基于两性分子共聚物和活性成分的改性释放的微颗粒以及含有它们的药物制剂的制作方法

专利名称：：基于两性分子共聚物和活性成分的改性释放的微颗粒以及含有它们的药物制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及活性成分(AP)(尤其是蛋白质和肽活性成分的)新型的传送体，本发明还涉及含有所述AP传送体的改性释放的药物制剂。这些制剂有多种治疗(人用和兽用)用途。
背景技术：
：本说明书中所用的术语AP表示至少一种活性成分。术语"改性释放"表示延长和域延迟和/或脉冲释放。更具体地说，这种作为本发明目的的新型的AP传送体是由两性分子聚合物(例如疏水性基团改性的聚氨基酸)形成的微颗粒。这些微颗粒含有和所述聚合物结合的至少一种AP，并且能够以胶体悬浮液的形式或干燥形式提供。在药用AP，尤其是治疗用肽/蛋白质的延长释放领域中，在很多情形下，目的是尽可能在患者体内重现接近健康受试者的观察值的血浆肽或蛋白浓度。这个目标与蛋白质在血浆里的存在期短相抵触，因此需要重复注射治疗蛋白质。故治疗蛋白质的血浆浓度具有"锯齿"形，其特征是高浓度的峰和极低浓度的谷。峰浓度远大于健康受试者体内的基础浓度，由于治疗蛋白质(如白细胞介素IL2)的高毒性，其具有非常显著的有害效应。另外，谷浓度低于治疗效果所需的浓度，所以患者接受的治疗覆盖较少，而承受严重的长期副作用。因此，为在患者体内重现接近其治疗的理想值的治疗蛋白质血浆浓度，所讨论的药物制剂必须允许延长释放治疗蛋白质，以限制血浆浓度随着时间变化。而且，这种活性制剂优选应该满足以下为所属领域的技术人员所熟知的规范1-延长释放活性的和非变性的治疗蛋白质(例如人或合成蛋白质)以使血浆浓度保持在治疗水平；2-足够低的注射粘度以便于注射；3-生物适应的和生物可降解的形式；114-无毒并且无免疫原性的形式；5-具有优良的局部耐受性的形式。为了实现这些目标，现有技术提出的最佳方法之一是开发治疗蛋白质的延长释放形式，其由加载治疗蛋白质的纳米颗粒的低粘度液体悬浮液构成。这些悬浮液有助于天然的治疗蛋白质的给药。因此，所述治疗蛋白质和含有疏水性基团和亲水性基团的共聚氨基酸的纳米颗粒结合。专利US-B-5904936描述了一种两性分子聚氨基酸共聚物的平均尺寸0.01-0.5pm的亚微米颗粒(NPV)和平均尺寸0.5-20iim的微米颗粒(MPV)，所述共聚物包括至少两种类型的氨基酸，一种是中性和疏水性的，另一种是可电离的。在水性溶液中，蛋白质(如胰岛素)被自发地吸附到这些颗粒上。这种聚氨基酸共聚物是例如聚(L-亮氨酸-b-(L-谷氨酸钠))的嵌段共聚物。该专利公开了通过向聚-Leu/Glu的胶体悬浮液加入单价阳离子盐(硫酸铵)或多价阳离子盐(Fe^、Fe3+、Zn2+、Ca2+、Al2+、A产或Cu2+)、酸(HC1)或阳离子聚合物(聚赖氨酸)引发的NPV向MPV的聚集。专利申请WO-A-03/104303公开了两性分子的聚氨基酸，其含有天冬氨酸残基和/或谷氨酸残基，这些残基的至少一部分带有含有至少一个a-生育酚单元的接枝物(例如由合成或者天然来源的a-生育酚接枝的聚谷氨酸根或聚天冬氨酸根)。在水中，这些"疏水改性的"均聚氨基酸自发地形成一种纳米颗粒胶体悬浮液，所述纳米颗粒在pH7.4的水性悬浮液中易于和至少一种活性蛋白质(胰岛素)相结合。根据US-B-5904936和WO-A-2005/033181，由悬浮液"矢量化的"活性蛋白质(如胰岛素)的体内释放时间能够增加。在PCT申请WO-A-05/051416中公开的药物形式也部分实现了释放时间的增加。该专利申请公开了一种疏水改性的聚(L-谷氨酸钠)的纳米颗粒(0.001-0.5pm)的胶体悬浮液，其在一定浓度下注射，使得在皮下注射后，和内源性的白蛋白接触，在患者的注射部位形成凝胶体。然后这种蛋白质缓慢释放，通常超过一周的时间。然而，当给药的治疗蛋白质浓度相对高时，例如人生长激素的情形时，其释放时间只能局限在几天。通过提供一种用于AP延长释放的药物制剂有可能改进现有技术通过胃肠外途径(例如皮下)注射后，能够实现非变性并且高浓度(例如几mg/ml)的AP(例如治疗用蛋白质、治疗用肽和小分子)体内释放时间的延长，在物理化学和生理条件下均储存稳定。为了实现这个目的，可行的方法是按照WO05/051416，通过加入和两性分子聚氨基酸的可电离基团(IG)极性相反的多价离子的方法将制剂的纳米颗粒聚集在一起以提供一种微颗粒，所述离子以确定的比例存在。这导致特定微颗粒群体的选择，结合有AP的微颗粒能够使所述AP(例如蛋白质或肽)释放的时间得到显著延长。一些多价离子，例如Mg2+、Ca2+、Zn2+、Fe2+、Ci^+或它们的混合物和/或A产、F^+或它们的混合物使得这种用于AP延长释放的液体药物制剂具有极好的耐受性。例如，这种制剂可以含有基于合成来源的a-生育酚接枝的粒径为0.5-100pm的聚谷氨酸微米尺寸的颗粒的低粘度的水性胶体悬浮液，其含有多价离子Mg2+、Ca2+、Zn2+、Fe2+、Cu2+、Al3+或Fe3、其乘积r，如下式所定义，为0.3-10，g巾，n是所述多价离子的化合价，■[MI]是多价离子的摩尔浓度，■[IG]是可电离基团IG的摩尔浓度。这些选定的微米尺寸的颗粒来自大量两性分子共聚物纳米颗粒的聚集。加载AP(例如hGH)的微颗粒的悬浮液因此能够通过和多价离子Mg2、Ca2+、Zn2+、Fe2+、Cu2+、A产或Fe"的絮凝作用以及随后的陈化和洗涤生产。这种悬浮液可以随后冻干或雾化并且然后可以和水重构以产生一种能够现成用于注射的制剂。很明确这些干燥粉末形式的微颗粒在储藏方面具有优势。具体地说，它们应当能够增加这些微颗粒的物理稳定性和AP的稳定性。然而，在通过胃肠外途径将这些微颗粒粉末用于治疗应用时，难度在于当使用时能够容易地分散(或悬浮)这些粉末以获得重构的液体微颗粒形式，更具体地说，是一种悬浮液，它在室温下是稳定的，例如至少稳定几分钟，事实上平均至少稳定几十分钟。这种稳定性是人们想要的，尤其是为了能够易于操作这种重构的悬浮液。这种悬浮液能够易于通过连接在注射器或注射笔(胰岛素笔类型)上的空心针头而容易地注射也很重要。最后，还应当考虑到一个事实，即分散、操作和注射这种重构的悬浮液将由患者或医务人员进行。
发明内容在这种情形下，本发明的一个主要的目的是提供一种新型的微颗粒，其通过可生物降解的和水溶性的两性分子的聚合物的纳米颗粒(例如根据WO-A-05/051416中公开的那些制剂的类型)的聚集获得，这些微颗粒加载有AP，并且能够显示出改进的性质，尤其是干燥的固体形式，特别是关于它们被分散的能力("可分散性")，以及对于重构的悬浮液，其稳定性以及其易于操作和注射的能力。本发明的另一个目的是提供一种微颗粒，其通过可生物降解的和水溶性的两性分子的聚合物的纳米颗粒的聚集获得，所述微颗粒加载有AP，并且具有良好的分散性质，无论是在含水相中或者是在有机相中，同时保持所述微颗粒的完整性。本发明的另一个目的是提供一种微颗粒，其通过可生物降解的和水溶性的两性分子的聚合物的纳米颗粒的聚集获得，所述微颗粒加载有AP，并且其固体和干燥形式具有优良的稳定性。本发明的另一个目的是提供一种制备固体和干燥形式微颗粒的方法，而且这些微颗粒—通过可生物降解的和水溶性的两性分子的聚合物的纳米颗粒(例如根据WO-A-05/051416中公开的那些制剂的类型)的聚集获得，~>加载有AP，—并且如上述的目的所定义。本发明的另一个目的是提供一种制备固体和干燥形式微颗粒的方法，其类型为前面的目的中所定义，而且这种方法简单、经济以及是工业性质的。本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，其含有新型的微颗粒，所述微颗粒通过可生物降解的和水溶性的两性分子的聚合物的纳米颗粒(例如根据WO-A-05/051416中公开的那些制剂的类型)的聚集获得，而且这些微颗粒4加载有AP，—并且如上述的目的所定义。本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，其用于AP的延长释放，该制剂能够克服现有技术的缺陷，并且尤其能够在通过胃肠外途径(例如皮下)注射后，使非变性的AP(例如蛋白质、治疗用肽或小分子)的体内释放时间得到延长。本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，其能够在通过胃肠外途径(例如皮下)注射后，使高浓度(例如几mg/ml)的治疗用蛋白质或肽的体内释放时间得到延长。本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，用于延长AP的体内释放时间，其在物理化学和生理条件下均储存稳定。本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，用于延长AP的体内释放时间，其显示出以下性质中的至少一种生物相容性、生物可降解性、无毒性和良好的局部耐受性。本发明的另一个目的是提供一种药物制剂，用于延长AP的体内缓慢释放时间，所述制剂含有和至少一种AP自结合的两性分子聚合物PO的微颗粒(PO/AP微颗粒)，所述聚合物PO是带有疏水性基团(HG)和亲水性基团[优选至少部分电离的可电离基团(IG)]的水溶性可生物降解的聚合物，其在水中自发地形成胶体纳米微粒的悬浮液，这种聚合物PO是，例如一种聚氨基酸，其主链由天冬氨酸残基或谷氨酸残基形成，至少部分这些单元通过在链中和/或链端接枝至少一个疏水性基团HG而改性。本发明的另一个目的是提供一种药盒，用于重构前面所列目的所定义的制剂，这种药盒例如是使用简单的因此能够由病人或医务人员容易地使用。本发明的另一个目的是提供一种重构如前面所列目的所定义的制剂的方法，这种方法是，例如，操作简单的，尤其是对于病人或医务人员。本发明的另一个目的是提供一种固体药物制剂，用于AP的延长释放，尤其是一种用于肺部吸入和给药的干燥粉末形式其基于如前面所列目的定义的和至少一种AP结合的PO微颗粒；或者由如前面所列目的定义的制剂获得。为了实现这些目的，其中，在长期的勤奋研究之后，发明人的贡献在于以完全意外和预想不到的方式，发现了雾化基于两性分子PO(例如基于共聚氨基酸)和基于AP的制剂将获得非常稳定的干燥PO/AP微颗粒，其能够实现在液体介质中重构0.5-100微米大小的微颗粒的水性悬浮液。而且，发明人还对于开发从这些微颗粒重构悬浮液的方法作出了贡献，所述方法在水性液体相和有机液体相中都能够优化它们的分散。这是因为优质稳定易于获得的分散体是把这些重构自干燥PO/AP微颗粒的悬浮液用作可注射制剂的前提。雾化是人们所知的从由颗粒作为成分材料的溶液或悬浮液生产干燥颗粒的方法。雾化(或喷雾干燥)是这种溶液或悬浮液的雾状小液滴在热空气流或热的惰性气体流中非常快的蒸发。在制药领域，雾化可能由于其带入了热应力而成为问题，所述热应力证明对一些热敏感的AP完全不适用，例如基于蛋白质或其它肽化合物的AP。因此，依靠雾化以获得基于赋形剂和AP的干燥颗粒不是显而易见的，除非通过选择能够避免肽AP变性(实际上是使其最小化)的赋形剂。因此，专利申请US-A-2005/0158392公开了通过雾化加载了肽AP的固体亲水性微颗粒的制备方法。