一种静注人免疫球蛋白的制备方法

一种静注人免疫球蛋白的制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种生产静注人免疫球蛋白的方法，此方法具体包括：组分I+II+III(或组分II+III)沉淀的溶解；分离组分I+III-1(或组分III-1)沉淀；分离组分I+III-2(或组分III-2)沉淀；分离组分II沉淀；组分II沉淀溶解、过滤；超滤、透析、浓缩；纯化、过滤；超滤透析、浓缩、配制，此方法针对传统工艺方法的各步骤以及各步骤参数作出了改进，各步骤以及各步骤参数的特定组合可有效从I+II+III(或组分II+III)沉淀中提取静注人免疫球蛋白，解决静注人免疫球蛋白纯度偏低，多聚体等含量偏高的技术难题，降低人们用药风险，保障人们用药安全。
【专利说明】一种静注人免疫球蛋白的制备方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制药领域，尤其涉及一种静注人免疫球蛋白的制备方法。

【背景技术】
[0002] 免疫球蛋白是由B淋巴细胞合成、分泌的一种糖蛋白，主要存在于循环系统中，细 胞表面也有分布。免疫球蛋白的主要功能在于抵抗各种病原微生物对人体的感染。主要用 于：①原发性和继发性免疫缺陷病；②特发性血小板减少性紫癜；③川崎病；④艾滋病的治 疗；⑤其他适应症，如糖尿病、类风湿性关节炎、重症肌无力、自身免疫性贫血、再生障碍性 贫血等。免疫球蛋白生产工艺是由美国哈佛大学医学院Cohn教授研宄开发的一种低温乙 醇蛋白分离工艺，该技术通过多步调节低温乙醇法的五大要素：离子强度、PH值、温度、乙 醇浓度和蛋白质含量来实现分离1+11+111(或组分Π+ΙΙΙ)沉淀中的组分II，再经进一步 提纯得到静注人免疫球蛋白。这种传统的生产工艺采用两步法提取静注人免疫球蛋白，其 最大的缺陷是生产的静注人免疫球蛋白纯度偏低，多聚体等含量偏高，容易引起输注后的 不良反应。因为其中的多聚体分子量较大可引起类过敏反应、抗补体活性以及血压下降，随 着研宄的深入其治疗范围在不断增加，如皮肤病、器官移植、肿瘤、白血病等，有的病人需要 长期使用或单次大剂量输注，这样风险就会大大增加。


【发明内容】

[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种制备纯度高，多聚体含量、抗补体活性、激肽 释放酶原激活剂含量较低的静注人免疫球蛋白的制备方法。
[0004] 本发明提供了一种静注人免疫球蛋白的制备方法，包括如下步骤：
[0005] 步骤一：组分I+II+III或组分II+III沉淀的溶解
[0006] 将组分I+II+III沉淀或组分II+III沉淀用磷酸二氢钠的水溶液完全溶解；
[0007] 步骤二：分离组分I+III-I沉淀或组分m-ι沉淀
[0008] 调节上述组分I+II+III沉淀溶解液或组分II+III沉淀溶解液pH值至5. 00? 5. 20,调节温度至-0. 5?0. (TC，再用-20°C以下95%的乙醇溶液调节至乙醇终浓度为 7. 5?8. 5%，并调整pH值至5. 00?5. 20,调节温度至-3. (TC?-2. (TC，搅拌使其反应完 全，按每IOOOkg悬液加入娃藻土 3. 5?4. 5kg和珍珠岩2. 0?3. 0kg，搅拌，开始悬液压滤， 控制过滤压力为0?0. 3MPa，过滤速度为20?90kg/min，滤出液温度-3. 0?-I. (TC，收集 组分I+III-I上清液或组分III-I上清液；
[0009] 步骤三：分离组分I+II 1-2沉淀或组分II1-2沉淀
[0010] 调整组分I+III-I上清液或组分III-I上清液pH值至5. 10?5. 30,用-20 °C 以下95 %的乙醇调节乙醇终浓度至14?16%，并调整pH值至5. 10?5. 30,反应温度 至-5. 0°C?-4. 0°C，搅拌使其反应完全，按每IOOOkg悬液加入娃藻土 2. 0?3. Okg和珍珠 岩2. 0?3. 0kg，搅拌，开始悬液压滤，控制过滤压力为0?0. 3MPa，过滤速度为20?90kg/ min，滤出液温度-5. 0?-3. 0°C，收集组分I+III-2上清液或组分III-2上清液；
[0011] 步骤四：分离组分II沉淀
[0012] 每1000敁1+111-2上清液或组分111-2上清液加入25?35%的氯化钠溶液 18. 4?22. 4kg，调节pH值至6. 90?7. 10,用-20°C以下95%的乙醇调节乙醇浓度至19? 21 %，调整pH值至6. 90?7. 10,调节反应温度至-8. 0?-6. 0°C，搅拌使其反应完全，按每 IOOOkg悬液加入珍珠岩0. 5?I. 0kg，搅拌，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 300MPa，过滤 速度为20?90kg/min，滤出液温度-7. 5?-5. 5°C，上清排放，收集组分II沉淀；
[0013] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0014] 将收集的组分II沉淀加入注射用水搅拌至完全溶解，调整pH值至6. 90?7. 10， 调节温度至0. 0?4. 0°C，继续搅拌，按每IOOOkg溶解悬液加入娃藻土 I. 0?2. Okg和珍珠 岩I. 0?2. 0kg，搅拌，开始压滤，控制过滤压力为0. 200MPa，过滤速度为10?60kg/min，滤 出液温度0. 0?5. 0°C，压滤分离过滤液，调节过滤液pH值至3. 80?4. 10 ;
[0015] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0016] 将过滤液浓缩至蛋白质含量为8?12%，然后用2?5°C、4?6倍体积的注射用 水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8?9%，再调整pH值至6. 50?7. 30,用注射用 水稀释控制蛋白质含量为50. 0?100. Og/L ;
[0017] 步骤七：纯化、过滤
[0018] 将步骤六浓缩后的制品用0.0?4.0°C的注射用水稀释蛋白质含量至1.5? 2. 0%，稀释后在每IOOOkg制品加入磷酸二氢钠I. 0?3. Okg和氯化钠0. 2?I. 0kg，调整 pH值至6. 90?7. 10,调节温度至0. 0?0. 5°C，用-20°C以下95 %的乙醇调节乙醇浓度至 1. 5?2. 5 %，调节温度至-2. 0?-I. (TC，搅拌使其反应完全，按每IOOOkg悬液加入珍珠岩 I. 0?2. 0kg，搅拌，开始压滤，控制过滤压力为0. 200MPa，过滤速度为10?60kg/min，滤出 液温度-2. 0?-I. (TC，调节滤出液pH值至3. 80?4. 10,调节温度至-2. 0?-I. (TC ;
[0019] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0020] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为8?12%，然 后用注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8?9%，按最终制品每升含麦芽糖 95?105g加入麦芽糖，调节pH值至3. 90?4. 30,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为 5. 20?5. 50%，再进行除菌、除病毒过滤、低pH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白 半成品。
[0021] 所述步骤一中所述磷酸二氢钠的水溶液为组分I+II+III或组分II+III沉淀重量 的6?8倍，浓度为0. Olmol/L，搅拌时间为6小时以上。
[0022] 所述步骤二、三、四和五中用来调节PH值的溶剂为lmol/L醋酸溶液或0· 5mol/L 氢氧化钠溶液。
[0023] 所述步骤六中将过滤液浓缩至蛋白质含量为8?12%是采用膜规格为30KD超滤 器浓缩。
[0024] 本发明提供了一种生产静注人免疫球蛋白的方法，此方法针对传统工艺方法 的各步骤以及各步骤参数作出了改进，各步骤以及各步骤参数的特定组合可有效从 1+11+111(或组分II+I II)沉淀中提取静注人免疫球蛋白，解决静注人免疫球蛋白纯度偏 低，多聚体等含量偏高的技术难题，降低人们用药风险，保障人们用药安全。

【专利附图】

【附图说明】
[0025] 图1为本发明原料组分I+II+III (或组分II+III)沉淀的生产工艺流程图。
[0026] 图2为传统的静注人免疫球蛋白生产工艺流程图。
[0027] 图3为本发明的静注人免疫球蛋白生产工艺流程图。

【具体实施方式】
[0028] 本发明中的原料组分I+II+III沉淀和II+III沉淀可以采用最常规的工艺生产， 例如可以按照图1的以下步骤制备：
[0029] 一、组分 I+II+III 制备
[0030] 1血浆计量：将合并融化后的健康人血浆（由单采血浆站采集并经过两次检验和 符合窗口期管理的要求）计量。
[0031] 2调整蛋白质含量：用0. 9%氯化钠溶液调节血浆蛋白质含量至4. 8?5. 3%。
[0032] 3调节pH值：用pH4. 0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH值至6. 20?6. 30。
[0033] 4调节乙醇浓度：加入95%乙醇调节乙醇终浓度至20±1%。
[0034] 5复测及调整pH值：加完95 %乙醇后复测pH值应为6. 60?6. 70。如pH值小 于6. 60,则应用0. 5mol/L氢氧化钠调节至此范围内；如pH值大于6. 70,则应用pH4. 0醋 酸-醋酸钠缓冲液调节至此范围内。
[0035] 6调节反应温度：调节反应温度至-5. 0?-4. (TC，温度到达目标值后继续搅拌反 应2小时以上，得到组分I+II+III悬液，这时其蛋白质含量为3. 5?4. 5%。
[0036] 7加入助滤剂：每IOOOkg组分I+II+III悬液加入硅藻土 3. 5?4. 5kg、珍珠岩2? 3kg，加完上述助滤剂后，继续搅拌10分钟以上。
[0037] 8悬液压滤：在压滤机上组装滤板，调节液压190?240bar压紧压滤机，用20 %平 衡液对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20?40分钟，用预冷洁净压缩 空气吹干滤板，使排放温度达到-5. 0?-3. (TC，组分FI+II+III压滤所有步骤的预冷压缩 空气温度均为-7. 0?-3. (TC。开始悬液压滤，控制过滤速度为20?90kg/min，检查滤液 澄清度，进口压力为〇· 300MPa，滤出液温度为-5. 0?-3. 0°C。
[0038] 9罐顶洗：悬液压滤完成后，用20 %平衡液50?IOOkg对悬液罐的罐体进行清洗 回收，洗液经压滤机后进入目标罐。罐顶洗完成后，设定吹扫时间30?60分钟，用预冷洁 净压缩空气吹干滤板；接着用20%平衡液经过悬液罐的旁路对压滤机进行清洗回收，回收 液进入目标罐，出液50?150kg后结束。设定吹扫时间30?150分钟，用预冷洁净压缩空 气吹干滤板。
[0039] 10收集沉淀：松开压滤机，收集组分I+II+III沉淀，收集完后放置_30°C以下冷库 保存。
[0040] 二、组分II+III沉淀制备
[0041] 1离心冷沉淀
[0042] I. 1血浆计量：融化合并后的血浆计量。
[0043] 1. 2离心冷沉淀：通过输送管道将血浆送往离心间，使用离心机进行冷沉淀离心 分离，出液温度控制在0. 5?2. 5°C，出液速度小于2. 5kg/min，收集离心上清。
[0044] 2组分I制作、离心
[0045] 2· 1组分I的制作
[0046] 2. I. 1离心冷沉淀后的上清计量。
[0047] 2. L 2调节pH值：用pH4. 0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH至L 00?L 20。
[0048] 2. 1. 3调节乙醇浓度：用95%乙醇调节乙醇浓度至8. 0±0. 5%。
[0049] 2. 1. 4复测及调整pH值：加完95%乙醇后复测pH值应为7. 00?7. 20。如pH值小 于7. 00,则应用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调节至此范围内；如pH值大于7. 20,则应用pH4. 0 醋酸-醋酸钠缓冲液调节至此范围内。
[0050] 2. 1. 5调节反应温度：调节反应温度至-2. 5?-I. 5°C，温度到达目标值后搅拌反 应30分钟以上。
[0051] 2. 1. 6复核蛋白质含量：最终蛋白质含量应为4. 5?5. 5%。
[0052] 2. 2组分I离心：离心出液速度为每台离心机小于2. Okg/min，检查出液澄清度，出 液温度为-2. 0?-I. (TC，收集离心上清。
[0053] 3组分II+III制作、压滤
[0054] 3. 1 组分 II+III 制作
[0055] 3. I. 1离心组分I后的上清计量。
[0056] 3. 1. 2调整蛋白质含量：用8%平衡液将蛋白质含量调整至4. 00?5. 00%。
[0057] 3. L 3调节pH值：用pH4. 0醋酸-醋酸钠缓冲液调节pH至6. 40?6. 50。
[0058] 3. 1.4调节乙醇浓度：用95%乙醇调节乙醇浓度至20±1%。
