97是S。
[0104]40.根据条款39所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶R3进一步包括以下残基中的一种或多种:
[0105]卡巴特残基H95处的V、N、A或L ;
[0106]卡巴特残基H99处的S、F、H、P、T或W ;
[0107]卡巴特残基H100B处的A、T、P、S、V或H。
[0108]41.根据条款40所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基H95是V。
[0109]42.根据条款40或条款41所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基H99是S。
[0110]43.根据条款37至42中任一项所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基H100B 是 A 或 T。
[0111]44.根据条 款40所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶R3具有选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成:SEQ ID N0:5、SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:45,SEQID NO:55、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:155、SEQ IDNO:165、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:185 和 SEQ ID NO:195。
[0112]45.根据条款39至44中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VHCDRl中的卡巴特残基H34是I。
[0113]46.根据条款37至45中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VHCDRl具有氨基酸序列 SEQ ID NO:3。
[0114]47.根据条款39至46中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VHCDR2在卡巴特残基H54处包括E和/或在卡巴特残基H57处包括I。
[0115]48.根据条款39至47中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VHCDR2具有氨基酸序列 SEQ ID NO:4。
[0116]49.根据条款39至48中任一项所述的方法、组合物或产品，其中在VH域框架中的卡巴特残基H17是S。
[0117]50.根据条款39至49中任一项所述的方法、组合物或产品，包括一个抗体VL域，该VL域包括互补决定区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及一个框架。
[0118]51.根据条款50所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶R3包括以下残基中的一种或多种:
[0119]卡巴特残基L90处的S、T或M;
[0120]卡巴特残基L92处的D、E、Q、S、M或T ;
[0121]卡巴特残基L96处的S、P、I或V。
[0122]52.根据条款51所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L90是S。
[0123]53.根据条款51或条款52所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L92是D或E0
[0124]54.根据条款51至53中任一项所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L95A是S。
[0125]55.根据条款51至53中任一项所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L96是S。
[0126]56.根据条款50或条款55所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶R3具有选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成:SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:40、SEQID NO:50、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:150、SEQ IDNO:160、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190 和 SEQ ID NO:200。
[0127]57.根据条款50至56中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VIXDRl包括以下残基中的一种或多种:
[0128]卡巴特残基27A处的S;
[0129]卡巴特残基27B处的N;
[0130]卡巴特残基27C处的I;
[0131]卡巴特残基32处的D。
[0132]58.根据条款50至57中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶Rl具有氨基酸序列SEQ ID NO:8。
[0133]59.根据条款50至58中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶R2包括以下残基中的一种或多种:
[0134]卡巴特残基51处的N;
[0135]卡巴特残基52处的N;
[0136]卡巴特残基53处的K。
[0137]60.根据条款50至59中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶R2具有氨基酸序列SEQ ID NO:9。
[0138]61.根据条款37至60中任一项所述的方法、组合物或产品，包括一个抗体VH域，其中卡巴特残基H94是I。
[0139]62.根据条款37至61中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括一种人类的或人源化的抗体分子，该人类的或人源化的抗体分子与一种具有VH域和VL域的并且该VH域和VL域具有选自以下的氨基酸序列的抗体分子竞争结合人类GM-CSFR α的胞外域:
[0140]VH 域 SEQ ID NO: 2 和 VL 域 SEQ ID NO: 208 ；
[0141]VH 域 SEQ ID NO: 12 和 VL 域 SEQ ID NO: 210;
[0142]VH 域 SEQ ID NO: 22 和 VL 域 SEQ ID NO: 212;
[0143]VH 域 SEQ ID NO: 32 和 VL 域 SEQ ID NO: 214;
[0144]VH 域 SEQ ID NO:42 和 VL 域 SEQ ID NO: 216;
[0145]VH 域 SEQ ID NO: 52 和 VL 域 SEQ ID NO: 218;
[0146]VH 域 SEQ ID NO:62 和 VL 域 SEQ ID NO: 220 ；
[0147]VH 域 SEQ ID NO: 72 和 VL 域 SEQ ID NO: 222 ；
[0148]VH 域 SEQ ID NO:82 和 VL 域 SEQ ID NO: 224 ；
[0149]VH 域 SEQ ID NO:92 和 VL 域 SEQ ID NO: 226 ；
[0150]VH 域 SEQ ID NO: 102 和 VL 域 SEQ ID NO: 228 ；
[0151]VH 域 SEQ ID NO: 112 和 VL 域 SEQ ID NO: 230 ；
[0152]VH 域 SEQ ID NO: 122 和 VL 域 SEQ ID NO: 232 ；
[0153]VH 域 SEQ ID NO: 132 和 VL 域 SEQ ID NO: 234 ；
[0154]VH 域 SEQ ID NO: 142 和 VL 域 SEQ ID NO: 236 ；
[0155]VH 域 SEQ ID NO: 152 和 VL 域 SEQ ID NO: 238 ；
[0156]VH 域 SEQ ID NO: 162 和 VL 域 SEQ ID NO: 240 ；
[0157]VH 域 SEQ ID NO: 172 和 VL 域 SEQ ID NO: 242 ；
[0158]VH 域 SEQ ID NO: 182 和 VL 域 SEQ ID NO:244;或
[0159]VH 域 SEQ ID NO: 192 和 VL 域 SEQ ID NO: 246。
[0160]63.根据条款37至62中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子是一种人类的或人源化的抗体分子。
[0161]64.根据条款63所述的方法、组合物或产品，其中该VH域框架是一种人类种系VH1DP5 或 VH3DP47 框架。
[0162]65.根据条款63或条款64所述的方法、组合物或产品，包括一个VL域，其中该VL域框架是一种人类种系 V λ 1DPL8 (VLambdalDPL8)、V λ 1DPL3 或 V λ 6_6a 框架。
[0163]66.根据条款37至65中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括:
[0164]一个具有在SEQ ID NO: 52中所示的VH域氨基酸序列的VH域或其具有一个或多个氨基酸改变的变体，以及
[0165]一个具有在SEQ ID NO: 218中所示的VL域氨基酸序列的VL域或其具有一个或多个氨基酸改变的变体；
[0166]其中这些氨基酸改变选自下组，该组由取代、插入和缺失组成。
[0167]67.根据条款63至66中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子是IgG4。
[0168]68.根据条款67所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子是包含一个VH域和一个VL域的人类IgG4，该VH域具有在SEQ ID NO: 52中所示的氨基酸序列，该VL域具有在SEQ ID N0:218中所示的氨基酸序列。
[0169]69.根据以上条款中任一项所述的方法、组合物或产品，其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以InM或更少的亲和力(KD)结合人类GM-CSFRa胞外域。
[0170]70.根据条款69所述的方法、组合物或产品，其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以0.5nM或更少的亲和力(KD)结合人类GM-CSFRa胞外域。
[0171]71.一种在患者中治疗RA以提供临床益处的方法，该临床益处是通过DAS28-CRP在85天之内减少超过1.2测量的，该方法包括向该患者给予包括马威利姆单抗的一种组合物，其中该组合物是通过皮下给予以IOOmg每两周一次的剂量给予的。
[0172]72.一种在患者中治疗RA以提供临床益处的方法，该临床益处是通过在85天之内改善至少ACR50或至少ACR70测量的，该方法包括向该患者给予包括马威利姆单抗的一种组合物，其中该组合物是通过皮下给予以IOOmg每两周一次的剂量给予的。
[0173]73.根据条款71或条款72所述的方法，其中该临床益处是在42天之内实现的。
[0174]74.根据条款73所述的方法，其中该临床益处是在14天之内实现的。
[0175]75.一种在患者中诱导RA的缓解的方法，如通过DAS28-CRP小于2.6测量的，该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括一个治疗有效量的马威利姆单抗，其中该组合物是通过皮下给予以1OOmg每两周一次的剂量给予的，并且其中是在85天之内开始缓解的。