这种雾化在于雾化一种水性溶液，其含有透明质酸、AP和亲脂性表面活性齐tj(例如卵磷脂)，事实上甚至另一种Tween80类型的表面活性剂，或者，在第一步，雾化一种水性溶液，其含有透明质酸、AP和可选的一种Tween80类型的表面活性剂以获得一种初级颗粒，然后在第二步，雾化一种亲脂性表面活性剂(例如卵磷脂)的醇性溶液，其中分散了所述的初级颗粒。该美国申请的重点在于透明质酸和亲脂性表面活性剂(例如卵磷脂)的保护性联合，后者的目的在于形成一层用于基于透明质酸和基于AP的微颗粒的覆盖膜。这份文件既未提及甚至也没有暗示两性分子PO的使用，以及两性分子的共聚氨基酸作为AP的赋形剂或者传送体和AP形成微颗粒。在Maa等人J.Pharm.Sci.,87(2)，152-159,1988的论文中描述了其它的雾化例子。根据该论文，所述AP(人生长激素)在雾化以产生微颗粒之前在生物可降解的表面活性剂存在下和锌复合。因此，很明显蛋白质雾化的操作很困难，它要求使用含有多种赋形剂的复合制剂，以在过程中保护所述AP并且保证其储存的稳定性，这一点对于一些敏感的分子，如人生长激素(hGH)尤其是非常重要的。而且，由于现有技术没有教导关于设计用于AP延长释放的干燥微颗粒在液体中分散和稳定的难题(尤其是关于两性分子PO的微颗粒)，发明人的贡献是巨大的。本发明的第一方面涉及含有至少一种活性成分(AP)的聚合物(PO)的微颗粒，所述聚合物PO，是带有疏水性基团(HG)和亲水性基团的水溶性生物可降解的两性分子(共)聚合物，，在pH7.0，等渗条件下，在水中自发地形成纳米颗粒的胶体悬浮液，并且和所述AP非共价地结合；其中微颗粒a.通过雾化含有至少一种AP的PO的溶液或胶体悬浮液获得，b.以T试验测得的尺寸为0.5-100微米，优选l-70微米，更优选2-40微米，c.并且在"可分散性"试验DP1中在胶体悬浮液中是可分散的。本发明第二方面涉及一种制备PO微颗粒的方法，其与至少一种活性成分(AP)相结合，这些PO/AP微颗粒尤其是根据本发明第一方面所定义的那些，i该聚合物PO是带有疏水性基团(HG)和亲水性基团[优选至少部分电离的可电离基团(IG)]的水溶性可生物降解的两性分子(共)聚合物，在pH7.0，等渗条件下，在水中自发地形成纳米颗粒的胶体悬浮液，并且和所述AP非共价地结合；ii所述微颗粒以T试验测得的尺寸为0.5-100微米，优选l-70微米，更优选2-40微米，其主要包括雾化含有AP的PO的溶液或胶体悬浮液。根据一个有趣的实施方式，所述通过雾化获得的微颗粒再分散于基本上是水性的液体介质中(优选含有多价离子作为分散方法)，然后冻干所获得的分散体。本发明第三方面涉及一种液体药物制剂，用于AP的延长释放，其含有一种"低"粘度的胶体悬浮液，所述胶体悬浮液基于含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是根据本发明第一方面所定义的那些或者是根据本发明第二方面所定义的方法获得的那些。本发明第四方面涉及一种重构药盒，尤其用于重构根据本发明第三方面定义的制剂，其包括-含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是根据本发明第一方面所定义的那些或者是根据本发明第二方面所定义的方法获得的那些；，和重构液体，其选自以下组4基本上水性的液体；4基本上有机并且与水互溶的液体；—以及基本上有机并且与水不互溶的液体。本发明第五方面涉及一种重构方法，尤其用于重构根据本发明第三方面定义的制剂，其主要包括混合3含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是根据本发明第一方面所定义的那些或者是根据本发明第二方面所定义的方法获得的那些.3和一种重构液体，其选自以下组—基本上水性的液体；—基本上有机并且与水互溶的液体；—以及基本上有机并且与水不互溶的液体；，并且搅拌这种混合物。本发明第六方面涉及一种固体药物制剂，用于AP的延长释放，其含有用于吸入和肺部给药的干燥的粉末形式參基于含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是根据本发明第一方面所定义的那些或者是根据本发明第二方面所定义的方法获得的那些；，或者根据本发明第三方面所定义的制剂获得。优点不愿被理论束缚，也可以认为能够聚集起来以提供疏水性区域的所述聚合物PO的疏水性基团在所述AP改性释放的过程中起了重要的作用，如同在后者的稳定中一样。也可以假设所述两性分子聚合物PO的疏水区域和所述AP(尤其是蛋白质类型的)之间发生了物理(非共价滩互作用。所述蛋白质对于所述聚合物的强亲和18力导致皮下给药后其释放延长。这种释放机理尤其和聚乳酸、聚乳酸-乙二醇酸的微颗粒中观察到的不同，并且可以可选地与聚乳酸、聚乳酸-乙二醇酸的微颗粒中观察到的结合起来，或者也可以和透明质酸钠的那些结合起来，其中所述AP的释放主要与所述活性成分的扩散和所述颗粒的分解/蚀耗有关。所述蛋白质对于所述聚合物PO的亲和力使得能够限制蛋白质的聚集现象以及其它在雾化过程中可能出现的破坏性情况的发生，而不必加入其它稳定剂(例如糖、表面活性剂等)。PO的这种保护效果还使得能够容易获得储存稳定的液体制剂。最后，当PO主要是无定形性质时(尤其当PO是聚氨基酸时)，当它们以干燥形式储存时，这给所述微颗粒带来优异的物理稳定性。因此，很明显这些两性分子聚氨基酸PO的存在带来了控制所述AP改性释放以及关于聚集或者可能的化学分解的稳定化的新方法。而且，所述聚合物PO的两性分子性质使得能够在雾化过程中完全使用含水相或者完全使用有机挥发相或使用含水和有机相的挥发性混合物，这给方法的实施带来了极大的灵活性。'而且，由于其化学性质，这些由所述(共)聚氨基酸型PO形成的微颗粒是生物可降解的和生物相容性的，并且总体来说具有良好的局部耐受性。关于制备根据本发明的所述固体和干燥微颗粒的方法，即雾化，其在本质上也容易转变成工业化规模。最后，本发明的微颗粒以及含有它们的制剂是无毒的并且局部耐受良好。定义在本申请的全文中，连词"或"应当理解为包括"这个或另一个或两者"的意思。因此，例如可以含有至少一个杂原子(O、N或S)或至少一个不饱和键的直链烷基可以具有两个杂原子，N和S，和一个不饱和键。在本申请的全文中，术语"亚微米-等级的颗粒"或"纳米颗粒"和根据本发明的微颗粒不同，指颗粒尺寸(以下面描述的T试验测定)为，例如大于或等于lnm并且小于500nm，优选5-250nm。在本申请的全文中，根据本发明，术语"聚氨基酸"同时覆盖天然的聚氨基酸与合成的聚氨基酸，以及含有2-20个氨基酸残基的低聚氨基酸，和含有大于20个氨基酸残基的聚氨基酸。聚氨基酸主链优选的氨基酸残基是具有L构型的那些，键类型优选a型的，键存在于氨基酸的a氨基和另一个a-氨基酸的l位的羧基之间。根据本发明，术语"蛋白质"指例如蛋白质和肽，无论其为寡肽或多肽。这种蛋白质或这种肽可以是改性或未改性的，例如，通过接枝一个或多个聚乙二醇基团改性。在本申请的全文中，根据本发明，术语"结合"(名词或动词)用于描述一种或多种AP和聚合物PO之间的关系，尤其是指所述活性成分或多个成分通过非共价键和一种或多种聚合物PO(s)结合，例如通过静电或疏水相互作用或氢键或立体相互位阻。本发明的第一方面微颗粒特.征M:…在雾化之前，AP(例如一种蛋白质或其它肽化合物)和一种两性分子聚合物PO(例如一种两性分子(共)聚氨基酸)的结合事实上显示出许多同时关于方法本身和通过雾化生产的微颗粒的性质方面的优点。物理雾化处理可以使所得的干燥固体微颗粒具有独特的结构，其带来了大量优良的性质。这种结构通过这种雾化的生产方法以及这些优良的性质所附带的功能正确地进行表征。授.征.0〕;....该特征由下面描述的T试验客观地定义。通过激光衍射测定微颗粒尺寸的T试验a-TO试验，其中微颗粒是干燥形式的1设备和操作条件激光颗粒检测仪MalvernMastersizer2000单位Hydro2000SM液体通路分散载体流体体积150ml波长(蓝和红)466和632nm搅拌速度2400rev/min分析范围0.02,2000光学模型(Mie理论)所使用的折射率值n流体=1.39+i0分散流体(水)11聚苯乙烯胶乳=1.59+iO聚苯乙烯胶乳触发分析的遮拦值5%-20%获取时间10s2样品制备-制备0.1Q/。的Span80庚垸溶液(称取0.01gSpan80粉末于20ml烧瓶中，然后加入庚烷，控制最终的重量为10g)，-称取约6mg粉末于5ml试管中，-加入0.7g含有0.P/QSpan80的庚烷于该试管中，-试管置于超声池中2分钟以彻底分散粉末。3样品分析清空储存于静止的液体-通路分散系统中的循环流体，然后加入庚垸。Hydro2000SM转子的搅拌速度单位设置在2400rev/min。测试在前面提到的试验条件下开始-校正激光束，-记录背景噪音。这些步骤之后操作员按照以下方式加入分析样品滴加稀释的样品(用Pasteur管)，直到遮拦值为5%-20%,开始捕获。获得数据和D50有关，它是一个数值，即被分析目标中直径小于该值的占50%。在三个不同样品中检测D50值三次，然后取其平均值。21b-Tl试验，其中微颗粒是水性分散体形式1设备和操作条件<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>2样品制备待分析样品加入到样品池中或者高散射样品也可以可选地用水再稀释。3样品分析清空储存于静止的液体-通路分散系统中的循环流体，然后加入新鲜的去离子水。Hydro2000SM转子的搅拌速度单位设置在2400rev/min。测试在前面提到的试验条件下开始-校正激光束，-记录背景噪音。这些步骤之后操作员按照以下方式加入分析样品滴加稀释的样品(用Pasteur管)，直到遮拦值为5%-20%，开始捕获。获得数据和D50有关，它是一个数值，即被分析目标中直径小于该值的占50%。在三个不同样品中检测D50值三次，然后取其平均值。c-T2试验，其中微颗粒是有机溶剂中的分散体形式该试验和T1试验类似。然而，在本试验中，有必要将水替换成和分散液完全互溶的并且颗粒在其中不膨胀的溶剂。在多个实例中是使用了庚垸。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>2样品制备为制备待分析样品，400pl待分析样品必须用600jil庚垸在5ml试管中稀释，然后该样品必须搅拌10秒(10士5)。3样品分析清空储存于静止的液体-通路分散系统中的循环流体，然后加入新鲜的去离子水。Hydro2000SM转子的搅拌速度单位设置在2400rev/min。测试在前面提到的试验条件下开始-校正激光束，-记录背景噪音。这些步骤之后操作员按照以下方式加入分析样品滴加稀释的样品(用Pasteur管)，直到遮拦值为5%-20%，开始捕获。获得数据和D50有关，它是一个数值，即被分析目标中直径小于该值的占50%。在三个不同样品中检测D50值三次，然后取其平均值。该特征由下面描述的DP1试验客观地定义。粉末的"可分散性"DP1试验大约30mg的颗粒粉末加入到带有隔板的3ml烧瓶中。然后测定颗粒的精确重量(w,)。用装有25Gx5/8(0.5x16mm)针头(例如BDMicrolance3型号)的1ml注射器通过隔板将1ml重构溶液加入到粉末中，然后该烧瓶手工间歇地搅拌15分钟。