[0059] 3. L 5复测及调节pH值：加完95%乙醇后复测pH值应为6. 60?6. 70。如pH值 小于6. 60,则应用0. 5mol/L氢氧化钠调节至此范围内；如pH值大于6. 70,则应用pH4. 0醋 酸-醋酸钠缓冲液调节至此范围内。
[0060] 3. 1. 6调节反应温度：调节反应温度至-5. 0?-4. (TC，温度到达目标值后继续搅 拌反应2小时以上。
[0061] 3. 1. 7复核蛋白质含量：最终蛋白质含量应为3. 0?4. 5%。
[0062] 3. 2组分II+III沉淀压滤
[0063] 除加入的助滤剂量不一样之外，其余操作步骤和上述的"本发明中的原料组分 I+II+III生产步骤"中的"步骤2组分I+II+III沉淀压滤"一致（其中助滤剂加量为每 IOOOkg 组分 II+III 悬液加入硅藻土 5. 5±0. 5kg、珍珠岩 3. 5±0. 5kg)。
[0064] 利用原料组分I+II+III沉淀和II+III沉淀制备静注人免疫球蛋白半成品，工艺 流程如图3所示，包括如下步骤：
[0065] 步骤一：组分I+II+III (或组分II+III)沉淀的溶解
[0066] 将组分I+II+III (或组分II+III)沉淀用沉淀6?8倍重量的0· 0?4. (TC的含 0. Olmol/L磷酸二氢钠的水溶液搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分I+II+III (或组分 ΙΙ+ΠΙ)沉淀溶解液。
[0067] 其中0. 0?4. 0°C的含0. 01mol/L磷酸二氢钠的水溶液的配制方法为：按每 1000kg注射用水称取I. 38kg磷酸二氢钠加入搅拌至完全溶解。
[0068] 步骤二：分离组分I+III-I (或组分II1-1)沉淀
[0069] 用lmol/L醋酸溶液调节上述组分I+II+III (或组分II+III)沉淀溶解液pH值至 5. 00?5. 20,用-15°C冷媒降温至-0· 5?0· 0°C，用-20°C以下95% (v/v)乙醇溶液调节 至乙醇终浓度为7. 5?8. 5% (v/v)，并用lmol/L醋酸溶液或0. 5mol/L氢氧化钠溶液调整 pH值至5. 00?5. 20,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-3. (TC?-2. (TC，以搅拌速度为 50?IOOrpm搅拌2?3小时，反应完全后按每IOOOkg悬液加入娃藻土 3. 5?4. 5kg和珍 珠岩2. 0?3. 0kg，以搅拌速度为50?IOOrpm搅拌30分钟，用8%平衡液800?1200Kg对 整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20?40分钟，用-4. 0?0. (TC预冷洁 净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度 达到-3. 0?-I. 0°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0?0. 3MPa，过滤速度为20?90kg/ min，滤出液温度-3. 0?-I. (TC，悬液压完设定吹扫时间30?60分钟，用预冷洁净压缩空 气吹干滤板，用8%平衡液800?IOOOKg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液 罐，设定吹扫时间30?150分钟，再使用-4. 0?0. (TC预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组 分I+III-I (或组分II1-1)上清液，组分I+III-I (或组分II1-1)沉淀高压灭菌后废弃；
[0070] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°c以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至4. 90?5. 10 ;用-15°C冷媒调节温度至-3. 0?-2. (TC。
[0071] 步骤三：分离组分1+111-2(或组分II1-2)沉淀
[0072] 用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调整组分I+III-I (或组分II1-1)上清液pH值至 5. 10?5. 30,用-20 °C以下95 % (v/v)乙醇调节乙醇终浓度至14?16 % (v/v)，并用 lmol/L醋酸或0· 5mol/L氢氧化钠调整pH值至5. 10?5. 30,用-15°C冷媒调节反应温度 至-5. 0°C?-4. 0°C，以搅拌速度为50?IOOrpm搅拌2?3小时，反应完全后按每IOOOkg悬 液加入娃藻土2. 0?3. Okg和珍珠岩2. 0?3. 0kg，以搅拌速度为50?IOOrpm搅拌30分钟， 用15%平衡液800?1200Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20? 40分钟，用-6. 5?-2. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号： PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-5. 0?-3. 0°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为 0?0. 3MPa，过滤速度为20?90kg/min，滤出液温度-5. 0?-3. (TC，悬液压完设定吹扫时 间30?60分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15 %平衡液800?IOOOKg对压滤机进行 清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间30?150分钟，再使用-6. 5?-2. 5°C 预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分I+II 1-2 (或组分II1-2)上清液，组分I+II 1-2 (或 组分II1-2)沉淀高压灭菌废弃；
[0073] 所用的15%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠 3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 10?5. 30 ;用-15°C冷媒调节温度至-5. 0?-4. (TC ;
[0074] 步骤四：分离组分II沉淀
[0075] 称取组分1+111-2(或组分III-2)上清液的重量，每IOOOKg上清液加入25? 35 % (m/v)氯化钠溶液18. 4?22. 4kg，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6. 90? 7. 10,用-20°C以下95% (v/v)乙醇调节乙醇浓度至19?21 % (v/v)，复测并调整pH值 至6. 90?7. 10 (用lmol/L醋酸或0· 5mol/L氢氧化钠调整），用-15°C冷媒调节反应温度 至-8. 0?-6. (TC，继续搅拌反应2?3小时，其搅拌速度为50?100RPM，反应完全后按每 IOOOkg悬液加入珍珠岩0. 5?I. 0kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为50?100RPM，用20 % (v/ v)乙醇1000?2000Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间20?40分 钟，用-?ο. O?-6. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-7. 5?-5. 5°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 300MPa， 过滤速度为20?90kg/min，滤出液温度-7. 5?-5. 5°C，上清直接经过乙醇排放管路排放， 当组分II悬液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循 环管路，循环IOmin后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹 扫时间为30?150分钟，用-10. 0?-6. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉 淀；
[0076] 所用的20%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-8. 5?-6. 5°C ;
[0077] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0078] 将收集的组分II沉淀用沉淀5?7倍重量的0. 0?4. (TC的注射用水溶解，在搅 拌速率为50?IOOrpm下搅拌4小时以上至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液或 lmol/L醋酸溶液调整pH值至6. 90?7. 10 ;用-15°C冷媒调节温度至0. 0?4. (TC ;继续 在搅拌速率为50?IOOrpm下搅拌反应2?3小时，溶解完全后按每IOOOkg溶解悬液加入 娃藻土 I. 0?2. Okg和珍珠岩I. 0?2. 0kg，在搅拌速率为50?IOOrpm下搅拌30分钟， 用0. 0?4. (TC注射用水300?500kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间10?30分钟，用0. 0?4. 0°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型 号：Steril S100,规格：349*384mm)，使排放温度达到0. 0?4. 0°C，开始压滤，控制过滤压 力为0. 200MPa，过滤速度为10?60kg/min，滤出液温度0. 0?5. (TC，溶解液压完设定吹扫 时间10?30分钟，压滤分离溶解悬液，用50?200kg 0. 0?4. (TC注射用水对压滤机进行 清洗回收，用〇. 〇?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设定吹扫时间 为10?30分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，用lmol/L醋酸溶液调节滤液 pH值至3. 80?4. 10,过滤沉淀高压灭菌废弃；
[0079] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0080] 用膜规格为30KD超滤器将过滤液浓缩至蛋白质含量为8?12% (m/v)，然后用 2?5°C、4?6倍体积的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8?9% (m/v)，再 用0. 5mol/L的NaOH溶液调整制品pH值至6. 50?7. 30,用注射用水稀释控制蛋白质含量 为 50. 0 ?100. Og/L ;
[0081] 步骤七：纯化、过滤
[0082] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用0. 0?4. 0°C的注射用水稀释蛋白质 含量至1. 5?2. 0 % (m/v)，稀释后在每IOOOkg制品加入磷酸二氢钠I. 38kg和氯化钠 0· 585kg，用0· 5mol/L氢氧化钠溶液或lmol/L醋酸溶液调整pH值至6. 90?7. 10,用-15°C 冷媒调节温度至〇. 〇?〇. 5°C，用-20°C以下95% (v/v)乙醇调节乙醇浓度至1.5?2. 5% (v/v)，用_15 °C冷媒调节最终温度至-2. 0?-I. 0°C，在搅拌速率为50?IOOrpm下继续 搅拌反应2?3小时，反应完全后按每IOOOkg悬液加入珍珠岩I. 0?2. 0kg，在搅拌速率 为50?IOOrpm下搅拌30分钟，用-2. 0?-I. (TC的2 %乙醇300?500kg对整个压滤管 道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间10?30分钟，用-2. 0?2. (TC预冷洁净压缩空 气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)，使排放温度 达到-2. 0?-L 0°C，开始压滤，控制过滤压力为0· 200MPa，过滤速度为10?60kg/min， 滤出液温度-2. O?-I. 0°C，悬液压滤完设定吹扫时间为10?30分钟，用50?200kg 2%乙醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-2. 0?2. (TC预冷洁净压缩空气 吹干滤板，用〇.5mol/L盐酸溶液调节过滤上清液pH值至3. 80?4. 10 ;调节最终温度 至-2. 0 ?-I. 0°C ;
