一种制备特立帕肽的方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备特立帕肽的方法，本发明具体步骤为：A）在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂；B）通过固相合成法，按特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中肽序16-17位氨基酸采用假脯氨酸二肽Fmoc-Asn(Trt)-Ser(ψMe,MePro)-OH代替原16-17位置两个氨基酸进行偶联；C）肽树脂裂解采用含NH4I/Me2S的TFA体系的裂解液，粗品经HPLC纯化、冻干得到特立帕肽，其工艺杂质Met8(O)-特立帕肽含量小于0.1%。本发明提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的特立帕肽制备工艺，此工艺既有效控制Met8(O)-特立帕肽含量又不影响特立帕肽的总收率。
【专利说明】一种制备特立帕肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多肽类药物的制备方法，是一种具有可调节钙、磷代谢，促进骨形成而用于骨质疏松治疗的药物-特立帕肽的制备方法。
【背景技术】
[0002]特立帕肽,英名为:Teriparatide,为一直链34肽,结构式如下:
【权利要求】
1.一种制备特立帕肽的方法，提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的特立帕肽制备工艺，此工艺既有效控制Met8 (O)-特立帕肽含量又不影响特立帕肽的总收率，其特征在于，所述方法包括以下步骤: 步骤1，在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Phe-OH偶联得到Fmoc-Phe-树脂； 步骤2，通过固相合成法，按特立帕肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中肽序16-17位氨基酸采用假脯氨酸二肽Fmoc-Asn(Trt)-Ser(v Me, MePro)-OH代替原16-17位置两个氨基酸进行偶联； 步骤3，肽树脂裂解采用含NH4I/Me2S的TFA体系的裂解液，粗品经HPLC纯化、冻干得到特立帕肽，其工艺杂质Met8 (O)-特立帕肽含量小于0.1 %。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是: 其中，步骤I所述的固相合成方法，所述树脂固相载体采用2-CTC树脂，所述活化剂系统选自 DIEA、TMP 或 NMM，所述 Fmoc-Phe-树脂为 0.40~0.90mmol/g 取代度的 Fmoc-Phe-CTC树脂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是: 其中，步骤I所述的固相合成方法，所述树脂固相载体采用王树脂，所述活化剂系统由DIC、HOBt 和 DMAP 组成，所述 Fmoc-Phe-树脂为 0.40~0.90mmol/g 取代度的 Fmoc-Phe-王树脂。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在是: 其中，步骤2所述的固相合成方法，I)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc-Phe-树脂上的Fmoc保护基，得到H-Phe-树脂； 2)在偶联剂系统的存在下，H-Phe-树脂和Fmoc保护且侧链保护的精氨酸偶联得到Fmoc-Asn (Trt) - Phe-树脂； 3)重复步骤1)、2)，按照特立帕肽主链肽序依次进行氨基酸的偶联，肽序16-17位氨基酸采用假脯氨酸二肽Fmoc-Asn (Trt) -Ser ( Ψ Me, Me Pro) -OH代替原16-17位置两个氨基酸进行偶联。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征是: 其中，步骤3所述采用了含NH4I/Me2S的TFA体系的裂解液，其TFA体系的裂解液为:TFA、苯甲硫醚、苯甲醚、乙二硫醇、三异丙基硅烷、水、二甲硫醚、碘化铵一种或多种的组合。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征是: 所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA ;所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP, DMSO或他们之间的任意组合。
【文档编号】C07K1/06GK104017064SQ201410262511
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月13日 优先权日:2014年6月13日
【发明者】陈晓航, 路杨, 杨东晖, 周亮 申请人:杭州诺泰制药技术有限公司