专利名称：氨茴酸类似物的制作方法
背景技术：
本发明涉及一系列具有生理学活性的新的氨茴酸衍生的酰胺类化合物(I)，它们的制备方法，含有它们的药物组合物，以及它们经钾通道和氯通道调节作用治疗与平滑肌收缩有关的疾病的应用。此类疾病包括，但不仅限于尿失禁、哮喘、早产、肠过敏综合症、充血性心力衰竭、心绞痛和脑血管疾病。
目前，调节钾通道的通用方法是控制细胞膜静电电位和影响细胞应激性。广泛分布的钾通道存在形式多种多样，在最近的一些综述中，根据结构、功能、生理特性以及入门机理对它们进行了彻底分类[Rudy，B.Neuroscience 1988，25，729-749；Atwal，K.，Medicinal Research Reviews 1992，12，569-591；Gopalakrishnan，M.etal.，Drug Development Research 1993，28，95-127；Primeau，J.et al.CurrentPharmaceuical Design 1995，1，391-406；Edwards，G.et al.Exp.Opin.Invest.Drugs 1996，5(11)，1453-1464].钾通道调节剂对心血管疾病、代谢疾病、中枢神经系统疾病、支气管哮喘和膀胱过敏的治疗效果现在进行着广泛研究。
人们对于氯通道调节作用的研究兴趣正快速兴起[Strange，K.et al.Kidney International 1995，48，994-1003；Franciolini，F.etal.Biochimica et Biophysica Acta 1990，247].与氯通道的调节作用可能有关的各类疾病包括支气管哮喘、心律失常、囊纤维变性和肾病。
在日本专利申请49-102692中，Harita等人公开了一种生产间位取代的芳族酰胺羧酸类衍生物的方法，并且在日本专利申请49-42465中还确立了一种生产芳族肉桂酸衍生物的方法。有些专利和专利申请特别注重要求保护具有抗过敏/抗哮喘/抗-组胺活性的制剂在日本专利申请57-179976中，Sato等人公开了一组氨茴酸衍生物(最重要的是作为抗过敏剂的Tranilast)，在日本专利申请58-79436中，Aoyanagi等人要求保护相关的氨茴酸酯类化合物，其中公开了一种生产氨茴酸衍生物的方法；相关的匈牙利专利HU 200 996 B还公开了几种Tranilast类似物的生产方法；Yukihiko在日本专利J60019-754-A中还公开了一种制备氨茴酸衍生物的方法，其中苯亚乙基部分被严格地限定为烷氧基、羟基或酰氧基。
另外，Tsumoro等人的日本专利J0 2218-654-A公开了一类用作反转录酶抑制剂的氨基-苯甲酸衍生物。Tsumoro等人的专利J60097-946-A还公开了一系列具有白三烯拮抗剂和磷脂酶抑制剂活性的取代的甲酰胺衍生物。
附图简要说明
图1是图表表示的单个细胞的细胞电流记录。图1A表明所述对照的细胞向外电流。图1B表明细胞与实施例1化合物接触后细胞向外电流。图1C表明清洗后的细胞向外电流。
图2是图表表示的实施例1对肿胀诱导的氯通道电流的作用。图2A表明等渗、低渗透性和与实施例1接触后细胞的电流描迹。图2B表明在对照(C)、低渗性(肿胀)、实施例1(WY)和清洗溶液(清洗剂)存在下电流相应的电压。图2C表明实施例1对氯通道电流的作用时间。
发明详述本发明提供了下式化合物或其药物上可接受的盐
其中
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-12链烯基、C6-12芳基、C6-12芳烷基；条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳。
在某些优选的实施方案中，R1、R2和R3独立地是氢、氰基、C1-10全卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10全卤代烷基；条件是(1)R1、R2和R3不可同时为氢，和(2)当R1和R2是氢时，R3不可是间-CF3；R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C6-12芳基和C6-12芳烷基，条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；
R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳；或其药物上可接受的盐。
在本发明其他优选的方案中，R15选自氢、金属阳离子、选自下式的基团
其中R11、R12、R13和R14独立地是氢、C1-10烷基、C6-12芳基或C6-12芳烷基。
在本发明其他更优选的实施方案中，W是氮或带有氢、卤素、硝基、氰基或C1-10卤代烷基之一的碳。更优选的是，W是带氢的碳。
在本发明某些实施方案中，优选的是R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地选自氢、卤素、COOR15、硝基、氰基、C1-6烷氧基、C1-6链烷酰基、C1-6卤代烷氧基、C6-10芳酰基、C1-6烷基磺酰基、C1-6卤代烷基磺酰基、C6-10芳基磺酰基、C1-6卤代烷基、C1-6烷基、氨基和C1-6二烷氨基，条件是(1)R1、R2和R3不可同时为氢，(2)当R1和R2是氢时，R3不是间-CF3，和(3)R4和R5中至少一个是COOR15。
在本发明某些优选方案中，还优选的是，R1、R2和R3选自氢、C1 -6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、硝基、C1-6二烷氨基和卤素，条件是(1)R1、R2和R3不可同时是氢，和(2)当R1和R2是氢时，R3不是间-CF3。在上述条件下，进一步优选的是，R1、R2和R3中的至少一个是全卤代烷基，更优选的是三氟甲基。当R1、R2和R3之一是全卤代烷基时，优选的是所述取代基是4-CF3。
在本发明其他更优选的实施方案中，优选的是，R6、R7和R8之一是卤素，更优选的是氯，而最优选的是4-氯。
在本发明其他更优选的实施方案中，优选的是，R4是COOR15，更优选的是COOH。
在本发明某些优选的实施方案中，R10是亚烷基，更优选的是亚甲基。在本发明其他更优选的实施方案中，R9是C1-9烷基，最优选的是甲基。在本发明优选的实施方案中，存在所述双键。
本发明优选的化合物是(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐；2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；(E)-2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；(E)-2-[3[(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；(E)-2-[3[(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物；2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-3-烯酰氨基]苯甲酸；(E)-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-2-烯酰氨基]苯甲酸钠盐；(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基-苯甲酸；(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物；(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物；(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]烟酸；(E)-5-甲氧基-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸二乙基氨基甲酰基甲酯；2-(3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-(2-甲基-3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(2-甲基-3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(2-甲基-3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(2-甲基-3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(2-甲基-3-邻-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-(3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-(2-甲基-3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(2-甲基-3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(2-甲基-3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(2-甲基-3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(2-甲基-3-间-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-(3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-(2-甲基-3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(2-甲基-3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(2-甲基-3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(2-甲基-3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(2-甲基-3-对-甲苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-[3-(2-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-氟-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-氟-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；3-[3-(2-溴-苯基)丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；3-[3-(2-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)丙酰氨基]-5-氯-苯甲酸；2-[3-(2-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-5-氯-苯甲酸；2-[3-