一种具有神经保护作用的药物的制备和应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物的制备方法和在制备治疗和/或预防神经损伤药物中的应用，该药物为一点红全草或(和)地上部分的乙醇提取物或(和)1个新的生物碱类化合物。

背景技术：

一点红Emilia sonchifolia(L.)DC为菊科一点红属植物。该属植物全世界约有100种，分布于亚洲和非洲热带，少数产于美洲。我国仅有3种，其中包括一点红。一点红又名红背叶、羊蹄草、花古帽(贵州)、红头草(云南)、紫背草(台湾)，一年生草本，主要产于云贵川、江浙一带，常生于山坡荒地、田埂、路旁、海拔800-2100米。该植物在我国、印度、巴西等民间均有药用，全草药用，性凉，味苦，具有清热解毒，散瘀消肿的功效，主治上呼吸道感染、急性肠炎、痢疾、泌尿系感染、跌打损伤等。一点红也是临床上多个中成药的主要原料药之一。该药应用历史悠久，疗效确切，但其中的活性成分并不清楚。因此在制药领域中需要了解药效物质基础，并探寻新的候选药物。

技术实现要素：

为解决上述问题，通过研究，从一点红醇提物中得到的一个新型生物碱类成分，并命名为一点红碱(Emiline，1)。该化合物为吡咯烷型生物碱。

同时，根据本发明的一个方面，所述化合物具有神经保护作用。

此外，根据本发明的一个方面，一点红的乙醇提取物具有神经保护作用。

本发明的生物碱类化合物具有如下结构：

迄今为止，以上研究成果尚未有专利或文献报道。

本发明的有益效果和意义在于：充分利用一点红药用植物资源，深入研究开发，寻找具有独特化学结 构，活性较强的生物碱类化合物，以期为临床研究提供新型抗神经损伤的药物。

附图说明

图1一点红中1个具有神经元细胞保护作用的新生物碱类化合物的化学结构

图2化合物1的核磁氢谱

图3化合物1的核磁碳谱

图4化合物1的X-射线单晶衍射图谱

图5不同浓度的化合物1对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

具体实施方式

根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其他实施方案，下述实施方案仅作示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进。这些改变和改进均应在本发明的保护范围之内。

实施案例一本发明一点红乙醇提取物的制备

一点红的地上部分与3～5倍量90％乙醇回流提取，提取液真空浓缩即得。

实施案例二本发明新型生物碱类成分的制备

一点红的地上部分经90％乙醇提取，浓缩，提取物与1.5倍硅藻土拌样，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、95％乙醇回流洗脱，得到4个不同极性的部分。针对乙酸乙酯部分，利用硅胶柱色谱层析，以氯仿-甲醇(20∶1～0∶1，v/v)梯度洗脱，得到7个组分(Fr.1～7)。对Fr.2进行硅胶柱色谱层析，以氯仿-甲醇(0∶1～0∶1，v/v)梯度洗脱，得到10个亚组分(Fr.2-1～10)。SubFr.2-9经硅胶柱色谱，氯仿-甲醇(40∶1～0∶1，v/v)梯度洗脱，得到7个流分(Fr.2-9-1～7)。subFr.2-9-3流分经反相高效液相制备色谱分离，得到化合物1。利用现代波谱技术(IR，UV，1D-，2D-NMR，HRMS)鉴定该化合物为新化合物，命名为一点红碱(Emiline)。

实施案例三本发明新型生物碱类成分的表征

经过测试化合物1的理化性质、波谱数据确定了其结构。

化合物1波谱数据见表1。

表1化合物1的¹³C-NMR(CDCl₃，150MHz)和¹H-NMR(CDCl₃，600MHz)数据

化合物1的X-射线单晶衍射数据

Crystal data of 1：C₂₁H₂₃NO₆，MW＝385.42，monoclinic，space group P2₁/c，a＝10.549(4)b＝10.981(3)c＝16.736(5)β＝107.629(8)°，V＝1847.6(11)Z＝4，D_calc＝1.386g/cm^-3，crystal size0.22×0.34×0.49mm.3588independent reflections measured.Final R-factors[I＞2σ(I)]were R₁＝0.0472，wR₂＝0.1278(w＝1/σ|F|²)，S＝1.090.

实施案例四本发明新型生物碱类成分的体外对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用试验

(1)实验药物：Emiline[(+)-Emiline和(-)-Emiline，1∶1]，含量达98％以上。

(2)试剂：大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞(上海细胞库)；精致胎牛血清、马血清、青霉素钠、链霉素(Gibco公司)；皮质酮，DMEM，MTT，二甲基亚砜(Sigma公司)。

(3)方法：PC12细胞培养基养至对数生长期，用含10％胎牛血清、5％马血清的DMEM培养基(含青霉素钠100U/ml、链霉素100μg/ml)重悬细胞，调细胞浓度为每毫升1×10⁵个。细胞接种于96孔板中，各孔加入100μL细胞液，置于37℃、CO₂培养箱中贴壁培养2～4d，待细胞长满孔底后即可用于实验。加入250μmol/mL的皮质酮，作用24h后，加入不同浓度(2.5，5.0，10.0，20μg/mL)的Emiline作用24h后，用MTT法检测细胞的活力，利用酶标仪在450nm处测定各组细胞吸光度A值。以对照组平均吸收值为100％，以各处理组吸收值与对照组的比值计算存活率。

(4)结果：MTT结果显示Emiline在2.5～10.0μg/mL对皮质酮诱导的PC12细胞表现出明显的保护作用，其中在5.0μg/mL与皮质酮组相比，呈非常显著性关系。结果如图5，M±SD(n＝3)；##p＜0.01与对照组比较；*p＜0.05和**p＜0.01与皮质酮组比较；Cort：皮质酮。