[0176]76.根据条款75所述的方法，其中是在42天之内开始缓解的。
[0177]77.根据条款76所述的方法，其中是在14天之内开始缓解的。
[0178]78.一种改善RA患者的身体机能的方法，如通过HAQ-DI确定的，该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括马威利姆单抗，其中该组合物是通过皮下给予以Iml中IOOmg每两周一次的剂量给予的，并且其中HAQ-DI的改善是在十二周内实现的。
[0179]79.根据条款78所述的方法，其中该改善是在患者的HAQ-DI得分上至少减少
0.25。
[0180]80.根据条款78或条款79所述的方法，其中该改善是在六周之内实现的。
[0181]81.根据条款71至8 0中任一项所述的方法，其中还用一种或多种另外的病情改善抗风湿药(DMARD)对该患者进行治疗。[0182]82.根据条款81所述的方法，其中该另外的药物是甲氨蝶呤。
[0183]83.根据权利要求71至82中任一项所述的方法，其中还用一种或多种镇痛药和/或非留体抗炎药(NSAID)和/或留体类对该患者进行治疗。
[0184]84.一种包括马威利姆单抗的组合物，用于在根据条款71至83中任一项所述的方法中使用。
[0185]85.一种包括马威利姆单抗的组合物，用于根据权利要求84所述的来使用，其中该组合物是用于与甲氨蝶呤组合给予的。
[0186]抑制剂
[0187]在此描述的是结合人类GM-CSFRa并且抑制人类GM-CSF结合至GM-CSFRα的抑制剂。总体上，抑制剂结合GM-CSFR α的胞外域。优选地该抑制剂结合在成熟的人类GM-CSFRa (SEQ ID NO:206)的 226 至 230 位的 Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln (YLDFQ)，SEQ IDN0:201的至少一个残基。该抑制剂可结合人类GM-CSFRα的YLDFQ序列中的至少一个残基，例如，它可结合该YLDFQ序列的一个、两个、三个或四个残基。因此，该抑制剂可识别此序列内的一个或多个残基，并且可任选地它还可结合GM-CSFR α的胞外域中的另外的侧翼残基或结构上相邻的残基。[0188]结合可通过任何适合的方法确定，例如可使用一种肽结合扫描，如一种基于PEPSCAN的酶联免疫测定(ELISA)，如在此其他地方详细描述的。在一种肽结合扫描中，如由PEPSCAN系统提供的这类，针对与抑制剂的结合，系统地对衍生自该抗原的短重叠肽进行筛选。这些肽可共价地偶联至一个支撑表面以形成肽阵列。简言之，一种肽结合扫描(例如，“PEPSCAN”)涉及识别(例如使用ELISA) —组该抑制剂结合的肽，其中，这些肽具有对应于SEQID NO: 206的片段的氨基酸序列(例如，具有SEQ ID NO: 206的大约15个连续残基的肽)，并比对这些肽以确定被该抑制剂结合的残基的足迹，此处该足迹包括对重叠肽来说常见的残基。根据本发明，由肽结合扫描或PEPSCAN识别的足迹可包括对应于SEQ ID NO: 206的226至230位的YLDFQ的至少一个残基。该足迹可包括YLDFQ的一个、两个、三个、四个或所有残基。根据本发明的一种抑制剂可结合SEQ ID NO:206的一个肽片段(例如具有15个残基的)，该片段包括一个或多个、优选地全部的对应于SEQ ID NO: 206的226至230位的YLDFQ残基，例如通过此处所述的肽结合扫描或PEPSCAN方法确定的。因此，本发明的一种抑制剂可结合具有SEQ ID NO:206的15个连续残基的氨基酸序列的一种肽，其中这15个残基序列包括SEQ ID NO: 206的226至230位的YLDFQ的至少一个残基或至少部分地与其重叠。用于确定结合的一种适合的肽结合扫描方法的详情在此处其他地方详细陈述。本领域内熟知的并且可被用于确定由一种抗体结合和/或证实肽结合扫描(例如PEPSCAN)结果的其他方法包括定点诱变、氢氘交换、质谱法、NMR、以及X射线晶体学。
[0189]此外，可确定对于人类GM-CSFR α的结合动力学和亲和力，例如通过表面等离子体共振，例如使用BIAcore。用以在本发明中使用的抑制剂一般地具有小于5nM并且更优选地小于 4、3、2 或 InM 的 KD。优选地，KD 小于 0.9,0.8,0.7,0.6,0.5,0.4,0.3、0.2 或 0.15nM。
[0190]典型地，用于根据本发明使用的一种抑制剂是一种结合成员，该结合成员包括一种抗体分子，例如完整抗体或抗体片段，如以下更详细地讨论的。优选地，该抗体分子是一种人类抗体分子。典型地，该抗体将是完整抗体，优选地是IgGl、IgG2或更优选地是IgG4。
[0191]该抑制剂一般包含抗体VH和/或VL域。结合成员的VH域和VL域也作为本发明的一部分来提供。在每个该VH域和VL域之内的是互补决定区(“⑶R”)和框架区(“FR”)。VH域包含一组HCDR并且VL域包含一组IXDR。
[0192]抗体分子典型地包括抗体VH域，该VH域包含VH⑶R1、⑶R2和⑶R3以及框架。它可以可替代地或还包括抗体VL域，该VL域包含VL⑶R1XDR2和⑶R3以及框架。因此，一组H⑶R是指HCDR1、HCDR2以及HCDR3，并且一组IXDR是指IXDR1、IXDR2以及IXDR3。除非另行说明，一 “组CDR”包含HCDR和LCDR。
[0193]VH或VL域框架包含四个框架区，FR1、FR2、FR3和FR4，它们在以下结构中穿插有CDR:
[0194]FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
[0195]根据本发明的抗体VH和VL域、FR以及CDR的实例在形成本披露的一部分的附加序列表中列出。
[0196]W02007/110631描述了抗体分子和其他抑制剂，包括现在称为马威利姆单抗的抗体，该抗体被分离为一组优化抗体的一种，这组优化抗体称为抗体1、抗体2和抗体4-20(都衍生自亲本抗体3)。这些抗体分子的序列示于附加序列表中。
[0197]马威利姆单抗是人类IgG4单克隆抗体，包含VH域，关于其的氨基酸序列在SEQ IDNO: 52 ^SEQ ID NO: 51编码)中列出，和VL域，关于其的氨基酸序列在SEQ ID NO: 218 (由SEQ ID N0:217编码)中列出。该VH域包括重链CDR，其中HCDRl是SEQ ID NO:53, HCDR2是 SEQ ID N0:54并且H CDR3是SEQ ID NO: 55。该 VL 域包括轻链 CDR，其中 LCDRl 是 SEQ IDN0:58，LCDR2 是 SEQ ID NO: 59 并且 LCDR3 是 SEQ ID NO: 60。框架区的序列是 VH FRlSEQ IDNO:251，VH FR2SEQ ID NO:252，VH FR3SEQ ID NO:253；VH FR4SEQ ID NO:254 ；VL FRlSEQID NO: 255, VL FR2SEQ ID NO: 256, VL FR3SEQ ID NO:257和 VL FR4SEQ ID NO: 258，如在附加序列表中所示的和在相关说明(key)中列出的。
[0198]在本发明的优选实施例中，该抑制剂是马威利姆单抗，或是一种包括马威利姆单抗的互补决定区(CDR)，例如包括马威利姆单抗的VH和VL域的抗体分子。可使用马威利姆单抗的变体，包括在此所述的变体。
[0199]如在W02007/110631中更详细描述的，在该VH和VL域的CDR内的某些残基对于受体结合和中和效能是尤其重要的。因为这些⑶R主要负责确定一个结合成员的结合和特异性，所以可使用具有如此处定义的合适的残基的一个或多个CDR并且将其并入任何合适的框架中，例如抗体VH和/或VL域框架，或非抗体蛋白质骨架，如在此处其他地方更详细地描述的。例如,抗体的一个或多个CDR或一组CDR可枝接至框架(例如人框架)中以便提供一种抗体分子或不同的抗体分子。例如，一种抗体分子可包含此处披露的CDR和人类种系基因区段序列的框架区。一种抗体可在框架内设有一组CDR，该框架可经受种系化，其中该框架内的一个或多个残基被改变为匹配最相似的人种系框架中的等效位置处的残基。因此，抗体框架区优选地是种系的和/或人类的。
[0200]如在W02007/110631中所述的，以下位置被识别为有助于抗原结合:VL域中的卡巴特(Kabat)残基 27A、27B、27C、32、51、52、53、90、92 和 96，以及 VH 域中的卡巴特(Kabat)残基17、34、54、57、95、97、99和100B。在本发明的优选实施例中，这些卡巴特残基中的一个或多个是在编号为1、2和4-20的抗体克隆中的一个或多个的那个位置处存在的卡巴特残基，这些抗体克隆的序列披露于附加的序列表中。在不同的实施例中，该残基可以与存在于抗体3中的那个位置处的残基相同或可以不同。
[0201]发现这些⑶R中的以下4个残基位置对受体结合具有特别强的影响:H97、H100B、L90和L92 (卡巴特编号)。优选地，VH⑶R3的H97为S。在所有160个克隆中都观察到在此位置的丝氨酸残基，并且因此表示它是对于抗原识别的一个重要的残基。
[0202]优选地，VH⑶R3包括以下残基中的一种或多种:
[0203]卡巴特残基H95处的V、N、A或L，最优选地是V ；
[0204]卡巴特残基H99处的S、F、H、P、T或W，最优选地是S ;
[0205]卡巴特残基H100B处的A、T、P、S、V或H，最优选地是A或T。
[0206]优选地，VH⑶Rl中的卡巴特残基H34为I ;优选地，VH⑶R2在卡巴特残基H54处包括E和/或在卡巴特残基H57处包括I。
[0207]在抗体VH域中，在该VH域框架中的卡巴特残基H17优选地是S。优选地，卡巴特残基H94是I或其一个保守取代(例如L、V、A或M)。一般地H94是I。
[0208]优选地，VL⑶R3包括以下残基中的一种或多种:
[0209]卡巴特残基H90处的S、T或M，最优选地是S或T ;
[0210]卡巴特残基L92处的D、E、Q、S、M或T，最优选地是D或E ;
[0211 ] 卡巴特残基L96处的A、P、S、T、1、L、M或V，最优选地是S、P、I或V，尤其是S ；
[0212]VL CDR3中的卡巴特残基L95A优选地是S。
[0213]优选地，VL⑶Rl包括以下残基中的一种或多种:
[0214]卡巴特残基27A处的S;
[0215]卡巴特残基27B处的N;
[0216]卡巴特残基27C处的I;
[0217]卡巴特残基32处的D。
[0218]优选地，VL⑶R2包括以下残基中的一种或多种:
[0219]卡巴特残基51处的N;
[0220]卡巴特残基52处的N;
[0221]卡巴特残基53处的K。
[0222]在一个优选实施例中，在本发明中使用的一种抑制剂是一种结合成员，该结合成员包括一种或多种选自VH⑶R和VL⑶R的⑶R，即如在序列表中所示的抗体1、2或4至20中的任一种的VH CDR1、2和/或3，和/或VL CDR1、2和/或3。在一个优选实施例中，本发明的一个结合成员包括以下抗体分子中的任一个的VH⑶R3:抗体I (SEQ ID N05);抗体2 (SEQ ID N015);抗体 3 (SEQ ID N025);抗体 4 (SEQ ID N035);抗体 5 (SEQ ID N045)；抗体 6 (SEQ ID N055);抗体 7 (SEQ ID N065);抗体 8 (SEQ ID N075);抗体 9 (SEQ IDN085);抗体 10 (SEQ ID N095);抗体 11 (SEQ ID N0105);抗体 12 (SEQ ID NOl 15);抗体13 (SEQ ID N0125);抗体 14 (SEQ ID N0135);抗体 15 (SEQ ID N0145);抗体 16 (SEQ IDN0155);抗体 17 (SEQ ID N0165);抗体 18 (SEQ ID N0175);抗体 19 (SEQ ID N0185);抗体20(SEQ ID N0195)。优选地，该结合成员另外包括SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 173的VHCDRUP / 或 SEQ ID NO:4 的 VH CDR2。优选地，包括 SEQ ID NO: 175 的 VH CDR3 的结合成员包括SEQ ID NO: 173的VH CDRl，但可以可替代地包括SEQ ID NO:3的VH CDR1。