[0083] 所用的2%乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-2. 0?-I. (TC ;
[0084] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0085] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为8?12% (m/ V)(进口压力< 4. Obar，回流压力< 2. Obar)，然后用2?5°C 10?13倍体积的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8?9% (m/v)，按最终制品每升含麦芽糖95?105g 加入麦芽糖，用〇· 5mol/L盐酸溶液或0· 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至3. 90?4. 30， 用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为5. 20?5. 50% (m/v)，再进行除菌、除病毒过滤、低 PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0086] 产品检测：本发明对制备得到的所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量、纯 度、PH值、残留的乙醇含量、多聚体含量、ACA (抗补体活性）、PKA (激肽释放酶原激活剂）含 量均进行了检测，并与国家标准（2010年版《中国药典》）和现有技术进行了对比，其结果如 表1所示。
[0087] 实施例1
[0088] 步骤一：组分I+II+III沉淀的溶解
[0089] 将组分I+II+III56. 3kg用394. 54kg的0. 7°C的含0. 54kg磷酸二氢钠的水溶 液（含磷酸二氢钠〇. 54kg，注射用水394. Okg)搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分 I+II+III 沉淀溶解液 450. 8kg。
[0090] 步骤二：分离组分I+III-1沉淀
[0091] 用lmol/L醋酸溶液3. Okg调节上述组分I+II+III沉淀溶解液pH值至5. 03， 用-15°C冷媒降温至-0· 4°C，再加入-20. 8°C的95% (v/v)乙醇溶液28. 2kg，并用0· 5mol/ L氢氧化钠溶液调整pH值至5. 12,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-2. 6°C，以搅拌速度 为90rpm搅拌2小时，反应完全后加入娃藻土 I. 9kg和珍珠岩I. 2kg，以搅拌速度为80rpm 搅拌30分钟，用8%平衡液927Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间 29分钟，用-I. 7°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-I. 8°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 20MPa，过滤 速度为79kg/min，滤出液温度-2. (TC，悬液压完设定吹扫时间49分钟，用预冷洁净压缩空 气吹干滤板，用8%平衡液927Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定 吹扫时间82分钟，再使用-2. 2°C预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分I+III-1上清液 1372. 7kg，组分I+III-1沉淀39. 4kg高压灭菌后废弃；
[0092] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至5. 01 ;用-15°C冷媒调节温度至-2. 8°C。
[0093] 步骤三：分离组分I+II1-2沉淀
[0094] 用0. 5mol/L氢氧化钠溶液0. 7kg调整组分I+III-1上清液pH值至5. 24,再加 入-21. 3°C的95% (v/v)乙醇102. 5kg，并用0· 5mol/L氢氧化钠调整pH值至5· 20,用-15°C 冷媒调节反应温度至-4. 9°C，以搅拌速度为77rpm搅拌2. 9小时，反应完全后加入硅藻土 3. 7kg和珍珠岩3. 7kg，以搅拌速度为75rpm搅拌30分钟，用15 %平衡液982Kg对整个压 滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间29分钟，用-5. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤 板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-3. 8°C。开始 悬液压滤，控制过滤压力为0. 21MPa，过滤速度为78kg/min，滤出液温度-4. 1°C，悬液压完 设定吹扫时间46分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15%平衡液879Kg对压滤机进行 清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间99分钟，再使用-4. 5°C预冷洁净压缩 空气进行吹干，收集组分Ι+Π1-2上清液2345. 4kg，组分I+II1-2沉淀16. 9kg高压灭菌废 弃；
[0095] 所用的15%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠 3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 25 ;用-15°C冷媒调节温度至-4. 8°C ;
[0096] 步骤四：分离组分II沉淀
[0097] 在上述组分I+III-2上清液中加入30% (m/v)氯化钠溶液47. 8kg，用0. 5mol/L 氢氧化钠溶液37. 5kg调节pH值至7. 07,再加入-20. 1°C的95% (v/v)乙醇154. 9kg，用 lmol/L醋酸调整pH值至7. 00,用-15°C冷媒调节反应温度至-7. 2°C，继续搅拌反应2. 3小 时，其搅拌速度为70RPM，反应完全后加入珍珠岩I. 9kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为70RPM， 用-6.8°C的20% (v/v)乙醇1536Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间30分钟，用-8. 4°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-7. 0°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 15MPa，过滤速 度为70kg/min，滤出液温度-6. 2°C，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分II悬液罐重 量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路，循环IOmin 后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为100分钟， 用-7. 7°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉淀17. 4kg ;
[0098] 所用的20%乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-6. 8°C ;
[0099] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0100] 将步骤四收集的组分II沉淀用104. 7kg的I. 4°C的注射用水溶解，在搅拌速率 为72rpm下搅拌4. 1小时至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液I. 4kg调整pH值至 7. 03 ;用-15°C冷媒调节温度至2. (TC;继续在搅拌速率为74rpm下搅拌反应3小时，溶解完 全后加入娃藻土 0. 19kg和珍珠岩0. 19kg，在搅拌速率为72rpm下搅拌30分钟，用I. 3°C注 射用水432kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间18分钟，用I. 9°C预冷 洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)， 使排放温度达到2. 5°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 12MPa，过滤速度为20kg/min，滤出 液温度2. 0 °C，溶解液压完设定吹扫时间24分钟，压滤分离溶解悬液，用130kg 1. 0 °C注射 用水对压滤机进行清洗回收，用I. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设 定吹扫时间为19分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到沉淀I. 4kg，滤液 252. 4kg，用lmol/L醋酸溶液3. Okg调节滤液pH值至4. 00,过滤沉淀高压灭菌废弃，这时滤 液蛋白质含量为I. 53%，蛋白质总量为3. 91kg。
[0101] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0102] 用膜规格为30KD超滤器将步骤五得到的滤液浓缩至蛋白质含量为10% (m/v)， 重39. lkg，然后用3. 9°C、195. 5kg的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 6% (m/v)，再用0. 5mol/L的NaOH溶液2. 3kg调整制品pH值至6. 90,用注射用水稀释控制蛋白 质含量为7. 1%，稀释后重量为55. Ikg ;
[0103] 步骤七：纯化、过滤
[0104] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用1.2°C的注射用水稀释蛋白质含量至 1. 83% (m/v)，稀释后重量为213. 6kg，然后加入磷酸二氢钠0. 29kg和氯化钠0. 13kg，用 0. 5mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至6. 97,用-15°C冷媒调节温度至0. 2°C，再加入_21°C的 95% (v/v)乙醇3. 9kg，用-15°C冷媒调节最终温度至_1.3°C，在搅拌速率为69rpm下继续 搅拌反应2. 4小时，反应完全后加入珍珠岩0. 33kg，在搅拌速率为69rpm下搅拌30分钟， 用-I. 7°C的2%乙醇424kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间18分 钟，用-I. 4°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规 格：349*384mm)，使排放温度达到-I. 4°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 12MPa，过滤速度为 30kg/min，滤出液温度-I. 5°C，悬液压滤完设定吹扫时间为20分钟，用139kg 2%乙醇对压 滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-I. 4°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，用0. 5mol/ L盐酸溶液2. 3kg调节过滤上清液pH值至3. 95,调节最终温度至-I. 3°C，得到沉淀I. 6kg， 滤液357. 8kg，其中滤液蛋白质含量为1. 04%。
[0105] 所用的2%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-I. 4°C ;
[0106] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0107] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为9. 6% (m/v) (重量为38·7kg)(进口压力3·9bar，回流压力l·8bar)，然后用3·7°C的 426kg的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 64% (蛋白质总量为3. 71kg) (m/v)，加入麦芽糖 6. 64kg，用0. 5mol/L盐酸溶液调节pH值至3. 97,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为 5. 33% (m/v)，配制后得到重量为69. 7kg、收率为6. 3kg/kL的血浆。配制完成后进行除菌、 除病毒过滤、低PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0108] 广品检测：