(3-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-溴-苯基)丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；2-[3-(3-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；3-[3-(3-溴-苯基)丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；3-[3-(3-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；2-[3-(3-溴-苯基)丙酰氨基]-5-氯-苯甲酸；2-[3-(3-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-5-氯-苯甲酸；2-[3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[2-甲基-3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[2-甲基-3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[2-甲基-3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[2-甲基-3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[2-甲基-3-(2-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[2-甲基-3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[2-甲基-3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[2-甲基-3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[2-甲基-3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[2-甲基-3-(3-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-(3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-(2-甲基-3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；3-(2-甲基-3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-2-(2-甲基-3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；4-氯-3-(2-甲基-3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；5-氯-2-(2-甲基-3-苯基-丙酰氨基)苯甲酸；2-[3-(4-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；2-[3-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；3-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；3-[3-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-4-氯-苯甲酸；2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]-5-氯-苯甲酸；2-[3-(4-溴-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]-5-氯-苯甲酸；2-[3-(2-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[2-甲基-3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[2-甲基-3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[2-甲基-3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[2-甲基-3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[2-甲基-3-(2-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[2-甲基-3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[2-甲基-3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[2-甲基-3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[2-甲基-3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[2-甲基-3-(3-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[2-甲基-3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[2-甲基-3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[2-甲基-3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[2-甲基-3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[2-甲基-3-(4-硝基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-二甲氨基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(4-二甲氨基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-二甲氨基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(4-二甲氨基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-二甲氨基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(4-二甲氨基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-二甲氨基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(4-二甲氨基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-二甲氨基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(4-二甲氨基-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；
2-[3-(2，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(2，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(2，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(2，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(2，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(2，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；2-[3-(3，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；3-[3-(3，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-2-[3-(3，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；4-氯-3-[3-(3，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；5-氯-2-[3-(3，4-二氯-苯基)丙酰氨基]苯甲酸；和5-氯-2-[3-(3，4-二氯-苯基)-2-甲基-丙酰氨基]苯甲酸；或其药物上可接受的盐。
应当理解的是，当R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10含不对称碳原子时，式(I)化合物定义中包括具有如下所述活性的所有可能的立体异构体及其混合物。特别是，所述定义中包括具有所述活性的外消旋体和任何一种光学异构体。光学异构体可通过常规分离方法或对映体特异性合成方法以纯异构体形式获得。应当理解的是，本发明包括所有式(I)化合物的结晶体。本发明碱性化合物的药物上可接受的盐可由例如下列有机或无机酸衍生得到如乳酸、柠檬酸、乙酸、酒石酸、富马酸、琥珀酸、马来酸、丙二酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸以及类似公知的可接受的酸。当R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9和R10含羧基时，本发明所述化合物的盐可与碱例如碱金属(Na、K、Li)或碱土金属(Ca或Mg)生成。
本文所用“烷基”是指含有1-12个碳原子，更优选含有1-6个碳原子的支链或直链。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。
本文所用“链烯基”是指含有2-12个碳原子，更优选含有1-6个碳原子的支链或直链，所述链含有至少一个碳-碳双键。链烯基可以与术语烯烃同时使用并且包括亚烷基。链烯基的实例包括亚乙基、亚丙基和异亚丁基。
本文所用“烷氧基”是指其中所述烷基如上所述的烷基-O-基团。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。
本文所用“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤素取代的如上定义的烷基。全卤代烷基是指其中每个氢均被卤素原子取代的烷基。卤代烷基的实例包括氯甲基、二溴甲基和全卤代烷基，三氟甲基。
本文所用“芳基”是指含有6-12个碳原子的单或双芳族环。单环优选为6或7元，而双环优选为8、9或10元环结构。芳基的实例包括苯基和萘基。所述芳基可被一个或多个取代基取代。取代的芳基优选带有1-3个取代基，它们可包括烷基、烷氧基、全卤代烷基、卤素、硝基、氨基、羧基、羧基烷基、烷氨基和二烷氨基。