烧瓶称重以确定所加入溶液的精确重量(W2)。最后，用装有25G针头的1ml注射器(BraunInjeckt-FLuer1ml型，ref.9166017V)吸取全部悬浮液，然后倾入到预先称皮重的另一个烧瓶中，检测所回收溶液的重量W3。根据Tl或T2试验(取决于分散液体是水性溶剂或有机液体)测定分散体的质量方面(分散的倾向性、不透明性、溶液的视觉均一性)、通过25G针头注射的可能性、溶液的回收百分数％=w3xl00/(Wl+w2)，以及微颗粒的尺寸。如果符合以下条件，则认为粉末在液体中的分散性质良好■所得悬浮液含有平均直径为2-40pm的微颗粒，"悬浮液的外观是均一的，"能够通过25G针头注射，以及至少80%的悬浮液可被回收。除特征(a)、(b)和(c)外，根据本发明的微颗粒可以由它们在ST1试验和/或ST2试验中是稳定的事实客观地定义。ST1试验，用于测定干燥微颗粒的物理稳定性干燥雾化的粉末中的微颗粒的尺寸在粉末雾化后的一周内根据TO试验用激光颗粒尺寸检测仪测定。然后颗粒置于3(TC烘箱中一周。"对照"样品在5"C放置。分散后按照和时间tO相同的条件再次测定尺寸。比较陈化前后的颗粒分布。ST2试验，用于测定悬浮液中颗粒的胶体稳定性微颗粒粉末用磁力搅拌分散在分散液体中，其浓度为观察其稳定性的理想浓度，然后用中速磁力搅拌至少2h(t0检测)。根据T1或T2试验在激光颗粒尺寸检测仪上根据分散介质(水性或有机)测定颗粒的尺寸。悬浮液然后于5T:下放置7天。沉淀的颗粒搅拌几分钟分散(直至所得悬浮液视觉上是均一的)。分散后按照和时间to相同的条件再次测定尺寸。聚合物PO根据本发明的聚合物PO是带有疏水性基团HG和亲水性基团[优选部分电离的可电离基团IG]的水溶性生物可降解聚合物。和链的剩余部分相比，疏水性基团HG的数目可以少一些，并且可以从侧面连接到链上或者插在链中，并且可以随机分布(无规共聚物)或者以序列或者接枝的形式分布(嵌段共聚物或连续共聚物)。根据本发明一个优选的实施方式，聚合物PO是两性分子(共)聚氨基酸。PO的这种选择提供了和蛋白质/肽类型AP优良的相容性。因此能够极大地简化蛋白质/肽类型AP和聚合物PO的起始溶液或者悬浮液的组成。这种起始溶液或悬浮液可以仅含有在水性和/或有机相中的AP和PO。对于这样的起始溶液或悬浮液，不含有其它成分使得能够在雾化前过滤(通过0.2pm的滤膜)，这使得能够在无菌条件下操作后者。根据本发明一个优选的实施方式中，PO选自两性分子(共)聚氨基酸及其混合物。优选地，根据本发明的聚氨基酸是低聚物或均聚物，含有谷氨酸或天冬氨酸重复残基，或共聚物体，含有这两种类型氨基酸残基的混合物。这些聚合物中所述的残基是具有D或L或D/L构型的氨基酸，就谷氨酸或谷氨酸残基来说，其通过它们的a或Y位结合，就天冬氨酸或天冬氨酸残基来说，其通过它们的a或(3位结合。根据本发明一个特别优选的实施方式，聚合物PO是由天冬氨酸残基和/或谷氨酸残基形成的聚氨基酸，至少一部分这些残基中带有包含至少一个疏水性基团HG的接枝。PCT专利申请WO-A-00/30618中特别描述了这些类型的聚氨基酸。根据第一种可能性，所述PO由下列通式(I)(基团-COOR包括羧基和113之间的键是离子键-COO'+R3的形式)定义<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>其中■R1代表H、C2到C1Q的直链垸基或C3到C1Q的支链垸基、苄基和-Rt[HG]，或者■NHI^是末端氨基酸残基；■R2代表H、C2到C1()的直链酰基或C3到C1()的支链酰基、焦谷氨酸根基团或-R、[HG];■RS是H，或者■+113优选自包括以下的组-金属阳离子，优选自包括钠、钾、钙和镁的亚组，-有机阳离子，优选自包括以下的亚组基于胺的阳离子，基于低聚胺的阳离子，基于聚胺的阳离子(特别优选聚乙烯亚胺)，基于氨基酸的阳离子，优选自包括基于赖氨酸或精氨酸的阳离子的组，-或者阳离子聚氨基酸，优选自包括聚赖氨酸和低聚赖氨酸的亚组；■W代表直接键或基于1到4个氨基酸残基的"间隔子"；■独立地，A代表-(:112-基团(天冬氨酸残基)或-0^2-(3112-基团(谷氨酸残基)；■n/(n+m)是摩尔接枝率，在pH为7，25'C时溶于水中时PO的摩尔接枝率值足够低，以形成PO亚微米尺寸颗粒的胶体悬浮液；n/(n+m)优选为1-25mol%，更优选1-15mol%;■n+m是聚合度，其为10-1000，优选50-300;■HG代表含有6-30个碳原子的疏水性基团。在本发明一个优选的实施方式中，所述疏水性基团HG选自含有以下类型的烷氧基的组一OCH2(CH2-CH2)3.8~CH3、油烯基、生育酚基或胆甾醇基，并且W代表一个单键。根据第二种可能性，PO对应于以下通式(II)、(ni)和(IV)(基团-COORS包括羧基和W之间的键是离子键-COO'+W的形式)中的一种COOR3',COOr3'OH(IV)其中■HG代表含有6-30个碳原子的疏水性基团；■R^是直链的二价CVC6亚烃基链；■R3'是H，或者■+113'优选自包括以下的组-金属阳离子，优选自包括钠、钾、钙和镁的亚组，-有机阳离子，优选自包括以下的亚组:基于胺的阳离子，基于低聚胺的阳离子，基于聚胺的阳离子(特别优选聚乙烯亚胺)，基于氨基酸的阳离子，优选自包括基于赖氨酸或精氨酸的阳离子的组，27-或者阳离子聚氨基酸，优选自包括聚赖氨酸和低聚赖氨酸的亚组；■R5G是直链的二价CVQ亚烃基链，其中一个或两个优选位于R5G每个末端的亚甲基单元可以独立地被-O-或-NH代替；■R"代表直接键或基于1到4个氮基酸残基的间隔子；■独立地，A代表-CH2-基团(天冬氨酸残基)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸残基)；■n，+m'或n"是聚合度，其为IO-IOOO，优选50-300。根据一个优选的可供选择的形式，W代表一个单键。根据第三种可能性，PO是基本上中性的共聚羟基烷基谷氨酰胺(优选地垸基是乙基)，其含有多个相同或互不相同的疏水性基团(HG)侧基。所述共聚羟基烷基谷氨酰胺还带有羟基烷基胺基团。这些羟基垸基胺基团优选通过酰胺键结合到所述共聚物。可用于酰胺化谷氨酸残基的羧基并用于形成所述共聚羟基烷基谷氨酰胺的这些羟基垸基胺基团可以相同或者互不相同，例如选自以下基团2-羟基乙基胺、3-羟基丙胺、2,3-二羟基丙胺、三(羟基甲基)氨基甲垸和6-羟基己胺。优选地，所述疏水性基团HG中的至少一个包括在疏水性接枝物中，所述疏水性接枝物含有至少一个间隔接合点(或单元)(间隔子)，其能将所述疏水性基团HG连接到共聚谷氨酸的链上。该接合点可以包括，例如至少一个直接的共价键或至少一个酰胺键或至少一个酯键。例如，该接合点可以尤其属于以下组的类型氨基酸残基、氨基醇的衍生物、聚胺的衍生物(例如二胺)、多元醇的衍生物(例如二醇)和多羟基酸的衍生物。所述HG和共聚谷氨酸或聚垸基谷氨酰胺链的接枝可以包括使用能够键合到所述共聚谷氨酸或共聚羟基烷基谷氨酰胺链的HG前体。所述HG的前体实际上没有限制，选自包括醇类和胺类的组，这些化合物能够容易地被本领域的技术人员功能化。关于这种共聚羟基垸基谷氨酰胺(优选的垸基是乙基)的细节参见FR-A-2,881,140。根据一个优选的可供选择的形式，尤其根据上述三种可能性的至少一种，所述PO的所有或部分疏水性基团HG独立地选自包括以下基团的组■含有6到30个碳原子的直链或支链烷氧基并且其可以含有至少一个杂原子(优选O、N或S)和/或至少一个不饱和键，■含有6到30个碳原子的垸氧基，其具有一个或多个退火的环烷基(cycloalkylesannel6s)，并且可选地，含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O、N或S)，■含有7到30个碳原子的烷氧基芳基或芳氧基垸基，其含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O、n或S)。根据一个优选的可供选择的形式，尤其根据上述三种可能性的至少一种，所述疏水性基团HG选自含有以下类型的垸氧基的组-OCH2(CH2-CH2)3.8~€H3、油烯基、生育酚基或胆甾醇基，并且R"代表一个单键。根据另一个优选的可供选择的形式，尤其根据上述三种可能性的至少一种，所述PO的n个HG基团各自独立地代表下式的单价基团(HG)其中-RS代表甲基(丙氨酸)、异丙基(缬氨酸)、异丁基(亮氨酸)、仲丁基(异亮氨酸)或苄基(苯丙氨酸)；-W代表含有6到30个碳原子的疏水性基团；-l为0到6。根据本发明的一个显著特征，所述PO的所有或部分疏水性基团R^虫立地选自包括以下基团的组■含有6到30个碳原子的直链或支链烷氧基并且其可以含有至少一个杂原子(优选O、N或S)或至少一个不饱和键，■含有6到30个碳原子的烷氧基，其具有一个或多个退火的环烷基(cycloalkylesannel6s)，并且可选地，含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O、N或S)，■含有7到30个碳原子的烷氧基芳基或芳氧基烷基，并且含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O、N或S)。实际上没有限制，所述PO的接枝物的疏水性基团W选自含有以下类型的烷氧基的组-OCH2(CH2-CH2)3-8~CH3、油烯基、生育酚基或胆甾醇基，并且W代表一个单键。优选地，聚氨基酸的主链是a-L-谷氨酸根或a-L-谷氨酸均聚物；a-L-天冬氨酸根或a-L-天冬氨酸均聚物；或a-L-天冬氨酸根/a-L-谷氨酸根或a-L天冬氨酸/a-L-谷氨酸共聚物。优选地，PO的聚氨基酸主链的天冬氨酸或谷氨酸残基的分布使得到的聚合物是无序的或嵌段型的或复块型的。根据另一种定义的方法，PO的摩尔质量在2000-100,000g/mo1，优选5000-40,000g/mol。根据一个可供选择的形式，PO带有至少一个聚二醇类接枝，其与谷氨酸根或天冬氨酸根残基键合。优选地，该聚二醇类接枝为下式(V)所示类型在实践中，聚二醇是例如聚乙二醇。根据本发明，理想的聚二醇接枝的摩尔百分率为1到30%。此外，聚氨基酸PO在下述方面非常有价值，即它们以可调节的接枝率分散在pH:7.4(例如有磷酸盐缓冲液)的水中，形成胶态悬浮液。而且，活性成分AP，例如蛋白质、肽或小分子，可以自发地与包括这些聚氨基酸PO的纳米颗粒结合在一起。应该理解的是，包含可电离功能基团的PO可以是中性的(例如-COOH)或电离的(例如-COCT)，视pH和组合物而定。因此，在含水相中的溶解度直接取决于可电离功能基团的比例和pH。当水性溶液中有羧基功能基时，抗衡离子可以是其中R'"代表直接键或基于l到4个氨基酸残基的"间隔X是选自氧、氮和硫的杂原子；W和RS独立地代表H或直链的d到C4烷基;n"'为10到1000，优选50到300。30金属阳离子(例如钠、钙或镁)，或有机阳离子(例如三乙醇胺，三羟甲基氨基甲垸的质子形式)，或聚胺(例如聚乙烯亚胺)。聚氨基酸类的PO可以通过例如为本领域技术人员所知的方法得到。无序聚氨基酸可以通过普通的偶联反应，将疏水基(预先被"间隔子"功能化)直接连接到聚合物上而得到。