高效植物生长调节剂的微流电色谱分离方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种高效植物生长调节剂的微流电色谱分离 方法。
【背景技术】
[0002] 植物生长调节剂，是用于调节植物生长发育的人工合成化学物质，主要分为植物 生长促进剂、植物生长延缓剂、植物生长抑制剂，其中1- (2-氯-4-吡啶基）-3-苯基脲属于 苯脲类细胞分裂素，1-对氯苯基-2-(1，2, 4-三唑-1-基）-4, 4-二甲-3-戊醇属于内源赤 霉素合成的抑制剂，2, 4-二氯苯氧乙酸属于生长素类似物，在实际生产中应用广泛。
[0003] 关于植物生长调节剂的检测，国内外已建立了多种方法，主要为高效液相色谱法、 气相色谱质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等。对于1_(2_氯-4-吡啶基）-3-苯基脲、 1-对氯苯基-2- (1，2, 4-三唑-1-基）-4, 4-二甲-3-戊醇和2,4-二氯苯氧乙酸，目前主要 为反相液相色谱法和液相-质谱联用法。对于所述的极性植物生长调节剂，特别是强极性 的可离子化植物生长调节剂(如，2,4-二氯苯氧乙酸)而言，常规反相色谱保留作用较弱，单 一色谱分配作用难以实现高分辨分离。结合质谱技术，采用分子碎片质谱信息二次分辨，有 助于提高分离检测的准确性，但是仪器技术复杂、成本高。
[0004] 微流电色谱，包括分离功能柱，作为一种新兴的色谱微分离技术。整体柱作为新兴 的分离功能材料，固定相结构稳定，固定相拥有大量纳米中孔和微米通孔构型，溶质洗脱传 输速率快，区带扩散效应小；整体柱表面键合功能基团丰富、反相/亲水作用、离子交换作 用强、生物兼容性良好，对极性植物生长调节剂在柱分离具有明显优势；同时，微流电色谱 综合了高压电场驱动和微流液相分配的双重作用，溶质洗脱迁移不仅存在固定相和流动相 间的分配作用，而且受到电渗流的驱动作用，分离过程快速高效。
【发明内容】
[0005] 本发明目的在于提供一种高效植物生长调节剂的微流电色谱分离方法，基于亲水 作用整体柱为分离柱，在柱施加高压电场和微流液相分析模式，应用电渗流和流体压力驱 动、电泳分离、亲水_离子交换的多重作用，实现高效植物生长调节剂的快速分离。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种高效植物生长调节剂的微流电色谱分离方法，以亲水作用整体柱为分离柱，在分 离柱上同时施加高压电场和微流液相分析模式，应用电渗流和流体压力驱动、电泳分离、亲 水-离子交换的多重作用模式，实现高效植物生长调节剂的快速分离。
[0007] 所述商风险植物生长调节剂为1- (2_氯_4_批陡基）_3_苯基脈、1-对氯苯 基-2-(1，2,4_三唑-1-基）-4, 4-二甲-3-戊醇和2, 4-二氯苯氧乙酸。
[0008] 所述分离柱是以甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯 酸酯为交联剂的有机聚合整体柱。
[0009] 应用以甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯酸酯为交 联剂的聚合整体柱进行分析的条件包括：以体积比80:20的乙腈与甲酸铵-氨水缓冲溶液 的混合液为流动相，分离电压-15kV，液相泵压力750psi，流速为0. 05mL/min; 所述甲酸铵-氨水缓冲溶液的pH值为3. 00,其中甲酸铵的浓度为2. 50mmol/L。
[0010] 所述以乙以甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯酸酯 为交联剂的聚合整体柱中各组分质量百分数为：甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐占 12%-18%，季戊四醇三丙烯酸酯占2%-8%，引发剂占1%，致孔剂占79% ; 所述引发剂为偶氮二异丁腈； 所述致孔剂为环己醇和乙二醇的混合物，其中环己醇占致孔剂重量的45%-65%。
[0011] 本发明的显著优点在于： 本发明依靠微流电色谱系统，基于电渗流、电泳和液相色谱洗脱三者综合作用，应用极 性离子单体（甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐）和极性交联剂(季戊四醇三丙烯酸 酯）聚合的整体柱，通过优化致孔剂(环己醇和乙二醇）比例，将会改善极性交联剂和离子单 体在聚合混合物中的溶解度，整体柱表面可修饰上丰富的季铵离子、羧基，能够提供强的反 向电渗流、亲水作用、离子交换作用，可以实现不同电荷性质的植物生长调节剂的电渗流和 流体压力混合驱动、电泳分离及亲水-离子交换作用的多重作用，不仅可以加快分离速度， 同时可以基于强极性功能固定相，提高对极性较强的植物生长调节剂的保留作用，提高柱 效和响应信号强度，克服常规反相色谱柱出峰慢、对于强极性物质分离度不足的缺陷，满足 不同电荷强度的植物生长调节剂的高效分离要求。