[0223]优选地，该结合成员包含以下抗体中的一个的一组VH⑶R:抗体l(Seq ID3-5);抗体 2 (SEQ ID13-15);抗体 3 (SEQ ID23-25);抗体 4 (SEQ ID33-35);抗体 5 (SEQ ID43-45)；抗体 6 (SEQ ID53-55);抗体 7 (SEQ ID63-65);抗体 8 (SEQ ID73-75);抗体 9 (SEQID83-85);抗体 10 (SEQ ID93-95);抗体 11 (SEQ ID103-105);抗体 12 (SEQ ID113-115)；抗体 13 (SEQ ID123-125);抗体 14 (SEQ ID133-135);抗体 15 (SEQ ID143-145);抗体 16(SEQ ID153-155);抗体 17 (SEQ ID163-165);抗体 18 (SEQ ID173-175);抗体 19 (SEQID183-185);抗体20 (SEQ ID193-195)。任选地，它还可包含这些抗体中的一个的一组VIXDR，并且这些VL⑶R可来自与VH⑶R相同或不同的抗体。总体上，VH域与VL域配对以便提供抗体抗原结合部位，尽管在一些实施例中，VH或VL域可单独用于结合抗原。轻链混杂在本领域中是良好建立的，并因此该VH和VL域不需要是来自与此处披露的相同的克隆。
[0224]一个结合成员可包含抗体I至20中的任何一个的一组H⑶R和/或!XDR，并且在所披露的该组H CDR和/或L CDR内具有一个或多个取代，例如十个或更少，例如一个、两个、三个、四个或五个取代。优选的取代是在除了 VL域中的卡巴特残基27A、27B、27C、32、51、52、53、90、92 和 96，以及 VH 域中的卡巴特(Kabat)残基 34、54、57、95、97、99 和 100B 之外的卡巴特残基处。在取代是在这些位置进行的情况下，该取代优选地是针对此处指明为在该位置的一个优选的残基的一个残基。
[0225]在一个优选的实施例中，本发明的一个结合成员是一种分离的人抗体分子，这种分离的抗体分子具有包含人类种系框架(例如来自重链VHl或VH3家族的人类种系框架)中的一组HCDR的VH域。在一个优选的实施例中，该分离的人类抗体分子具有VH域，该VH域包含人类种系框架VH1DP5或VH3DP47中的一组HCDR。因此，该VH域框架区可包括人类种系基因区段VH1DP5或VH3DP47 的框架区。VH FRl的氨基酸序列可以是SEQ ID N0:251。VHFR2的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:252。VH FR3的氨基酸序列可以是SEQID NO:253。VH FR4的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:254。
[0226]一般地该结合成员也具有VL域，该VL域包含一组IXDR，优选地是人类种系框架中的，例如来自轻链νλ I或νλ 6家族的人类种系框架。在一个优选的实施例中，该分离的人类抗体分子具有VL域，该VL域包含人类种系框架V λ 1DPL8或V λ 1DPL3或V λ 6_6a中的一组IXDR。因此，该VL域框架可包括人类种系基因区段νλ 1DPL8、VA 1DPL3或VA6_6a的框架区。该VL域FR4可包含人类种系基因区段JL2的框架区。VL FRl的氨基酸序列可以是SEQ ID N0:255。VL FR2的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:256。VLFR3的氨基酸序列可以是257。VL FR4的氨基酸序列可以是SEQ ID NO:258。
[0227]与种系化抗体相比，非种系化抗体具有相同CDR、但是不同的框架。
[0228]在序列表中列出的VH和VL域以及⑶R的变体，可通过序列改变或突变以及筛选的方法来获得，并可在针对GM-CSFRa的结合成员中被采用。遵循计算化学在将多变量数据分析技术应用于结构/特性-活性关系中的指引[19]，可使用熟知的数学技术例如统计回归、模式识别和分类来产生抗体的定量活性-特性关系[20，21，22，23，24，25]。抗体的特性可从抗体序列、功能和三维结构的经验和理论模型(例如，分析可能的接触残基或计算物理化学特性)来得到并且这些特性可逐一地和组合地考虑。
[0229]由VH域和VL域组成的抗体抗原结合部位由六个多肽环形成:三个来自轻链可变域(VL)并且三个来自重链可变域(VH)。已知原子结构的抗体的分析已经说明抗体组合部位的序列与三维结构之间的关系[26，27]。这些关系暗示，除了 VH域中的第三区域(环)，结合部位环具有少量主链构象之一:典型结构。已经显示在特定环中形成的典型结构由其尺寸和在环和框架区中的关键部位处的某些残基的存在来确定[26，27]。
[0230]序列-结构关系的此研究可用于预测具有已知序列、但是具有未知三维结构的抗体中的那些残基，这些残基对于维持其CDR环的三维结构并且由此保持结合是重要的。这些预测可通过将预测与来自前导优化实验的输出进行比较来获得支持。在结构方法中，可使用任何可免费获得的或商业的程序包，例如WAM[28]来建立抗体分子的模型[29]。然后，蛋白可视化和分析软体包，例如Insight II (Accelerys, Inc.(埃塞来瑞斯公司))或DeepView (深入视点)[30]可用于评估⑶R中的每个位置处的可能取代。然后，此信息可用于产生可能的取代从而对于活性具有最小或有利效应。
[0231 ] 产生在CDR、抗体VH或VL域和结合成员的氨基酸序列之内的取代所需的技术总体上在本领域中是可获得的。可产生具有取代的变体序列，可预测或不可预测这些取代对于活性具有最小或有利效应，并且针对结合且/或中和GM-CSFR α的能力和/或任何其他所希望的特性来测试。
[0232]其序列确切地披露于此的任何VH和VL域的可变域氨基酸序列变体可根据本发明来使用，如所讨论。特定变体可包括一个或多个氨基酸序列改变(氨基酸残基的添加、缺失、取代和/或插入)，可小于大约20个改变，小于大约15个改变，小于大约10个改变或小于大约5个改变，可以是5、4、3、2或I个改变。可在一个或多个框架区和/或一个或多个⑶R中产生改变。
[0233]优选地，改变不导致功能损失，因此包含由此改变的氨基酸序列的结合成员优选地保持结合且/或中和GM-CSFR α的能力。更优选地，它保持与未产生改变的结合成员相同的定量结合和/或中和能力，例如如在此描述的测定中测量的。最优选地，与其中未进行该改变的结合成员相比，包含由此改变的氨基酸序列的结合成员具有结合或中和GM-CSFR α的提闻的能力。
[0234]改变可包含以非天然存在的或非标准的氨基酸替换一个或多个氨基酸残基、将一个或多个氨基酸残基修饰成非天然存在的或非标准的形式，或将一个或多个非天然存在的或非标准的氨基酸插入至序列中。本发明的序列中的改变的优选数量和位置在此在别处描述。天然存在的氨基酸包括20个“标准”L-氨基酸，通过它们的标准单个字母代码被识别为G、Α、V、L、1、Μ、P、F、W、S、Τ、N、Q、Y、C、K、R、H、D、Ε。非标准氨基酸包括可并入多肽骨架中或由现有氨基酸残基的修饰来产生的任何其他残基。非标准氨基酸可以是天然存在或非天然存在的。几个天然存在的非标准氨基酸在本领域中是已知的，例如4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸、3-甲基组氨酸、N-乙酰丝氨酸等[31]。这些在它们的Ν-α位衍生的氨基酸残基将仅位于氨基酸序列的N端。一般地，在本发明中，氨基酸为L-氨基酸，但是在一些实施例中，它可以是D-氨基酸。因此，改变可包含将L-氨基酸以D-氨基酸来修饰，或用它来替换。甲基化、乙酰化和/或磷酸化形式的氨基酸也是已知的，并且本发明中的氨基酸可经受这种修饰。
[0235]本发明的抗体域和结合成员中的氨基酸序列可包含如上所述的非天然的或非标准的氨基酸。在一些实施例中，在合成期间非标准氨基酸(例如D-氨基酸)可被并入氨基酸序列中，而在其他实施例中，在该氨基酸序列合成之后这些非标准氨基酸可通过“原始”标准氨基酸的修饰或替换被引入。
[0236]使用非标准和/或非天然存在的氨基酸增加结构和功能多样性，并且因而可增加在本发明的结合成员中实现所希望的GM-CSFRa结合以及中和特性的潜力。另外，已经显示D-氨基酸和类似物与标准L-氨基酸相比具有更好的药代动力学特性，这是由于具有L-氨基酸的多肽在给予动物之后在体内降解。
[0237]如以上提及，基本上如在此列出的⑶R氨基酸序列优选地作为⑶R被载入人抗体可变域或其实质性部分中。基本上如在此列出的HCDR3序列代表本发明的优选实施例，并且优选地，这些中的每一个是作为HCDR3被载入人重链可变域或其实质性部分中。
[0238]用于本发明的可变域可从任何种系或重新排列的人可变域获得或得到，或可以是基于已知人可变域的共有序列或实际序列的合成可变域。可使用重组DNA技术将本发明的⑶R序列(例如⑶R3)引入缺乏⑶R (例如⑶R3)的可变域谱系中。
[0239]例如，Marks (玛尔柯斯)等人(1992) [32]描述产生抗体可变域谱系的方法，其中结合针对人VH基因的第三框架区的共同引物来使用定向于或相邻于可变域区域的5’末端的共同引物，从而提供缺乏CDR3的VH可变域的谱系。Marks (玛尔柯斯)等人进一步描述此谱系可与特定抗体的CDR3组合的方法。使用类似技术，本发明的CDR3衍生序列可与缺乏⑶R3的VH或VL域的谱系进行改组，并且经改组的完整的VH或VL域可以与同源VL或VH域组合，从而提供本发明的结合成员。然后，谱系可展示于合适宿主系统中，例如W092/01047，或任何后续大量文献，包括参考文献[33]的噬菌体展示系统，从而使得可选择合适的结合成员。谱系可由104个单独成员以上的任何成员组成，例如由106至108或1010个成员。其他合适的宿主系统包括酵母展示、细菌展示、T7展示、病毒展示、细胞展示、核糖体展示和共价展示。类似的改组或组合技术还被Ste_er (施特默尔)(1994) [34]所披露,他描述了与内酰胺酶基因相关的技术但观察到该方法可用于产生抗体。
[0240]一个另外的替代方案是使用一个或多个选定VH和/或VL基因的随机诱变以产生整个可变域内的突变，产生承载本发明的⑶R衍生序列的新颖VH或VL区域。这类技术由Gram (格兰)等人(1992) [35]描述，他使用易错PCR。在优选实施例中，一个或两个氨基酸取代是在一组HCDR和/或IXDR中产生。可使用的另一个方法是将诱变定向至VH或VL基因的CDR区域[36，37] ο
[0241]本发明的另一个方面提供了一种获得针对GM-CSFRa抗原的抗体抗原结合部位的方法，该方法包括:经由将一个或多个氨基酸添加、缺失、取代或插入于在此列出的VH域的氨基酸序列中来提供作为VH域的氨基酸序列变体的VH域，任选地将由此提供的VH域与一个或多个VL域组合，并且测试VH域或一种或多种VH/VL组合从而鉴定针对GM-CSFR α抗原的并且任选地具有一个或多个优选特性(优选中和GM-CSFR α活性的能力)的结合成员或抗体抗原结合部位。所述VL域可具有基本上如在此列出的氨基酸序列。
[0242]可使用类似方法，其中在此披露的VL域的一个或多个序列变体与一个或多个VH域组合。
[0243]免疫球蛋白可变域的实质性部分将包含至少三个⑶R区域，连同其介于中间的框架区。优选地，该部分还将包括第一和第四框架区中一个或两个的至少约50%，该50%为第一框架区的C-末端50%和第四框架区的N-末端50%。可变域的实质性部分的N-末端或C-末端的另外残基可以是通常不与天然存在的可变域区域相关联的那些残基。例如，通过重组DNA技术产生的本发明的结合成员的构建可导致由所引入的接头编码的N-或C-末端残基的引入以便促进克隆或其他操纵步骤。其他操纵步骤包括引入将本发明的可变域连接至包括抗体恒定区的其他蛋白序列的接头、其他可变域(例如在产生双体中)或可检测/功能性标记。