嵌段或复块聚氨基酸PO可以通过相应N-羧基氨基酸酐(NCA)的连续聚合得到。例如，共聚谷氨酸根、共聚天冬氨酸根聚氨基酸或嵌段、复块或无序谷氨酸根/天冬氨酸根共聚物由常规方法制备。为得到a型聚氨基酸，最常用的方法是基于N-羧基氨基酸酐(NCA)的聚合，对该方法例如在"Bi叩olymers，1976，15，1869"的文章以及H.R.Kricheldorf所作的题为"a-aminoacidN隱carboxyanhydridesandrelatedheterocycles，，，SpringerVerlag(1987)的书中有描述。当侧链具有羧酸功能时，NCA衍生物优选为NCA-O-Me、NCA-O-Et或NCA-O-Bz衍生物(Me二甲基，Et二乙基，Bz二节基)。然后将聚合物在适当的条件下水解，以得到它的酸形式聚合物。这些方法基于申请人的在专利FR-A-2801226中的描述。本发明可使用的某些聚合物，例如，分子量不同的聚(a-L-天冬氨酸)、聚(a-L-谷氨酸)、聚(a-D-谷氨酸)和聚(？L-谷氨酸)类，均可以商购获得。a,p型的聚天冬氨酸经天冬氨酸的縮合(以得到聚琥珀酰亚胺)，然后是碱水解得至U(参考Tomida等人的Polymer，1997，38，4733-36)。接枝物与聚合物的酸功能基的偶合通过聚氨基酸在碳二亚胺作为偶联剂、以及可选的催化剂例如4-二甲基氨基吡啶的存在下，于适当的溶剂中容易地进行反应，溶剂例如为二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯垸酮(NMP)或二甲亚砜(DMSO)。碳二亚胺例如是二环己基碳二亚胺或二异丙基碳二亚胺。接枝率由组分和反应物的化学当量控制，或通过反应时间控制。由"间隔子"功能化的疏水性接枝通过常规的肽偶合或通过在酸催化之下直接縮合得到。这些技术均为所属领域的技术人员所熟知。由预先与疏水性接枝合成的NCA衍生物来合成嵌段或复块共聚物。例如，疏水NCA衍生物与NCA-O-Bz进行共聚，然后通过水解选择性除去节基。活性成分PA(s)关于AP，优选自以下组蛋白质、糖蛋白、与一个或多个聚二醇链结合的蛋白质[优选聚乙二醇(PEG):"聚乙二醇化的蛋白质"]、肽、聚糖、脂糖、寡聚核苷酸、多核苷酸及其混合物，并且特别优选自以下亚组血红蛋白、催产素、后叶加压素、促肾上腺皮质激素、表皮生长因子、血小板源性生长因子(PDGF)、造血刺激因子及其混合物、VIII因子和IX因子、血色素、细胞色素、白蛋白、泌乳刺激素、促黄体素释放素、黄体激素释放激素(LHRH)、LHRH拮抗剂、LHRH竞争剂、人、猪或牛生长因子(GH)、生长激素释放因子、胰岛素、生长激素抑制素、胰高血糖素、白介素或其混合物(IL-2、IL-H、IL-12)、a-、卩-或Y-干扰素、胃泌素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、尿抑胃素、分泌素、降钙素、脑啡肽、内吗啡肽、血管紧张素、促甲状腺素释放激素(TRH)、肿瘤坏死因子(TNF)、神经生长因子(NGF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、肝素酶、骨成形素蛋白(BMP)、hANP、类高血糖素样肽(GLP-1)、VEG-F、重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)、肾素、细胞因子、缓激肽、杆菌肽、多粘菌素、粘菌素、短杆菌酪肽、短杆菌肽、环孢菌素类，以及酶、细胞因子、抗体、抗原和疫苗的合成类似物和药学活性改性物和片段。根据一个可供选择的形式，活性成分是疏水或亲水的，可选地离子的，"小的"有机分子，其类型属于蒽环霉素、紫杉类或喜树碱家族，或是属于肽(如亮丙瑞林或环孢子菌素)家族以及它们的混合物。本发明的内容中，"小"分子特别指非蛋白小分子，例如没有氨基酸的小分子。根据另一个可供选择的形式，所述活性成分优选自以下活性物质家族的至少一种治疗酗酒的药物、治疗阿尔茨海默病毒药物、麻醉药、治疗肢端肥大症的药物、镇痛药物、平喘药、治疗过敏的药物、抗肿瘤药、抗炎药、抗凝血剂和抗血栓形成剂、抗惊厥药、抗癫痫药、抗糖尿病药、止吐药、抗青光眼药、抗组胺药、抗感染药、抗生素、抗真菌药、抗病毒药、抗帕金森病药、抗胆碱药、止咳药、碳酸酐酶抑制剂、心血管药物、降血脂药、抗心律失常药、血管扩张药、抗心绞痛药、抗高血压药、血管保护剂、胆碱酯酶抑制剂、治疗中枢神经系统失调的药物、中枢神经系统刺激剂、避孕药、生殖促进药、分娩促进药和抑制剂、治疗粘液粘稠病的药物、多巴胺受体激动剂、治疗子宫内膜异位的药物、治疗勃起障碍的药物、治疗生育的药物、治疗胃肠道疾病的药物、免疫调节剂和免疫抑制剂、治疗记忆疾病的药物、抗偏头痛药、肌松药、32核苷类似物、治疗骨质疏松的药物、拟副交感神经药、前列腺素、心理治疗药、镇静药、催眠和镇定药、安定药、抗焦虑药、精神振奋药、抗抑郁药、治疗皮肤病的药物、留体和激素、安非他明、减肥药、非镇痛型止痛药、巴比妥类、苯并二氮杂卓类、放松药、精神药品以及任何这些产品的联合使用。从定量的角度看，特别优选不与微米尺寸的颗粒结合的AP[非结合AP]的重量百分率为以下数值o[非结合AP]^1,o优选[非结合AP]S0.5。本发明的第二方面通过雾化含有AP的PO溶液或胶体悬浮液生产微颗粒的方法根据本发明的方法一个优选地方式，用于雾化的溶液或胶体悬浮液中存在的PO至少部分为PO纳米颗粒的形式，所述纳米颗粒以T1试验测定的尺寸小于500nm，优选为10-300nm，特别优选IO-IOOnm。优选地，待雾化的溶液或胶体悬浮液中PO的浓度为，例如5mg/ml-100mg/ml，优选10mg/ml-40mg/ml。本发明的上下文中，AP/PO结合物在雾化步骤之前和/或期间产生。对于这种结合物，PO和/或AP可以是液体悬浮液形式中的固体形式(优选粉末)。在雾化步骤前使一种或多种AP和PO相结合的技术尤其在专利申请WO-A-00/30618中有描述。这些技术例如是将PO的胶体悬浮液和AP的溶液或悬浮液混合。根据一种可供选择的方式，粉末形式的AP和PO悬浮液相混合。根据本发明的生产方法一种有趣的实施方式，与至少一种活性成分(AP)结合的PO聚合物的微颗粒分散于基本上水性的液体介质中，所述介质优选含有分散措施M,，并且冻干所得的分散体。因此，所得冻干物有助于制备基于微颗粒的液体制剂(下面所述的本发明的第三方面)，因为这种冻干物在用于制备液体制剂的重构液体中分散迅速。优选地，所述分散措施Mi选自以下组i.和PO聚合物的可电离基团极性相反的多价离子，并且其包含在连续的水性相中；ii.加入到待雾化的PO悬浮液/溶液中并且因此包含在雾化后的PO/AP微颗粒中的至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)；iii.用至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)包至少一层膜的至少一种微颗粒；iv.改变pH;V.措施(i)-(iv)中至少两种的结合；其中措施(i)特别优选。关于措施M,(i)-(iv)实施方式的其他细节，可参考下面关于分散措施M2的描述。同样地，关于分散的液体介质，它可以含有和下面所定义的重构液体的添加剂相同的添加剂。本发明的第三方面基于微颗粒的液体制剂，所述微颗粒通过雾化含有AP的PO的溶液或胶体悬浮液获得根据本发明的制剂可以是用于AP延长释放的液体药物制剂，其含有基于和至少一种AP相结合的PO微颗粒的低粘度的胶体悬浮液，这些微颗粒是前面定义的那些或者由前面定义的方法本身和下面的实施例中的方法本身所获得的那匙。这种制剂的优点是可以通过胃肠外注射并且在注射条件下是液体。根据本发明，术语"低粘度"或"极低粘度"优选对应于2(TC时的动力学粘度低于或等于lOOOmPa.s。优选地，该制剂的动力学粘度，以2(TC时1000s"的剪切梯度测定，优选小于或等于500mPa.s，特别优选2-200mPa.s，例如1.0-100mPa.s或1.0-50mPa.s。动力学粘度的测定动力学粘度的对照测量可以在例如2(TC时使用配备锥/板式几何学(4cm，2°)的AR1000流变仪(TA仪器)上完成。粘度v在10s"的剪切梯度测定。低粘度可以使本发明的制剂容易以胃肠外方式注射，尤其是通过粘膜、皮下、肌内、皮内、腹腔或脑内途径或注射到肿瘤中。根据本发明的制剂也尤其可以通过口腔、鼻腔、肺部、阴道或眼部途径给药。本发明的液体制剂的低粘度可同时存在于对应于室温的注射温度(例如4-3(TC)和生理温度。34而且，通过两性分子PO(例如聚氨基酸)雾化形成的干燥的微颗粒可以容易地再分散以形成低粘度的微颗粒悬浮液或溶液。分散措施N^特别关于在重构液体中分散或者悬浮雾化的PO/AP微颗粒以制备制剂，根据本发明提供了所述制剂包含措施M2，用于分散PO/AP微颗粒。这种分散措施M2可以在性质上和用于形成所述制剂的悬浮液的连续相(即重构液体)不同。因此，根据本发明可以尤其展望四种可能性1.悬浮液的连续相基本上是水性的。2.悬浮液的连续相基本上是有机的和水互溶的相。3.悬浮液的连续相基本上是有机的和水不互溶的相。4.悬浮液的连续相基本上是有机的和水互溶或不互溶的相。术语"基本上水性的连续相"的意思是，例如含有至少60%重量的水的液体。术语"基本上有机的连续相"的意思是，例如含有至少60%重量的有机相的液体。i暴淳统的逢续报綦.本i;是杰性的可以展望几种类型的分散措施M2，其可选地相互结合，即所述分散措施M2例如选自以下组i.和po聚合物的可电离基团极性相反的多价离子，其包含在连续的水性相中；ii.加入到待雾化的PO悬浮液/溶液中并且因此包含在雾化后的PO/AP微颗粒中的至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)；iii.用至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)包至少一层膜的至少一种微颗粒；iv.改变pH;V.措施(i)-(iv)中至少两种的结合；其中措施(i)特别优选。(i)基于多价离子的分散措施当PO带有可电离基团IG时，所述分散措施M2可以含有多价离子，其极性和聚合物PO的可电离基团IG(至少部分电离的)相反，重构悬浮液/形成悬浮液的溶液时将其加入到水性连续相中。根据本发明，术语"多价离子"指例如二价离子、三价离子、四价离子以及这些离子的混合物。当PO具有阴离子基团IG时，所述多价离子是多价阳离子，优选二价阳离子，并且特别优选自包括Mg"、Ca2+、Zn2+、Fe2+、012+及其混合物的组，和/或三价离子，特别优选自包括A产、F^+或其混合物的组。除多价离子外，根据本发明的制剂可以包括单价离子(例如阳离子)，它们在纳米颗粒聚集成微颗粒的过程中可以起作用。这些多价离子优选以水性(有机或矿物)盐溶液的形式，例如多价离子的硫酸盐、氯化物、乙酸盐、葡糖酸盐或谷氨酸盐(或其它阴离子氨基酸)的溶液加入到本发明的制剂中。这种基于多价离子的分散措施M2优选适用于两性分子PO(例如一种(共)聚氨基酸)是相对亲水的情形。