具有水润和润滑活性的药物组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明公开了基于透明质酸的酯衍生物的药物组合物，其可用作特征为弹性和水 润性降低的阴道粘膜病症如阴道干燥和/或萎缩性阴道炎的局部治疗，并可用作生殖器粘 膜的润滑剂。
【背景技术】
[0002] 阴道粘膜是面向腔体的阴道表面。其由不含角蛋白但是被粘液保护的厚的多层被 覆上皮组成，所述粘液富含由分泌粘液的细胞所分泌的粘多糖。阴道粘膜的细胞、尤其是最 外层的那些细胞是与激素相关的，并且在维持阴道环境的代谢平衡方面起着重要作用。所 述细胞受雌激素的刺激而合成和储存大量糖原（糖储备），当所述细胞脱落时，其被引入到 阴道腔中。被释放出来的趟原被阴道中正常存在的菌群代谢而形成负责酸性局部pH的乳 酸，尤其是在接近月经周期的中期时。乳酸杆菌形成一种覆盖阴道粘膜的生物被膜，其与低 的pH值一起保护该环境不受病原体和机会致病菌侵袭并对抗自身无害并且通常在阴道中 以正常的"固有"菌丛形式少量存在的细菌的过度生长。
[0003] 粘膜的最内层是粘膜固有层，其由粘弹性结缔组织组成，并且其最深的部分血管 丰富。虽然阴道粘膜不包含腺体，但是，刺激、唤醒和性交增加其分泌，该分泌有润滑其表面 的作用。这种分泌实际上源于宫颈的腺体，还有一些是源自粘膜固有层的渗出液。
[0004] 由这一复杂的画面可以容易地推断出，阴道平衡中的任何变化都会导致粘膜的变 化，使粘膜倾向于丧失其水润和肿胀性，从而产生阴道干燥。从出生到绝经，外阴阴道粘膜 的水润和润滑、厚度、结构和功能性在女性生育期内一直在变化，但主要变化发生在绝经期 和绝经后，当雌激素刺激显著降低时。阴道干燥的其它原因是产后期、哺乳、长期使用一些 药物（如抗肿瘤药、抗抑郁药和抗组胺药）、手术操作（卵巢切除）和一些并发的病症如肥 胖或糖尿病。还有一些精神和身体方面的原因如应激反应，特别是限制饮食、强烈的体力活 动，和一些严重的社会问题。
[0005] 最后，性唤起阶段一些阻止常规粘液产生的精神或关系问题可造成干燥。
[0006] 不管什么原因，阴道干燥影响约50%的女性，其表现为干燥感、阴道瘙痒、不适、性 交期间疼痛，在更难以医治的一些形式中，表现为炎症和泌尿问题。阴道粘膜营养的改变为 机会性真菌或细菌感染铺平了道路；在这些情况中，该病症被更具体地称为阴道萎缩或萎 缩性阴道炎。
[0007] 除细菌或真菌感染的药理学治疗或激素替代治疗（其并不总是适用）外，阴道干 燥和萎缩性阴道炎的治疗主要是以使用具有舒缓和滋润作用的、特征在于组成其的载体的 润滑剂为基础。润滑剂可以是：
[0008] 以油为基础的润滑剂：通常为得自石油的聚合物凝胶。因为与空气接触时不会变 干并且不会与体液发生不利的相互作用，它们通常具有长效作用，但是，它们并不十分润滑 (它们会产生摩擦），并且尤其会溶解乳胶，这意味着它们不能与避孕套一起使用，因为它 们将会降低避孕套的避孕功效和对抗性传播疾病的功效；
[0009] 以硅酮为基础的润滑剂：最新一代，其类似水凝胶。它们易于涂布并且干燥缓慢， 但可能会攻击基于娃酮的产品；
[0010] 以水为基础的润滑剂：高水含量的凝胶，其易于涂布、与生物学液体相容并且对 制备避孕套用的乳胶没有影响；虽然它们在应用后可以提供极佳的快感，但是，它们十分容 易变干，并且因此需要频繁使用。
[0011] 当不仅需要即刻润滑，而且还需要长效润滑、滋润、保护作用时，以水为基础的产 品当然是使用最广泛的。