[0244]虽然在本发明的一个优选方面中，包含一对VH和VL域的结合成员是优选的，但是基于VH或VL域序列的单一结合域形成本发明的另外方面。已知单一免疫球蛋白域，尤其是VH域，能够结合靶标抗原。例如，参见此处其他地方的dAb的讨论。
[0245]本发明的一个结合成员可与此处披露的任一结合成员(例如抗体3或抗体1、2或4-20中任一个)竞争结合至GM-CSFRa。因此一个结合成员可与包含抗体1、2或4_20中任一个的VH域和VL域的抗体分子竞争结合至GM-CSFRa。结合成员之间的竞争可容易地在体外测定，例如通过将报道分子标记至一种结合成员，该结合成员可在一种或多种其他无标记结合成员的存在下来检测，以便能够识别结合了相同表位或重叠表位的结合成员。
[0246]竞争可例如使用ELISA来确定，其中将例如GM-CSFR α的胞外域，或该胞外域的肽固定至一个板上，并且将一个第一标记的结合成员与一种或多种其他无标记的结合成员添加至该板。与标记结合成员竞争的无标记结合成员的存在是通过标记结合成员发出的信号的减少来观察。类似地，可使用表面等离子体共振测定来确定结合成员之间的竞争。
[0247]在竞争测试中 ，可使用抗原的肽片段，尤其是包括感兴趣的表位或结合区的或基本上由其组成的肽。可使用具有该表位或靶标序列加上任一末端处的一个或多个氨基酸的肽。根据本发明的结合成员可使得其与抗原的结合由具有或包括给定序列的肽来抑制。
[0248]通过用这一种或多种肽淘选将结合一种肽的结合成员从例如噬菌体展示文库中分离。
[0249]此处，该抑制剂是一种抗体分子或其他多肽，它可以通过来自编码核酸的表达来产生，例如通过来自一个重组宿主体外细胞中的表达载体的表达。W02007/110631中描述了适合的方法和细胞。编码核酸的实例提供于附加序列表中。
[0250]结合成员
[0251]这描述了彼此结合的一对分子的一种成员。结合对的成员可天然地衍生或全部或部分地合成产生。分子对的一个成员在其表面上具有一个区域、或腔穴，该区域或腔穴结合至分子对的另一个成员的特定空间和极性组织并且由此与其互补。结合对的类型的实例是抗原-抗体、生物素-抗生物素蛋白、激素-激素受体、受体-配体、酶-底物。本发明涉及抗原-抗体类型反应。
[0252]结合成员通常包含具有抗原结合部位的分子。例如，结合成员可以是抗体分子或包含抗原结合部位的非抗体蛋白。抗原结合部位可通过以下方式来提供:在非抗体蛋白支架例如纤连蛋白或细胞色素B等[39，40，41]上排列CDR，或通过使蛋白支架内的环的氨基酸残基随机化或突变以便赋予与所希望的靶标的结合。已经详细地评论了用于工程化蛋白质中的新颖结合部位的支架[41]。抗体模拟物的蛋白质支架披露于W0/0034784中，其中发明人描述了包括具有至少一个随机环的III型纤连蛋白域的蛋白质(抗体模拟物)。其中用以枝接一个或多个CDR例如一组HCDR的合适支架可由免疫球蛋白基因超家族的任何域成员来提供。支架可以是人类蛋白质或非人类蛋白质。
[0253]非抗体蛋白支架的优势是它可在支架分子中提供比至少一些抗体分子更小且/或更容易制造的抗原结合部位。结合成员的小尺寸可赋予有用的生理特性，例如能够进入细胞，穿透组织深处或到达其他结构内的靶标，或结合于靶标抗原的蛋白腔穴内。
[0254]参考文献中评论了非抗体蛋白支架中的抗原结合部位的用途[38]。典型的是具有稳定骨架和一个或多个可变环的蛋白质，其中一个或多个环的氨基酸序列特定或随机地突变以产生用于结合靶标抗原的抗原结合部位。此类蛋白质包括来自金黄色葡萄球菌的蛋白A的IgG结合域、运铁蛋白、四连接素、纤连蛋白(例如第10个III型纤连蛋白域)和脂质运载蛋白。其他方法包括合成的“微体”(Selecore (斯莱克瑞)GmbH),它是基于环肽-具有分子内二硫键的小蛋白。
[0255]除了抗体序列和/或抗原结合部位以外，根据本发明的结合成员可包含其他氨基酸，例如形成肽或多肽(例如折叠域)的氨基酸，或赋予分子除了结合抗原能力以外的另一种功能特征的氨基酸。本发明的结合成员可带有可检测标记，或可轭合至毒素或靶标部分或酶(例如经由肽键或连接物)。例如，结合成员可包含催化部位(例如酶域)以及抗原结合部位，其中抗原结合部位结合至抗原并且因而将催化部位靶向至抗原。催化部位可例如通过裂解来抑制抗原的生物功能。
[0256]虽然，如所提及，⑶R可由支架如纤连蛋白或细胞色素B承载[39，40，41]，但是承载本发明的一个CDR或一组CDR的结构将总体上具有抗体重链或轻链序列或其实质性部分，其中该CDR或该组CDR位于与由重排的免疫球蛋白基因编码的天然存在的VH和VL抗体可变域的该CDR或该组CDR对应的位置处。免疫球蛋白可变域的结构和位置可参考(Kabat(卡巴特)等人，1987) [57]和其更新来确定，现在在互联网(http://immun0.bme.nwu.edu或使用任意搜索引擎寻找“Kabat (卡巴特)”)上是可获得的。
[0257]本发明的结合成 员可包含抗体恒定区或其部分，优选地是人抗体恒定区或其部分。例如，VL域可在其C-末端连接至抗体轻链恒定域,这些抗体轻链恒定域包括人Ck或CA链，优选C λ链。类似地，基于VH域的结合成员可在其C-末端连接至源自任何抗体同种型，例如IgG、IgA、IgE和IgM和任何同种型子类，尤其IgGl、IgG2和IgG4的免疫球蛋白重链的全部或一部分(例如CHl域)。IgGU IgG2或IgG4是优选的。IgG4是优选的，因为其不结合补体并且不产生效应子功能。具有这些特性并且使可变区稳定的任何合成或其他恒定区变体对于在本发明的实施例中的使用也是优选的。
[0258]本发明的结合成员可用可检测或功能标记来标记。可检测标记包括放射性标记，如131I或"Tc，可使用在抗体成像领域中已知的常规化学来将它们连接至本发明的抗体。标记还包括酶标记，如辣根过氧化物酶。标记进一步包括化学部分，如可经由结合至特定同源可检测部分(例如标记的抗生物素蛋白)来检测的生物素。因此，本发明的一个结合成员或抗体分子可处于一种包括该结合成员和标记的轭合物的形式，可任选地经由一个接头如一种肽来连接。该结合成员可被轭合至例如多种酶(例如过氧化物酶、碱性磷酸酯酶)或一种荧光标记，包括但不限于生物素、荧光染料、绿色荧光蛋白。另外，该标记可包括一个毒素部分，如选自下组的一个毒素部分:假单胞菌外毒素(PE或其细胞毒性片段或突变型)、白喉毒素(其细胞毒性片段或突变型)、肉毒杆菌毒素A至F、蓖麻毒素或其细胞毒性片段、相思豆毒素或其细胞毒性片段、皂素或其细胞毒性片段、美洲商陆抗病毒毒素或其细胞毒性片段、以及异株腹泻毒蛋白I或其细胞毒性片段。在该结合成员包括一种抗体分子的情况下，该标记的结合成员可被称为免疫轭合物。[0259]抗体分子
[0260]它描述了免疫球蛋白，不论天然的还是部分或全部合成产生的。该术语也涵盖包含抗体抗原结合部位的任何多肽或蛋白。包含抗体抗原结合部位的抗体片段是分子如Fab、F(ab，)2、Fab’、Fab’ _SH、scFv、Fv、dAb、Fd,以及双体。
[0261]可采用单克隆和其他抗体并且使用重组DNA技术的技术来产生保留了原始抗体的特异性的其他抗体或嵌合分子。此类技术可涉及将编码抗体的免疫球蛋白可变区或⑶R的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区，或恒定区加框架区中。参见例如EP-A-184187、GB2188638A或EP-A-239400和大量后续文献。杂交瘤细胞或产生抗体的其他细胞可经受基因突变或其他变化，这些基因突变或其他变化可以或不可以改变所产生的抗体的靶标结合。[0262]鉴于可以用多种方式修饰抗体，术语“抗体分子”应被理解为涵盖具有抗体抗原结合位点的任一结合成员或物质。因此，此术语涵盖抗体片段和衍生物，包括包含了抗体抗原结合部位的任何多肽，不论天然的还是全部或部分合成的。因此包括嵌合分子，该嵌合分子包含融合至另一种多肽的抗体抗原结合部位或等效物。嵌合抗体的克隆和表达描述于EP-A-0120694和EP-A-0125023，和大量后续文献中。
[0263]可在抗体工程化领域中获得的其他技术已经使得有可能分离人抗体和人源化抗体。人抗体和人源化抗体是本发明的优选实施例，并可使用任何适合的方法产生。例如，可制备人类杂交瘤[42]。噬菌体展示，即另一种用于产生结合成员的既定技术已经在许多公开物中详细描述，如参考文献[42]和W092/01047 (以下进一步讨论)。其中小鼠抗体基因经过钝化并且在功能上被人抗体基因替换而保持小鼠免疫系统的其他组件完整的转基因小鼠可用于分离人抗体[43]。人源化抗体可使用在本领域中已知的技术来产生，例如那些在例如 W091/09967.US5, 585，089、EP592106、US565, 332 和 W093/17105 中披露的技术。此外，W02004/006955描述了通过将非人抗体的可变区的⑶R序列的典型⑶R结构类型与来自人抗体序列(例如种系抗体基因区段)的文库的相应CDR的典型CDR结构类型进行比较，基于对来自人抗体基因的可变区框架序列的选择来人源化抗体的方法。具有与非人CDR类似的典型CDR结构类型的人抗体可变区形成用于选择人框架序列的成员人抗体序列的子集。子集成员可进一步通过人类CDR序列与非人类CDR序列之间的氨基酸相似性来排序。在W02004/006955的方法中，选择最高级人类序列以便提供用于构建嵌合抗体的框架序列，该嵌合抗体使用所选择的子集成员人类框架在功能上以非人类CDR对应物来替换人类CDR序列，从而提供具有高亲和力和低免疫原性的人源化抗体而不需要在非人类抗体与人类抗体之间对框架序列进行比较。还披露根据方法产生的嵌合抗体。
[0264]合成抗体分子可通过来自基因的表达来产生，这些基因借助于在合适表达载体内合成并且组装的寡核苷酸来产生[44，45]。
[0265]已经显示完整抗体的片段可执行结合抗原的功能。结合片段的实例是(i)由VL、VH、CL和CHl域组成的Fab片段；(ii)由VH和CHl域组成的Fd片段；(iii)由单一抗体的VL和VH域组成的Fv片段；(iv)由VH或VL域组成的dAb片段[46，47，48] ； (v)分离的CDR区；(vi) F (ab’)2片段，即包括两个连接的Fab片段的二价片段(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH域和VL域被一个肽接头连接，该肽接头允许这两个域相关联以形成抗原结合部位[49，50] ；(viii)双特异性单链Fv 二聚体(PCT/US92/09965)以及(ix) “双体”，通过基因融合构建的多价的或多特异性的片段(W094/13804 ;[51])。Fv、scFv或双体分子可通过并入连接VH和VL域的二硫桥键来稳定[52]。还可产生包含了连接至CH3域的scFv的小体[53]。
[0266]dAb (域抗体)为抗体的小单体抗原结合片段，即抗体重链或轻链的可变区[48]。VH dAb天然地存在于骆驼科(例如骆驼、美洲驼)中，并且可通过用靶标抗原来免疫接种骆驼科、分离抗原特异性B细胞并且直接克隆来自单独B细胞的dAb基因而产生。dAb也可在细胞培养物中产生。它们的小尺寸、良好溶解性和温度稳定性使其尤其在生理上适用并且适合于选择和亲和力成熟。本发明的结合成员可以是dAb，它包括基本上如在此列出的VH或VL域，或包括包含了基本上如在此列出的一组⑶R的VH或VL域。通过“基本上如列出的”是指本发明的相关的CDR或者VH或VL域与具有此处列出的序列的指定区可以是相同的或高度相似的。通过“高度相似”，应考虑到在该CDR和/或VH或VL域中可产生从I至5、优选从I至4、如I至3个或I或2个或3个或4个氨基酸取代。
[0267]当使用双特异性抗体时，这些抗体可以是能以各种方法来制造的常规双特异性抗体[54]，例如以化学方法来制备或从杂种杂交瘤细胞制备，或可以是以上提到的双特异性抗体片段的任一个。双特异性抗体的实例包括BiTETM技术的那些抗体，其中具有不同特异性的两个抗体的结合域可使用并且经由短柔性肽来直接连接。这将两个抗体组合于短单一多肽链上。可以仅使用可变域来构建没有Fe区的双体和scFv，从而潜在地减少抗-独特型反应的影响。
[0268]与双特异性完整抗体形成对照，双特异性双体也可以是尤其有用的，因为这些双特异性双体可容易地构建并且表达于大肠杆菌中。可使用噬菌体展示(W094/13804)来从文库中容易地选择具有合适结合特异性的双体(和许多其他多肽，例如抗体片段)。如果双体的一个臂保持恒定，例如，针对GM-CSFRa，那么可产生其中另一个臂可变化的文库并且选择合适祀标结合的抗 体。双特异性完整抗体可通过扦白(knobs-1nto-holes)工程化来产生[55]。