(ii)和(iii)基于亲水性化合物或含有至少一种基于亲水性化合物的包膜的分散措施M2该分散措施M2可以主要包括-加入到待雾化的PO悬浮液/溶液中并且因此存在于雾化的PO/AP微颗粒中的至少一种亲水性化合物(优选其能用于可注射的制剂)；-或者，用至少一种亲水性化合物膜(优选其能用于可注射的制剂)对微颗粒包上至少一层膜。这种分散措施M2可以按照几种方法结合到制剂中。根据第一种方法，至少一种亲水性化合物加入到待雾化的PO悬浮液/溶液中，这种亲水性化合物选自可用于可注射制品的那些，特别优选自包括以下的组—氨基酸类(例如赖氨酸、精氨酸、甘氨酸)；4聚二醇类，优选聚乙二醇类；~>共聚二醇类，优选(Poloxamer、Pluronic或Lutrol型的)乙二醇/丙二醇共聚物；36—纤维素聚合物类及其衍生物，优选羧基垸基纤维素(例如羧甲基纤维素)或烷基纤维素(例如甲基纤维素)；4氢化或非氢化的糖类，例如海藻糖、山梨醇、甘露醇或蔗糖；—多元醇类，如丙二醇或甘油；—明胶类，优选水解明胶；—含氮(共)聚合物类，优选自包括聚丙烯酰胺、聚-N-乙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚-N-乙烯内酰胺的组；—聚(乙烯醇)类(PVA);—聚(谷氨酸钠)；—及其混合物；所述亲水性包膜化合物优选含有至少一种亲水性聚合物。根据第二种方法，所述微颗粒包有用前面定义的至少一种亲水性化合物的至少一层。在该第二种方法中，所述亲水性化合物优选含有至少一种选自前面定义的亲水性化合物的亲水性聚合物。基于至少一种亲水性化合物的分散措施M2(ii)被证明为特别适合疏水性足够高的两性分子PO，例如对于由至少一种聚氨基酸构成的PO，其HG基团的水平大于或等于10mol%。用这种亲水的和生物相容的化合物对微颗粒的包膜[措施M2(iii)]可以通过例如两步连续的雾化进行，其中第二步的雾化在和微颗粒不互溶的溶剂中在颗粒的悬浮液上进行，所述溶剂有助于这些颗粒的分散。通过对微颗粒进行亲水性包膜的这种分散措施(iii)可以使微颗粒的悬浮液保持可靠和稳定至少达几天，这使其易于操作。优选地，将用于分散基于亲水性化合物的微颗粒的措施(ii)或(m)和在制剂重构期间用于分散存在于水性相中二价离子的措施(i)相结合可以加速分散。根据另一种具体实施方式，该水性连续相或者亲水性包膜也可以含有至少一种可注射的表面活性剂，例如Tween⑧80、卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或者聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物(商品名Poloxamer、Pluronic、Lu加l)。(iv)通过改变pH的分散措施M2根据本发明可以展望的另一种分散措施是通过改变pH的分散措施，优选在雾化之前。己证明这种类型的措施尤其适合于其中两性分子PO(例如聚氨基酸)是带有可电离官能团并且高度亲水的化合物的情形，也就是说，其含有例如低于10moP/。的疏水性基团HG。事实上，采用这种措施M2(iv)能够通过将pH值调节至使PO(例如聚氨基酸)的可电离官能团不发生电离(例如当PO是聚Glu或聚Asp型的亲水性聚氨基酸时酸化)的值来提高两性分子PO的疏水性。优选地，这种通过在雾化前改变pH的分散措施M2(iv)应用于PO悬浮液/溶液后立即雾化。这种通过在雾化前改变pH的分散措施M2(iv)可以和以下措施联合或者不联合使用，在雾化后的重构步骤中使用的基于多价离子的分散措施M^i);或者，基于亲水性化合物的分散措施M2(ii)或(iii)，优选通过用至少一种亲水性聚合物包膜M^iii)微颗粒。2.悬.浮液.的逢续报棊.本J;是有机的.租杰.互.澄放报分散措施由和水互溶的有机相组成。该相因此可以例如，含有乙醇、N-甲基吡咯垸酮(NMP)、二甲基亚砜(DMSO)、异丙醇、甘油或三縮四乙二醇(四氢糠基醇聚乙二醇醚)。3.暴浮痕的逢续报蓋.本丄.是有机的报杰丕瓦澄的报根据一个优选的实施方式，分散措施含有一种存在于和水不互溶的有机连续相中的亲脂性液体，其熔点优选低于或等于15"C。优选地，该亲脂性液体含有至少一种饱和脂肪酸的甘油三酯的混合物或者至少一种植物油或至少一种脂质或至少一种脂质衍生物或至少一种脂肪酸或至少一种脂肪酸衍生物。更优选地，该亲脂性液体含有源自椰子油的饱和C8-C1Q脂肪酸的甘油三酯的混合物，例如由Sasol以"Miglyol812"出售的那种；，至少一种植物油，优选大豆油、棕榈油、亚麻籽油、棉籽油、芝麻油、葵花籽油或花生油；，至少一种脂质，优选脂质卵磷脂、合成或天然的维生素E;至少一种脂质衍生物，优选花生四烯酰磷脂酰胆碱和硬脂酰磷脂酰胆碱；*至少一种脂肪酸，优选油酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸及其盐类；*至少一种脂肪酸衍生物，优选单-、双-或三-甘油酯衍生物、油酸乙酯、乳酸月桂酯、硬脂酸甘油酯、棕榈酸脱水山梨聚醇酯、硬脂酸脱水山梨醇酯、脱水山梨醇一油酸酯或聚山梨醇酯；*和任何它们的混合物；其条件是当某些上面列出的产品如果在例如低于或等于i5X:时单独使用时不是液体形式，那么这些产品可以和其它产品混合，以使其在例如低于或等于15"C时是液体形式。特别优选脂肪酸甘油三酯的衍生物，尤其是源自椰子油的饱和C8-do脂肪酸的甘油三酯的混合物，例如由Sasol以"Migiyol812"出售的那种。其它含有脂肪酸长链的甘油三酯尤其存在于植物油中，例如大豆油、棕榈油、亚麻籽油、棉籽油、芝麻油、葵花籽油或花生油。雾化的PO/AP粉末易于在这种和水不互溶的有机相中分散以得到稳定的微颗粒悬浮液，其可以保持稳定达数天之久，因此容易操作。这种分散尤其迅速，其不用加入另外的或其它分散措施，即使可以展望这种可能性。4-悬.淫液節.逢续相.蒸.本丄.悬有.机.的招.杰s澄的或煮.和水丕.瓦澄.的报根据一个优选的、和构成制剂的悬浮液/溶液的连续相的性质有关的第二和第三种可能性相兼容的方法的可供选择的方式，这种分散措施含有用至少一种膜形成包膜化合物(优选其能用于可注射的制剂)对微颗粒进行包膜。优选地，这种膜形成包膜化合物含有至少一种疏水性聚合物，选自包括以下物质的组聚交酯、聚羟基乙酸、聚(交酯-共-乙交酯)、聚原酸酷、聚酸酐、聚(羟基丁酸)、聚己酸内酯、聚(碳酸烷基酯)、水不溶性PO聚合物、它们的衍生物和混合物。根据一种可供选择的形式，这种膜形成包膜化合物是脂质性质的，其烙点优选高于或等于15'C，并且含有至少一种脂质或至少一种脂质衍生物，或至少一种植物油，或至少一种脂肪酸或至少一种脂肪酸衍生物或至少一种饱和脂肪酸的甘油三酯的混合物或这些产品的混合物。根据另一个优选的实施方式，这种有机的连续相，例如疏水性的，或者疏水性包膜可以含有至少一种可注射的表面活性剂，例如Tween⑧80、卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或者聚氧丙烯/聚氧乙烯共聚物(商品名Poloxamer、Pluronic、Lutrol)。鹏浪剂/.稳窓.剂也可以是优选的，以利于在水性相中分散的性质和/或进一步提高水性悬浮液的稳定性，可注射的制剂可以含有其他添加物，一方面是下面所指的"赋形剂/稳定剂"，另一方面是传统的赋形剂。赋形剂/稳定剂可以选自包括以下的组—至少一种聚合物PO的纳米颗粒，PO是水溶性的可生物降解的两性分子共聚物，带有疏水性基团(HG)和至少部分电离的可电离亲水性基团(IG)，其在pH=7.0，等渗条件下自发地形成一种纳米颗粒的胶体悬浮液；4氨基酸；—聚二醇类，优选聚乙二醇；—共聚二醇类，优选乙二醇/丙二醇共聚物(Poloxamer、Pluronic或Lutrol型的)；—纤维素聚合物及其衍生物，优选羧烷基纤维素(例如羧甲基纤维素)或垸基纤维素(例如甲基纤维素)；—山梨聚糖和一种或多种脂肪酸的酯类，优选吐温(或聚山梨醇酯)类的聚氧烯烃(例如聚氧乙烯)二醇和至少一种酸(例如油酸)的酯类；—基于磷脂和聚烯烃二醇的表面活性剂，优选聚乙二醇；—氢化或非氢化的糖类，例如海藻糖、山梨醇、甘露醇或蔗糖；—多元醇，如丙二醇或甘油；4朋胶，优选水解明胶；~>含氮(共)聚物，优选自含有聚丙烯酰胺、聚-N-乙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚-N-乙烯内酰胺的组；—聚(乙烯醇)类(PVA);及其混合物。根据本发明的优选的赋形剂(稳定剂)中的一种由至少一种聚合物PO的纳米颗粒构成，所述PO和构成所述微颗粒的PO相同或不同(优选相同)。制剂中所用赋形剂/稳定剂的量优选0.01-10%重量，特别优选0.1-5%重量。40至于含有纳米颗粒的稳定剂，它们优选以1.5-3.5%重量的比例用于所述制齐U，例如2.0-3.0%(-2.5%)重量。重构液体除了前面描述的分散措施，根据本发明的制剂的制备中所用的重构液体可以含有，例如-至少一种缓冲液或至少一种可注射盐(磷酸盐缓冲液、拧檬酸盐缓冲液、氯化钠)，浓度为例如0.001M-0.1M，优选0.005M-0.02M，这种缓冲液或这种可注射盐能够调节溶液的pH;和-至少一种可注射的表面活性剂，优选聚山梨醇酯型的，例如Tween20或Tween80，或者是Poloxamer类的，例如LutrolF38、Lutrol⑧F68或Lutro1⑧F127，浓度为例如0.01%-2%，优选0.05-0.5%。重构液体还可以包括增加密度的试剂，例如糖类，尤其是蔗糖、D-甘露醇或海藻糖，浓度为0.1%-10%，优选0.5-5%。这种重构溶液还可以含有可注射的增粘聚合物，选自包括多糖、合成聚合物(例如羧甲基纤维素钠)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚二醇(如聚乙二醇)及其混合物的组。两性分子PO(例如聚氨基酸)干燥微颗粒的使用和即用的(adhoc)重构措施的使用因此能够满足双重目标，能够获得既稳定又易于分散的药物制剂，以使其能够胃肠外注射。除了前面所列的用于改善分散和稳定性的赋形剂/稳定剂以外，其它可以加入到待雾化的悬浮液/溶液或根据本发明的制剂中的常用赋形剂是，例如是本领域技术人员所知的抗微生物剂、缓冲剂、抗氧化剂和渗透压调节剂。可以参考例如InjectableDrugDevelopment—书，P.K.Gupta等，InterpharmPress,Denver,Colorado,1999。常用赋形剂可以加入到水性分散相中或者在雾化前加入到溶液/悬浮液中。根据本发明的液体制剂的应用虽然根据本发明的制剂优选是药物，但这并不排除化妆品、健康食品或植物保护制剂，其包括至少一种前面定义的PO和至少一种AP。本发明第四方面用于重构根据本发明制剂的药盒PO/AP微颗粒和基本上水性的重构液体、基本上有机的和水互溶的重构液体和基本上有机的和水不互溶的重构液体已在前面定义。本发明第五方面重构方法，尤其是重构根据本发明制剂的方法PO/AP微颗粒和基本上水性的重构液体、基本上有机的和水互溶的重构液体和基本上有机的和水不互溶的重构液体已在前面定义。根据本发明，可以展望使用过滤除菌的方式，在孔径例如等于0.2pm的滤膜上过滤纳米颗粒悬浮液，生成根据本发明的制剂的微米尺度的颗粒。因此根据前面描述的方法在无菌条件下的聚集可以将制剂直接注射给病人。