[0012] 在这些制剂中，最广泛使用的成分之一是透明质酸（HA)，一种具有多种性质的广 泛存在于人体内的聚合物；特别是，对于局部应用而言，其可以起到润湿剂、滋润剂、粘膜粘 着剂、愈合剂和组织再生剂的作用。其吸收大量的水（高达其自身重量的1〇〇〇倍），产生易 于涂布且可舒服涂抹的水溶性凝胶。但是，高水含量使得它们很快变干。
[0013] 现已令人吃惊地发现，一些通过HA的酯化获得的透明质酸衍生物可成功用于这 些应用，克服现有技术中存在的所有问题。
[0014] 一些HA酯衍生物已被成功用于其它领域，如组织工程学；例如，如EP618817中所 述，可将75或100%的衍生物压缩成纤维，当以无纺布形式进行处理时，其可形成一种可用 于皮肤病学领域的三维基质。
[0015] 本发明的凝胶形式的药物组合物由与苄醇形成的透明质酸酯组成，其中50%的透 明质酸羧基被苄醇的相应羟基酯化（Hyaffllp50);由此获得的酯吸收的水分低于HA本身， 其是低水溶性的并且更致密，但是，令人吃惊地是，其还可发挥比已知的包含HA钠盐的制 剂更有效、更长效的湿润作用。
[0016]因此，本发明的组合物显著改善了干燥阴道粘膜的营养和水润性。
[0017] 发明详沭
[0018] 本发明公开了以透明质酸苄基酯为基础的药物组合物，其中透明质酸50%的羧基 被苄醇的相应羟基酯化（HyafTllp50)，该组合物可用作特征为弹性和水润性降低的、可能 伴有并发的炎症或细菌或真菌感染的阴道粘膜病症如阴道干燥和萎缩性阴道炎的局部治 疗；所述组合物还可成功用作生殖器粘膜的润滑剂，即使在生理学条件下也是如此。本发明 所用的透明质酸原料可得自任何来源，例如由公鸡冠提取（EP138572)、如本领域技术人员 已知的通过发酵获得、或者通过生物合成获得（得自芽孢杆菌属，W02012032154)，且具有 100, 000至250, OOODa，特别是180, 000至230, OOODa的平均分子量。应当注意，这里的平 均分子量是指通过"特性粘度"法计算（Terbojevich等，Carbohydr Res, 1986,363-377)的 重均分子量。
[0019] 本文所用的酯衍生物是如EP216453中所述那样获得的，具体如实施例1所述：
[0020] 实施例1:其中50%的HA羧基被苄醇酯化的透明质酸苄基酯（Hyaff lp50)的制备
[0021] 在25°C下，将10. 6g HA四丁基铵盐（重均分子量为200,OOODa)(相当于17毫当 量的单体单元）溶解于530ml二甲基亚砜中，加入7. 8毫当量的苄基溴，并将所得溶液在 30°C下维持12小时。然后，加入62ml包含9g氯化钠的水溶液，在不断搅拌下，将所得混合 物缓慢倾倒到3000ml丙酮中。将形成的沉淀滤出，用500ml5 :1的丙酮/水洗涤三次，最 后，在30°C下真空干燥8小时。重复该沉淀阶段；将沉淀用5 :1的丙酮/水洗涤两次，然后 再单独用丙酮洗涤三次，然后在30°C下真空干燥24小时。
[0022] 由此获得的终产物是其中50%的透明质酸羧基被苄醇的相应羟基酯化了的透明 质酸（Hyaffllp50)。根据 Cundiff and Markunas, Anal Chem, 1961, 33, 1028-1030 来讲行 酯基的定量。
[0023] 由此获得的酯衍生物的吸水度低于起始分子。由于明显的化学原因和立体化学原 因，苄醇芳族基团对50%羧基的置换降低了起始分子的亲水性；但是，如下所述，出乎意料 地证明Hyaffllp50:
[0024] ?虽然含水百分数较低，但是，在对粘膜水润、维持新鲜度和快感的长效方面，远远 优于HA本身；
[0025] ?能发挥抑菌作用，在机会性感染事件中是有用的；
[0026] ?由于在水中的溶解度更低，因此更长效；