[0269]抗原结合部位
[0270]这描述了结合至并且与靶标抗原的全部或一部分互补的分子部分。在抗体分子中，它被称为抗体抗原结合部位，并且包含结合至靶标抗原的全部或一部分并且与其互补的抗体部分。当抗原较大时，抗体可只结合至抗原的特定部分，此部分称为表位。抗体抗原结合部位可由一个或多个抗体可变域来提供。优选地，抗体抗原结合部位包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
[0271]卡巴特(Kabat)编号
[0272]此处的抗体序列的残基通常是指使用Kabat (卡巴特)编号，如在Kabat (卡巴特)等人，1971 [56]中定义的。还参见参考文献[57，58]。
[0273]GM-CSFR α 和 GM-CSF
[0274]GM-CSFR α是对于粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的受体的α链。人类GM-CSFR α的全长序列是在登录号S06945 (g1:106355)下存放的[59]，并在此列为SEQ ID N0:202。人类GM-CSFRa的成熟形式，即具有裂解的信号肽的，在此列为SEQ ID N0:206。除非上下文另外指明，此处对GM-CSFR α的提及是指人类或非人灵长类(例如猕猴)GM-CSFR a，一般地是人类的。GM-CSFRa可以是天然存在的GM-CSFR α或重组的GM-CSFR α。[0275]人类GM-CSF受体α的298氨基酸胞外域具有氨基酸序列SEQ ID NO: 205。
[0276]除非上下文另外指明，此处对GM-CSF的提及是指人类或非人灵长类(例如猕猴)GM-CSF，一般地是人类的。
[0277]GM-CSF —般结合至成熟GM-CSF受体α链(SEQ ID NO:206)的胞外域(SEQ IDΝ0:205)。如在此的其他地方所描述的，该结合受本发明的结合成员的抑制。
[0278]已经识别了 GM-CSFRa的天然存在的剪接变体-参见例如参考文献[60和61]。在这些剪接变体中的胞外域是高度保守的。本发明的结合成员可以或不可以结合至GM-CSFR α的一种或多种剪接变体上，并可以或不可以抑制GM-CSF结合至GM-CSFR α的一种或多种剪接变体。
[0279]使用生物传感器分析的结合亲和力数据
[0280]使用表面等离子体共振确定结合亲和力的方法是已知的。确定对于抗体分子的KD的详情参见例如W02007/110631。可使用BIAcore2000系统(法玛西亚生物传感器)来评价与重组受体相互作用的动力学参数。生物传感器使用表面等离子体共振的光学效应来研究由分析物分子与共价连接至右旋糖酐基质的配体分子相互作用所产生的表面浓度的变化。典型地，游离溶液中的分析物种类在偶联的配体上通过，并且任何结合可随着局部SPR信号的增加来检测到。在这之后为洗涤期，在此期间分析物种类的解离被视为SPR信号的减少，这之后将任何剩余的分析物从该配体上去除并且在几种不同分析物浓度下重复程序。通常在实验中采用一系列对照来确保该偶联的配体既没有绝对的结合能力，动力学曲线也没有显著地改变。典型地，专有h印es (羟乙基哌嗪乙硫磺酸)缓冲盐水(HBS-EP)被用作分析物样品的主要稀释剂以及解离相溶剂。相对于时间以共振单位(直接对应于SPR信号)记录实验数据。该共振单位与结合的分析物的大小和数量成正比。然后可以使用BIA评估(BIAevaluation)软件包来分配该解离相(离解速率单位s—1)和缔合相(缔合速率单位M-1S-1)的速率常数。这些数字进而允许计算缔合和解离亲和常数。
[0281]如在W02007/110631中所述的，IgG4的亲和力可使用一种单一测定来评估，其中该IgG4非共价地被胺蛋白A表面捕获。然后，重组体纯化标记的GM-CSF受体胞外域的一系列稀释物(从100至6.25nM)顺序地通过该IgG4。使用该浓度(Bradford (布拉德福德))以及预测的非翻译后修饰的成熟多肽质量(39.7kDa)计算该受体的摩尔浓度。以相同的形式对两个分离的数据集中的每进行分析。使用被设置为用于同时地全局计算缔合和解离速率的1:1朗缪尔模型，对参比池校正的数据进行拟合，其中Rmax值被设置为全局的。对在每个循环中捕获的IgG4水平进行评价，以确保在整个实验中捕获的数量保持稳定。此外，对该IgG4的离解速率进行评价，以确定是否需要对基线漂移进行修正。然而，蛋白A相互作用两者都被证明是充分地可再现的和稳定的。数据的有效性受计算的chi2和T值(参数值/偏离)的限制，其分别必须为〈2和>100。
[0282]分离
[0283]抑制剂或结合成员，例如抗体分子，通常是处于分离的形式。分离的多肽结合成员不含或基本上不含在天然状态下与其相关联的材料，例如在其天然环境下，或在这种制备是通过在体外或体内实施的重组DNA技术时在其制备环境(例如细胞培养物)中与其一起存在的其他多肽或核酸。当在治疗中使用时，抑制剂将与药学上可接受的载体或稀释剂混合。多肽结合成员，如抗体分子，可在天然状态下或通过异源真核细胞系统(例如CHO或NSO(ECACC85110503)细胞来糖基化，或它们可以是(例如如果通过在原核细胞中表达来产生)未糖基化的。
[0284]配制品和给药
[0285]抗GM-CSFRa治疗可以口服地(例如纳米抗体))、通过注射(例如皮下地、静脉内地、动脉内地、关节内地、腹膜内地或肌内地)、通过吸入、通过囊内途径(滴注入膀胱)、或局部地(例如眼内、鼻内、直肠、进入伤口、皮肤上)给予。治疗可通过脉冲输注，尤其以下降剂量的抑制剂来给予。给予途径可通过治疗的物理化学特征、对于疾病的特殊考虑因素或优化功效或最小化副作用的要求来确定。设想抗GM-CSFRa治疗不限于临床使用。因此，使用无针装置的皮下注射也是优选的。对于皮下给予，该抑制剂通常是以Iml的体积给予的。因此，可以提供Iml的单独体积的所希望的剂量的配制品用于皮下给予。
[0286]取决于所治疗的病症，组合物可单独或与其他治疗组合，同时或顺序地给予。一般地，不同的治疗剂是以分离的组合物提供的，尽管在一些情况下可以使用组合的配制品。组合治疗可用于提供显著协同效应，尤其抗GM-CSFRa结合成员与一种或多种其他药物的组合。根据本发明的一种抑制剂可组合或添加至以下的一种或多种来提供:NSAID (例如，COX抑制剂如双氯芬酸或塞来昔布以及其他类似的cox2抑制剂),皮质留类(例如口服和/或肠胃外的强的松)和DMARD，例如修美乐(Humira)(阿达木单抗)、甲氨蝶呤、阿拉瓦、恩博(Enbrel)(依那西普)、类克(Remicade)(英利昔单抗)、阿那白滞素(Kineret,Anakinra)、瑞图宣(Rituxan)(利妥昔单抗)、奥瑞希纳(Orencia)(阿巴西普(abatacept)),金盐，抗疟疾药，例如抗疟疾药(例如、氯喹、羟氯喹)、柳氮磺吡啶、d-青霉胺、环胞素A、环磷酰胺、硫唑嘌呤、来氟米特、培舍珠单抗(赛妥珠(Cimzia) ?)、托珠单抗和高利单抗(辛普尼(Simponi) ?)。 [0287]根据本发明，可将提供的组合物给予个体。优选地，给药是以“一个治疗有效量”进行的，这个量足够向患者显示益处。这种益处可至少是至少一个症状的改善。给予的实际量以及给予的速率和时程将取决于正治疗的疾病的性质和严重度。治疗处方，例如对剂量的决定等是在普通医生和其他医师的责任范围内，并且可取决于症状严重度和/或所治疗的疾病的进展。抗体的适当剂量在本领域中是熟知的[62，63]。可使用在此或在医师桌面参考(Physician’s Desk Reference) (2003)中视情况针对所给予的药物类型所指示的具体剂量。本发明的一种抑制剂的治疗有效量或合适剂量可通过在动物模型中比较其体外活性和体内活性来确定。将小鼠和其他测试动物中的有效剂量外推至人类的方法是已知的。确切剂量将取决于多种因素，包括抗体是否用于诊断或治疗，所治疗的区域的大小和位置，抗体的确切性质(例如完整抗体、片段或双体)和任何可检测标记或连接至抗体的其他分子的性质。
[0288]典型抗体剂量将是在10-150mg、50-150mg、80-140mg 或 90_110mg 或最优选 IOOmg
的范围内。这些剂量可以按Iml的体积提供用于皮下给予。这是用于成人患者的单一治疗的剂量，它可针对儿童和婴幼儿来按比例调整，并且也可针对其他抗体形式与分子量成比例来调整。剂量和配制品可以针对替代的给药途径进行调整。例如，已描述了马威利姆单抗以高达10mg/kg进行的静脉内给药[7]。
[0289]在医师判别下，治疗可以按每日、每周两次、每周或每月的间隔来重复。在一个优选的治疗方案中，该抑制剂是以14天的间隔给予的。为了维持或进一步改善临床益处和/或维持或进一步改善患者HAQ-DI得分上的减少,可需要继续治疗。优选地,治疗持续时间是至少85天，并且可以无限期继续。
[0290]此处所示的数据另外表明用根据本发明的一种抑制剂治疗的患者在给予该抑制剂之后的一个持续时期中可继续从治疗的效果中获益，包括临床益处如减少的DAS28-CRP。在给予该抑制剂之后，例如给予至少三次常规剂量的该抑制剂之后，临床益处可被维持在相同水平，或在一些情况下维持在一个较低的但益处仍然显著的水平，持续至少一个月、至少两个月、或至少三个月的时期。因此，在一些实施例中，在需要时，本发明的方法可容许一个或多个治疗间歇，而继续向该患者提供治疗益处，持续至少一个月、至少两个月、或至少三个月。
[0291]将治疗与手术组合时，该治疗可在手术之前和/或之后进行。该治疗可以可任选地直接给予或应用于手术治疗的解剖部位。
[0292]抑制剂通常以药用组合物形式给予，该组合物可包含至少一种除了结合成员以外的组分。因此，用于根据本发明使用的药用组合物可以除了包含活性成分之外，还可以包含一种药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲液、稳定剂或本领域技术人员熟知的其他材料。这些材料应无毒并且不应干扰活性成分的功效。载体或其他材料的确切性质将取决于给药途径，该途径可以是口服、或通过注射，例如静脉内。用于口服给药的药用组合物可以是片剂、胶囊、粉末、液体或半固体形式。片剂可包含固体载体，例如明胶或佐剂。液体药用组合物总体上包含液体载体，例如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可包含生理盐水溶液、葡萄糖或其他糖类溶液或二醇，例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。对于静脉内注射，或病痛部位的注射，活性成分将处于肠胃外可接受的水性溶液形式，该水性溶液为无热原的并且具有合适pH、等渗性以及稳定性。本领域技术人员完全能够使用例如等渗媒介物，例如氯化钠注射液、林格氏注 射液、乳酸盐林格氏注射液来制备合适溶液。需要时,可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲液、抗氧化剂和/或其他添加剂。本发明的结合成员可取决于分子的物理化学特性和递送途径而以液体、半固体或固体形式来配制。配制品可包括赋形剂或赋形剂的组合，例如:糖、氨基酸和表面活性剂。液体配制品可包括宽范围的抗体浓度和pH。固体配制品可通过冻干、喷雾干燥或经由例如超临界流体技术而干燥来产生。抗GM-CSFRa配制品将取决于预期递送途径:例如，用于肺部递送的配制品可以由具有确保在吸入时渗透至肺部深处的物理特性的颗粒组成；外用配制品可包括粘度改性剂，该粘度改性剂延长药物驻留于作用部位的时间。在某些实施例中，该结合成员可被制备成具有保护结合成员避免快速释放的载体，例如控释配制品，包括植入物、经皮贴片和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、可生物相容的聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯以及聚乳酸。许多用于制备此类配制品的方法是本领域的技术人员已知的。参见，例如 Robinson (罗宾逊)，1978 [64]。
[0293]DAS28-CRP
