专利名称：浆果赤霉素iii的衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及式Ⅰ的新紫杉素(Taxans)，其制备方法和药物用途。
在通式Ⅰ中，R1独自出现时为氢;R14独自出现时为氢，三(低级烷基)甲硅烷基，或2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基可未被取代或被卤素、低级烷氧基、低级卤代烷氧基一、二或三取代;或
R1和R4一起为羰基或低级亚烷基，其可未被或被苯基取代;
R7和R10分别为氢，三(低级烷基)甲硅烷基或含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基或未被取代或被卤素、低级烷氧基、低级卤代烷氧基一，二或三取代;和R13是氢，三烷基甲硅烷基、-COCHOCH(C6H5)-NHCOC6H5，-COCHOHCO(C6H5)NHCOOC(CH3)3，含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基可未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基未被取代或被卤素、低级烷氧基、卤代烷氧基一、二或三取代;
Ac为乙酰基，低级烷基定义为含1-8碳的支链或直链单键饱和烃基。这类烷基的代表物是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、异己基、庚基、辛基等等。
低级烷氧基定义为低级烷基通过醚氧链与分子的其他部分相连。这类烷氧基的代表是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、叔戊氧基、己氧基、异己氧基、庚氧基、辛氧基等等。
低级亚烷基定义为含1-8碳的支链或直链二价饱和烃基。这类亚烷基的代表物是亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚戊基、亚异戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基等等。
代表性的低级卤代烷氧基是二氟甲氧基、三氟甲氧基。
式Ⅰ化合物，其中R1＝R7＝R10＝R13＝R14＝氢(1a)是一种新紫杉素，它可从天然植物原料紫杉属，特别是喜玛拉雅紫杉的气生部分中分离出来。这种紫杉广泛分布于亚洲，特别是喜玛拉雅山脉的峭壁上。通过核磁共振谱(1氢和13碳-核磁共振谱)和x线衍射分析、结构Ⅰa是一种新型紫杉素。与已知用于合成抗肿瘤剂紫杉酚和taxoter的化合物(10-去乙酰浆果赤霉素Ⅲ)相比，这种新的紫杉素在14β位上多一个羟基，这个羟基的出现使该分子较10-去乙酰浆果赤霉素有更大的亲水性，有利于这种双萜核抗肿瘤剂在灌注给药的应用。
新紫杉素Ⅰa可用两种不同的方法从植物原料、特别是针状物中分离出来。
事实上，可用与水混溶或不混溶的溶剂萃取植物原料。第一种方法(方法A)非对质子惰性溶剂如甲醇或乙醇，可单独使用或与水混用，极性对质子惰性溶剂介质如丙酮，也可单独使用或与水混用。室温下，Ⅰa用这些溶剂从植物原料中萃取出来。得到的萃取物浓缩直到去除有机溶剂，滤去形成的不溶物，然后用不混溶于水的溶剂处理，如乙酸乙酯或氯化溶剂，优选二氯甲烷。含Ⅰa的有机萃取物被蒸发至干，得到的剩余物通过柱层析被提纯。如果使用不混溶的溶剂(方法B)，可使用芳香烃，如苯、甲苯或氯化溶剂，如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷。在这种方法中，植物原料的萃取可在室温或被选溶剂的回流温度下进行。
得到的萃取物被浓缩，并用醇水混合物，如30%的甲醇水溶液从极性杂质中提纯，然后蒸干。
得到与方法A相似的剩余物须经柱层析进一步提纯。
通过这两种方法，植物原料的两种不同萃取物得到的剩余物通过柱层析提纯，洗脱可用溶剂混合液如环己烷-丙酮，二氯甲烷-乙酸乙酯或二氯甲烷-甲醇，并调节这些混合物的比例以分离出最大量的Ⅰa。根据起始植物原料的质量，Ⅰa的产量可达0.1至0.01%。收集含Ⅰa的层析组分，然后蒸干，剩余物从甲醇、乙酰乙酯、丙酮或乙腈中结晶，得到纯Ⅰa。
化合物Ⅰ可通过已知方法由Ⅰa制备。
部分衍生产物可由Ⅰa得到，因为羟基具有以下活性顺序7-OH＞10-OH＞14-OH＞13-OH。
因此，通过采用适当量的试剂，或调节温度和反应时间可得到部分衍生产物。
全部或部分R7、R10、R13、R14为以上所述的含2-9碳的链烷酰基的化合物可通过Ⅰa或其衍生物与式为R5-COO-CO-R5的羧酸酐或其等当量的衍生物，在4-氨基取代的氨基吡啶存在下于适当溶剂中，反应得到，其中R5为1-8碳的烷基，其未被取代或被卤素一、二、三取代或被苯基单取代，其中苯基未被取代或被卤素、低级氧基或低级卤代烷基一，二或三取代。
