一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物、制备方法及其应用与流程

技术特征：
1.一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物的制备方法，将蚕丝脱胶后得到的丝素溶解，经透析、过滤得到丝素蛋白溶液，其特征在于再进行如下步骤的加工：(1)将硫代琥珀酰亚氨基-4-[N-马来酰亚胺甲基]-环己烷-1-羧酸酯（sulfo-SMCC）溶解于PBS缓冲溶液中，将得到的溶液滴加到浓度为1～20mg/ml的丝素蛋白溶液中，按质量百分比，硫代琥珀酰亚氨基-4-[N-马来酰亚胺甲基]-环己烷-1-羧酸酯（sulfo-SMCC）为丝素蛋白的0.25～5%；在温度为0～4℃、搅拌条件下反应，再经超滤离心处理后，得到截留分子量为9～12kDa的活化丝素蛋白溶液；(2)将硫酸鱼精蛋白溶解于含5mMEDTA的PBS缓冲溶液中，再加入水溶性2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐作为Trant’s试剂，硫酸鱼精蛋白的浓度为1～20mg/ml，鱼精蛋白与Trant’s按质量比为1:(1～20)；在温度为0～4℃、搅拌条件下反应，得到巯基化鱼精蛋白溶液；(3)将步骤(2)得到的巯基化鱼精蛋白溶液与步骤(1)得到的活化丝素蛋白溶液混合，巯基化鱼精蛋白与活化丝素蛋白的质量比为（0.025～0.1）：1；在温度为0～4℃的条件下反应，得到的反应液在去离子水中透析,截留分子量为9～12kDa，再经超滤离心处理，得到经鱼精蛋白改性的阳离子化丝素蛋白溶液；(4)在温度为2～8℃、搅拌步骤(3)制备的阳离子化丝素蛋白溶液15～30min后将基因滴加到溶液中，阳离子化丝素蛋白与基因的质量比为（2～10）：1；涡旋处理30～45s，升温至25～37℃，静置30～45min，得到阳离子化丝素蛋白/基因复合物。2.根据权利要求1所述的一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物的制备方法，其特征在于：所述的丝素为柞蚕丝素、天蚕丝素，所述丝素蛋白的分子量分布在15～250kDa范围内。3.根据权利要求1所述的一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物的制备方法，其特征在于：所述的硫酸鱼精蛋白的分子量分布在4.9～5.1kDa范围内。4.根据权利要求1所述的一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物的制备方法，其特征在于：所述的基因为质粒DNA或siRNA。5.根据权利要求1所述的一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物的制备方法，其特征在于：所述的阳离子化丝素蛋白的等电点pI为7～8，表面Zeta电位为+12～+20mV。6.一种按权利要求1制备方法得到的阳离子化丝素蛋白/基因复合物。7.根据权利要求6所述的一种阳离子化丝素蛋白/基因复合物，其特征在于：它的表面Zeta电位为+3～+10mV，粒径为100～260nm。8.一种如权利要求6所述的阳离子化丝素蛋白/基因复合物的应用，其特征在于：将复合物中携带的基因传递给靶细胞，其靶细胞为细胞膜表面大量表达αvβ3和αvβ5整合素的细胞。9.根据权利要求8所述的阳离子化丝素蛋白/基因复合物的应用，其特征在于：所述的靶细胞为血管内皮细胞、L929成纤维细胞、Hela人宫颈癌细胞、HCT116结肠癌细胞及U87胶质瘤细胞。