[0294]临床益处可基于DAS28-CRP的减少来确定，例如将DAS28-CRP减少超过1.2，和/或将DAS28-CRP减少至小于2.6。
[0295]可以如前所述的对DAS28-CRP进行确定[12], [13]。如由Wells (威尔斯)等人[13]所述的，该DAS28考虑了 28个压痛和肿胀关节计数，总体健康状况(GH ;使用IOOmm视觉模拟评分法(VAS)进行疾病活性患者评估，其中O=最好，100=最差)，加上一个急性期反应物(ESR (mm/h)或CRP (mg/升))。DAS28值计算如下:
[0296]DAS28-CRP=0.56* V (TJC28)+0.28* V (SJC28)+0.014*GH+0.36*ln (CRΡ+1)+0.96 ；
[0297]其中TJC=压痛关节计数，并且SJC=肿胀关节计数。
[0298]ACR 标准
[0299]可基于ACR标准确定临床益处。该RA患者可被记分为例如ACR20 (20%患者改善)，与未治疗的(例如治疗前的基线)或用安慰剂治疗的进行比较。典型地，方便的是测量与该患者的基线值相比的改善。ACR20标准可包括在压痛(疼痛的)关节计数和肿胀关节计数中20%的改善，加上以下5个另外的量度中的至少3个的20%的改善:
[0300]1.患者通过视觉模拟评分法(VAS)进行的疼痛评估，
[0301]2.患者通过疾病活性(VAS)进行的全局评估，
[0302]3.医师通过疾病活性(VAS)进行的全局评估，
[0303]4.患者通过健康评估问卷(HAQ)测量的自我评估的残疾，以及
[0304]5.急性期反应物，CRP或ESR。
[0305]在1980年引入的HAQ是首批被设计为代表患者源性结果评估模型的患者报告结果工具中的一个[65]。
[0306]ACR50和70是类似定义的。优选地，患者被给予一个量的本发明的⑶20抗体，该量对实现至少ACR20、优选至少ACR30、更优选至少ACR50、甚至更优选至少ACR70、最优选至少ACR75以及更高的分数是有效的。
[0307]健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI)
[0308] HAQ-DI是患者报告的残疾的一种标准化测量，由该患者对他或她执行日常活动的能力的报告来确定。关于HAQ和HAQ-DI的详细信息已经被公开[65]。
[0309]附图简要说明
[0310]图1显示在欧洲临床试验的第85天对于以下治疗组中的患者确定的反应率(％):安慰剂(n=75) ; IOmg 马威利姆单抗(n=39), 30mg (n=41) ；50mg (n=39) ； IOOmg (n=39)。针对以下显示了反应率(从左到右):DAS28-CRP提高>1.2，EULAR中等或良好反应，EULAR良好反应，DAS28-CRP 缓解(〈2.6)。
[0311]图2显示在欧洲临床试验中的第85天对接受了马威利姆单抗(CAM-3001)或安慰剂的患者确定的DAS28-CRP反应率(％)，由剂量组类表示。
[0312]图3显示了在欧洲临床试验中对于每个治疗组通过就诊得出的DAS28-CRP反应率(%)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0313]图4显示在欧洲临床试验中对于每个治疗组DAS28-CRP反应开始的时间。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0314]图5显示在欧洲临床试验第85天的DAS28-CRP的经验分布曲线图。
[0315]图6显示了在欧洲临床试验中对于每个治疗组通过就诊得出的缓解率(％)。CAM-3001=马威利姆单抗。缓解是如通过DAS28-CRP〈2.6定义的。
[0316]图7显示了在欧洲临床试验中对于每个治疗组的DAS28-CRP缓解的开始时间。CAM-3001=马威利姆单抗。[0317]图8显示在欧洲临床试验的第85天对于以下治疗组中的患者确定的反应率(％):安慰剂(n=75) ; IOmg 马威利姆单抗(n=39), 30mg (n=41) ；50mg (n=39) ； IOOmg (n=39)。反应率数据是针对ACR20、ACR50和ACR70显示的(从左到右)。
[0318]图9显示了在欧洲临床试验的第15、29、43、57、71以及85天对于每个治疗组确定的ACR20反应率(％)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0319]图10显示了在欧洲临床试验的第15、29、43、57、71以及85天对于每个治疗组确定的ACR50反应率(％)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0320]图11显示了在欧洲临床试验的第15、29、43、57、71以及85天对于每个治疗组确定的ACR70反应率(％)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0321]图12是在欧洲临床试验第85天的ACRn的经验分布曲线图。
[0322]图13显示了在欧洲临床试验的85天治疗期的过程中对于每个治疗组测量的肿胀关节计数从基线的变化(平均值+/-SE)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0323]图14显示了在欧洲临床试验的85天治疗期的过程中对于每个治疗组测量的压痛关节计数从基线的变化(平均值+/-SE)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0324]图15显示了在欧洲临床试验的筛选时和85天治疗期的过程中对于每个治疗组的医师全局评估(平均值+/-SE)，该评估由疾病活性评估(CM)表示。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0325]图16显示了在欧洲临床试验的筛选时和85天治疗期的过程中对于每个治疗组的患者全局评估(平均值+/-SE)，该评估由疾病活性评估(MM)表示。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0326]图17显示了在欧洲临床试验的筛选时和85天治疗期的过程中对于每个治疗组的患者疼痛评估(平均值+/-SE)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0327]图18a显示了在欧洲临床试验的85天治疗期的过程中对于每个治疗组的HAQ-DI从基线的变化(平均值+/-SE)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0328]图18b显示在欧洲临床试验的第85天针对HAQ-DI的％反应率，其中HAQ-DI反应者被定义为从基线的提高达到> 0.25。CAM-3001=马威利姆单抗
[0329]图19显示了在欧洲临床试验的筛选时和85天治疗期的过程中对于每个治疗组测量的CRP浓度(mg/Ι，几何平均值)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0330]图20显示了在欧洲临床试验的筛选时和85天治疗期的过程中对于每个治疗组测量的红细胞沉降速率(ESR) (MM/HR，几何平均值)。CAM-3001=马威利姆单抗。
[0331]图21是在欧洲临床试验中对于ITT群体至第169天的平均(+/_SE)DAS28 (CRP)的曲线图。CAM-3001=马威利姆单抗
[0332]图22是在欧洲临床试验中对于ITT群体至第169天通过就诊得出的DAS28(CRP)反应率的曲线图。CAM-3001=马威利姆单抗
[0333]图23是在欧洲临床试验中的ITT群体通过就诊得出的ACR20反应率的曲线图。CAM-3001=马威利姆单抗
[0334]图24是在欧洲临床试验中的ITT群体通过就诊得出的平均值(+/-SE)从基线HAQ-DI变化的曲线图。CAM-3001=马威利姆单抗。水平的参考线表示HAQ-DI从基线变化-0.22。[0335]临床试齡
[0336]研究设计综沭
[0337]共筛选了 516个受试者，有239个欧洲人受试者和51个日本人受试者，随后被随机分成四个组类。这些中，284个被包含在ITT群体中。所有组类就基线和疾病特征而言被良好地平衡。
[0338]II期随机的、双盲的、安慰剂对照的研究
[0339]受试者的数目284 (ITT群体)
[0340]有活性的:安慰剂2:1
[0341]组类IOmg, 30mg, 50mg, IOOmg
[0342]治疗在患有中等至严重有活性的RA的成年患者中，将马威利姆单抗添加至稳定的甲氨蝶呤中
[0343]进行一个2期随机的、双盲的、安慰剂对照的、多重递增剂量研究以评估患有RA的受试者中马威利姆单抗的功效、安全性和耐受性。该试验允许评估多个因子，包括RA中的临床结果，剂量与安全性和功效之间的关系，以及马威利姆单抗的药物代谢动力学和免疫原性。
[0344]在85天给药期中，患有至少中等有活性的RA的患者接受与甲氨蝶呤组合皮下给予的多剂量的马威利姆 单抗，或仅接受甲氨蝶呤，其中马威利姆单抗或安慰剂是每隔14天给予的。维持稳定剂量的甲氨蝶呤，补充以叶酸>5mg/周。还在另外的12周的随访期中对受试者进行监测。
[0345]允许受试者接受稳定剂量的非甾体抗炎药和口服的皮质甾类(< IOmg/天强的松龙或等效物)。
[0346]目标群体如下:患有如由1987ACR分类标准[18]定义的RA持续至少3个月的18 - 80岁女性或男性，尽管用甲氨蝶呤治疗，在筛选时和基线处具有由DAS28 ^ 3.2定义的中等至严重的疾病活性，在筛选之前以7.5 - 25mg/周接受甲氨蝶呤持续至少12周，补充以^ 5mg/周叶酸，并在筛选之前保持以稳定剂量的甲氨蝶呤持续至少4周，并且对类风湿因子和/或抗CCP IgG抗体是阳性的。
[0347]由于GM-CSF通路的抑制可抑制肺泡巨噬细胞功能的潜在风险[66]，增加另外的肺部测试以密切监测肺功能。
[0348]在基线处和治疗期间每隔2周进行功效评估。本研究的主要终点是在第12周，与安慰剂相比，组合的马威利姆单抗治疗的受试者的部分实现了 DAS28-CRP[13]从基线提高
1.2。计算反应率，其中反应者被定义为显示了从他们的基线DAS28-CRP减少超过1.2的受试者。
[0349]次要的功效终点是ACR20、ACR50和ACR70反应，缓解率(DAS28_CRP〈2.6)和DAS-28-CRP EULAR反应标准。另外的评估包括缓解开始的时间、从基线1.2个点的一个提高、肿胀和压痛关节计数以及急性期反应物的测量(CRP和ESR)。还测量了包括健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI) [67]的患者报告的结果。
[0350]统计方法
[0351]样本大小计算是基于主要功效终点(在第12周时DAS28-CRP变化1.2个点)。假定安慰剂反应率为10%，退出率为15%，双侧第I类错误为0.05，并且随机化率为2:1 (有活性的:安慰剂)，为216个受试者的总样本大小提供了 86%的检定力以检测在反应率上20%的差异，以用于基于双侧费希尔精确检验(Fisher’ s exact test)的分析。需要日本组类中的另外48个受试者给出264个受试者的总体计划的样本大小。
[0352]使用费希尔精确检验(Fisher’ s exact test)分析所有反应率，包括主要终点ACR20、ACR50和ACR70。使用混合模型重复的测量分析与对于基线DAS28的一个协变量对DAS28得分从基线的变化进行分析。使用科克伦-曼特尔-亨塞尔(Cochran-Mantel-Haenszel)检验对DAS28欧洲抗风湿病联盟(EULAR)反应标准进行分析。使用该EULAR反应标准将DAS28的提高进行分类，如以下所示:
[0353]
【权利要求】
1.一种在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)来量度，后者如由1987美国风湿病学会(ACR)标准确定的， 该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括一个治疗有效量的一种GM-CSFR α抑制剂， 其中，该抑制剂结合在人类GM-CSFRa序列SEQ ID NO:206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
