本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种低分子量肝素钙的制备方法。
背景技术：
肝素是一种由糖醛酸和葡萄糖胺等低聚糖组成的混合物，具有抗凝活性，从发现至今已有80余年的历史，目前仍没有一种能够完全替代其的产品，仍是重要的生化药物。肝素是预防手术后血栓形成和治疗静脉血栓的首选药物。但大量的使用会引起出血和诱导血小板减少等副作用，限制了其大量的使用。低分子量肝素是肝素分级或降解得到的分子量较小的糖片段，其重均分子量在3000-8000，具有与肝素相当的抗Xa因子作用，而抗凝血酶(IIa)活性大大降低，其抗栓作用对凝血系统影响较小，出血倾向较小，还具有分子小，易吸收，生物利用度高，体内半衰期长等特点，其有效性与安全性由于肝素，目前已成为抗凝类药物研究的热点。低分子量肝素钙是低分子量肝素的钙盐，与钠盐相比，钙盐经注射后缓慢扩散，不会减少局部细胞间毛细血管的钙胶质，也不会改变血管通透性，几乎无钠盐经皮下注射可能引起的局部出血的副作用，故钙盐更适于临床使用。衡量低分子肝素钙的品质的标准有两个，一个是抗Xa因子效价，另一个就是抗Xa/抗Ⅱa比值，这两个标准的值越高，产品质量越好。公开号为CN1554671A的中国专利公开了“一种低亚硝酸盐含量的低分子肝素钙的制备方法”，其基于亚硝酸盐法将低分子量肝素钠经多次酸碱反应转变为低分子量肝素钙，虽然其成功降低了亚硝酸盐的含量，但制备过程中pH值较低，加上后续转钙步骤中酸碱强烈的中和反应，对抗Xa因子效价有一定损失，造成了抗Xa因子效价和抗Xa/抗Ⅱa比值不高的问题，影响产品质量，同时此工序操作较繁琐，可能引入其它试剂杂质。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种低分子量肝素钙的制备方法，使该制备方法能够提高低分子量肝素钙的抗Xa因子效价和抗Xa/抗Ⅱa比值；本发明的再一个目的在于提供一种低分子量肝素钙的制备方法，使该制备方法能够简化制备低分子量肝素钙工艺步骤。针对现有低分子量肝素钙制备方法(CN1554671A)中，抗Xa因子效价和抗Xa/抗Ⅱa比值较低，影响产品质量，同时工序操作较繁琐的问题，本发明提供如下解决方案：一种低分子量肝素钙的制备方法，包括以下步骤：步骤1、利用亚硝酸钠法制备低分子量肝素钠溶液；步骤2、阳离子交换树脂用氯化钙溶液进行树脂钙化，然后将步骤1制备的低分子量肝素钠溶液上钙化后的阳离子树脂，进行钙钠离子置换；步骤3、将步骤2钙钠离子置换后的置换液过滤、冻干、粉碎获得低分子量肝素钙。作为优选，步骤1为：步骤1.1、取肝素钠溶于水溶液中，加醋酸调节pH值至2-4，加入亚硝酸钠反应4-6h获得降解液；步骤1.2、向所述降解液中加入30％过氧化氢溶液氧化15min，然后加入25％氢氧化钠溶液中和pH值至6.5-7.0，获得中和液；步骤1.3、向所述中和液中加入95％乙醇进行醇沉并分离醇沉物，所得醇沉物用注射用水溶解获得低分子量肝素钠溶液。其中，所述肝素钠、亚硝酸钠和30％过氧化氢的比例优选为2.5kg:70g-90g:660mL，更优选为2.5kg:80g-85g:660mL；所述各pH值均可从限定的范围内任取一个点值，并不局限于范围的端点值，且可以和其它参数任意组合，不限于上述优选的步骤1具体方案，例如所述加醋酸调节pH值至2-4，所述pH值可以取此范围内诸如2.01、2.02......3.98、3.99或4.00任意一个作为pH值，且可以和过氧化氢、氢氧化钠的浓度以及反应时间、氧化时间参数任意组合，其他pH值参照此解释。作为优选，所述阳离子交换树脂为强酸性大孔阳离子交换树脂，进一步优选为D001型强酸性大孔阳离子交换树脂或JZD001X7-II型大孔强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂。作为优选，所述低分子量肝素钠的重均分子量为3000-4500D。作为优选，所述低分子量肝素钙的重均分子量为3000-4500D。作为优选，所述树脂钙化步骤为：阳离子交换树脂上氯化钙溶液，置换至下柱液pH值呈中性后，注射用水冲洗阳离子交换树脂完成树脂钙化。其中，所述氯化钙溶液浓度优选为0.5mol/L。本发明在制备过程中避免pH值为2以下的低分子量肝素步骤，减少了低分子量肝素在极低pH值环境下的分解，同时通过低分子量肝素钠与阳离子交换树脂温和的进行置换，避免了采用氢氧化钙与低分子量肝素的酸碱中和放热反应，保证了低分子量肝素钙的稳定，避免了剧烈环境下的抗Xa因子效价的损失。经过检测分析，本发明制备的低分子量肝素钙抗Xa因子效价介于105-120IU/mg，明显高于CN1554671A中记载的最高抗Xa因子效价102IU/mg(实施例1)，同时抗Xa/抗Ⅱa最高比值达到4.4以上，高于CN1554671A记载的最高比值4.2。