本文所用“芳烷基”是指其中所述芳基和烷基如上定义的芳基-烷基。芳烷基的实例包括苄基和苯乙基。
本文所用“链烷酰基”是指其中R为如上定义烷基的-C(O)R。
本文所用“芳酰基”是指其中R为如上定义芳基的-C(O)R。
本文所用“芳烷酰基”是指其中R为如上定义芳烷基的-C(O)R。
本文所用“甲酰氨基”是指-CONH2。
本文所用“氨基磺酰基”是指-SONH2。
本文所用“磺氨基”是指-RSONH2。因此，烷基-、芳基和芳烷基磺氨基是指其中R为如上定义烷基、芳基或芳烷基的基团。
本文所用“亚磺酰基”是指-SOR。因此，烷基-、芳基-或芳烷基亚磺酰基是指其中R为如上定义烷基、芳基或芳烷基的基团。
本文所用“磺酰基”是指-SO2R。因此，烷基-、芳基-和芳烷基磺酰基是指其中R为如上定义烷基、芳基或芳烷基的基团。
本文所用“卤素”是指氯、氟、溴和碘。
碳原子数是指在碳主链中的碳原子数，但不包括在取代基例如烷基或烷氧基取代基中的碳原子。
当术语结合使用时，除非另有说明，结合中适用每一部分的定义。例如，全卤代烷氧基是指其中所述烷基中的每个氢原子已被卤素替代的如上定义的烷氧基。
本发明还提供了式(I)化合物的制备方法。制备方法如反应路线1和2所示。在适宜碱例如，但不仅限于，正丁基锂、仲丁基锂、叔丁基锂、二异丙基氨化锂、六甲基二硅氨化锂、钾或钠或者四甲基哌嗪锂、钾或钠存在下，令原料(II)和(III)反应(反应路线1)，得到缩合产物(IV)，其中R1、R2、R3、R9和R10分别如上定义或者是可以转变成它们的原子基团。将所述酯皂化，得到中间体羧酸(V)。
反应路线1
用下文所述偶合方法中的一种，可随后将羧酸中间体(V)与式(VI)或(VII)氨茴酸适宜衍生的胺偶合(方法A(COCl)2，催化，DMF，CH2Cl2，然后向氨茴酸的氢氧化钠溶液中加入纯酰氯；方法B二异丙基碳化二亚胺，DMAP，CH2Cl2，然后加入氨茴酸甲酯；或方法C(COCl)2，催化，DMF，CH2Cl2或SOCl2，随后用三乙胺和氨茴酸甲酯处理所述纯酰氯)，得到式(Ia)或(Ib)酰胺。如果使用(VI)或(VII)的酯，最终皂化，得到游离酸(R15＝H)。
反应路线2
除CH2Cl2以外，上述反应可在低至环境温度下于非质子传递溶剂例如乙醚、二氯乙烷、二恶烷或THF中进行。当氢氧化钠用作碱时，也可适用的其他无机碱有氢氧化锂或氢氧化钾等。同样，三乙胺也可任意地用任何一种三烷基胺替代。
式(I)化合物也可用固相合成方法制备。
如上所述，现已发现，式(I)化合物及其药物上可接受的盐可使平滑肌松弛。因此，它们可以用于治疗与平滑肌收缩有关的病症，与尿道(例如尿失禁)或胃-肠道(肠过敏综合症)平滑肌收缩过度有关的病症、哮喘和脱发。另外，式(I)化合物具有钾通道激动剂活性，使它们可用于治疗末梢血管疾病、充血性心力衰竭、中风、焦虑症、脑缺氧和其他神经变性疾病。而且，式(I)化合物还可作为氯通道阻断剂，使它们可用于治疗上述病症。
本发明化合物特征在于它们具有体外使平滑肌松弛的特性。本发明所述化合物经激活钾通道和/或阻断氯通道表现出平滑肌松弛剂活性。如大鼠膀胱肥大模型所示体内活性(表II)表明的，该系列化合物中的化合物被认为具有体内活性。另外，如膀胱/大动脉IC50比所示(表1)，本发明化合物独特点在于它们对膀胱组织较血管组织具有固有的选择性。对比化合物，Tranilast未表现出是一种有效的或膀胱选择性的平滑肌松弛药。
因此，本发明提供了一种药物组合物，该组合物含有本发明化合物和与其结合或联合的药物上可接受的载体。具体讲，本发明提供了一种药物组合物，该组合物含有有效量的本发明化合物和药物上可接受的载体。
所述组合物优选适用于口服给药。但是，它们也适用于其他方式给药，例如，给患有心力衰竭的患者非肠道用药或给患有哮喘的患者鼻内给药。
为了实现用药一致，优选的是，本发明组合物是单位剂量形式。适宜的单位剂量形式包括片剂、胶囊剂和小药瓶或安瓿中的粉剂。此单位剂量可含有0.1-100mg本发明化合物，优选含有2-50mg。进一步优选的单位剂量含有5-25mg本发明化合物。本发明化合物可以以约0.01-100mg/kg剂量范围或者优选0.1-10mg/kg剂量范围经口服施用。此组合物可每日用药1-6次，通常是每日1-4次。
本发明所述组合物可与常规赋形剂配制，例如填充剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、调味剂等。它们可按照常规方法配制，例如按照用于公知的抗高血压剂、利尿剂和β-阻断剂相似的方法配制。
本发明还提供了本发明化合物作为活性治疗物质的应用。式(I)化合物特别是用于诱导使平滑肌松弛。
本发明进一步提供了一种治疗哺乳动物包括人平滑肌病症的方法，该方法包括给患病的哺乳动物施用有效量的本发明化合物或药物组合物。
下列化合物试图阐述而非限制本发明具有代表性化合物的制备方法。实施例实施例1(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐步骤1) (E)-[2-甲基-3-(4-三氟甲基苯基)]-2-丙烯酸甲酯的制备于-25℃下，经注射器于22分钟内向2.5M正丁基锂己烷(25.3ml，63.2mmol)和THF(50ml)溶液中加入2-二乙基膦酰基丙酸甲酯(13.7ml，68.9mmol)。所得混合物于-25℃下再搅拌0.5小时，然后将其冷至-80℃。经注射器于30分钟内向其中加入α，α，α-三氟-对-甲苯甲醛(10.0g，57.4mmol)的THF(15ml)溶液。加完后，将冷却浴在12小时内十分缓慢地温热至10℃，反应混合物随后用MeOH(1.0ml)处理，经旋转蒸发除去所有挥发物。然后将残余物于乙醚(250ml)和水(100ml)之间配分，有机相用盐水(100ml)洗涤并用MgSO4干燥。粗产物进行闪式色谱法纯化(用2％乙醚-己烷洗脱)，浓缩后，得到11.32g(81％)白色固体1H NMR(DMSO-d6)δ7.66-7.79(m，5H)，3.77(s，3H)，2.04(d，3H).步骤2) (E)-[2-甲基-3-(4-三氟甲基苯基)]-2-丙烯酸的制备于室温下，向上述甲酯(11.2g，45.9mmol)的THF(320ml)均相溶液中加入1.00N LiOH(138ml，138mmol)。将所得两相混合物剧烈搅拌16小时，之后经旋转蒸发除去所有挥发物。残留的水溶液用乙醚(3×100ml)洗涤，用浓HCl(13.4ml)酸化至pH2，并与乙醚(300ml)配分。水相用固体HN4Cl饱和，再萃取(2×150ml)。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，用苏长岩(Norite)处理，经硅藻土过滤，浓缩得一固体。用乙醚-己烷研制，随后过滤并真空干燥，得到8.60g(81％)白色固体1H NMR(DMSO-d6)δ12.69(s，1H)，7.62-7.79(m，5H)，2.01(d，3H).
步骤3) (E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸的制备于0℃下，向上述羧酸(1.00g，4.34mmol)和无水DMF(2滴)于无水CH2Cl2(5ml)中的非均相混合物中滴加草酰氯(760μl，8.69mmol)。将所得混合物温热至室温并搅拌2.5小时，之后将其浓缩，得到一非均相黄色混合物，真空下清洗掉过量的草酰氯。然后于5℃下，将酰氯加入到氨茴酸(1.19g，8.69mmol)的2.5N NaOH水溶液(6.95ml，l7.4mmol)的均相溶液，同时有白色沉淀生成。然后将反应混合物温热至室温，之后将其用少量水稀释，以利于搅拌，继续搅拌1.5小时。通过加入浓HCl(1.63ml)将混合物酸化至pH2，用2.0N HCl稀释，并搅拌1.5小时。将悬浮液过滤，用水洗涤，空气干燥并随后于MeOH中重结晶，得到568mg(37％)高结晶度的白色固体mp 207-208℃；1HNMR(DMSO-d6)δ13.76(br s，1H)，8.68(dd，1H)，8.04(dd，1H)，7.56-7.81(m，6H)，7.19(ddd，1H)，2.18(d，1H)；IR(KBr)3396，3116，2722，2651，1674，1607，1584，1534，1471，1452，1411，1382，1328，1291，1260，1198，1166，1118，1107，1068，1016，996，903，824，757，696，664cm-1；MS(m/z)349[M+].
元素分析C18H14F3NO3计算值C，61.89；H，4.04；N，4.01.
实测值C，61.87；H，4.04；N，4.01.
步骤4) (E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐的制备于氮气氛室温下，向上述羧酸(4.907g，14.05mmol)和氢化锂粉(111.7mg，14.05mmol)的固体混合物中加入THF(90ml，由二苯酮羰游基钠中蒸馏得到)，将非均相混合物回流下加热12小时，生成大量白色沉淀，然后将其冷却至室温，用THF(1000ml)稀释，经硅藻土过滤并浓缩，得到一白色固体。所述固体用乙醚(500ml，由二苯酮羰游基钠中蒸馏得到)研制12小时，生成一非常白的悬浮液，于氮气氛下过滤，用乙醚(500ml)洗涤，最后于80℃高真空下干燥，得到4.2655g(85％)白色粉末mp 321.5-322.3℃(dec)；1H NMR(DMSO-d6)δ15.21(s，1H)，8.59(dd，1H)，8.00(dd，1H)，7.71(ABq，4H)，7.51(s，1H)，7.28(ddd，1H)，6.95(ddd，1H)，3.35(s，3H)；IR(KBr)3354，3127，1647，1623，1598，1527，1453，1388，1325，1251，1191，1127，1068，1018，998，915，862，830，763，704cm-1；MS(m/z)348[(M-Li)-].元素分析C18H13F3LiNO3；计算值C，60.85；H，3.70；N，3.94.实测值C，60.34；H，3.50；N，3.80.实施例22-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸将3-(4-三氟甲基苯基)丙酸(2.14g，10.0mmol)和亚硫酰氯(0.80ml，11.0mmol)的混合物于苯(100ml)中加热回流，直至TLC显示所有原料已被消耗。将该混合物经旋转蒸发仪浓缩，得到酰氯粗产物，将其与氨茴酸(1.37g，10.0mmol)于二甲基乙酰胺(100ml)中混合，然后回流12小时。反应混合物冷却至室温，于水和乙醚之间配分。有机相用Na2SO4干燥，浓缩，用MeOH重复研制，然后干燥，得到3.40g(100％)白色固体mp169-171℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.4-13.7(br s，1H)，11.12(s，1H)，8.45(dd，1H)，7.63(d，2H)，7.57(ddd，1H)，7.50(d，2H)，7.13(ddd，1H)，3.03(t，2H)，2.77(t，2H)；IR(KBr)3124，3036，2983，1711，1661，1609，1585，1335，1315，1224，1192，1163，1145，1122，1107，1070，791，760cm-1；MS(m/z)379[M+].