[0109] 所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量为5. 28%，其纯度为98. 9%，PH值为 4.00，其中残留的乙醇含量为小于0.0258/1001111，多聚体含量为1.1%，404(抗补体活性） 为6IU/ml，PKA (激肽释放酶原激活剂）含量为小于10 %。
[0110] 实施例2
[0111] 步骤一：组分Ι+Π+ΙΙΙ沉淀的溶解
[0112] 将组分I+II+III沉淀56. Okg用I. 1°C的含磷酸二氢钠的水溶液（含磷酸二氢钠 0. 54kg，注射用水391. 7kg)搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分I+II+III沉淀溶解液 448. 2kg。
[0113] 步骤二：分离组分I+III-1沉淀
[0114] 用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节上述组分I+II+III沉淀溶解液pH值至5. 10， 用-15°C冷媒降温至-0. 3°C，再加入-20. 5°C的95% (v/v)乙醇溶液28. Okg，并用0. 5mol/ L氢氧化钠溶液调整pH值至5. 13,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-2. 9°C，以搅拌速度 为82rpm搅拌2. 8小时，反应完全后加入娃藻土 I. 9kg和珍珠岩I. 2kg，以搅拌速度为89rpm 搅拌30分钟，用8%平衡液1044Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间26分钟，用-2. 7°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50， 规格680*779mm)，使排放温度达到-2. 0°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 23MPa，过滤 速度为75kg/min，滤出液温度-I. 9°C，悬液压完设定吹扫时间48分钟，用预冷洁净压缩空 气吹干滤板，用8%平衡液930Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定 吹扫时间100分钟，再使用-I. 2°C预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分I+III-1上清液 1373. lkg，组分I+III-1沉淀39. 2kg高压灭菌后废弃；
[0115] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至5. 04 ;用-15°C冷媒调节温度至-2. 6°C。
[0116] 步骤三：分离组分I+II1-2沉淀
[0117] 用0. 5mol/L氢氧化钠溶液0. 7kg调整组分I+III-1上清液pH值至5. 17,再加 入-20. 4°C的95% (v/v)乙醇102. 5kg，并用0. 5mol/L氢氧化钠调整pH值至5. 21，用-15°C 冷媒调节反应温度至-4. (TC，以搅拌速度为72rpm搅拌2. 8小时，反应完全后加入硅藻土 3. 7kg和珍珠岩3. 7kg，以搅拌速度为77rpm搅拌30分钟，用15 %平衡液924Kg对整个压 滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间32分钟，用-4. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤 板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-3. 9°C。开始 悬液压滤，控制过滤压力为0. 21MPa，过滤速度为67kg/min，滤出液温度-4. 3°C，悬液压完 设定吹扫时间43分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15%平衡液897Kg对压滤机进行 清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间81分钟，再使用-4. 2°C预冷洁净压缩 空气进行吹干，收集组分Ι+Π1-2上清液2363. 9kg，组分I+II 1-2沉淀16. 8kg高压灭菌废 弃；
[0118] 所用的15%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠 3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 23 ;用-15°C冷媒调节温度至-4. 7°C ;
[0119] 步骤四：分离组分II沉淀
[0120] 在上述组分I+III-2上清液中加入30% (m/v)氯化钠溶液48. 2kg，用0. 5mol/L 氢氧化钠溶液37. 8kg调节pH值至7. 04,再加入-2L (TC的95 % (v/v)乙醇156. lkg，用 lmol/L醋酸调整pH值至7. 01，用-15°C冷媒调节反应温度至-6. 9°C，继续搅拌反应3. 0小 时，其搅拌速度为78RPM，反应完全后加入珍珠岩2. 0kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为78RPM， 用-7. (TC的20% (v/v)乙醇1473Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间30分钟，用-7. 8°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-6. 8°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 18MPa，过滤速 度为64kg/min，滤出液温度-6. 5°C，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分II悬液罐重 量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路，循环IOmin 后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为119分钟， 用-8. 4°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉淀17. 3kg ;
[0121] 所用的20%乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入-20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-6. (TC ;
[0122] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0123] 将步骤四收集的组分II沉淀用104. Ikg的I. 1°C的注射用水溶解，在搅拌速率 为77rpm下搅拌4. 7小时至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液I. 4kg调整pH值至 6. 98 ;用-15°C冷媒调节温度至I. 4°C;继续在搅拌速率为79rpm下搅拌反应2. 9小时，溶解 完全后加入娃藻土 0. 18kg和珍珠岩0. 18kg，在搅拌速率为76rpm下搅拌30分钟，用I. 8°C 注射用水371kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间22分钟，用2. 3°C预 冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)， 使排放温度达到I. 7°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 13MPa，过滤速度为20kg/min，滤出液 温度2. 9°C，溶解液压完设定吹扫时间19分钟，压滤分离溶解悬液，用122kg的I. 6°C注射 用水对压滤机进行清洗回收，用I. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设 定吹扫时间为25分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到沉淀I. 3kg，滤液 243. 7kg，用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节滤液pH值至3. 93,过滤沉淀高压灭菌废弃，这时滤 液蛋白质含量为1.57%，蛋白质总量为3. 87kg。
[0124] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0125] 用膜规格为30KD超滤器将步骤五得到的滤液浓缩至蛋白质含量为10. 2 % (m/v)， 重37. 9kg，然后用4. 0°C、189. 7kg的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 8% (m/v)，再用0. 5mol/L的NaOH溶液2. 2kg调整制品pH值至6. 91，用注射用水稀释控制蛋白 质含量为7. 3%，稀释后重量为53. Okg ;
[0126] 步骤七：纯化、过滤
[0127] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用I. (TC的注射用水稀释蛋白质含量至 1. 83% (m/v)，稀释后重量为211. 4kg，然后加入磷酸二氢钠0. 29kg和氯化钠0. 12kg，用 lmol/L醋酸溶液调整pH值至6. 93,用-15 °C冷媒调节温度至0. 4°C，再加入-20. 2 °C的 95% (v/v)乙醇3. 8kg，用-15°C冷媒调节最终温度至_1.5°C，在搅拌速率为66rpm下继续 搅拌反应2. 8小时，反应完全后加入珍珠岩0. 32kg，在搅拌速率为63rpm下搅拌30分钟， 用-I. 4°C的2%乙醇351kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间24分 钟，用-0.7°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100， 规格：349*384mm)，使排放温度达到-I. 6°C，开始压滤，控制过滤压力为0. llMPa，过滤速度 为30kg/min，滤出液温度-I. 5°C，悬液压滤完设定吹扫时间为21分钟，用134kg的2 %乙 醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-I. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，用 0. 5mol/L盐酸溶液2. 2kg调节过滤上清液pH值至3. 93,调节最终温度至-I. 5°C，得到沉淀 1. 6kg，滤液350. 5kg，其中滤液蛋白质含量为1. 05%。
[0128] 所用的2%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-I. 4°C ;
[0129] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0130] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为10. 3% (m/v) (重量为35. 7kg)(进口压力3. 3bar，回流压力I. Obar)，然后用3. 2°C的393kg的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 43% (蛋白质总量为3. 68kg) (m/v)，加入麦芽糖 6. 54kg，用0. 5mol/L盐酸溶液调节pH值至3. 96,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为 5. 35% (m/v)，配制后得到重量为68. 7kg，收率为6. 2kg/kL血浆。配制完成后进行除菌、除 病毒过滤、低PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0131] 产品检测：
[0132] 所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量为5. 34%，其纯度为98. 8%，PH值为 4. 01，其中残留的乙醇含量为小于0. 025g/100ml，多聚体含量为1. 2%，ACA(抗补体活性） 为8IU/ml，PKA (激肽释放酶原激活剂）含量为小于10 %。
[0133] 实施例3
[0134] 步骤一：组分I+II+III沉淀的溶解
[0135] 将组分I+II+III沉淀54. 6kg用3. 1°C的含磷酸二氢钠的水溶液（含磷酸二氢钠 0. 53kg，注射用水382. Ikg)搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分I+II+III沉淀溶解液 437. 3kg。