此外，本发明简化了生产步骤，通过树脂一次进行置换，提高了生产效率，采用阳离子交换树脂，先选择性吸附原料中的钙离子，然后与低分子量肝素钠进行置换，减少杂质的引入，所置换产生的低分子量肝素钙，大部分为结合态钙，保证钙含量的稳定可靠。具体实施方式本发明公开了一种低分子量肝素钙的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述制备方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。以下就本发明所提供的一种低分子量肝素钙的制备方法做进一步说明。实施例1：制备低分子量肝素钙降解：取精品肝素钠2.5kg溶于水溶液中，加醋酸调节pH值至2-4，加入亚硝酸钠80.00g反应4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％(质量百分比，下同)过氧化氢溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氢氧化钠溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，为低分子量肝素钠溶液。钙化树脂：JZD001X7-II型大孔强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂上0.5mol/L氯化钙溶液，置换至下柱液pH值呈中性后，注射用水冲洗离子交换树脂。钙置换：低分子量肝素钠溶液上阳离子交换柱，进行钠钙置换。精制：置换液经0.22um过滤后，得到精品溶液。冻干：精品溶液置于冷冻干燥机冻干，粉碎后，得到低分子量肝素钙成品1858g。实施例2：制备低分子量肝素钙降解：取精品肝素钠2.5kg溶于水溶液中，加醋酸调节pH值至2-4，加入亚硝酸钠81.25g反应4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％过氧化氢溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氢氧化钠溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，为低分子量肝素钠溶液。钙化树脂：JZD001X7-II型大孔强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂上0.5mol/L氯化钙溶液，置换至下柱液pH值呈中性后，注射用水冲洗离子交换树脂。钙置换：低分子量肝素钠溶液上阳离子交换柱，进行钠钙置换。精制：置换液经0.22um过滤后，得到精品溶液。冻干：精品溶液置于冷冻干燥机冻干，粉碎后，得到低分子量肝素钙成品1932g。实施例3：制备低分子量肝素钙降解：取精品肝素钠2.5kg溶于水溶液中，加醋酸调节pH值至2-4，加入亚硝酸钠82.5g反应4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％过氧化氢溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氢氧化钠溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，为低分子量肝素钠溶液。钙化树脂：D001型强酸性大孔阳离子交换树脂上0.5mol/L氯化钙溶液，置换至下柱液pH值呈中性后，注射用水冲洗离子交换树脂。钙置换：低分子量肝素钠溶液上阳离子交换柱，进行钠钙置换。精制：置换液经0.22um过滤后，得到精品溶液。冻干：精品溶液置于冷冻干燥机冻干，粉碎后，得到低分子量肝素钙成品2047g。实施例4：制备低分子量肝素钙降解：取精品肝素钠2.5kg溶于水溶液中，加醋酸调节pH值至2-4，加入亚硝酸钠83.75g反应4-6h。氧化：上步制得的降解液，加入30％过氧化氢溶液660mL氧化15min。中和：加入25％氢氧化钠溶液中和pH值至6.5-7.0。醇沉：中和液加入95％乙醇醇沉，醇沉物用注射用水溶解后，为低分子量肝素钠溶液。钙化树脂：D001型强酸性大孔阳离子交换树脂上0.5mol/L氯化钙溶液，置换至下柱液pH值呈中性后，注射用水冲洗离子交换树脂。钙置换：低分子量肝素钠溶液上阳离子交换柱，进行钠钙置换。精制：置换液经0.22um过滤后，得到精品溶液。冻干：精品溶液置于冷冻干燥机冻干，粉碎后，得到低分子量肝素钙成品2195g。实施例5：产品检测将实施例1-实施例4制备的低分子量肝素钙进行检测，对比产品为采用CN1554671A实施例1记载的方法制备的产品，检测结果如下表：表1产品检测结果由表1可知，本发明制备的产品符合低分子量肝素钙的各项质量标准，并且在抗Xa因子效价、抗Xa/抗Ⅱa比值和干燥失重比例方面显著优于CN1554671A。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。