元素分析C17H14F3NO3计算值C，60.54；H，4.18；N，4.15.
实测值C，60.27；H，4.26；N，4.19.实施例3(E)-2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸步骤1) (E)-2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸甲酯的制备于0℃下，向4-溴琥珀酸(2.25g，9.91mmol)和DMAP(121mg，0.991mmol)于CH2Cl2中的非均相混合物中加入1，3-二异丙基碳化二亚胺(1.55ml，9.91mmol)。将所得混合物搅拌30分钟，此时加入氨茴酸甲酯(1.92ml，14.9mmol)。反应混合物于0℃下保持10分钟，然后令其温热至室温，之后将其搅拌72小时。反应混合物用EtOAc(200ml)稀释，依次用2.0N HCl(50ml)、水(50ml)、饱和NaHCO3(50ml)并最终用盐水(50ml)配分。有机相用MgSO4干燥，用苏长岩处理，经硅藻土过滤，浓缩得到一固体。用乙醚-己烷研制，随后过滤，用20％乙醚-石油醚洗涤并真空干燥，得到2.81g白色固体粗品。于MeOH中重结晶，得到1.59g(45％)分析纯白色结晶片状产物1H NMR(DMSO-d6)δ10.83(s，1H)，8.39(dd，1H)，7.94(dd，1H)，7.71-7.56(m，6H)，7.21(ddd，1H)，6.97(d，1H)，3.87(s，1H).
步骤2) (E)-2-[3-(4-溴-苯基)丙酰氨基]苯甲酸按照实施例1步骤2的相似方法，制得所述标题化合物(781mg，52％)mp 215-216℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.52(br s，1H)，11.33(s，1H)，8.59(dd，1H)，8.01(dd，1H)，7.58-7.72(m，6H)，7.18(ddd，1H)，6.94(d，1H)；IR(KBr)3331，3123，3072，1705，1670，1626，1606，1583，1526，1487，1449，1413，1402，1389，1261，1224，1146，1071，966，882，816，750，656cm-1；MS(m/z)345/347[M+].
元素分析C16H12BrNO3计算值C，55.51；H，3.49；N，4.04.
实测值C，55.10；H，3.50；N，4.10.实施例4(E)-2-[3[(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸将反-4-(三氟甲基)琥珀酸(2.02g，9.34mmol)、亚硫酰氯(2.0ml，27.4mmol)和氨茴酸甲酯(2.4ml，13.6mmol)的混合物于苯(100ml)中回流96小时。真空浓缩，随后用MeOH析晶，过滤后，得到1.3g(40％)所述甲酯中间体。向该中间体(873mg，2.50mmol)的THF(25ml)溶液中加入1N NaOH(7.5ml，7.5mmol)，将所得混合物搅拌，直至水解完全，之后用HCl酸化至pH3并搅拌30分钟。分出有机层，用盐水洗涤，MgSO4干燥，然后真空浓缩，得到500mg(60％)白色固体mp 222-224℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.3-13.9(br s，1H)，11.36(s，1H)，8.59(dd，1H)，8.01(dd，1H)，7.97(d，2H)，7.78(d，2H)，7.69(d，1H)，7.63(ddd，1H)，7.20(ddd，1H)；IR(KBr)3329，3063，2877，1674，1628，1606，1585，1530，1472，1451，1414，1329，1299，1262，1214，1165，1118，1110，1068，972，893，831，756，657cm-1；MS(m/z)335[M+].
元素分析C17H12F3NO3计算值C，60.90；H，3.61；N，4.18.
实测值C，60.50；H，3.55；N，4.21.实施例5(E)-2-[3-[(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物按照实施例1步骤4所述相似方法，由上述羧酸制备所述标题化合物(64％)mp＞340℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ15.03(s，1H)，8.56(dd，1H)，8.00(dd，1H)，7.84(ABq，4H)，7.61(d，1H)，7.28(ddd，1H)，6.96(ddd，1H)，6.84(d，1H)；IR(KBr)3715，3678，3423，3264，3060，1693，1620，1587，1512，1415，1384，1294，1166，1111，1067，976，828，759cm-1；MS(m/z)334[(M-Li)-].
元素分析C17H11F3NO3Li·0.5H2O计算值C，59.84；H，3.26；N，4.11.
实测值C，58.78；H，3.22；N，4.06.实施例62-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-3-烯酰氨基]苯甲酸步骤1) (E)-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-2-烯酸甲酯的制备按照实施例1步骤1所述相似方法，由4-(三氟甲基-苯基)苯乙酮制备所述标题化合物(46％)
1H NMR(DMSO-d6)δ7.77(ABq，4H)，6.24(q，1H)，3.68(s，3H)，2.52(d，3H).步骤2) (E)-[3-(4-三氟甲基-苯基)]丁-2-烯乙酸的制备按照实施例1步骤2所述相似方法制得白色固体状所述中间体化合物(82％)1H NMR(DMSO-d6)δ12.42(s，1H)，7.75(s，4H)，6.17(q，1H).步骤3) 2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-3-烯酰氨基]苯甲酸甲酯的制备于0℃下，向上述羧酸(1.75g，7.60mmol)、DMAP(186mg，1.52mmol)和氨茴酸甲酯(1.97ml，15.2mmol)的CH2Cl2均相溶液中滴加二异丙基碳化二亚胺(1.19ml，7.60mmol)。将所得黄色混合物于0℃下搅拌1小时，然后温热至室温并再搅拌48小时。反应混合物用乙醚(400ml)稀释，依次用水(3×200ml)和盐水(200ml)萃取。有机相用MgSO4干燥，用1.0M HCl乙醚溶液(8.0ml，8.0mmol)处理，经一短SiO2层过滤，然后浓缩，得到一油状残余物，将其进行闪式色谱纯化(用20％乙醚-己烷洗脱)，得到1.58g(57％)白色固体1H NMR(DMSO-d6)δ10.75(s，1H)，8.26(dd，1H)，7.88(dd，1H)，7.73(ABq，4H)，7.56(ddd，1H)，7.15(ddd，1H)，5.85(s，1H)，5.55(s，1H)，3.81(s，3H)，3.75(s，2H).步骤4) 2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-3-烯酰氨基]苯甲酸的制备如实施例1步骤2所述，将上述酯进行皂化，得到烯烃异构体的混合物。室温下，向该混合物(325mg，0.930mmol)中加入1.0N HCl乙醚溶液(30ml，30mmol)。将所得均相溶液搅拌20分钟，然后用石油醚稀释至200ml，结果有大量沉淀生成。将该混合物搅拌1小时，然后过滤，并于60℃下真空干燥，得到218.7mg(67％)白色固体状最终烯烃异构体
mp 174-175℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.53(br s，1H)，11.31(s，1H)，8.45(dd，1H)，7.93(dd，1H)，7.72(ABq，4H)，7.53(ddd，1H)，7.11(ddd，1H)，5.86(s，1H)，5.57(s，1H)，3.75(s，3H)；IR(KBr)3183，2993，2651，1694，1635，1582，1511，1451，1406，1325，1235，1176，1064，1014，983，940，863，797，751，727，695cm-1；MS(m/z)349[M+].