[0136] 步骤二：分离组分I+III-1沉淀
[0137] 用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节上述组分I+II+III沉淀溶解液pH值至5. 06， 用-15°C冷媒降温至-0· 2°C，再加入-20. 8°C的95% (v/v)乙醇溶液27. 3kg，并用0· 5mol/ L氢氧化钠溶液调整pH值至5. 19,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-3. (TC，以搅拌速 度为83rpm搅拌2. 1小时，反应完全后加入娃藻土 I. 9kg和珍珠岩I. 2kg，以搅拌速度为 SOrpm搅拌30分钟，用8%平衡液919Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫 时间34分钟，用-2. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50， 规格680*779mm)，使排放温度达到-2. 2°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 24MPa，过滤 速度为63kg/min，滤出液温度-2. 4°C，悬液压完设定吹扫时间49分钟，用预冷洁净压缩空 气吹干滤板，用8%平衡液897Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定 吹扫时间89分钟，再使用-I. 6°C预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分I+III-1上清液 1329. 3kg，组分I+III-1沉淀38. 2kg高压灭菌后废弃；
[0138] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°C以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至5. 11 ;用-15°C冷媒调节温度至-2. 1°C。
[0139] 步骤三：分离组分I+II1-2沉淀
[0140] 用0· 5mol/L氢氧化钠溶液0· 7kg调整组分I+III-1上清液pH值至5. 20,再加 入-21. 6°C的95% (v/v)乙醇99. 3kg，并用0· 5mol/L氢氧化钠调整pH值至5. 23,用-15°C 冷媒调节反应温度至-4. 5°C，以搅拌速度为72rpm搅拌2. 5小时，反应完全后加入娃藻土 3. 6kg和珍珠岩3. 6kg，以搅拌速度为75rpm搅拌30分钟，用15 %平衡液1012Kg对整个压 滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间35分钟，用-5. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤 板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-3. 5°C。开始 悬液压滤，控制过滤压力为0. 24MPa，过滤速度为71kg/min，滤出液温度-4. 1°C，悬液压完 设定吹扫时间40分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15%平衡液890Kg对压滤机进行 清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间99分钟，再使用-4. 8°C预冷洁净压缩 空气进行吹干，收集组分Ι+ΠΙ-2上清液2310. 0kg，组分I+III-2沉淀16. 4kg高压灭菌废 弃；
[0141] 所用的15%平衡液配制方法为：每1000kg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 23 ;用-15°C冷媒调节温度至-4. 3°C ;
[0142] 步骤四：分离组分II沉淀
[0143] 在上述组分I+III-2上清液中加入30% (m/v)氯化钠溶液47. 1kg，用0. 5mol/L 氢氧化钠溶液37. Okg调节pH值至7. 07,再加入-20. 1°C的95% (v/v)乙醇152. 6kg，用 lmol/L醋酸调整pH值至7. 07,用-15°C冷媒调节反应温度至-7. 2°C，继续搅拌反应2. 3小 时，其搅拌速度为78RPM，反应完全后加入珍珠岩I. 9kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为78RPM， 用-6.4°C的20% (v/v)乙醇1477Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间30分钟，用-7. 9°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-6. 8°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 20MPa，过滤速 度为79kg/min，滤出液温度-6. 4°C，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分II悬液罐重 量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路，循环IOmin 后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为119分钟， 用-8. 1°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉淀16. 9kg ;
[0144] 所用的20%乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-6. 4°C ;
[0145] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0146] 将步骤四收集的组分II沉淀用101. 5kg的I. 5°C的注射用水溶解，在搅拌速率 为72rpm下搅拌4. 9小时至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液I. 3kg调整pH值至 7. 04 ;用-15°C冷媒调节温度至I. 6°C;继续在搅拌速率为74rpm下搅拌反应2. 3小时，溶解 完全后加入娃藻土 0. 18kg和珍珠岩0. 18kg，在搅拌速率为76rpm下搅拌30分钟，用I. 5°C 注射用水408kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用2. 3°C预 冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)， 使排放温度达到2. 0°C，开始压滤，控制过滤压力为0. lOMPa，过滤速度为29kg/min，滤出液 温度2. 4°C，溶解液压完设定吹扫时间19分钟，压滤分离溶解悬液，用128kg的I. 1°C注射 用水对压滤机进行清洗回收，用2. 1°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设 定吹扫时间为18分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到沉淀I. 4kg，滤液 246. 7kg，用lmol/L醋酸溶液3. Okg调节滤液pH值至3. 94,过滤沉淀高压灭菌废弃，这时滤 液蛋白质含量为1.59%，蛋白质总量为3. 98kg。
[0147] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0148] 用膜规格为30KD超滤器将步骤五得到的滤液浓缩至蛋白质含量为10. 3% (m/v)， 重38. 6kg，然后用3. 6°C、193. Okg的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 5% (m/v)，再用0. 5mol/L的NaOH溶液2. 2kg调整制品pH值至6. 99,用注射用水稀释控制蛋白 质含量为7. 9%，稀释后重量为50. 3kg ;
[0149] 步骤七：纯化、过滤
[0150] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用I. 1°C的注射用水稀释蛋白质含量至 1. 74% (m/v)，稀释后重量为228. 5kg，然后加入磷酸二氢钠0. 32kg和氯化钠0. 13kg，用 lmol/L醋酸溶液调整pH值至6. 93,用-15 °C冷媒调节温度至0. TC，再加入-21. 7 °C的 95% (v/v)乙醇4. 2kg，用-15°C冷媒调节最终温度至_1.8°C，在搅拌速率为62rpm下继续 搅拌反应2. 1小时，反应完全后加入珍珠岩0. 35kg，在搅拌速率为69rpm下搅拌30分钟， 用-I. 5°C的2%乙醇359kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分 钟，用-〇· 8°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100， 规格：349*384mm)，使排放温度达到-I. 5°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 15MPa，过滤速度 为26kg/min，滤出液温度-I. 7°C，悬液压滤完设定吹扫时间为19分钟，用148kg的2 %乙 醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-〇. 6°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，用 0. 5mol/L盐酸溶液2. 2kg调节过滤上清液pH值至3. 94,调节最终温度至-I. 6°C，得到沉淀 1. 7kg，滤液381. 8kg，其中滤液蛋白质含量为0. 99%。
[0151] 所用的2%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-I. 5°C ;
[0152] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0153] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为9.9% (m/v) (重量为38·2kg)(进口压力3·2bar，回流压力l·5bar)，然后用3·3°C的 420kg的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 79% (m/v)(蛋白质总量为3. 78kg)，加入麦芽糖 6. 72kg，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至4. 04,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量 为5.35% (m/v)，配制后得到重量为70. 6kg，收率为6. 4kg/kL的血浆。配制完成后进行除 菌、除病毒过滤、低PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0154] 产品检测：
[0155] 所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量为5. 28%，其纯度为98. 8%，PH值为 4. 03,其中残留的乙醇含量为小于0. 025g/100ml，多聚体含量为1. 0%，ACA(抗补体活性） 为6IU/ml，PKA (激肽释放酶原激活剂）含量为小于10 %。
[0156] 实施例4
[0157] 步骤一：组分II+III沉淀的溶解
[0158] 将组分II+III沉淀55. 3kg用3. 9°C的含磷酸二氢钠的水溶液（含磷酸二氢钠 0. 53kg，注射用水386. 8kg)搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分II+III沉淀溶解液 442. 6kg。
[0159] 步骤二：分离组分III-I沉淀
[0160] 用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节上述组分II+III沉淀溶解液pH值至5. 01， 用-15°C冷媒降温至-0· 5°C，再加入-22. (TC的95% (v/v)乙醇溶液27. 7kg，并用0· 5mol/ L氢氧化钠溶液调整pH值至5. 18,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-2. 5°C，以搅拌速度 为90rpm搅拌2. 5小时，反应完全后加入娃藻土 I. 9kg和珍珠岩I. 2kg，以搅拌速度为80rpm 搅拌30分钟，用8%平衡液1002Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间26分钟，用-3. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50， 规格680*779mm)，使排放温度达到-2. 2°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 25MPa，过 滤速度为69kg/min，滤出液温度-I. 6°C，悬液压完设定吹扫时间46分钟，用预冷洁净压缩 空气吹干滤板，用8%平衡液931Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设 定吹扫时间80分钟，再使用-2. 3°C预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分III-I上清液 1368. 6kg，组分III-I沉淀38. 7kg高压灭菌后废弃；