本发明第六方面固体药物制剂这种用于AP延长释放的制剂含有用于吸入或肺部给药的基于己在前面定义的PO/AP微颗粒的干燥粉末形式。本发明的其它方面本发明还涉及衍生自根据本发明的PO微颗粒的固体产品。在实践中，这些衍生产品可以尤其由粉末、凝胶、植入物或薄膜组成。因此，本发明涉及衍生自根据本发明的制剂的产品，它们与其制备方法无关。本发明还涉及一种治疗方法，其主要在于通过胃肠外、粘膜、皮下、肌内、皮内、腹腔或脑内途径给药或肿瘤内给予根据本发明的制剂。也可以尤其通过口服、经鼻、经肺部、经阴道或经眼部途径给予本说明书中描述的制剂。在本发明的一个具体的可供选择的方式中，该治疗方法在于通过胃肠外、皮下、肌内、皮内、腹腔或脑内途径注射或注射到肿瘤内给予该制剂，优选以在注射位点形成贮库层的方式给药。通过以下实施例将更清楚地理解本发明，且本发明的优点和可供选择的实施方式将更清楚地在实施例中显现，所述实施例描述了由聚氨基酸与疏水性基团接枝形成的PO的合成，以及它们转变为AP的延长释放体系，即转变为本发明的制剂(干燥微颗粒的粉末)，以及这种体系的稳定性和再分散性。具体实施例方式实施例l:两性分子聚合物PO-A的合成接枝了合成来源的cc-生育酚的聚谷氨酸的合成在8(TC加热15g聚(a-L-谷氨酸)(相对于聚氧乙烯标准的分子量约为1690042Da，其通过聚合NCAGluOMe然后水解得到，如专利申请FR-A-2801226所描述)直到其溶解在288ml二甲基甲酰胺(DMF)里。将溶液冷却至15°C，连续加入预先溶解在8mlDMF里的2.5gD,L-a-生育酚(〉98X，购自Fluka⑧)、预先溶解在1mlDMF里的280mg4-二甲基氨基吡啶和预先溶解在6mlDMF里的1.6g二异丙基碳二亚胺。搅拌3小时后，将反应介质倒入1200ml含有15n/。的氯化钠和盐酸(pH二2)的水中。然后通过过滤回收沉淀的聚合物，并用0.1N盐酸、水和二异丙醚洗涤。然后该聚合物在4CTC真空箱中干燥，得到的产率约为90%。用体积排除色谱法测得的相对于聚氧乙烯标准的分子量为15500。用质子NMR光谱法评估的生育酚的接枝比例为5.1mol%。将其溶解在水中，并将pH调节(中和羧酸盐)至7±1，获得聚合物在水中的纳米颗粒悬浮液。实施例2:两性分子聚合物PO-B的合成实施例2由实施例1改变条件进行，目标的接枝率为20%。实施例3:含有IFN-a2b的聚合物PO-A的干燥微米-尺寸的颗粒的制备制备含有20mg/g聚合物和0.25mg/gIFN的溶液将200g聚合物PO-A浓度为30mg/g的溶液加入到500ml的烧瓶中。然后向含有聚合物的烧瓶中加入68g7jC。将浓縮至2.8mg/g的IFN-a-2b冷冻溶液于25'C解冻1h，然后将26.8g解冻的溶液加入到含有聚合物溶液的烧瓶中。该混合物于室温条件下静置14h。将该溶液通过0.2pm的除菌滤膜过滤。聚合物-IFN溶液的雾化该溶液在BiichiB290型的喷雾干燥装置上雾化。以5ml/min的速度抽出液体溶液，并通过供氮(7bar，卯01/h)的喷嘴雾化。抽出流速(干空气)为40m3/h。进口温度维持在9(TC，这些条件下的出口温度为45。C。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=5将粉末于雾化浓度分散于水中以后，IFN的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例4:含有IFN-a2b和聚山梨醇酯80的聚合物PO-A的干燥微米-尺寸的颗粒的制备PO聚合物和干扰素溶液的制备和实施例3相同，在雾化前将0.9g聚山梨醇酯80加入到溶液中。在聚山梨醇酯存在下雾化聚合物-IFN溶液溶液的雾化条件和实施例3相同。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=5pm.将粉末于雾化浓度分散于水中以后，IFN的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例5:含有IFN-a2b的聚合物PO-A的酸化的干燥微米-尺寸的颗粒的制备聚合物PO-A和IFN溶液的制备和实施例3相同。然后加水稀释至聚合物PO-A的浓度为15mg/g(IFN的浓度应为0.188mg/g)。通过0.2pm的滤膜过滤后，溶液中加入1NHCl酸化至pH:4。所得溶液是乳白色的。酸化的聚合物-IFN溶液的雾化溶液的雾化条件和实施例3相同。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=5pm。将粉末于雾化浓度分散于水中以后，IFN的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例6:用PVP包膜并含有IFN-a2b的聚合物PO-A的干燥微米-尺寸的颗粒的制备按照实施例3使用的方案从PO-A/IFN混合物获得由聚合物PO-A和IFN的干燥微颗粒形成的粉末。在雾化步骤结束后，1.5g这种粉末再悬浮于含有7g/1PVPK30型注射级的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的乙醇溶液中。该乙醇悬浮液搅拌2h，然后在配备了有机溶剂提取捕集器(-20。C惰性循环)的BiichiB290型的喷雾干燥装置中再雾化一次以及在氮气条件下密闭循环操作。以5ml/min的速度抽出液体溶液，并通过供氮(7bar-6701/h)的喷嘴雾化。抽出流速(干空气)为40m3/h。进口温度维持在8(TC，这些条件下的出口温度为55X:。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=6将粉末于雾化浓度分散于水中以后，IFN的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例7:含有IFN-a2b的聚合物P0-B的干燥微米-尺寸的颗粒的制备聚合物-IFN溶液的制备和雾化方法和实施例3相同，其中聚合物PO-A用聚合物PO-B代替。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=4将粉末于雾化浓度分散于水中以后，IFN的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例8:含有hGH的聚合物PO-A的干燥微米-尺寸的颗粒的制备浓縮的hGH溶液的制备60g重组人生长激素溶液(浓度3.9mg/g)于25。C解冻1h30，然后通过10kD滤膜以正向超滤(frontalultrafiltration)的方式浓縮约6倍直到浓度达到24mg/g(HPLC监控)。和聚合物溶液的混合物将28g水加入到52g浓縮的浓度为30mg/g的聚合物PO-A的溶液中将其稀释至19.5mg/g。将8g浓度为24mg/g的hGH溶液缓慢倒入稀释后的聚合物溶液中。混合物于室温下静置过夜然后用0.2pm除菌滤膜过滤。聚合物/hGH溶液的雾化溶液的雾化条件和实施例3相同。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=5将粉末于雾化浓度分散于水中以后，hGH的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。45实施例9:含有IL-2的聚合物PO-A的干燥微米-尺寸的颗粒的制备浓縮的IL-2溶液的制备100g用SDS稳定的浓度为2g/1的IL-2冷冻溶液于室温下解冻，然后该溶液冷却到0-2°C。100g无水乙醇缓慢加入到该溶液中以沉淀蛋白质。沉淀物用0.65/0.45nm的膜在正向渗滤池(frontaldiafiltrationcell)中以过滤的方式回收并用200g水洗涤。沉淀物用氮气流干燥，然后溶解于10g预先冷却(〈5")的0.02N氢氧化钠中以获得浓度为20mg/g、pH42并且无SDS的澄清蛋白质溶液。溶液用HPLC方法进行严格检测。和聚合物溶液的混合物将39g水加入到96g浓縮的(浓度为30mg/g)实施例l的聚合物PO的溶液中将其稀释。将9g前面的浓度为20mg/g的IL-2溶液缓慢倒入稀释后的聚合物溶液中。含有20mg/g聚合物PO和1.25mg/gIL-2的混合物于室温下静置过夜然后用0.2pm除菌滤膜过滤。聚合物-IL-2溶液的雾化溶液的雾化条件和实施例3相同。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=5将粉末于雾化浓度分散于水中以后，IL-2的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例10:含有胰岛素的聚合物PO-A的干燥微米-尺寸的颗粒的制备40g浓度为20.3mg/g的胰岛素溶液的制备0.83g含水量2.5%、活性为28.7Ul/g的重组人胰岛素(粉末)加入到玻璃烧瓶中。加入23.62g水，然后胰岛素用缓慢的磁力搅拌分散。加入6.22g0.1NHC1直到获得澄清的酸性胰岛素溶液。然后加入9.32g1N氢氧化钠以获得pH7-8的最终澄清液。该胰岛素溶液用0.2pm除菌滤膜过滤。和聚合物溶液的混合物将37.66g前面获得的浓縮胰岛素溶液缓慢倒入(同时磁力搅拌)220g30mg/g的聚合物PO溶液中。然后往溶液中加入72.34g水。混合物于室温下静置4小时然后用0.2iLim滤膜过滤。聚合物-胰岛素溶液的雾化该溶液然后在BiichiB290型的喷雾干燥装置上雾化。以5ml/min的速度抽出液体溶液，并通过供氮(7bar-9001/h)的喷嘴雾化。抽出流速(干空气)为40m3/h。进口温度维持在120。C，这些条件下的出口温度为70。C。聚合物-胰岛素溶液的雾化溶液的雾化条件和实施例3相同。所得微颗粒的表征所得颗粒的尺寸(根据T0试验)为D50=5将粉末于雾化浓度分散于水中以后，胰岛素的HPLC检测和雾化前溶液的检测相同，未发现分解形式。实施例ll:根据本发明所获得的微颗粒的特征尺寸和稳定性微颗粒的尺寸根据TO试验测定，稳定性根据S1试验测定。蛋白质的分解通过HPLC比较雾化前后的色谱图进行评估。实施例根据TO试验的D50尺寸(pm)经过根据ST1的稳定性试验后的D50尺寸((im)雾化所导致的蛋白质分解*355无455无555无665无745无855无955无1055无*无表示没有观察到分解形式。结果表明在两性分子聚氨基酸存在下雾化蛋白质能够保持蛋白质的稳定性。在固体形式时，根据所描述的方案，粉末是稳定的。很显然并且可以预期粉末在5"C时其稳定性可达至少两年。雾化是一种可能引起蛋白质分解的方法。通过HPLC分析比较雾化前后的色谱图显示没有观察到分解的形式。47在两性分子聚氨基酸存在下雾化蛋白质可以得到长时间稳定的微颗粒而且不会引起蛋白质的分解。这些粉末可以固体形式使用(例如吸入、在压力下通过枪头进行无针头注射)或者在合适的介质中重构后以可注射悬浮液的形式使用。实施例12:从实施例3-10的粉末开始悬浮液的重构根据进行DP1试验所描述的方案，粉末在三种不同的介质中进行重构A.pH7.4的磷酸盐缓冲盐水溶液B.O.IM的氯化镁水溶液C.癸酸甘油三酯溶液(Miglyo1⑧812)然后通过进行以下步骤评估样品-在前面提及的一种介质中分散-转移到注射器中然后通过25G针头注射。