2.包括一种GM-CSFRa抑制剂的一种组合物，用于在患者中治疗类风湿关节炎以提供临床益处的方法中使用，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)来量度的，后者如由1987ACR标准确定的，其中，该抑制剂结合在人类GM-CSFR a 序列 SEQ ID NO: 206 的 226 至 230 位的一个 Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln 基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFR a胞外域。
3.一种产品，包含 (i)被封装在一个容器中的包括一种GM-CSFRa抑制剂的一种组合物，其中该抑制剂结合在人类 GM-CSFRa 序列 SEQ ID NO:206 的 226 至 230 位的一个 Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域；以及 (ii)关于将该抑制剂使用于一种治疗患者类风湿关节炎以提供临床益处的方法中的一个包装说明书或有说明的标签，该临床益处是通过DAS28-CRP减少超过1.2和/或改善至少20%治疗功效(ACR20)来量度，后者如由1987ACR标准确定的， 并且，其中该方法包括向该患者给予一个治疗有效量的该抑制剂。
4.根据权利要求1所述的方法，根据权利要求2所述的组合物或根据权利要求3所述的产品，其中该临床益处包括DAS28-CRP减少超过1.2。
5.根据权利要求4所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括监测治疗后的患者，测量DAS28-CRP并且确定治疗已将该DAS28-CRP减少超过1.2。
6.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括缓解类风湿关节炎或减少开始缓解的时间。
7.根据权利要求6所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括缓解至少10%或至少20%的患者的类风湿关节炎。
8.根据权利要求7所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括监测治疗后的患者，并观察类风湿关节炎的缓解。
9.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括改善至少20%的治疗功效(ACR20)，如通过1987ACR标准确定的。
10.根据权利要求9所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括改善至少50%的治疗功效(ACR50)，如通过1987ACR标准确定的。
11.根据权利要求10所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括改善至少70%的治疗功效(ACR70)，如通过1987ACR标准确定的。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括监测治疗后的患者，根据1987ACR标准评价治疗功效并确定已经实现了 ACR20、ACR50或ACR70。
13.根据权利要求9至12中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括在至少20%或至少30%的患者中实现ACR50。
14.根据权利要求13所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处包括在至少5%、至少10%或至少15%的患者中实现ACR70。
15.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该临床益处是在85天之内实现的。
16.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法进一步包括改善RA患者的身体机能，如通过HAQ-DI确定的。
17.一种改善RA患者的身体机能的方法，该身体机能如通过HAQ-DI确定的， 该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括一个治疗有效量的一种GM-CSFR α抑制剂， 其中，该抑制剂结合在人类GM-CSFRa序列SEQ ID NO:206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
18.包括一种GM-CSFRα抑制剂的一种组合物，用于在改善RA患者的身体机能的方法中使用，该身体机能如通过HAQ-DI确定的， 其中，该抑制剂结合在人类GM-CSFRa序列SEQ ID NO:206的226至230位的一个Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域。
19.一种产品，包含 (i)被封装在一个容器中的包括一种GM-CSFRa抑制剂的一种组合物，其中该抑制剂结合在人类 GM-CSFRa 序列 SEQ ID NO: 206 的 226 至 230 位的一个 Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln基序，并抑制GM-CSF结合至GM-CSFR a，并且其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以5nM的或更少的亲和力(KD)结合至人类GM-CSFRa胞外域；以及 (ii)关于将该抑制剂使用于一种改善RA患者身体机能的方法中的一个包装说明书或有说明的标签，该身体机能如通过HAQ-DI确定的， 并且，其中该方法包括向该患者给予一个治疗有效量的该抑制剂。
20.根据权利要求16至19中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将HAQ-DI得分提高至少0.25。
21.根据权利要求20所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括监测治疗后的患者，测量HAQ-DI并且确定该患者的HAQ-DI得分已经提高了至少0.25。
22.根据权利要求16至21中任一项所述的方法、组合物或产品，其中HAQ-DI的提高是在六周之内实现的。
23.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括以90至IlOmg之间的皮下剂量将该抑制剂给予该患者。
24.根据权利要求23所述的方法、组合物或产品，其中该剂量是lOOmg。
25.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该组合物被配制用于皮下给予。
26.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将该组合物与一种或多种另外的治疗剂组合给予该患者。
27.根据权利要求26所述的方法、组合物或产品，其中该一种或多种另外的治疗剂包括一种或多种病情改善抗风湿药(DMARD)。
28.根据权利要求27所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将该组合物与甲氨蝶呤组合给予该患者。
29.根据权利要求28所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括以每周7.5至25mg的剂量给予甲氨蝶呤。
30.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该类风湿关节炎患者是在给予该GM-CSFRa抑制剂之前已经接受了一个稳定剂量的甲氨蝶呤持续至少4周的一位患者，并且其中该方法包括将该组合物与持续剂量的甲氨蝶呤组合给予该患者。
31.根据权利要求30所述的方法、组合物或产品，其中甲氨蝶呤的剂量是每周7.5至25mg。
32.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该患者在治疗之前具有至少3.2的基线DAS28-CRP。
33.根据权利要求32所述的方法、组合物或产品，其中该患者在治疗之前具有大于5.1的基线 DAS28-CRP。
34.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该患者在治疗之前对于类风湿因子和/或抗环瓜氨酸肽(CCP) IgG抗体测试呈阳性。
35.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该方法包括将一个治疗有效量的该抑制剂以每两周一次的间隔给予该患者持续至少85天的时期。
36.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该患者是一位不患有医学上显著的呼吸道疾病的患者。
37.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抑制剂包括一种抗体分子。
38.根据权利要求37所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括一个抗体VH域，该VH域包括一组互补决定区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及一个框架，其中该组互补决定区包括具有氨基酸序列SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 173的一个CDRl、具有氨基酸序列SEQ ID NO: 4的一个⑶R2、以及具有选自由以下组成的组中的氨基酸序列的一个⑶R3:SEQ ID NO:5 ；SEQID NO: 15 ；SEQ ID NO:25 ；SEQ ID NO:35 ；SEQ ID NO:45 ；SEQ ID NO:55 ；SEQ ID NO:65 ；SEQID NO:75 ；SEQ ID NO:85 ；SEQ ID NO:95 ；SEQ ID NO: 105 ；SEQ ID NO: 115 ；SEQ ID NO: 125 ；SEQ ID NO: 135 ；SEQ ID NO: 145 ；SEQ ID NO: 155 ；SEQ ID NO: 165 ；SEQ ID NO: 175 ；SEQ IDNO: 185;和SEQ ID NO: 195 ;或包括具有一个或两个氨基酸取代的⑶R序列组。
39.根据权利要求37或权利要求38所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括一个抗体VH域，该VH域包括互补决定区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及一个框架，并且其中VH⑶R3中的卡巴特残基H97是S。
40.根据权利要求39所述的方法、组合物或产品，其中VHCDR3进一步包括以下残基中的一种或多种: 卡巴特残基H95处的V、N、A或L ; 卡巴特残基H99处的S、F、H、P、T*W; 卡巴特残基HlOOB处的A、T、P、S、V或H。
41.根据权利要求40所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基H95是V。
42.根据权利要求40或权利要求41所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基H99是S。
43.根据权利要求37至42中任一项所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基H100B 是 A 或 T0