[0161] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°C以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至5. 00 ;用-15°C冷媒调节温度至-2. 2°C。
[0162] 步骤三：分离组分II1-2沉淀
[0163] 用0· 5mol/L氢氧化钠溶液0· 7kg调整组分III-I上清液pH值至5. 16，再加 入-20. 2°C的95% (v/v)乙醇102. 2kg，并用0· 5mol/L氢氧化钠调整pH值至5. 22,用-15°C 冷媒调节反应温度至-4. 9°C，以搅拌速度为79rpm搅拌2. 4小时，反应完全后加入硅藻土 3. 7kg和珍珠岩3. 7kg，以搅拌速度为75rpm搅拌30分钟，用15 %平衡液917Kg对整个压 滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间32分钟，用-4. 2°C预冷洁净压缩空气吹干滤 板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-4. 5°C。开始 悬液压滤，控制过滤压力为0. 23MPa，过滤速度为71kg/min，滤出液温度-4. 4°C，悬液压完 设定吹扫时间42分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15%平衡液851Kg对压滤机进行 清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间94分钟，再使用-4. 3°C预冷洁净压缩 空气进行吹干，收集组分III-2上清液2313. 2kg，组分III-2沉淀16. 6kg高压灭菌废弃；
[0164] 所用的15%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 16 ;用-15°C冷媒调节温度至-4. (TC ;
[0165] 步骤四：分离组分II沉淀
[0166] 在上述组分组分III-2上清液中加入30% (m/v)氯化钠溶液47. 2kg，用0. 5mol/ L氢氧化钠溶液37. Okg调节pH值至7. 07,再加入-20. (TC的95% (v/v)乙醇152. 8kg，用 lmol/L醋酸调整pH值至7. 06,用-15°C冷媒调节反应温度至-7. 5°C，继续搅拌反应2. 3小 时，其搅拌速度为79RPM，反应完全后加入珍珠岩I. 9kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为79RPM， 用-6. 1°C的20% (v/v)乙醇1517Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间30分钟，用-7. 6°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-6. 3°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 20MPa，过滤速 度为61kg/min，滤出液温度-6. 3°C，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分II悬液罐重 量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路，循环IOmin 后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为107分钟， 用-7. 8°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉淀17. Ikg ;
[0167] 所用的20%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-6. 1°C ;
[0168] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0169] 将步骤四收集的组分II沉淀用102. 8kg的I. 5°C的注射用水溶解，在搅拌速率 为76rpm下搅拌4. 6小时至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液I. 3kg调整pH值至 6. 97 ;用-15°C冷媒调节温度至I. 8°C;继续在搅拌速率为80rpm下搅拌反应2. 9小时，溶解 完全后加入娃藻土 0. 18kg和珍珠岩0. 18kg，在搅拌速率为76rpm下搅拌30分钟，用I. 8°C 注射用水350kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用I. 9°C预 冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)， 使排放温度达到2. 3°C，开始压滤，控制过滤压力为0. llMPa，过滤速度为29kg/min，滤出液 温度2. 4°C，溶解液压完设定吹扫时间22分钟，压滤分离溶解悬液，用118kg的I. 6°C注射 用水对压滤机进行清洗回收，用2. 1°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设 定吹扫时间为25分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到沉淀I. 5kg，滤液 238. 2kg，用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节滤液pH值至3. 90,过滤沉淀高压灭菌废弃，这时滤 液蛋白质含量为1.65%，蛋白质总量为3. 98kg。
[0170] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0171] 用膜规格为30KD超滤器将步骤五得到的滤液浓缩至蛋白质含量为10. 2 % (m/v)， 重39. 0kg，然后用3. 4°C、195. 2kg的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 9% (m/v)，再用0. 5mol/L的NaOH溶液2. Ikg调整制品pH值至6. 99,用注射用水稀释控制蛋白 质含量为8. 0%，稀释后重量为49. 8kg ;
[0172] 步骤七：纯化、过滤
[0173] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用1.6°C的注射用水稀释蛋白质含量至 1. 85% (m/v)，稀释后重量为215. 2kg，然后加入磷酸二氢钠0. 30kg和氯化钠0. 13kg，用 lmol/L醋酸溶液调整pH值至6. 97,用-15 °C冷媒调节温度至0. 2 °C，再加入-21. 8 °C的 95% (v/v)乙醇3. 9kg，用-15°C冷媒调节最终温度至_1.5°C，在搅拌速率为68rpm下继续 搅拌反应2. 3小时，反应完全后加入珍珠岩0. 33kg，在搅拌速率为60rpm下搅拌30分钟， 用-I. 7°C的2%乙醇371kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间23分 钟，用-I. 2°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100， 规格：349*384mm)，使排放温度达到-I. 5°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 13MPa，过滤速度 为23kg/min，滤出液温度-I. 7°C，悬液压滤完设定吹扫时间为15分钟，用137kg的2%乙 醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-〇. 6°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，用 0. 5mol/L盐酸溶液2. Ikg调节过滤上清液pH值至3. 94,调节最终温度至-I. 6°C，得到沉淀 1. 6kg，滤液357. 2kg，其中滤液蛋白质含量为1. 06%。
[0174] 所用的2%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-I. 3°C ;
[0175] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0176] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为9. 8% (m/v) (重量为38·6kg)(进口压力3·9bar，回流压力l·7bar)，然后用3·l°C的 425kg的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 60% (蛋白质总量为3. 78kg) (m/v)，加入麦芽糖 6. 85kg，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至3. 99,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量 为5. 26% (m/v)，配制后得到重量为71. 9kg，收率为6. 4kg/kL的血浆。配制完成后进行除 菌、除病毒过滤、低PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0177] 产品检测：
[0178] 所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量为5. 30%，其纯度为99. 0%，PH值为 3. 95,其中残留的乙醇含量为小于0. 025g/100ml，多聚体含量为1. 3%，ACA(抗补体活性） 为6IU/ml，PKA (激肽释放酶原激活剂）含量为小于10 %。
[0179] 实施例5
[0180] 步骤一：组分II+III沉淀的溶解
[0181] 将组分II+III沉淀54. 8kg用1.4°C的含磷酸二氢钠的水溶液（含磷酸二氢钠 0. 53kg，注射用水383. 9kg)搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分II+III沉淀溶解液 439.3kg。
[0182] 步骤二：分离组分I+III-I (或组分II1-1)沉淀
[0183] 用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节上述组分II+III沉淀溶解液pH值至5. 03， 用-15°C冷媒降温至-0· 2°C，再加入-21. 4°C的95% (v/v)乙醇溶液27. 5kg，并用0· 5mol/ L氢氧化钠溶液调整pH值至5. 16,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-2. 6°C，以搅拌速 度为84rpm搅拌2. 9小时，反应完全后加入娃藻土 I. 9kg和珍珠岩I. 2kg，以搅拌速度为 86rpm搅拌30分钟，用8%平衡液910Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫 时间26分钟，用-2. 6°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50， 规格680*779mm)，使排放温度达到-I. 9°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 25MPa，过 滤速度为62kg/min，滤出液温度-I. 6°C，悬液压完设定吹扫时间42分钟，用预冷洁净压缩 空气吹干滤板，用8%平衡液889Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设 定吹扫时间93分钟，再使用-2. 8°C预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分III-I上清液 1323. 3kg，组分III-I沉淀38. 4kg高压灭菌后废弃；
[0184] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至5. 13 ;用-15°C冷媒调节温度至-2. 8°C。
[0185] 步骤三：分离组分II1-2沉淀