乙酰化反应可在室温下或选择地通过回流反应混合物进行。
在碳化二亚胺如二环己基碳化二亚胺或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺和催化剂，如4-(N，N-二甲基氨基)吡啶或4-(吡咯烷)吡啶存在下，于室温或溶剂回流温度下，Ⅰa或其衍生物也可与R5CO2H酸在氯化溶剂如二氯甲烷或氯仿中反应。
R7、R10、R13、R14是三(低级烷基)甲硅烷基的化合物Ⅰ可通过Ⅰa或其衍生物与甲硅烷化剂在适当溶剂和催化剂存在下反应得到。如在室温下2.2当量的咪唑或4-(N，N-二甲基氨基)吡啶的二甲基甲酰胺溶液存在下，对于每个反应的OH，可用1.1当量的叔-丁基二甲基氯化硅烷。
式Ⅰ化合物，其中R1和R14一起为羰基，可通过Ⅰa与适量氯甲酸酯在碱性溶剂，如吡啶中反应得到。如Ⅰa与过量氯甲酸三氯乙酯在吡啶溶液中，于80℃反应几分钟，从而得到羟基的-COOCH2CCl3在7、10、14位乙酰化。
但是，在反应介质中，14位取代基和1位羟基之间可发生分子内亲核取代，产生碳酸酯Ⅰb。
式Ⅰ的衍生物，其中R1和R14一起为未被取代或被苯基取代的低级亚烷基，可在适当催化条件下通过Ⅰa与醛或酮反应得到。例如，通过Ⅰa和2，2-二甲氧丙烷在丙酮溶液和吡啶对甲苯磺酸盐存在下，反应得到环酮Ⅰc，其中包括Ⅰa14位和1位羟基的形式。
与已知的紫杉素如紫杉酚或其衍生物相比较，本发明的式Ⅰ化合物具有抗有丝分裂活性和体内抗肿瘤活性。
在体外，该化合物在脑tubuline(Shelanski，美国科学学会记录汇编，美国，70，765，1973)和人培养白细胞中显示活性。本发明化合物对tubuline具有的活性是浆果赤霉素Ⅲ衍生物活性的两倍。
该化合物可口服或非肠道用药，可单独用药或在哺乳动物需要这种治疗时与其他药物如抗肿瘤药，甾体类等联合用药。非肠道用药包括肌内，鞘内，静脉内和动脉内用药。针对于此类药的任一药物，用药剂量的准则需根据具体的肿瘤，患者的状况和观察到的反应而调整。但是，一般情况下，每天用药10-30mg/m2，持续5天，或每三周一次，每次150-250mg/m2。与现在使用的其他药物相比较，该化合物具有较低毒性，同时毒性反应可通过减少每日用量或隔日用药或以更长的时间间隔，如每三天或五天用药一次来消除。口服剂型包括片剂和胶囊剂，其中每单位剂量为1-10mg。20-100mg/ml的等渗盐溶液可作非肠道用药。
以下实例用来进一步说明本发明。
实例1从喜玛拉雅紫杉叶中提取14-羟基-10-去乙酰-浆果赤霉素Ⅲ，Ⅰa(1，R1＝R7＝R10＝R13＝R14＝氢)方法A1kg喜玛拉雅紫杉叶，在35℃下真空干燥，仔细研磨，用6份甲醇萃取，每次1升，在室温下搅拌，每次萃取用6小时。萃取物在减压下浓缩至1升，放置24小时，滤去不溶物。滤液用500ml二氯甲烷萃取6次。有机相用真空浓缩至500ml，所得溶液通过300g硅胶的层析柱，以二氯甲烷作洗脱液至完全去除非极性化合物，再用85∶15的二氯甲烷-乙酰乙酯混合物洗脱出纯Ⅰa。得到的馏分用真空抽干。剩余物用7倍体积的甲醇结晶，泵过滤结晶的固体，用少量甲醇洗涤，于40℃下真空抽干，得到800mgIa，熔点215-217℃，M+m/z560。
元素分析C29H36O11实测值C，62.07;H，6.53%理论值C，62.13;H，6.47%。
实例2从喜玛拉雅紫杉中提取14-羟基-10-去乙酰-浆果赤霉素Ⅲ，Ⅰa(1，R1、R7＝R10＝R13＝R14＝氢)方法B1kg喜玛拉雅紫杉叶，在35℃下真空干燥，仔细研磨，用6份甲醇萃取，每次3升，在室温下搅拌，每次萃取用6小时。萃取物在减压下浓缩至500ml，与3份，每份70ml的20%甲醇反应。甲苯相用真空浓缩，干燥，将剩余物溶于500ml二氯甲烷。所得溶液用实例1所述的层析法提纯，得到纯Ⅰa，熔点215-217℃。
实例3Ⅰb的制备(1，R7＝R10＝-COOCH2CCl3，R13＝R14一起为CO)
300mlIa(0.53mmol)溶于6ml无水吡啶，在80℃下与0.49ml(3.41mmol)的氯甲酸三氯乙酯反应5分钟。将反应混合物冷却至室温，加入几滴甲醇，去除过量试剂。用水稀释反应混合物，再用二氯甲烷萃取。分离有机相，用稀盐酸洗涤，浓缩，再用硫酸钠干燥，剩余物通过含7g硅胶的层析柱，用1∶1的己烷-乙酸乙酯混合物洗脱纯化，得到295mg(59%)的Ⅰb，M+(C.I.Ms)m/z955(937+NH4)元素分析C36H35O16Cl6实测值C，45.98;H，3.91;Cl，22.67%理论值C，46.10;H，3.84;Cl，22.73%实例4Ⅰc的制备(1，R7＝R10＝R13＝H;R14和R1一起为C(CH3)2)100mgⅠa溶于17ml通过硫酸铜蒸馏的丙酮，在室温搅拌过程中与7ml2，2-二甲氧基丙烷和150ml吡啶对-甲苯磺酸盐反应。蒸发，干燥混合物，剩余物再溶于二氯甲烷。用水洗涤有机溶剂，除去吡啶盐，用硫酸钠干燥，在低压下蒸馏溶剂。剩余物通过含5g硅胶的层析柱，以乙醚洗脱提纯。得到82mg(76%)的Ⅰc，熔点166-170℃，M+(C.I.Ms)m/z618(600+NH4)元素分析C32H40O11实测值C，63.89;H，6.71%理论值C，64.00;H，6.67%。
