高纯度河豚毒素的提取方法
【专利摘要】本发明公开了一种不含去水河豚毒素的高纯度河豚毒素的提取方法，先用醇醚扩散法纯化TTX，再用高压液相色谱进一步分离Anh-TTX，使TTX的纯度达98%以上，且不含Anh-TTX，生物体内和TTX共存的Anh-TTX含量极微，由于其分子结构、分子量及理化性质和TTX非常接近，分离难度大，选用醇醚扩散法纯化TTX，不仅可以提高TTX纯度，同时可使Anh-TTX等（TTX衍生物）经离心分离，本发明利用PHLC-离子交换、凝胶工艺，使沉淀物中的Anh-TTX与TTX得到彻底分离，是Anh-TTX分离一大突破。
【专利说明】高纯度河豚毒素的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明是一种海洋生物活性物质的分离提取方法，属于天然生物产品提取技术领 域。
【背景技术】
[0002] 河豚毒素是存在于河豚鱼体内的一种有毒物质，去水河豚毒素是河豚毒素的衍 生物，两者的区别仅在后者比前者少一个水分子，但其毒力后者仅为前者的1%。一般情况 Anh-TTX与TTX存在于同一生物体中，主要存在于河豚鱼的卵巢、肝脏、皮肤和肠胃中，在 虾虎鱼、螺类、章鱼、蟹类、和海星等，海生陆产的两栖类、软体动物、节肢动物等都已检测到 TTX和Anh-TTX，并发现TTX和Anh-TTX可能来源于一些细菌如弧菌、假单胞菌等。
[0003] TTX是生物细胞Na+通道的阻断剂，其生理作用是快速可逆阻断Na+通道，所以，可 广泛用于神经生物学和生理学及其他科学研究。
[0004] Anh-TTX分布于多种生物中，在生物体内含量极少，约为百万分之一至千万分之 一。由于Anh-TTX与TTX分子结构、分子量及理化性质非常接近，提取TTX时总是含混有 Anh-TTX，要在TTX中分离Anh-TTX非常困难，目前尚未见有分离Anh-TTX的报道。
[0005] 为了提高提取河豚毒素（tetrodotoxin，TTX)的纯度，分离去水河豚毒素 (Anhydroterodotoxin，Anh-ΤΤΧ)，去水河豚毒素是一种氨基全氢喹唑啉型化合物，其分子 式和结构如下： 分子式=C11H15O7N3，分子量 301. 27. 结构式：
【权利要求】
1.高纯度河豚毒素的方法，其特征在于： 1)醇醚扩散法纯化TTX :先将粗品河豚毒素加4-22%醋酸溶解，加无水乙醇1-12倍， 离心除去不溶物，然后将上清液移到小烧杯，贮藏在密闭的容器中，并另放一杯乙醚，控制 温度3-35°C、10_48小时，最后将醇醚溶液经离心分离出沉淀物；2)高压液相色谱进一步 分离去水河豚毒素：将上述沉淀物，用1-32%磷酸溶液，用流动相组成含有0. 1-12%甲醇的 0. 01-. 0. 25M磷酸盐缓冲液，调PH为5. 7,流动相流速l-20ml/min，用示差检测器进行检 测，分离过程按记录仪上出峰图，分离去水河豚毒素馏份；3)河豚毒素的脱盐、回收：选择 填料为酸性阳离子交换树脂和生物凝胶，洗脱剂用1-22%的醋酸，收集PH4-7馏份，加氨水 调节PH7. 5-10,可沉淀出河豚毒素，经反复分离提取和脱盐，可得到纯品河豚毒素结晶。
【文档编号】C07D491/22GK104496999SQ201510004340
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月6日 优先权日:2015年1月6日
【发明者】满爱环, 杨玉霞, 刑德亮, 逢琦 申请人:刘学民, 李龙文, 程丽倩