如果通过25G针头吸取/注射能够回收至少80n/。的悬浮液，则认为其具有良好的性质。结果:<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>在稳定性试验期间还检测到蛋白质在介质A、B和C中重构后不发生分解。这些结果显示只有实施例7的组合物才能获得水中用PBS缓冲的pH=7.4的稳定的和可注射的悬浮液。对于大部分实施例(5除外)，含有二价盐的重构介质能够改善这些性质。在Miglyol介质中，所有的制剂都易于分散、注射并且是稳定的。根据所用的聚合物并不能容易地获得这些性质的组合。发明人的贡献在于，经过多次试验，发现了某些赋形剂和重构介质能够使其具有这些性质。实施例13:重构制剂粘度的测定30mg/ml前面实施例的介质B和C的粉末的分散体(介质B中的实施例5除外)能够得到稳定的低粘度悬浮液；在介质B中测得的粘度均低于IOmPa.s，在介质C中测得的粘度都约在30-40mPa.s。经过比较，根据现有技术的纳米颗粒形式的相同聚合物的组合物在这个浓度(30mg/ml)下不能获得可接受的粘度(〈100mPa.s)。实施例14:含有IFN-a2b的聚合物P0-A的干燥微米-尺寸的颗粒的冻干粉末形式的制备首先按照实施例3的描述制备颗粒。雾化步骤在无菌条件下进行，并且颗粒在无菌容器中回收。在M^+离子存在下颗粒的再分散在雾化阶段后，颗粒立即回收并且在无菌条件下再分散到O.lMMgCl2水溶液中。调整所加入的MgCl2溶液的量，使悬浮液中PO-A聚合物的浓度为大约为40mg/ml。加入lN氢氧化钠调节pH值为6.5。冻干悬浮液分装在Lyoguard⑧型的容器中，其能够使悬浮液在冻干期间保持无菌容器然后于无菌条件下在实验室冻干仪器(实验室桌面单位Christ，Osterode,Germany)上循环冻干72h。粉末在使用前在无菌条件下分装在烧瓶中。实施例15:从实施例3获得的微颗粒粉末和实施例14的微颗粒粉末重构的对比对于该对比，两种情况的重构悬浮液的体积相同(大约lml)，并且重构的烧瓶也相同(3ml玻璃烧瓶)。调节粉末的量使两种悬浮液都最终含有40mg/ml的聚合物和0.5mg/ml的IFN-a2b。实施例3的粉末在0.1MMgCl2水溶液中重构，实施例14的粉末(其已经含有Mg^离子)在纯水中重构。第一次，烧瓶用人工搅拌。当实施例3的粉末需要至少15分钟来再分散时，实施例14的粉末分散更快，在少于5分钟的时间获得了均匀的悬浮液。然后在两49烧瓶中都插入磁力搅拌棒，以相同的方式搅拌lh。该搅拌结束后，比较两种悬浮液的特征两种悬浮液的颗粒尺寸和粘度相似。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>实施例16:皮下注射基于两性分子聚氨基酸微颗粒形式的制剂后，狗中的IFN药代动力学用以下制剂处理8条Beagle小猎犬(重量9±0.6kg):<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>IFNIR(IR指立即释放)对应于重组人干扰素溶液(PCGen，批号IB05.0516)，其浓度、pH和摩尔渗透压浓度调节到一定值([IFN]=0.5mg/ml、pH=6.5和354mOsm)。制剂1的颗粒按照实施例14从相同PCGen批次的干扰素制备冻干粉末于无菌条件下(在层流气流罩下)按照和实施例15中的描述相类似的方法再悬浮于水中。药代动力学结果汇总于下表中:<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>其中--Cmax是最大血清IFN浓度-T〉50pg/ml是血清IFN浓度大于5ng/ml的时间；-AUC代表血清IFN浓度作为时间函数的曲线下面积-RBA代表相对于速释制剂的生物利用度；-Ts。^ue代表盐析总IFN的50。/。所需的时间。IFNIR具有速释曲线，其最大血清浓度为25.2士0.4ng/ml，在5h的中位时间后获得(范围3-5h)。24小时以后循环IFN检测不到。制剂1提供了IFN的药代动力学曲线的主要修正，其非常缓慢地释放，在60h的中位时间(范围48-96h)后获得最大血清浓度0.5±0.2ng/ml(低于IR形式的最大血清浓度50倍)。药代动力学的总体趋势是假稳态形式的非常平坦的曲线。循环IFN的水平在192-240小时(8-10天)回到检测不到的浓度。该制剂具有较低的AUC:相对生物利用度损失66%(RBA=34%)，其T5w高出IFNIR的丁5()%31]￡;大约20倍。实施例17:皮下注射基于两性分子聚氨基酸微颗粒形式的制剂后，狗中的胰岛素药代动力学本实施例的对比物Lantus⑧是一种改性的胰岛素类似物(甘精胰岛素-SanofiAventis)。在人胰岛素的一级结构上改变了两个氨基酸赋予Lantus⑧延长释放性质，其释放超过24h时间，其通过注射位点的沉淀物实现。一组6条健康的Beagle犬(体重11.4±1kg)在两阶段交叉试验中用制剂Lantus⑧进行处理，一组8条健康的Beagle犬(体重11.8±1kg)在四阶段交叉试验中用制剂2处理，二对二。下表对处理方法进行了简述狗的数目[胰岛素](賜[PO](mg/g),g)体积剂量(Hl/kg)Lantus(批号40N300)121000110制剂2810030110制剂2的颗粒按照实施例10制备，目标比例是3.5mg(100IU)胰岛素用30mgPO聚合物。制剂通过将雾化的粉末分散在O.lM的MgCl2中并且磁力搅拌悬浮液lh进行制备。制剂的pH是6.2，摩尔渗透压浓度为348mOsm。对应的以I^试验测定的颗粒尺寸为D50=12pm，制剂在2(TC时的粘度大约为5mPa.s。血糖在血液生化分析仪(Advia1650,BayerDiagnostics)上用酶方法(己糖激酶)计量。药代动力学结果的分析基于相对于时间的基础血糖的百分比。下表汇总了药代动力学数据51<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>其中-C曲是己观察到的基础血糖的最小百分比；-八？00).3611(血糖曲线面积百分数)代表在剂量后0到3611的时间期间，基础血糖(100%)和代表血糖进程(以基础血糖的百分数表示)AAirHiA4i~^,、;tTiVi古T7^TCTJCO]心I口JPTJ衣即-T5o。/。ATOc代表获得50Q/。的APGCo.36h所需的时间。参照物Lantus⑧给药后血糖从第一小时起迅速减少。然后甘精胰岛素的低血糖行为保持18至36小时的时期(平均在30小时后血糖回到其基础水平)。作为比较，制剂2给药后血糖也从第一小时起迅速减少。然后，基础血糖的百分比平均维持稳态直到36小时。制剂l得到的C^平均明显高于参照物Lantus⑧得到的值，这能够可观地减少糖尿病病人的严重低血糖现象。制剂2的作用时间明显大于长效作用的参照物Lantus⑧的作用时间。这由制剂2较高的平均T50。/。APGc值证实。与参照物Lantus⑧相比，制剂2的玎00).3611损失仅为24%。权利要求1.一种聚合物(PO)的微颗粒，其含有至少一种活性成分(AP)，所述聚合物PO●是带有疏水性基团(HG)和亲水性基团的水溶性生物可降解的两性分子(共)聚合物，●在pH7.0，等渗条件下，在水中自发地形成纳米颗粒的胶体悬浮液，●并且和所述AP非共价地结合；所述微颗粒a.通过雾化PO的溶液或胶体悬浮液获得，所述PO的溶液或胶体悬浮液含有至少一种AP，b.以T试验测得的尺寸为0.5-100微米，优选1-70微米，更优选2-40微米，c.并且在“可分散性”试验DP1中在胶体悬浮液中是可分散的。2.如权利要求1所述的微颗粒，其在ST1试验或ST2试验中是稳定的。3.如权利要求1或2所述的微颗粒，其中PO是嵌段型或者无序型的共聚物。4.如前述任何一项权利要求所述的微颗粒，其中所述PO的亲水性基团是至少部分电离的可电离基团(IG)。5.如前述任何一项权利要求所述的微颗粒，其中所述聚合物PO是两性分子(共)聚氨基酸或两性分子(共)聚氨基酸的混合物。6.如前述任何一项权利要求所述的微颗粒，其中PO是聚氨基酸，其主链由天冬氨酸单元和/或谷氨酸单元形成，这些单元中的至少一部分通过在链中或者链端接枝至少一个疏水性基团(HG)而改性。7.如前述任何一项权利要求所述的微颗粒，其中PO由下列通式(I)(基团-COOR3包括羧基和RS之间的键是离子键-COCT+R3的形式)定义<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中■R'代表H、(:2到do的直链垸基或C3到do的支链垸基、苄基或-R4-[HG];■NHR'是末端氨基酸残基；■112代表H、C2到d。的直链酰基或Q到C,。的支链酰基或-R4-[HG];■RS是末端焦谷氨酸根残基；■R3是H，或者■+&3优选自包括以下的组-金属阳离子，优选自包括钠、钾、钙和镁的亚组，-有机阳离子，优选自包括以下的亚组基于胺的阳离子，基于低聚胺的阳离子，基于聚胺的阳离子(特别优选聚乙烯亚胺)，基于氨基酸的阳离子，优选自包括基于赖氨酸或精氨酸的阳离子的组，-或者阳离子聚氨基酸，优选自包括聚赖氨酸或低聚赖氨酸的亚组；■W代表直接键或基于1到4个氨基酸残基的间隔子；■独立地，A代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团C谷氨酸单元)；■n/(n+m)是摩尔接枝率，在pH为7，25°C时溶于水中PO的摩尔接枝率值足够低，以形成PO亚微米尺寸颗粒的胶体悬浮液；n/(n+m)优选为1-25mol%，更优选1-15mol%;■n+m是聚合度，其为IO-IOOO，优选50-300;■HG代表含有6-30个碳原子的疏水性基团。8.如前述任何一项权利要求所述的微颗粒，其中一种或多种PO对应于以下通式(11)、(ni)和(IV)(基团-COOI^包括羧基和RS'之间的键是离子键-COCT+RS'的形式)中的一种<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>■HG代表含有6-30个碳原子的疏水性基团；■R^是直链的二价CVC6亚烃基链；■R3'是H，或者■+尺3'优选自包括以下的组-金属阳离子，优选自包括钠、钾、钙和镁的亚组，-有机阳离子，优选自包括以下的亚组基于胺的阳离子，基于低聚胺的阳离子，基于聚胺的阳离子(特别优选聚乙烯亚胺)，基于氨基酸的阳离子，优选自包括基于赖氨酸或精氨酸的阳离子的组，-或者阳离子聚氨基酸，优选自包括聚赖氨酸或低聚赖氨酸的亚组；■R^是直链的二价CrQ亚烃基链，其中一个或两个亚甲基单元，优选位于R5Q每个末端的亚甲基单元，可以独立地被-0或-NH代替；■W代表直接键或基于1到4个氨基酸残基的间隔子；麵独立地，A代表-CH2-基团(天冬氨酸单元)或-CH2-CH2-基团(谷氨酸单元)；■n，+111'或11"是聚合度，其为IO-IOOO，优选50-300。9.如权利要求7或8所述的微颗粒，其中W基团代表单键。10.如权利要求l-6任何一项所述的微颗粒，其中一种或多种所述PO含有至少一个"基本上中性的"共聚羟基烷基谷氨酰胺(优选的烷基是乙基)，其含有多个相同或互不相同的疏水性基团(HG)侧基。