[0186] 用0· 5mol/L氢氧化钠溶液0· 7kg调整组分III-I上清液pH值至5. 21，再加 入-20. 6°C的95% (v/v)乙醇98. 8kg，并用0· 5mol/L氢氧化钠调整pH值至5. 23,用-15°C 冷媒调节反应温度至-4. 5°C，以搅拌速度为78rpm搅拌2. 7小时，反应完全后加入娃藻土 3. 6kg和珍珠岩3. 6kg，以搅拌速度为77rpm搅拌30分钟，用15 %平衡液933Kg对整个压 滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间32分钟，用-4. 2°C预冷洁净压缩空气吹干滤 板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-3. 6°C。开始 悬液压滤，控制过滤压力为0. 20MPa，过滤速度为60kg/min，滤出液温度-4. (TC，悬液压完 设定吹扫时间49分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15%平衡液886Kg对压滤机进行 清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间90分钟，再使用-4. (TC预冷洁净压缩 空气进行吹干，收集组分II1-2上清液2299. 4kg，组分II1-2沉淀16. 5kg高压灭菌废弃；
[0187] 所用的15%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠 3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 21 ;用-15°C冷媒调节温度至-4. 9°C ;
[0188] 步骤四：分离组分II沉淀
[0189] 在上述组分组分III-2上清液中加入30% (m/v)氯化钠溶液46. 9kg，用0. 5mol/ L氢氧化钠溶液36. 8kg调节pH值至7. 10,再加入-20. 7°C的95% (v/v)乙醇151. 9kg，用 0. 5mol/L氢氧化钠调整pH值至7. 02,用-15°C冷媒调节反应温度至-7. 2°C，继续搅拌反应 2. 7小时，其搅拌速度为72RPM，反应完全后加入珍珠岩I. 9kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为 72RPM，用-6.4°C的20% (v/v)乙醇1501Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定 吹扫时间30分钟，用-7. 9°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号： PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-6. 0°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 20MPa， 过滤速度为72kg/min，滤出液温度-6. 7°C，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分II悬 液罐重量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路，循 环IOmin后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为 106分钟，用-8. 3°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉淀17. Okg ;
[0190] 所用的20%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-6. (TC ;
[0191] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0192] 将步骤四收集的组分II沉淀用102. Okg的I. 9°C的注射用水溶解，在搅拌速率 为78rpm下搅拌5. 0小时至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液I. 3kg调整pH值至 6. 95 ;用-15°C冷媒调节温度至I. 9°C;继续在搅拌速率为74rpm下搅拌反应3. 0小时，溶解 完全后加入娃藻土 0. 18kg和珍珠岩0. 18kg，在搅拌速率为71rpm下搅拌30分钟，用I. 6°C 注射用水368kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用I. 9°C预 冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)， 使排放温度达到I. 8°C，开始压滤，控制过滤压力为0. lOMPa，过滤速度为30kg/min，滤出液 温度2. 8°C，溶解液压完设定吹扫时间18分钟，压滤分离溶解悬液，用117kg的I. 7°C注射 用水对压滤机进行清洗回收，用2. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设 定吹扫时间为15分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到沉淀I. 4kg，滤液 236. 3kg，用lmol/L醋酸溶液2. 8kg调节滤液pH值至4. 00,过滤沉淀高压灭菌废弃，这时滤 液蛋白质含量为1.65%，蛋白质总量为3. 93kg。
[0193] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0194] 用膜规格为30KD超滤器将步骤五得到的滤液浓缩至蛋白质含量为10. 4% (m/v)， 重37. 8kg，然后用3. 5°C、189. Ikg的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 7% (m/v)，再用0. 5mol/L的NaOH溶液2. Ikg调整制品pH值至6. 97,用注射用水稀释控制蛋白 质含量为7. 9%，稀释后重量为49. 8kg ;
[0195] 步骤七：纯化、过滤
[0196] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用1.5°C的注射用水稀释蛋白质含量至 1. 69% (m/v)，稀释后重量为232. 8kg，然后加入磷酸二氢钠0. 32kg和氯化钠0. 14kg，用 lmol/L醋酸溶液调整pH值至6. 96,用-15 °C冷媒调节温度至0. 5 °C，再加入-21. 8 °C的 95% (v/v)乙醇4. 2kg，用-15°C冷媒调节最终温度至_1.4°C，在搅拌速率为67rpm下继续 搅拌反应2. 3小时，反应完全后加入珍珠岩0. 36kg，在搅拌速率为61rpm下搅拌30分钟， 用-I. 7°C的2%乙醇384kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间16分 钟，用-I. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100， 规格：349*384mm)，使排放温度达到-I. 3°C，开始压滤，控制过滤压力为0. lOMPa，过滤速度 为27kg/min，滤出液温度-I. 7°C，悬液压滤完设定吹扫时间为24分钟，用129kg的2 %乙 醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-I. 2°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，用 0. 5mol/L盐酸溶液2. Ikg调节过滤上清液pH值至3. 95,调节最终温度至-I. 7°C，得到沉淀 1.8kg，滤液367. lkg，其中滤液蛋白质含量为1.02%。
[0197] 所用的2%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-I. 6°C ;
[0198] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0199] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为10. 4% (m/v) (重量为35.91^)(进口压力3.你&1'，回流压力1.%&1〇，然后用3.6°〇的3951^的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 49% (m/v)(蛋白质总量为3. 74kg)，加入麦芽糖 6. 70kg，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至4. 01，用注射用水稀释控制最终蛋白质含量 为5.31 % (m/v)，配制后得到重量为70. 4kg，收率为6. 3kg/kL的血浆。配制完成后进行除 菌、除病毒过滤、低PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0200] 产品检测：
[0201] 所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量为5. 28%，其纯度为99. 0%，PH值为 4. 02,其中残留的乙醇含量为小于0. 025g/100ml，多聚体含量为1. 2%，ACA(抗补体活性） 为8IU/ml，PKA (激肽释放酶原激活剂）含量为小于10 %。
[0202] 实施例6
[0203] 步骤一：组分II+III沉淀的溶解
[0204] 将组分II+III沉淀55. 4kg用I. 3°C的含磷酸二氢钠的水溶液（含磷酸二氢钠 0. 53kg，注射用水387. 7kg)搅拌6小时以上至完全溶解，得到组分II+III沉淀溶解液 443. 6kg。
[0205] 步骤二：分离组分III-I沉淀
[0206] 用lmol/L醋酸溶液2. 9kg调节上述组分II+III沉淀溶解液pH值至5. 03， 用-15°C冷媒降温至-0· 2°C，再加入-20. 8°C的95% (v/v)乙醇溶液27. 7kg，并用0· 5mol/ L氢氧化钠溶液调整pH值至5. 18,用-15°C冷媒调节最后悬液温度至-3. (TC，以搅拌速度 为86rpm搅拌2. 4小时，反应完全后加入娃藻土 I. 9kg和珍珠岩I. 2kg，以搅拌速度为86rpm 搅拌30分钟，用8%平衡液1022Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间26分钟，用-2. 6°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50， 规格680*779mm)，使排放温度达到-I. 6°C。开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 21MPa，过 滤速度为74kg/min，滤出液温度-2. 2°C，悬液压完设定吹扫时间42分钟，用预冷洁净压缩 空气吹干滤板，用8%平衡液856Kg对压滤机进行清洗回收，回收液并入压滤上清液罐，设 定吹扫时间95分钟，再使用-2. 9°C预冷洁净压缩空气进行吹干，收集组分III-I上清液 1294. 5kg，组分III-I沉淀38. 8kg高压灭菌后废弃；
[0207] 所用的8%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°C以下的95% (v/v) 乙醇77. 7kg得到8% (v/v)的乙醇溶液；然后在每1000kg 8%的乙醇溶液中加入磷酸氢二 钠3. 58kg ;用冰醋酸调节pH值至5. 01 ;用-15°C冷媒调节温度至-2. 5°C。
[0208] 步骤三：分离组分II1-2沉淀
[0209] 用0. 5mol/L氢氧化钠溶液0. 6kg调整组分III-I上清液pH值至5. 24,再加 入-21. 8°C的95% (v/v)乙醇96. 7kg，并用lmol/L醋酸调整pH值至5.23,用-15°C冷媒调 节反应温度至-5. 0°C，以搅拌速度为77rpm搅拌2. 0小时，反应完全后加入娃藻土 3. 5kg和 珍珠岩3. 5kg，以搅拌速度为79rpm搅拌30分钟，用15 %平衡液997Kg对整个压滤管路及 压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间30分钟，用-4. 4°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国 Begerow公司生产，型号：PX50,规格680*779mm)，使排放温度达到-4. 1°C。开始悬液压滤， 控制过滤压力为0. 20MPa，过滤速度为71kg/min，滤出液温度-3. 9°C，悬液压完设定吹扫时 间45分钟，用预冷洁净压缩空气吹干滤板，用15%平衡液933Kg对压滤机进行清洗回收， 回收液并入压滤上清液罐，设定吹扫时间87分钟，再使用-4. (TC预冷洁净压缩空气进行吹 干，收集组分III-2上清液2315. 2kg，组分III-2沉淀16. 6kg高压灭菌废弃；