[0027] ?因为具有完全水性的基质，故对乳胶无害，因此可与避孕套一起使用；
[0028] ?是粘膜粘着性的并且是生物相容性的；
[0029] 因此，其无疑是对目前可获得的阴道水润和润滑产品的明确改善。
[0030] 实施例2:HA制剂（制剂A)和Hyaffllp50制剂（制剂B)的水润作用评估，其中 HA 的平均MW为180, 000-230,OOODa。
[0031] 该制剂是通过将HA粉末本身或Hyaff llp50用等渗盐水溶液（0? 9%w/v的NaCl水 溶液）水合以获得〇. 2%的终浓度来简单制备的。
[0032] 本研究是在通过手术切除获得的全无病理学疾病的猪阴道粘膜上离体进行的。
[0033] 将面积为2cm2的阴道粘膜样品放置到陪替氏培养皿上并用1ml制剂A或制剂B或 者等体积的盐水溶液（对照）处理。
[0034] 然后，将这些样品用1ml的盐水溶液润湿以模拟阴道环境，并在恒湿下将其储存 在37°C的恒温箱中。在1小时后，将该粘膜带转移到干燥的陪替氏培养皿上，并将此时记 为〇时和最大水润水平，对它们的水润程度进行评估，对照值被设定为100。在预设的时间 (1、3、6和24小时，对应于Tl、T2、T3和T4)测量粘膜的水润程度，在一次测量和下一次测 量之间，将样品保留在保温箱中。用皮肤水分测试仪（corneometer)进行测量；通过向测试 表面应用传感器来测量该表面所包含水分的介电功率（dielectric power),其显然会随着 水分含量而发生变化。
[0035] 在下面的表1中列出了所得的结果，其明确表明，制剂B(Hyaffllp50)的湿润效果 远远优于制剂A(HA);在24小时后，用Hyaffllp50处理的样品的残余水化水平比用HA处 理的样品高两倍。这意味着与制剂A相比，制剂B为粘膜提供了更多的水。
[0036] 表1:猪阴道粘膜样品水化程度评估
[0037]
【主权项】
1. 用于阴道干燥和/或萎缩性阴道炎的局部治疗的包含透明质酸的凝胶形式的药物 组合物，其中50%的透明质酸羧基被苄醇酯化。
2. 如权利要求1所述的药物组合物，其中所述透明质酸具有100, 000至250, OOODa，优 选180, 000至230, OOODa的平均分子量。
3. 如权利要求2所述的药物组合物，其中所述50%被苄醇酯化的透明质酸的浓度为 0· 2%w/w。
4. 用于治疗伴有阴道干燥和/或萎缩性阴道炎的细菌或真菌感染的如权利要求1-3任 意一项所述的药物组合物。
5. 包含浓度为0. 2%w/w的50%被苄醇酯化的透明质酸的凝胶形式的药物组合物，其中 所述透明质酸具有180, 000至230, OOODa的重均分子量且胶凝剂是Carbomer974P，并且其 还包含可药用的赋形剂。
6. 如权利要求5所述的药物组合物，其不包含尼泊金酯类防腐剂。
7. 用于治疗阴道干燥和/或萎缩性阴道炎的如权利要求5或6所述的药物组合物。
【专利摘要】本发明公开了具有水润和润滑活性的药物组合物，具体地讲，本发明公开了基于透明质酸的酯衍生物的药物组合物，其可用作特征为弹性和水润性降低的阴道粘膜病症如阴道干燥和/或萎缩性阴道炎的局部治疗，并可用作生殖器粘膜的润滑剂。
【IPC分类】A61K31-728, A61K9-06, A61P31-10, A61P15-02, A61P31-04
【公开号】CN104666240
【申请号】CN201310610684
【发明人】L·皮洛托, G·盖恩纳里, A·M·赞纳拉托
【申请人】菲迪亚制药股份公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年11月26日