实例514-β-羟基-10-去乙酰-7，10-二氯乙酯浆果赤霉素Ⅲ的制备(1，R1＝R13＝R14＝OH;R7＝R10＝COCHCl2)200mgⅠa溶于3ml无水吡啶，在室温下与160μl二氯乙酸酐和10mg4-(N，N-二甲基氨基)吡啶反应24小时。
反应混合物被冰水稀释，用氯仿萃取。以稀盐酸洗涤有机相，以硫酸钠干燥，蒸发至干。
剩余物以3∶7己烷-乙酸乙酯为洗脱液通过硅胶层析柱纯化，得到217mg7，10-二氯乙酯，再用氯仿结晶。M+792。
元素分析C33H36O13Cl14实测值C，49.86;H，4.71;Cl，17.01%理论值C，50.00;H，4.54;Cl，17.93%
权利要求
1.式Ⅰ化合物
其中，R1独自为氢；R14独自出现时为氢，三(低级烷基)甲硅烷基，或2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基可未被取代或被卤素、低级烷氧基，低级卤代烷基一、二或三取代；或R1和R4一起为羰基或未被取代或被苯基取代的低级亚烷基；R7和R10分别为氢，三(低级烷基)甲硅烷基或含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基可未被取代或被卤素、低级烷氧基、低级卤代烷氧基一、二或三取代；及R13是氢，二烷基甲硅烷基，-COCHOCH(C6H5)NH-COC6H5，-COCHOHCO(C6H5)NHCOOC(CH3)3，含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基可未被取代或被卤素、低级烷氧基、低级卤代烷氧基一，二或三取代；Ac为乙酰基。
2.权利要求1的化合物，其中R1，R7，R10，R13和R14同时为氢。
3.权利要求1的化合物，其中R7为含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基可未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基可未被取代或被卤素，低级烷氧基、低级卤代烷氧基一、二或三取代。
4.权利要求1的化合物，其中R10为含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基可未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基可未被取代或被卤素、低级烷氧基、低级卤代烷氧基一、二或三取代。
5.从喜玛拉雅紫杉的气生部分制备权利要求2化合物的方法，其中包括以下步骤a)用混溶于水的溶剂或其水的混合物萃取植物原料;b)蒸馏溶剂和滤除不溶剩余物;c)用不与水混溶的溶剂处理并蒸发至干;d)用柱层析纯化并结晶最终化合物。
6.从喜玛拉雅紫杉的气生部分制备权利要求2化合物的方法，其中包括以下步骤a)用混溶于水的溶剂或其水的混合物萃取植物原料;b)蒸发溶剂;c)用醇水溶液处理并蒸发至干;d)用柱层析纯化并结晶最终化合物。
7.式Ⅰ化合物的制备方法，其中R7、R10、R13和R14中至少有一个是含2-9碳的链烷酰基，该链烷酰基未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基未被取代或被卤素、低级烷氧基、低级卤代烷氧基一、二或三取代，其特征在于权利要求2的化合物与式R5COOH酸或其活性衍生物反应，其中R5为1-8碳的烷基，其未被取代或被卤素一、二或三取代，或被苯基单取代，其中苯基未被取代或被卤素、低级烷氧基或低级卤代烷氧基一、二或三取代。
8.式Ⅰ化合物的制备方法，其包括权利要求2化合物须经以下的一步或多步处理a)用式R5COOH酸或其活性衍生物处理;b)用氯甲酸酯处理;c)用甲硅烷化剂处理;d)在适宜的催化剂存在下用醛或酮处理。
9.作为抗肿瘤剂的权利要求1-4的化合物。
10.包括权利要求1-4化合物作为活性成份及适当载体的药物组合物。
全文摘要
具有药用活性的新紫杉素的分离，I a14-β-羟基-10-去乙酰-浆果赤霉素III和用作抗肿瘤剂的新紫杉素一些衍生物的半合成，及中间产物。
文档编号C07F7/18GK1076695SQ9310232
公开日1993年9月29日 申请日期1993年3月4日 优先权日1992年3月6日
发明者E·博马德利, B·加贝塔 申请人:因迪纳有限公司