元素分析C18H14F3NO3计算值C，61.89；H，4.04；N.4.01.
实测值C，61.81；H，3.94；N，4.22.实施例7(E)-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-2-烯酰氨基]苯甲酸钠盐按照实施例1步骤3所述相似方法，由(E)-[3-(4-三氟甲基-苯基)]丁-2-烯酸和氨茴酸制备所述标题化合物。用足量的2.0N HCl处理所述反应混合物进行所需的最终处理，使所述介质呈中性，随后于MeOH中重结晶，分离得到110mg(8％)吸湿性白色固体状所述钠盐mp 325-328℃；1H NMR(DMSO-d6)δ14.68(s，1H)，8.54(dd，1H)，7.98(dd，1H)，7.77(ABq，4H)，7.28(ddd，1H)，6.95(ddd，1H)，6.27(d，1H)，2.57(d，3H)；IR(KBr)3439，3236，3157，3024，1665，1618，1589，1441，1383，1326，1304，1168，1120，1080，1066，1014，836，760cm-1；MS(m/z)349[M+].
元素分析C18H13F3NO3Na计算值C，58.23；H，3.53；N，3.77.
实测值C，57.38；H，3.41；N，3.72.实施例8(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基-苯甲酸按照实施例1步骤3所述相似方法，由(E)-3-[4-三氟甲基苯基]-2-丙烯酸和4-氯氨茴酸制备所述标题化合物(47％)
mp 225.3-225.8℃；1H NMR(DMSO-d6)δ11.79(s，1H)，8.68(d，1H)，7.96(d，1H)，7.73(ABq，4H)，7.71(dd，1H)，7.56(s，1H)，2.17(d，3H)；IR(KBr)3132，1698，1662，1611，1583，1519，1381，1330，1293，1167，1114，1070，1000，847，833，688cm-1；MS(m/z)383/385[M+].
元素分析C18H13ClF3NO3计算值C，56.34；H，3.41；N，3.65.
实测值C，56.21；H，3.20；N，3.71.实施例9(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物按照实施例1步骤4所述相似方法，由吸湿性白色固体状(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基-苯甲酸制备所述标题化合物(89％)mp 244.9-262℃；1H NMR(DMSO-d6)δ15.10(s，1H)，8.62(d，1H)，7.80(ABq，4H)，7.50(s，1H)，7.33(dd，1H)，2.15(d，3H)；IR(KBr)3750，3413，3124，1657，1616，1583，1512，1441，1412，1374，1325，1251，1204，1167，1126，1068，999，830，736，697cm-1；MS(m/z)396[(M+H+Li)+].
元素分析C18H12ClF3NO3Li·0.5H2O计算值C，55.43；H，3.08；N，3.59.
实测值C，54.15；H，3.12；N，3.51.实施例10(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸按照实施例1步骤3所述相似方法，由(E)-3-[4-三氟甲基苯基]-2-丙烯酸和5-氯氨茴酸制备所述标题化合物(36％)
mp 228.4-229.0℃；1H NMR(DMSO-d6)δ11.97(s，1H)，8.78(d，1H)，8.03(d，1H)，7.74(ABq，4 H)，7.57(s，1H)，7.26(dd，1H)，2.18(d，3H)；IR(KBr)3420，3225，3010，2930，2600，1710，1660，1615，1600，1420，1345，1295，1115，1075，1000，915，850，785，725，690cm-1；MS(m/z)383/385[M+].
元素分析C18H13ClF3NO3计算值C，56.34；H，3.42；N，3.65.
实测值C，55.94；H，3.23；N，3.86.实施例11(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物按照实施例1步骤4所述相似方法，由吸湿性白色固体状(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸制备所述标题化合物(79％)mp 320.9-321.4℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.68(d，1H)，8.00(d，1H)，7.72(ABq，4H)，7.52(s，1H)，7.01(dd，1H)，2.16(d，3H)；IR(KBr)3662，3405，3103，2994，2647，1659，1618，1573，1512，1440，1373，1327，1242，1167，1110，1068，1000，914，847，769，693cm-1；MS(m/z)396[(M+Li)+]，390，[(M+H)+].
元素分析C18H12ClF3NO3Li·0.5H2O计算值C，55.48；H，3.11；N，3.60.
实测值C，54.14；H，3.06；N，3.42.实施例12(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]烟酸步骤1) (E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]烟酸甲酯的制备于0℃下，向2-氨基烟酸甲酯(0.50g，3.26mmol)和三乙胺(910μ1，6.52mmol)的CH2Cl2溶液中经导管加入(E)-3-[4-三氟甲基苯基]-2-丙烯酰氯(810mg，3.26mmol)(按照实施例1步骤3相同的方法制备，以CH2Cl2(5.0ml)溶液形式加入)。加完后，令反应混合物温热至室温并搅拌2小时，之后用水(20ml)和饱和NaHCO3(20ml)使反应中止，然后与EtOAc(20ml)配分。水相进一步用EtOAc(3×20ml)萃取，合并的有机相用MgSO4干燥，用苏长岩处理，浓缩并进行闪式色谱纯化(用75％EtOAc-己烷洗脱)，得到412mg(35％)白色固体。步骤2) (E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]烟酸的制备按照实施例1步骤2所述相似方法，由上述甲酯制备所述标题化合物(61％)mp 203.8-2.4.4℃；1H NMR(DMSO-d6)δ11.20(br s，1H)，8.54(dd，1H)，8.21(dd，1H)，7.73(ABq，4H)，7.45(s，1H)，7.28(dd，1H)，2.11(d，3H)；IR(KBr)3301，3079，2994，1686，1607，1560，1454，1411，1387，1261，1203，1189，1168，1148，1047，1016，997，892，850，777，682cm-1；MS(m/z)350[M+].
元素分析C17H13F3N2O3计算值C，58.29；H，3.74；N，8.00.
实测值C，57.45；H，3.56；N，7.76.实施例13(E)-5-甲氧基-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸按照实施例1步骤3所述相似方法，由(E)-3-[4-三氟甲基苯基]-2-丙烯酸和4-甲氧基氨茴酸制备所述标题化合物(39％)mp 207.2-208.0℃；1H NMR(DMSO-d6)δ13.80(br s，1H)，11.54(s，1H)，8.56(d，1H)，7.73(ABq，4H)，7.53(s，1H)，7.50(d，1H)，7.26(dd，1H)，3.78(s，3H)，2.17(d，3H)；IR(KBr)3310，3212，3142，3105，2947，2858，1697，1607，1554，1502，1452，1411，1382，1358，1335，1246，1172，1141，1121，1063，855，810，751，737，691cm-1；MS(m/z)379[M+].
元素分析C19H16FNO4计算值C，60.16；H，4.25；N，3.69.