11.如权利要求6-10任何一项所述的微颗粒，其中所述PO的所有或部分疏水性基团HG独立地选自包括以下基团的组■含有6到30个碳原子的直链或支链烷氧基，并且其可以含有至少一个杂原子(优选O或N或S)或至少一个不饱和键，■含有6到30个碳原子的烷氧基，其具有一个或多个退火的碳环，并且可选地，含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O或N或S)，■含有7到30个碳原子的烷氧基芳基或芳氧基焼基，并且其可以含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O或N或S)。12.如权利要求6-10任何一项所述的微颗粒，其中所述疏水性基团HG选自包括以下类型的烷氧基的组-0012(012-0"12)3.8_<:113、油烯基、生育酚基或胆甾醇基，并且W代表单键。13.如权利要求6-10任何一项所述的微颗粒，其中所述PO的n个HG基团各自独立地代表下式的单价基团<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中-RS代表甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苄基；-RM戈表含有6到30个碳原子的疏水性基团；-l为0到6。14.如权利要求13所述的微颗粒，其中所述PO的所有或部分疏水性基团RS独立地选自包括以下基团的组■含有6到30个碳原子的直链或支链垸氧基，并且其可以含有至少一个杂原子(优选O或N或S)或至少一个不饱和键，■含有6到30个碳原子的烷氧基，其具有一个或多个退火的碳环，并且可选地，含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O或N或S)，■含有7到30个碳原子的垸氧基芳基或芳氧基垸基，其可以含有至少一个不饱和键或至少一个杂原子(优选O或N或S)。15.如权利要求B或14所述的微颗粒，其中所述PO的接枝物的疏水性基团R6选自包括以下类型的垸氧基的组-OCH^CHrCH^^CH^油烯基、生育酚基或胆甾醇基。16.如权利要求6-9和ll-15任何一项所述的微颗粒，其中所述聚氨基酸的主链是a-L-谷氨酸根或a-L-谷氨酸均聚物。17.如权利要求6-9和ll-15任何一项所述的微颗粒，其中所述聚氨基酸的主链是a-L-天冬氨酸根或a-L-天冬氨酸均聚物。18.如权利要求6-9和ll-15任何一项所述的微颗粒，其中所述聚氨基酸的主链是a-L-天冬氨酸根/a-L-谷氨酸根或a-L-天冬氨酸/a-L-谷氨酸共聚物。19.如权利要求6-18任何一项所述的微颗粒，其中PO含有HG，式(I)中的(n/n+m)，其水平至少为10mol%，优选至少为15moP/。。20.如权利要求6-19任何一项所述的微颗粒，其中所述？0的摩尔质量在2000-100000g/mol，优选5000-40000g/mo1。21.—种制备含有至少一种活性成分(AP)的PO微颗粒的方法，这些微颗粒尤其是权利要求l-20所述的微颗粒，i.该聚合物PO是带有疏水性基团(HG)和亲水性基团[优选至少部分电离的可电离基团(IG)]的水溶性可生物降解的两性分子(共)聚合物，在pHK7.0，等渗条件下，在水中自发地形成纳米颗粒的胶体悬，并且和所述AP非共价地结合；ii.所述微颗粒以T1试验测得的尺寸为0.5-100微米，优选l-70微米，更优选2-40微米，该方法主要包括雾化含有AP的PO的溶液或胶体悬浮液。22.如权利要求21所述的方法，其中存在于所述溶液或胶体悬浮液中的所述PO至少部分是纳米颗粒形式，其以T1试验测定的尺寸小于500nm，优选为10-300nm，并且更优选为10-100nm。23.如权利要求21或22所述的方法，其中和至少一种活性成分(AP)相结合的PO聚合物的微颗粒分散在基本上水性的液体介质中，所述介质优选包括分散措施Mp并且冻干所得的分散体。24.如权利要求23所述的方法，其中所述分散措施M!选自以下组i.和所述PO聚合物的可电离基团极性相反的多价离子，并且其包含在连续的水性相中；ii.加入到待雾化的所述PO悬浮液/溶液中并且因此包含在雾化后的PO/AP微颗粒中的至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)；iii.用至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)包至少一层膜的至少一种微颗粒；iv.改变pH;v.以及措施(iMiv)中至少两种的结合；其中措施(i)特别优选。25.—种液体药物制剂，用于AP的延长释放，其含有低粘度的胶体悬浮液，所述胶体悬浮液基于含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是权利要求l-20任何一项所述的微颗粒或者通过权利要求21-24所述的方法获得的微颗粒。26.如权利要求25所述的制剂，其含有措施M2，用于分散和至少一种AP相结合的PO微颗粒。27.如权利要求25或26所述的制剂，其中所述悬浮液的连续相基本上是水性的。28.如权利要求25或26所述的制剂，其中所述悬浮液的连续相基本上是有机的和水互溶的相。29.如权利要求25或26所述的制剂，其中所述悬浮液的连续相基本上是有机的和水不互溶的相。30.如权利要求25、26或27所述的制剂，其中所述分散措施M2选自以下组i.和所述PO聚合物的可电离基团极性相反的多价离子，并且其包含在连续的水性相中；ii.加入到待雾化的所述PO悬浮液/溶液中并且因此包含在雾化后的PO/AP微颗粒中的至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)；iii.用至少一种亲水性化合物(优选能用于可注射的制剂)包至少一层膜的至少一种微颗粒；iv.改变pH;V.措施(i)-(iv)中至少两种的结合；其中措施(i)特别优选。31.如权利要求30所述的制剂，其中所述亲水性包膜化合物选自包括以下的组—氨基酸类；—聚二醇类，优选聚乙二醇类；—共聚二醇类，优选(Poloxamer或Pluronic或Lutrol型的)乙二醇/丙二醇共聚物；4纤维素聚合物类及其衍生物，优选羧基烷基纤维素或烷基纤维素；—氢化或非氢化的糖类，例如海藻糖、山梨醇、甘露醇或蔗糖；—多元醇类，如丙二醇或甘油；~>明胶类，优选水解明胶；—含氮(共)聚合物类，优选自包括聚丙烯酰胺、聚-N-乙烯酰胺、聚乙烯吡咯垸酮(PVP)和聚-N-乙烯内酰胺的组；4聚(乙烯醇)类(PVA);—聚(谷氨酸钠)；_>及其混合物；所述亲水性包膜化合物优选含有至少一种亲水性聚合物。32.如权利要求25和27或28所述的制剂，其中所述分散措施含有一种存在于和水互溶或和水不互溶的连续相中的亲脂性液体，其熔点优选低于或等于15'C。33.如权利要求32所述的制剂，其中所述亲脂性液体含有至少一种饱和脂肪酸的甘油三酯的混合物或者至少一种植物油或至少一种脂质或至少一种脂质衍生物或至少一种脂肪酸或至少一种脂肪酸衍生物。34.如权利要求33所述的制剂，其中所述亲脂性液体含有至少一种源自椰子油的饱和CVdo脂肪酸的甘油三酯的混合物；至少一种植物油，优选大豆油、棕榈油、亚麻籽油、棉籽油、芝麻油、葵花籽油或花生油；至少一种脂质，优选脂质卵磷脂、合成或天然的维生素E;至少一种脂质衍生物，优选花生四烯酰磷脂酰胆碱和硬脂酰磷脂酰胆碱；至少一种脂肪酸，优诜袖酴、囪W蔻酴、棕飽酴、硬脂酴及其盐类；至少一种脂肪酸衍生物，优选单-或三-甘油酯衍生物、油酸乙酯、乳酸月桂酯、硬脂酸甘油酯、棕榈酸脱水山梨聚醇酯、硬脂酸脱水山梨醇酯、脱水山梨醇一油酸酯或聚山梨醇酯；及其混合物；其条件是当上面列出的某些产品如果在例如低于或等于15C时单独使用时不是液体形式，那么这些产品可以和其它产品混合，以使其在例如低于或等于15'C时是液体形式。35.如权利要求25和27或28以及可选地32、33或34所述的制剂，其中所述分散措施包括用至少一种膜形成包膜化合物(优选其能用于可注射制剂)对所述微颗粒进行包膜。36.如权利要求35所述的制剂，其中所述膜形成包膜化合物含有至少一种疏水性聚合物，选自包括聚交酯、聚羟基乙酸、聚(交酯-共-乙交酯)、聚原酸酯、聚酸酐、聚(羟基丁酸)、聚己酸内酯、聚(碳酸垸基酯)、水不溶性PO聚合物、它们的衍生物和混合物的组。37.如权利要求25和27或29以及可选地权利要求31-35中至少一项所述的制剂，其中所述膜形成包膜化合物是脂质性质的，其熔点优选高于或等于15i:，并且含有至少一种饱和脂肪酸的甘油三酯的混合物或者至少一种植物油或至少一种脂质或至少一种脂质衍生物或至少一种脂肪酸或至少一种脂肪酸衍生物或者这些产品的混合物。38.—种重构药盒，尤其用于重构如权利要求24-37任何一项所述的制剂，其包括含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是权利要求l-20任何一项所述的微颗粒或者通过权利要求21或22所述的方法获得的微颗粒；和一种重构液体，选自包括以下的组—基本上水性的液体；基本上有机的和水互溶的液体；—以及基本上有机的和水不互溶的液体。39.—种重构方法，尤其用于重构如权利要求24-37任何一项所述的制剂，其主要包括混合^含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是权利要求l-20任何一项所述的微颗粒或者通过权利要求21或22所述的方法获得的微颗粒；^和一种重构液体，选自包括以下的组—基本上水性的液体；—基本上有机的和水互溶的液体；—以及基本上有机的和水不互溶的液体；并且搅拌该混合物。40.—种固体药物制剂，用于AP的延长释放，其含有干燥粉末形式其基于含有至少一种AP的PO微颗粒，这些微颗粒是权利要求l-20任何一项所述的微颗粒或者通过权利要求21或22所述的方法获得的微颗粒；或者由权利要求24-37任何一项所述的制剂获得。41.如权利要求40所述的固体药物制剂，用于吸入或者肺部给药。全文摘要本发明涉及由两性分子聚氨基酸形成的新型的微颗粒，所述两性分子聚氨基酸传输活性成分AP(s)，尤其是蛋白质和肽活性成分。本发明还涉及含有所述AP微颗粒的新型的改性释放的药物制剂。本发明的目的是开发加载了AP的新型的微颗粒，其通过聚集两性分子聚氨基酸的纳米颗粒获得，其性质得到改善，尤其是干燥固体形式的分散能力、以及重构悬浮液的稳定性及易于操作和注射的能力。本发明首先涉及含有至少一种AP(非共价结合)的两性分子聚氨基酸(PO)的微颗粒，其在pH7.0、等渗条件下在水中自发地形成纳米颗粒的胶体悬浮液，所述微颗粒a.通过雾化含有至少一种AP的PO溶液或胶体悬浮液获得；b.尺寸为0.5-100微米；c.在胶体悬浮液中能够分散。本发明还涉及这些微颗粒的制备方法、含有这些PO/AP微颗粒的悬浮液的液体制剂、这种制剂的重构方法和药盒以及这种制剂的干燥形式。文档编号C08G69/10GK101568328SQ200780031893公开日2009年10月28日申请日期2007年7月30日优先权日2006年7月28日发明者阿兰·孔斯坦西斯,陈幼平申请人:弗拉梅技术公司