【附图说明】
[0012] 图1是植物生长调节剂的反相填充柱分离谱图。
[0013] 图2是植物生长调节剂的聚合整体柱分离谱图。
[0014] 以上图中1. 1-(2_氣_4_批陡基）_3_苯基脈；2. 1_对氣苯基_2_ (1，2, 4_二 唑-1-基）-4, 4-二甲-3-戊醇；3. 2, 4-二氯苯氧乙酸。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0016] 实施例1: 基于微流电色谱，应用十八烷基键合硅胶毛细管填充柱，对高效植物生长调节剂进行 离析，其方法具体为：在毛细管柱末端施加负电荷高压电场和进样端上施加液相泵辅助压 力，进样体积20iiL，以乙腈：甲酸铵-氨水缓冲溶液（2.50mmol/L，pH3.00)=80:20 (v/ v)为流动相，分离电压-15kV，液相泵辅助压力750psi，流速0.05mL/min, 植物生长调节剂的微流电色谱分离如图1，整个流程约7min，洗脱峰依次为：峰1为 1- (2-氯-4-吡啶基）-3-苯基脲；峰2为1-对氯苯基-2- (1，2, 4-三唑-1-基）-4, 4-二 甲-3-戊醇；峰3为2, 4-二氯苯氧乙酸。
[0017] 实施例2: 以甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂，按 照以下配方组成，配制聚合反应液。整体柱A-E的具体配方如下：
【主权项】
1. 高效植物生长调节剂的微流电色谱分离方法，其特征在于：以亲水作用整体柱为分 离柱，在分离柱上同时施加高压电场和微流液相分析模式，应用电渗流和流体压力驱动、电 泳分离、亲水-离子交换的多重作用模式，实现高效植物生长调节剂的快速分离。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离柱是以甲基丙烯酰氧乙基三甲 基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂的有机聚合整体柱。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高风险植物生长调节剂为 1- (2-氯-4-吡啶基）-3-苯基脲、1-对氯苯基-2- (1，2, 4-三唑-1-基）-4, 4-二甲-3-戊 醇和2, 4-二氯苯氧乙酸。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：进行分离的条件包括：以甲基丙烯酰氧 乙基三甲基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂的聚合整体柱为分离柱， 以体积比80:20的乙腈与甲酸铵-氨水缓冲溶液的混合液为流动相，分离电压为-15 kV，液 相泵压力为750 psi，泵流速为0? 05 mL/min ; 所述甲酸铵-氨水缓冲溶液的pH值为3. 00,其中甲酸铵的浓度为2. 50 mmol/L。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：按质量百分数之和为100%计，聚合整体 柱中各组分质量百分数为：甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐占12%_18%，季戊四醇 三丙烯酸酯占2%-8%，引发剂占1%，致孔剂占79% ; 所述引发剂为偶氮二异丁腈； 所述致孔剂为环己醇和乙二醇的混合物，其中环己醇占致孔剂重量的45%-65%。
【专利摘要】本发明公开了一种高效植物生长调节剂的微流电色谱分离方法，应用以甲基丙烯酰氧乙基三甲基铵甲基硫酸盐为单体、季戊四醇三丙烯酸酯为交联剂的聚合整体柱作为分离柱，在柱施加高压电场和微流液相分析模式，应用电渗流和流体压力综合驱动、电泳分离、亲水-离子交换等多重作用模式，实现高效植物生长调节剂的连续分离。
【IPC分类】G01N30-06
【公开号】CN104614469
【申请号】CN201510058412
【发明人】林旭聪, 王绪培, 谢增鸿
【申请人】福州大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月5日