实测值C，60.31；H，4.09；N，3.65.实施例14(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸二乙基氨基甲酰基甲酯步骤1) (E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸钠盐的制备按照实施例1步骤4所述相似方法(用氢化钠代替氢化锂)，由相应的羧酸制备所述标题化合物(91％)。步骤2) (E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸二乙基氨基甲酰基甲酯的制备于室温氮气惰性气氛下，向上述羧酸钠盐(894mg，2.41mmol)和碘化钠(36mg，0.24mmol)的DMF均相溶液中滴加N，N-二乙基-2-氯乙酰胺(397μl，2.89mmol)。加完后，将反应混合物加热至50℃并搅拌12小时，之后用水(25ml)使反应中止，然后与EtOAc(50ml)配分。水相再次用EtOAc(50ml)萃取，合并的有机相用2％NaHCO3(2×25ml)洗涤，然后用己烷(25ml)稀释，并依次用水(3×25ml)，随后用盐水(25ml)洗涤。用MgSO4干燥，随后浓缩并于乙醚-石油醚中重结晶，得到898mg(74％)白色固体mp 76.4-77.2℃；1H NMR(CDCl3)δ11.46(s，1H)，7.58-7.63(m，2H)，7.57(ABq，4H)，7.14(ddd，1H)，4.99(s，2H)，3.37(dq，4H)，2.24(d，3H)，1.21(dt，6H)；IR(KBr)；MS(m/z).
元素分析C24H25F3N2O4计算值C，62.33；H，5.45；N，6.06.
实测值C，62.09，H，5.30；N，6.05.
实施例15-264的固相合成于0℃下，向Wang树脂(0.7g，0.52mmol)和三苯膦(0.409g，1.56mmol，3当量)的二氯甲烷(4ml)悬浮液中加入N-氯琥珀酰亚胺(0.394g，1.72mmol，3.3当量)。反应于0℃下继续5小时并于室温下持续10小时。然后过滤除去溶剂，树脂用二氯甲烷(4×8ml)洗涤。将氨茴酸或适宜取代的1，2或1，3-氨基苯甲酸(5当量)、碳酸铯(0.847g，2.6mmol，5当量)和二甲基甲酰胺(DMF)(6ml)与上述树脂混合。反应60小时后，将溶剂过滤，树脂用水(2×5ml)、DMF(4ml)和CH2Cl2(2×4ml)洗涤。室温下，将二氯甲烷(5ml)、适宜取代的二乙基膦酰基乙酸(3当量)、二异丙基碳化二亚胺(0.261ml，1.66mmol，3.3当量)和二甲氨基吡啶(DMAP)(10mg)与上述树脂反应20小时。将反应混合物过滤，用二氯甲烷(5×4ml)和四氢呋喃(THF)(5ml)洗涤。将氯化锂(40mg，1.5mmol，3当量)、1，8-的氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU)(150mg，1.5mmol，3当量)和THF(10ml)与上述树脂混合1小时，然后于室温下加入适宜取代的苯甲醛(3当量)。18小时后，加入水(10ml)，将溶剂过滤，然后残余物用THF-H2O(1∶1，10ml)、水(10ml)、THF(10ml)、丙酮(3×10ml)和二氯甲烷(3×10ml)洗涤。
将上述树脂用TFA(50％二氯甲烷，6ml)处理1小时，将滤液真空蒸发，得到粗产物。表A全面记述了实施例15-264的结构。
<
平滑肌松弛活性本发明化合物的平滑肌松弛活性可按照标准的药物上可接受的试验方法用有代表性的化合物如下文所述确定将Sprague-Dawley大鼠(150-200g)用CO2窒息，使其意识丧失，然后经颈脱位施行安死术。分离出膀胱放入下列组合物的温热(37℃)生理盐水溶液(PSS)中(mM)NaCl，118.4；KCl，4.7；CaCl2，2.5；MgSO4，4.7；H2O，1.2；NaHCO3，24.9；KH2PO4，1.2；葡萄糖，11.1；EDTA，0.023；通入95％O2；2/5％CO2；pH7.4。切开膀胱，然后切成宽1-2mm、长7-10mm的条。随后将条状组织在起始静张力为1.5g下悬浮于10ml组织浴中，所述条状组织被两个手术钳固定，其中一个与固定环相连，而另一个与等力换能器相连。在用0.1μM卡巴可处理之前，令通常具有较弱固有收缩的制品恢复1小时，然后将卡巴可清洗掉，令组织松弛至静止活性水平。再恢复30分钟后，向组织浴中加入15mM KCl。KCl浓度的增大导致迭加了基准小量增加的固有收缩(和原有静止状态条状组织的起始收缩)幅度大幅度提高。该收缩活性增加的水平稳定后，增大加入到组织浴中的试验化合物或载体的浓度。在处理30分钟的最后一分钟内测定每种化合物或载体浓度的收缩活性。
用引起药前收缩活性50％抑制(IC50)所需浓度测定膀胱组织条增大的等力并由该浓度—应答曲线计算。记录试验化合物浓度低于或等于30μM时收缩活性的最大百分抑制作用。
试验结果如表I所示。
表I离体大鼠膀胱组织条的收缩抑制作用和选择性指征IC50/μMIC50/μM IC50(A)/实施例# n膀胱(B) n 主动脉(A) IC50(B)1，Step 3 4 3.7±2.1 5 61.2±9.2 16.51，Step 4 6 1.07±0.37 6 41.9±8.4 39.62 2 14.1±1.77 4 118.2±27.6 8.43 4 4.9±2.6 3 53.5±7 114 7 3.37±0.59 3 39.5±1211.75 6 5.3±2.8 7 146±49 27.56 5 18.1±4.2-- -- --7 4 7.4±4 -- -- --8 4 1.18±0.45 3 4.23±0.66 3.589 2 0.52±0.24 3 2.76±1.63 5.3110 4 1.44±0.85 3 6.93±2.4 4.8111 6 3.45±0.75 -- -- --12 3 11.4±3.8-- -- --13 2 9.6±7.4 -- -- --14 3 10.8±0.6-- -- --14 3 I＝35.6±5％*-- -- --Tranilast§ 2 14.4±4.55 15.59±8.96 1.08§Tranilast为(E)-2-[3-(3，4-二甲氧基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸。*30μM下的百分抑制率另外，按照Malmgrem(A.Malmgrem，K.E.Andersson，C.Sjogren，P.O.Andersson，Effects of Pinacidil and Cromakalim(BRL 34915)onBladder Function in Rats with Detrusor Instability，J.Urol.1421134，1989.)所述下列方法，我们对化合物对有知觉的具有肥大膀胱的雄性鼠肥大膀胱(逼肌)平滑肌的活动过程的抑制能力进行试验，并因此可减轻尿失禁用体重在190-210g范围内的雄性Sprague-Dawley大鼠。每次准备至多25只动物。当出现膀胱肥大后，每一试验施用4-8只动物。
将化合物溶于PEG-200并以5ml/kg的量经胃管饲法或经静脉给药。为了初步筛选，将所有药物给每4只一组以设定剂量10mg/kg口服施用。
用氟烷将所述动物麻醉。经中线切口，暴露出膀胱和尿道，在不锈钢柱(直径1mm)存在下在接近尿道处用4-0丝线结扎，形成部分闭塞，然后除去不锈钢柱。用手术棉将腹部区域闭合，给每只鼠150,000单位苄星青霉素C-R，令所述动物六个星期内发展成膀胱足够肥大。6个星期后，在氟烷麻醉下除去结扎线，在膀胱穹窿处放置一带套的导管(PE60)并用缝合线固定。导管在皮下穿过，并经膀胱颈背面开口伸向外部。将腹部切口结扎，将导管自由端密封。为预防感染，给鼠注射苄星青霉素C-R(150000单位/鼠)。两天后所述动物用膀胱内压测量法评估。将鼠置于代谢笼中，导管与Statham压力换能器(P23Db)和Harvard灌注泵连接(用“T”连接器)，与压力换能器(Grass FTO3)连接的塑料烧杯置于鼠笼下面以收集并记录尿量。在灌注生理盐水(20ml/小时，20分钟)之前，使鼠安静15-30分钟，以开始第一个膀胱内压测量期间。第一个膀胱内压测量期间后两小时，给鼠以所示剂量的载体或试验化合物并于一小时后完成第一个膀胱内压测量期间。