[0210] 所用的15%平衡液配制方法为：每IOOOkg注射用水加入-20°C以下95% (v/v)乙 醇158. 3kg得到15 % (v/v)的乙醇；然后在每IOOOkg 15 %乙醇中加入磷酸氢二钠3. 58kg ; 用冰醋酸调节pH值至5. 17 ;用-15°C冷媒调节温度至-4. 1°C ;
[0211] 步骤四：分离组分II沉淀
[0212] 在上述组分组分III-2上清液中加入30% (m/v)氯化钠溶液47. 2kg，用0. 5mol/ L氢氧化钠溶液37. Okg调节pH值至7. 09,再加入-20. 5°C的95% (v/v)乙醇152. 9kg，用 lmol/L醋酸调整pH值至7. 04,用-15°C冷媒调节反应温度至-7. 5°C，继续搅拌反应2. 6小 时，其搅拌速度为74RPM，反应完全后加入珍珠岩I. 9kg，搅拌30分钟，其搅拌速度为74RPM， 用-6. (TC的20% (v/v)乙醇1587Kg对整个压滤管路及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时 间30分钟，用-8. 3°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：PX50,规 格680*779mm)，使排放温度达到-6. 6°C，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 16MPa，过滤速 度为65kg/min，滤出液温度-6. (TC，上清直接经过乙醇排放管路排放，当组分II悬液罐重 量低于200kg时，压滤上清不再排放而直接进入悬液罐从而形成一个循环管路，循环IOmin 后上清开始继续经过乙醇排放管路排放，待悬液全部压滤完后，设定吹扫时间为105分钟， 用-8. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，收集组分II沉淀17. 2kg ;
[0213] 所用的20%乙醇配制方法为：每1000kg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v)乙 醇225. 5kg得到20% (v/v)的乙醇，用-15°C冷媒调节温度至-6. 5°C ;
[0214] 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤
[0215] 将步骤四收集的组分II沉淀用103. Okg的I. 1°C的注射用水溶解，在搅拌速率 为71rpm下搅拌5. 0小时至沉淀完全溶解，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液I. 3kg调整pH值至 7. 01 ;用-15°C冷媒调节温度至I. 6°C;继续在搅拌速率为74rpm下搅拌反应2. 3小时，溶解 完全后加入娃藻土 0. 18kg和珍珠岩0. 18kg，在搅拌速率为79rpm下搅拌30分钟，用I. 0°C 注射用水408kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间15分钟，用I. 6°C预 冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100,规格：349*384mm)， 使排放温度达到2. 1°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 15MPa，过滤速度为23kg/min，滤出液 温度2. (TC，溶解液压完设定吹扫时间25分钟，压滤分离溶解悬液，用112kg的I. 9°C注射 用水对压滤机进行清洗回收，用2. 4°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，回收液并入滤液罐，设 定吹扫时间为22分钟，用0. 0?4. (TC预冷洁净压缩空气吹干滤板，得到沉淀I. 5kg，滤液 232. 5kg，用lmol/L醋酸溶液2. 8kg调节滤液pH值至3. 97,过滤沉淀高压灭菌废弃，这时滤 液蛋白质含量为1.67%，蛋白质总量为3. 93kg。
[0216] 步骤六：超滤、透析、浓缩
[0217] 用膜规格为30KD超滤器将步骤五得到的滤液浓缩至蛋白质含量为10. 2 % (m/v)， 重38. 5kg，然后用3. 0°C、192. 7kg的注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 6% (m/v)，再用0. 5mol/L的NaOH溶液2. Ikg调整制品pH值至6. 91，用注射用水稀释控制蛋白 质含量为7. 8%，稀释后重量为50. 4kg ;
[0218] 步骤七：纯化、过滤
[0219] 将浓缩后的制品转移至球蛋白精制罐，用1.4°C的注射用水稀释蛋白质含量至 1. 81 % (m/v)，稀释后重量为217. lkg，然后加入磷酸二氢钠0. 30kg和氯化钠0. 13kg，用 0. 5mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至6. 92,用-15°C冷媒调节温度至0. (TC，再加入-21. 4°C 的95% (v/v)乙醇4. 0kg，用-15°C冷媒调节最终温度至_1.5°C，在搅拌速率为67rpm下 继续搅拌反应2. 1小时，反应完全后加入珍珠岩0. 33kg，在搅拌速率为69rpm下搅拌30分 钟，用-I. 6°C的2%乙醇382kg对整个压滤管道及压滤机进行平衡降温，设定吹扫时间16 分钟，用-0. 5°C预冷洁净压缩空气吹干滤板（德国Begerow公司生产，型号：Steril S100， 规格：349*384mm)，使排放温度达到-I. 7°C，开始压滤，控制过滤压力为0. 15MPa，过滤速度 为30kg/min，滤出液温度-I. 3°C，悬液压滤完设定吹扫时间为19分钟，用124kg的2 %乙 醇对压滤机进行清洗回收，回收液并入滤液罐，用-〇. 7°C预冷洁净压缩空气吹干滤板，用 0. 5mol/L盐酸溶液2. Ikg调节过滤上清液pH值至3. 98,调节最终温度至-I. 3°C，得到沉淀 1. 7kg，滤液346. 2kg，其中滤液蛋白质含量为1. 08%。
[0220] 所用的2%乙醇配制方法为：每IOOOkg注射用水加入_20°C以下95% (v/v)乙醇 18. 2kg，用-15°C冷媒调节温度至-I. 6°C ;
[0221] 步骤八：超滤透析、浓缩、配制
[0222] 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为10. 2% (m/v) (重量为36. 6kg)(进口压力3. 7bar，回流压力I. Obar)，然后用3. 1°C的403kg的注射用水 进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8. 82% (m/v)(蛋白质总量为3. 73kg)，加入麦芽糖 6. 75kg，用0. 5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至4. 02,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量 为5.27% (m/v)，配制后得到重量为70. 8kg、收率为6. 3kg/kL的血浆。配制完成后进行除 菌、除病毒过滤、低PH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白半成品。
[0223] 产品检测：
[0224] 所述静注人免疫球蛋白半成品的蛋白质含量为5. 33%，其纯度为98. 8%，PH值为 4. 02,其中残留的乙醇含量为小于0. 025g/100ml，多聚体含量为1. 5%，ACA(抗补体活性） 为8IU/ml，PKA (激肽释放酶原激活剂）含量为小于10 %。
[0225]表 1
[0226]

【权利要求】
1. 一种静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤一：组分I+II+III或组分II+III沉淀的溶解 将组分I+II+III沉淀或组分II+III沉淀用磷酸二氢钠的水溶液完全溶解； 步骤二：分离组分I+II1-1沉淀或组分II1-1沉淀 调节上述组分I+II+III沉淀溶解液或组分II+III沉淀溶解液pH值至5. 00?5. 20， 调节温度至_〇. 5?0. 0°C，再用-20°C以下95%的乙醇溶液调节至乙醇终浓度为7. 5? 8. 5 %，并调整pH值至5. 00?5. 20,调节温度至-3. 0°C?-2. 0°C，搅拌使其反应完全，按 每1000kg悬液加入娃藻土 3. 5?4. 5kg和珍珠岩2. 0?3. 0kg，搅拌，开始悬液压滤，控制 过滤压力为〇?〇. 3MPa，过滤速度为20?90kg/min，滤出液温度-3. 0?-1. 0°C，收集组分 I+II 1-1上清液或组分II1-1上清液； 步骤三：分离组分I+II 1-2沉淀或组分II1-2沉淀 调整组分I+III-1上清液或组分III-1上清液pH值至5. 10?5. 30,用-20°C以 下95 %的乙醇调节乙醇终浓度至14?16%，并调整pH值至5. 10?5. 30,反应温度 至-5. 0°C?-4. 0°C，搅拌使其反应完全，按每1000kg悬液加入娃藻土 2. 0?3. 0kg和珍珠 岩2. 0?3. 0kg，搅拌，开始悬液压滤，控制过滤压力为0?0. 3MPa，过滤速度为20?90kg/ min，滤出液温度-5. 0?-3. 0°C，收集组分I+III-2上清液或组分III-2上清液； 步骤四：分离组分II沉淀 每lOOOKg的I+II 1-2上清液或组分II1-2上清液加入25?35%的氯化钠溶液18. 4? 22. 4kg，调节pH值至6. 90?7. 10,用-20°C以下95%的乙醇调节乙醇浓度至19?21 %，调 整pH值至6. 90?7. 10,调节反应温度至-8. 0?-6. 0°C，搅拌使其反应完全，按每1000kg 悬液加入珍珠岩0. 5?1. 0kg，搅拌，开始悬液压滤，控制过滤压力为0. 300MPa，过滤速度为 20?90kg/min，滤出液温度-7. 5?-5. 5°C，上清排放，收集组分II沉淀； 步骤五：组分II沉淀溶解、过滤 将收集的组分II沉淀加入注射用水搅拌至完全溶解，调整pH值至6. 90?7. 10,调节 温度至0. 0?4. 0°C，继续搅拌，按每1000kg溶解悬液加入硅藻土 1. 0?2. 0kg和珍珠岩 1. 0?2. 0kg，搅拌，开始压滤，控制过滤压力为0. 200MPa，过滤速度为10?60kg/min，滤出 液温度0. 0?5. 0°C，压滤分离过滤液，调节过滤液pH值至3. 80?4. 10 ; 步骤六：超滤、透析、浓缩 将过滤液浓缩至蛋白质含量为8?12%，然后用2?5°C、4?6倍体积的注射用水进 行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8?9%，再调整pH值至6. 50?7. 30,用注射用水稀 释控制蛋白质含量为50. 0?100. 0g/L ; 步骤七：纯化、过滤 将步骤八浓缩后的制品用0. 0?4. 0 C的注射用水稀释蛋白质含量至1. 5?2. 0 %，稀 释后在每1000kg制品加入磷酸二氢钠 1. 0?3. 0kg和氯化钠 0. 2?1. 0kg，调整pH值至 6. 90?7. 10,调节温度至0. 0?0. 5°C，用-20°C以下95 %的乙醇调节乙醇浓度至1. 5? 2. 5%，调节温度至-2. 0?-1. 0°C，搅拌使其反应完全，按每1000kg悬液加入珍珠岩1. 0? 2. 0kg，搅拌，开始压滤，控制过滤压力为0. 200MPa，过滤速度为10?60kg/min，滤出液温 度-2. 0?-1. 0°C，调节滤出液pH值至3. 80?4. 10,调节温度至-2. 0?-1. 0°C ; 步骤八：超滤透析、浓缩、配制 将步骤七经pH和温度调节后的滤出液经超滤浓缩至蛋白质含量为8?12%，然后用 注射用水进行连续等量透析，浓缩蛋白质含量至8?9%，按最终制品每升含麦芽糖95? l〇5g加入麦芽糖，调节pH值至3.90?4. 30,用注射用水稀释控制最终蛋白质含量为 5. 20?5. 50%，再进行除菌、除病毒过滤、低pH孵放和除菌分装，即得到静注人免疫球蛋白 半成品。
2. 根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，步骤一中所述 磷酸二氢钠的水溶液为组分I+II+III或组分II+III沉淀重量的6?8倍，浓度为0. Olmol/ L，搅拌时间为6小时以上。
3. 根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，步骤二、三、四 和五中用来调节PH值的溶剂为lmol/L醋酸溶液或0. 5mol/L氢氧化钠溶液。
4. 根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤六中 将过滤液浓缩至蛋白质含量为8?12%是采用膜规格为30KD超滤器浓缩。
【文档编号】C07K1/34GK104479011SQ201510003962
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2015年1月5日 优先权日:2015年1月5日
【发明者】张战, 吕东升, 骆远艺, 郑庭均, 王锦才, 邹延平, 谢文杰 申请人:深圳市卫光生物制品股份有限公司