44.根据权利要求40所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶R3具有选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成:SEQ ID NO:5,SEQ ID NO: 15,SEQ ID NO:35,SEQ ID NO:45,SEQID NO:55、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO: 105、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:135、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:155、SEQ IDNO:165、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:185 和 SEQ ID NO:195。
45.根据权利要求39至44中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶Rl中的卡巴特残基H34是I。
46.根据权利要求37至45中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶Rl具有氨基酸序列SEQ ID NO:3。
47.根据权利要求39至46中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶R2在卡巴特残基H54处包括E和/或在卡巴特残基H57处包括I。
48.根据权利要求39至47中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VH⑶R2具有氨基酸序列SEQ ID NO:4。
49.根据权利要求39至49中任一项所述的方法、组合物或产品，其中在该VH域框架中的卡巴特残基H17是S。
50.根据权利要求39至49中任一项所述的方法、组合物或产品，包括一个抗体VL域，该VL域包括互补决定区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及一个框架。
51.根据权利要求50所述的方法、组合物或产品，其中VLCDR3包括以下残基中的一种或多种: 卡巴特残基L90处的S、T或M ; 卡巴特残基L92处的D、E、Q、S、M或T ; 卡巴特残基L96处的S、P、I或V。
52.根据权利要求51所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L90是S。
53.根据权利要求51或权利要求52所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L92是D或E。
54.根据权利要求51至53中任一项所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L95A是S。
55.根据权利要求51至54中任一项所述的方法、组合物或产品，其中卡巴特残基L96是S。
56.根据权利要求50或权利要求55所述的方法、组合物或产品，其中VLCDR3具有选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成:SEQ ID NO: 10,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:40,SEQID NO:50, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:70, SEQ ID N0:80、SEQ ID N0:90、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:120、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:140、SEQ ID NO:150、SEQ IDNO:160、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:180、SEQ ID NO:190 和 SEQ ID NO:200。
57.根据权利要求50至56中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VLCDRl包括以下残基中的一种或多种: 卡巴特残基27A处的S ; 卡巴特残基27B处的N; 卡巴特残基27C处的I ; 卡巴特残基32处的D。
58.根据权利要求50至57中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶Rl具有氨基酸序列SEQ ID NO:8。
59.根据权利要求50至58中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VLCDR2包括以下残基中的一种或多种: 卡巴特残基51处的N; 卡巴特残基52处的N; 卡巴特残基53处的K。
60.根据权利要求50至59中任一项所述的方法、组合物或产品，其中VL⑶R2具有氨基酸序列SEQ ID NO:9。
61.根据权利要求37至60中任一项所述的方法、组合物或产品，包括一个抗体VH域，其中卡巴特残基H94是I。
62.根据权利要求37至61中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括一种人类的或人源化的抗体分子，该人类的或人源化的抗体分子与一种具有VH域和VL域的并且该VH域和VL域具有选自以下的氨基酸序列的抗体分子竞争结合人类GM-CSFR α的胞外域:
VH 域 SEQ ID NO: 2 和 VL 域 SEQ ID NO: 208 ；
VH 域 SEQ ID NO: 12 和 VL 域 SEQ ID NO: 210 ；
VH 域 SEQ ID NO: 22 和 VL 域 SEQ ID NO: 212;
VH 域 SEQ ID NO: 32 和 VL 域 SEQ ID NO: 214;
VH 域 SEQ ID NO:42 和 VL 域 SEQ ID NO: 216;
VH 域 SEQ ID NO: 52 和 VL 域 SEQ ID NO: 218;
VH 域 SEQ ID NO:62 和 VL 域 SEQ ID NO: 220 ；
VH 域 SEQ ID NO: 72 和 VL 域 SEQ ID NO: 222 ；
VH 域 SEQ ID NO:82 和 VL 域 SEQ ID NO: 224 ；
VH 域 SEQ ID NO:92 和 VL 域 SEQ ID NO: 226 ；
VH 域 SEQ ID NO: 102 和 VL 域 SEQ ID NO: 228 ；
VH 域 SEQ ID NO: 112 和 VL 域 SEQ ID NO: 230 ；
VH 域 SEQ ID NO: 122 和 VL 域 SEQ ID NO: 232 ；
VH 域 SEQ ID NO: 132 和 VL 域 SEQ ID NO: 234 ；VH 域 SEQ ID NO: 142 和 VL 域 SEQ ID NO:236 ；
VH 域 SEQ ID NO: 152 和 VL 域 SEQ ID NO: 238 ；
VH 域 SEQ ID NO: 162 和 VL 域 SEQ ID NO: 240 ；
VH 域 SEQ ID NO: 172 和 VL 域 SEQ ID NO: 242 ；
VH 域 SEQ ID NO:182 和 VL 域 SEQ ID NO:244;或
VH 域 SEQ ID NO: 192 和 VL 域 SEQ ID NO: 246。
63.根据权利 要求37至62中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子是一种人类的或人源化的抗体分子。
64.根据权利要求63所述的方法、组合物或产品，其中该VH域框架是一种人类种系VH1DP5 或 VH3DP47 框架。
65.根据权利要求63或权利要求64所述的方法、组合物或产品，包括一个VL域，其中该VL域框架是一种人类种系V λ 1DPL8、V λ 1DPL3或V λ 6_6a框架。
66.根据权利要求37至65中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子包括: 一个具有在SEQ ID NO: 52中所示的VH域氨基酸序列的VH域或其具有一个或两个氨基酸改变的变体，以及 一个具有在SEQ ID NO: 218中所示的VL域氨基酸序列的VL域或其具有一个或多个氨基酸改变的变体； 其中该氨基酸改变选自下组，该组由取代、插入和缺失组成。
67.根据权利要求63至66中任一项所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子是IgG4。
68.根据权利要求67所述的方法、组合物或产品，其中该抗体分子是一个人类IgG4，包含一个VH域和一个VL域，该VH域具有在SEQ ID NO: 52中所示的氨基酸序列，该VL域具有在SEQ ID NO:218中所示的氨基酸序列。
69.根据以上权利要求中任一项所述的方法、组合物或产品，其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以InM或更少的亲和力(KD)结合人类GM-CSFRa胞外域。
70.根据权利要求69所述的方法、组合物或产品，其中在一个表面等离子体共振测定中，该抑制剂以0.5nM或更少的亲和力(KD)结合人类GM-CSFRa胞外域。
71.一种在患者中治疗RA以提供临床益处的方法，该临床益处是通过DAS28-CRP在85天之内减少超过1.2测量的，该方法包括向该患者给予包括马威利姆单抗的一种组合物，其中该组合物是通过皮下给予以IOOmg每两周一次的剂量给予的。
72.—种在患者中治疗RA以提供临床益处的方法，该临床益处是通过在85天之内改善至少ACR50或至少ACR70测量的，该方法包括向该患者给予包括马威利姆单抗的一种组合物，其中该组合物是通过皮下给予以IOOmg每两周一次的剂量给予的。
73.根据权利要求71或权利要求72所述的方法，其中该临床益处是在42天之内实现的。
74.根据权利要求73所述的方法，其中该临床益处是在14天之内实现的。
75.一种在患者中诱导RA的缓解的方法，如通过DAS28-CRP小于2.6测量的，该方法包括向该患者给予一种组合物，该组合物包括一个治疗有效量的马威利姆单抗，其中该组合物是通过皮下给予以IOOmg每两周一次的剂量给予的，并且其中是在85天之内开始缓解的。
76.根据权利要求75所述的方法，其中是在42天之内开始缓解的。
77.根据权利要求76所述的方法，其中是在14天之内开始缓解的。
78.—种改善RA患者的身体机能的方法，如通过HAQ-DI确定的，该方法包括向该患者给予一种包括马威利姆单抗的组合物，其中该组合物是通过皮下给予以Iml中IOOmg每两周一次的剂量给予的，并且其中HAQ-DI的改善是在十二周内实现的。
79.根据权利要求78所述的方法，其中该改善是在患者的HAQ-DI得分上至少减少0.25。
80.根据权利要求78或权利要求79所述的方法，其中该改善是在六周之内实现的。
81.根据权利要求71至80中任一项所述的方法，其中还用一种或多种另外的病情改善抗风湿药(DMARD)对该患者进行治疗。
82.根据权利要求81所述的方法，其中该另外的药物是甲氨蝶呤。
83.根据权利要求71至82中任一项所述的方法，其中还用一种或多种镇痛药和/或非甾体抗炎药(NSAID)和/或留体类(口服和/或肠胃外的)对该患者进行治疗。
84.—种包括马威利姆单抗的组合物，用于在根据权利要求71至83中任一项所述的方法中使用。
85.—种包括马威利姆单抗的组合物，用于根据权利要求84来使用，其中该组合物是用于与甲氨蝶呤组合给予的。
【文档编号】C07K16/28GK103906767SQ201280048532
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2012年10月10日 优先权日:2011年10月10日
【发明者】A·高德伍德, F·马格里尼 申请人:米迪缪尼有限公司