记录下列膀胱动力学变量基础膀胱压＝膀胱内压测量期间内最低膀胱压阈压＝排尿前膀胱压排尿量＝排出的尿量排尿压＝排泄期内最大压力固有活性＝灌注期内膀胱压力波动平均幅度结果表示在施用化合物之前和之后计算每一变量的平均值。对于每种化合物，将测量的变量变化与处理前获得的数值进行比较并以百分抑制作用表示。将所述数据进行双向方差分析，以确定变量测量中的显著(p＜0.05)变化。活性标准在该大鼠模型中，最具特点的研究结果是灌注期间形成的固有膀胱收缩。在以10mg/kg口服或静脉内给药(随意选择剂量)时，能至少50％抑制固有收缩的化合物被认为是活性化合物。
试验结果如表II所示表II对体内固有收缩的抑制作用化合物动物数剂量mg/kg(i.v.) ％Red(F)*实施例9 1030 -71±6*在肥大的大鼠膀胱模型中，固有收缩总量的降低百分数钾通道的活化本发明化合物对钾通道的活化可如下文所述经测定实施例1化合物对钙依赖性大传导钾通道(最大K+)的作用来确定用上述豚鼠逼肌方法(Sheldon and Argentieri，1995)分离鼠逼肌。经吸入CO2将雄性Sprage-Dawley鼠(200-400g)施行安死术并放血。迅速分离出膀胱并置于37℃含有下列组份(mM)的生理盐水溶液中谷氨酸钠(80.0)，NaCl(54.7)，KCl(5.0)，NaHCO3(25.0)，MgCl2·2H2O(2.5)，D-葡萄糖(11.8)和CaCl2(0.2)，用CO2-O295％/5％充气，最终pH为7.4。由三角区分离出膀胱穹窿并除去粘膜。然后将该组织切成宽2-3mm的条状并置于新制缓冲液中1小时。然后将组织转移至10.0ml含有上述组份和胶原酶VIII型(1.0mg/ml)和链霉蛋白酶(0.25mg/ml)的分离缓冲液中。10分钟后，用新制的分离缓冲液代替所述分离缓冲液10分钟，然后将所述组织用新制的无胶原酶和链霉蛋白酶溶液清洗3次，于室温下贮存，直至开始试验。用连接改进的Harvard Respirator泵(Harvard Apparatus，Southnatic，MA)的光滑的Pasteur移液管(末端直径～1.5ml)，以20x/分钟的速度，体积约5ml，将1-2条逼肌组织于2ml新制的分离缓冲液中研制5分钟，制备研究用细胞。于32.5℃于温度调节组织浴中，将细胞置于显微镜镜台上，并用含有下列组份(mM)的生理盐水溶液(PSS)连续过冷NaCl(118.4)，KCl(4.7)，CaCl2(2.5)，MgSO4(1.2)，KH2PO4(1.2)，NaHCO3(24.9)和D-葡萄糖(11.1)，用CO2-O2，95％/5％充气，达到pH7.4。
用List-Medical EPC-7斑点钳放大器(patch clamp amplifier)(Adams & List Assoc.，Westbury，NY)完成单个细胞的记录。移液管电极末端电阻为2-4MΩ并装有下列组份(mM)KCl(126.0)，MgCl2·6H2O(4.5)，ATP Mg盐(4.0)，GTP tris盐(0.3)，肌酸PO4(14.0)，D-葡萄糖(9.0)，EGTA(9.0)，HEPES(9.0)。用KOH调至pH7.4，用586-型个人电脑和pClamp(Axon Instruments，FosterCity，Ca)软件获得信息(3kHz高频中止)。
所有细胞记录用斑点破损评估法完成。采用电压逐步升高(Vh＝-50；Vt＝-60-40mV)或电压骤变(-60-40mV，3.3mV/秒)加电流。达到稳定后，记录对照电流。下一步，向过冷剂中加入WAY-131354-A(10μM)。记录电流5-10分钟，直至化合物的作用达到稳定状态。此后清洗或向过冷剂中加入优降糖(5μM)。结果与实施例1化合物(溶于DMSO并进一步用PSS稀释)接触的所有细胞均与清洗后可逆的向外电流升高产生应答(图1)。与磺酰脲优降糖接触未产生影响(未给出数据)。上述试验表明，该电流对iberiotoxin是敏感的，这是最大K+通道的标志。据此可得出结论，实施例1化合物可激活离体鼠膀胱细胞最大K+电流，这与其能体外抑制KCl-诱导的整个组织的收缩是一致的。氯通道的阻断本发明化合物作为氯通道阻断剂的能力可如下所述确定。
由Clonetics Corporation(San Diego，CA)市售获得正常人支气管表皮细胞(NHBE)并由鼠膀胱分离膀胱细胞。
常规外用溶液含有(mM)N-甲基d-葡糖胺氯化物(NMDGCl)，140，MgCl2，2，CaCl2，2和4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)10。常规吸移溶液含有(mM)NMDGCl，125，HEPES 10，MgCl22，ethylenebis(oxonitrilo)tetraacetate(EGTA)2和ATPMg5，用TRIS将pH调至7.3。为了确定去极化的泄漏电导，用谷氨酸将内Cl离子浓度降至40mM(根据Nernst等式，EC1约为-31mV)。标准外溶液的克分渗透压浓度约为280mOsm。用蒸馏水稀释常规外溶液得到低渗溶液。
用全部细胞电压钳记录方法记录膜离子流。记录室的体积为1ml，过冷液的流速为4ml/分钟。用Axopatch 200A Patch ClampAmplifier(Axon Instruments，Inc.，Foster City，CA)记录膜电流。在电压钳条件下，在0.2Hz下刺激所述细胞，以确保在两个电压阶跃期间通道完全恢复。膜电流通过下述方法产生1)监测Vh(保持电位)＝-30mV，Vc(钳电位)＝60mV和Tc(钳时间)＝1秒。2)斜坡试验；Vh＝-30mV，V斜坡(斜坡电位范围)＝-100-100mV，T斜坡＝3秒、3)电流-电压曲线(I-V)；Vh＝-30mV，Vc＝-100-100mV，每步10mV和Tc＝1秒。
在正常人支气管表皮细胞(NHBE)和豚鼠膀胱中评价式I化合物对氯电流的影响并概括于下表中
>CFTR＝囊纤维变性互调节的氯通道图2表示实施例1化合物对豚鼠膀胱细胞肿胀诱导的氯通道电流的抑制作用。A在相同细胞中，在等渗、低克分渗透压浓度(210mOsm)和施用20μM实施例化合物后，记录的电流痕量为-100-60mV。实施例1化合物可显著地降低肿胀诱导的氯电流。名册B是在对照、低渗、实施例1化合物和清洗溶液存在下四个迭加的斜坡试验痕量。名册C表明于60mV下相同细胞中监测到的实施例1化合物对ICl，肿胀作用的时间过程。所述数字表明加入210mOs溶液后15分钟内ICl，肿胀达到稳定状态并且在20μM实施例1化合物存在下阻断率达67％。
因此，本发明化合物对平滑肌收缩具有显著的作用并可用于治疗胃肠道、心血管、代谢和中枢神经系统疾病，例如尿失禁、膀胱和肠过敏性疾病、哮喘、高血压、中风、囊纤维变性、心律失常、外周血管疾病、充血性心力衰竭、焦虑症、神经变性疾病以及与上文所述类似的疾病，它们可以通过给所需患者口服、非肠道施用或经吸入钾通道活化和/或氯通道阻断化合物治疗。
权利要求
1.下式化合物或其药物上可接受的盐
其中R1、R2和R3独立地是氢、氰基、C1-10全卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10全卤代烷基；条件是(1)R1、R2和R3不可同时为氢，和(2)当R1和R2是氢时，R3不可是间-CF3；R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C6-12芳基和C6-12芳烷基，条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳。
2.权利要求1的化合物，其中R15选自氢、金属阳离子、选自下式的基团
其中R11、R12、R13和R14独立地是氢、C1-10烷基、C6-12芳基或C2-12芳烷基。
3.权利要求1的化合物，其中W是带氢的碳。
4.权利要求1的化合物，其中W是NH2。
5.权利要求1的化合物，其中R1、R2和R3中至少一个是C1-6全卤代烷基。
6.权利要求1的化合物，其中R1、R2和R3中至少一个是三氟甲基。
7.权利要求1的化合物，其中R1、R2和R3之一是4-三氟甲基。
8.权利要求1的化合物，其中R6、R7和R8中至少一个是卤素。
9.权利要求1的化合物，其中R6、R7和R8之一是4-氯。
10.权利要求1的化合物，其中R4是COOR15。
11.权利要求1的化合物，其中R4是COOH。
12.权利要求1的化合物，其中R10是亚烷基。
13.权利要求1的化合物，其中R9是C1-6烷基。
14.权利要求1的化合物，其中R9是甲基。
15.权利要求1的化合物，其中所述双键存在。
16.权利要求1的化合物，其是(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐或其药物上可接受的盐。
17.权利要求1的化合物，其是2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸或其药物上可接受的盐。
18.权利要求1的化合物，其是(E)-2-[3[(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸或其药物上可接受的盐。
19.权利要求1的化合物，其是(E)-2-[3[(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物或其药物上可接受的盐。
20.权利要求1的化合物，其是2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-3-烯酰氨基]苯甲酸或其药物上可接受的盐。
21.权利要求1的化合物，其是(E)-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)丁-2-烯酰氨基]苯甲酸钠盐或其药物上可接受的盐。
22.权利要求1的化合物，其是(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸或其药物上可接受的盐。
23.权利要求1的化合物，其是(E)-5-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物或其药物上可接受的盐。
24.权利要求1的化合物，其是(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸或其药物上可接受的盐。
25.权利要求1的化合物，其是(E)-4-氯-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸锂盐半水合物或其药物上可接受的盐。
26.权利要求1的化合物，其是(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]烟酸或其药物上可接受的盐。
27.权利要求1的化合物，其是(E)-5-甲氧基-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸或其药物上可接受的盐。
28.权利要求1的化合物，其是(E)-2-[2-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)丙酰氨基]苯甲酸二乙基氨基甲酰基甲酯或其药物上可接受的盐。
29.一种药物组合物，该组合物含有下式化合物或其药物上可接受的盐
其中R1、R2和R3独立地是氢、氰基、C1-10全卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10全卤代烷基；条件是(1)R1、R2和R3不可同时为氢，和(2)当R1和R2是氢时，R3不可是间-CF3；R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C6-12芳基和C6-12芳烷基，条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳。
30.一种减缓平滑肌收缩的不利作用的方法，该方法包括给需要的患者施用下式化合物或其药物上可接受的盐
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷基氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-12链烯基、C6-12芳基、C6-12芳烷基；条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳。
31.权利要求1的方法，其中所述平滑肌的不利收缩引起尿失禁。
32.权利要求1的方法，其中所述平滑肌的不利收缩引起肠过敏综合症。
33.权利要求1的方法，其中所述平滑肌的不利收缩引起哮喘。
34.权利要求1的方法，其中所述平滑肌的不利收缩与充血性心力衰竭、高血压、心绞痛和心律失常有关。
35.权利要求1的方法，其中所述平滑肌的不利收缩与脑血管疾病有关。
36.一种激活患有与钾通道活性不足有关的病症的患者中平滑肌细胞钾通道的方法，该方法包括给需要的患者施用下列式(I)化合物或其药物上可接受的盐
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷基氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-12链烯基、C6-12芳基、C6-12芳烷基；条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳。
37.权利要求36的方法，其中所述患者患有焦虑症、脑缺氧或神经变性疾病。
38.一种使患有与不良氯通道活性有关的病症的患者中平滑肌细胞的氯通道被阻断的方法，该方法包括用治疗有效量的下列式(I)化合物或其药物上可接受的盐治疗所述患者
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地是氢、COOR15、卤素、硝基、氰基、C1-10烷氧基、C1-10卤代烷氧基、磺酸、C1-10烷基磺酰基、C6-12芳基磺酰基、C6-12芳烷基磺酰基、C1-10烷基亚磺酰基、C6-12芳基亚磺酰基、C6-12芳烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、C1-10烷基磺氨基、C6-12芳基磺氨基、C1-10链烷酰基、C6-12芳酰基、C6-12芳烷酰基、氨基、C1-10烷基氨基、C2-10二烷氨基、C6-12芳烷基氨基、C6-12芳基氨基、甲酰氨基、C1-10烷基甲酰氨基、C6-12芳基甲酰氨基、C1-10卤代烷基、C1-10烷基、C2-12链烯基、C6-12芳基、C6-12芳烷基；条件是R4和R5中的至少一个是COOR15；R9是氢、C1-10烷基和C1-10卤代烷基；R10是氢、C1-10烷基、C1-10卤代烷基或C2-12亚烷基；R15是氢、金属阳离子、乙酰氨基、烷氧基乙酰基或能在体内转化为所述羧酸基团的相应基团；虚线是可供选择的双键；条件是当R10是亚烷基基团时，所述双键不存在；和W是氮或带氢或者如上定义的R4、R5或R6的碳。
39.权利要求38所述方法，其中所述病症是尿失禁、膀胱过敏疾病/肠过敏疾病、哮喘、高血压、中风、充血性心力衰竭、心绞痛或心律失常。
全文摘要
用于治疗与经钾通道和氯通道调节的平滑肌收缩有关的疾病的式(Ⅰ)化合物或其药物上可接受的盐:其中R
文档编号C07C233/55GK1273579SQ98809866
公开日2000年11月15日 申请日期1998年8月3日 优先权日1997年8月5日
发明者J·R·伦诺克斯, S·A·安塔尼, J·A·布特拉 申请人:美国家用产品公司