本发明涉及一类新型的用作GPR17和CysLT1双重拮抗剂的化合物，其制备方法和用途。该类化合物对GPR17有弱的拮抗活性，对CysLT1有强的拮抗作用，可用于预防、治疗中枢神经系统损伤和神经退行性疾病(如多发性硬化症，脑白质营养不良)；还可用于治疗CysLT1介导的哮喘和鼻炎、过敏、其他炎症性疾病。
背景技术：
孤儿受体GPR17(the G protein-coupled receptor 17)属于视紫红质样A类G-蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)大家族，从系统发育树上看，GPR17处于P2Y12、P2Y13、P2Y14亚群和半胱氨酰白三烯受体(cysteinyl leukotrienes receptor,CysLT受体)的中间，GPR17具有典型的七次螺旋跨膜结构，人GPR17定位于染色体2q21，与CysLT1的同源性为31％。GPR17主要在中枢神经系统中表达，尤其是处于分化期的少突胶质前体细胞，GPR17有两种剪切变体，即短型(含339个氨基酸)和长型(N端多出28个氨基酸)，两种GPR17在不同组织中的表达水平不同，脑内短型GPR17的含量丰富，大约为长型的8-23倍，在心脏和肾脏中则相反。
近年来，研究发现GPR17与髓鞘的形成有关，Chen等人报道GPR17参与从少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)早期分化到少突胶质成熟、髓鞘形成的全过程，表现为NG2阳性细胞分化成OPCs期间GPR17的表达逐渐上调，并在OPCs分化前期表达最高，随着OPCs分化成熟GPR17的表达逐渐降低，完全成熟的少突胶质细胞不表达GPR17。螺旋-环-螺旋转录因子Olig1能促进少突胶质细胞成熟，从而修复髓鞘。Olig1能负性调控GPR17的表达。在体内和体外都发现GPR17过表达可抑制少突胶质细胞的分化成熟，引起脱髓鞘现象，GPR17基因敲除小鼠可以较早出现髓鞘形成。总之，GPR17对OPCs早期分化起正性调节作用，对少突胶质细胞 后期分化成熟起负性调控作用。在脑缺血、脊髓损伤后期抑制GPR17可促进髓鞘的修复。
人和实验动物在脑缺血和脑外伤后，CysLTs的合成和释放增加，CysLTs可激活GPR17，参与脑损伤病变。在大鼠局灶性脑缺血模型中，缺血中心区CysLT1受体mRNA表达增加，在缺血后3-6h和7-14d有两个高峰，而在缺血周边区仅在7-14d增加；缺血中心区CysLT1受体在缺血24h表达于神经元，14d后表达在小胶质细胞，缺血周边区在14d后表达在增生的星形胶质细胞。小鼠持续性局灶性脑缺血模型也证明，CysLT1受体在急性期有相似的表达特点(Fang SH et al.Neuroscience,2006,140(3):969-979；Zhang Y J et al.Acta Pharmacol Sin,2006,27(12):1553-1560)。这说明CysLT1受体与脑缺血急性期的神经元损伤和后期的胶质细胞增生有关。在整体实验中，已证明CysLT1受体拮抗剂对脑缺血和脑外伤有保护作用。
综上所述，GPR17和CysLT1与中枢神经系统损伤有密切的关系，开发它们的拮抗剂对于治疗中枢神经系统疾病具有重要意义。目前，还没有选择性GPR17拮抗剂的报道。研究发现，GPR17受体可能存在两个相距较远的配体结合位点(核苷酸结合位点和半胱氨酰白三烯结合位点)，GPR17的核苷酸结合区与P2Y受体的核苷酸结合区位置相同，Ciana等人用表达了hGPR17的1321N1细胞做[35S]GTPγS结合实验，P2Y12/P2Y13受体的拮抗剂cangrelor和P2Y1受体的拮抗剂MRS2179可以阻断UDP-葡萄糖引起的hGPR17激活，IC50分别为0.7nM和508nM；CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特和普仑司特能浓度依赖的抑制LTD4引起的hGPR17激活，IC50分别为60nM和10.5nM；2013年，Hennen等人发现MDL29951能选择性地激活GPR17，不能激活P2Y受体和CysLT1受体，普仑司特能抑制MDL29951诱导的GPR17的激活，而孟鲁司特不能。GV150526A对GPR17有弱的激活作用。2014年，Kirsten Ritter等人用放射性配体[3H]PSB-12150做结合实验，发现MDL29951和GV150526A、普仑司特、孟鲁司特对GPR17的亲和性相似，其Ki分别为2.32μM、1.63μM、4.06μM、6.54μM。和MDL29951相比，GV150526A对GPR17亲和性相似，激动作用大大减弱，可能是酰胺键侧链的苯基造成的，GV150526A可视为GPR17的部分激动剂。于是发明人设想用孟鲁司特的(E)-3-[2-[7-氯-2-喹啉]乙烯基]苯基替代GV150526A酰胺键侧链的苯基，设计合成了CHY113，使其对GPR17保持高亲和性的同时，对 GPR17具有拮抗作用，活性结果表明CHY113对GPR17有弱的拮抗作用，对CysLT1有较强的拮抗作用，结果证明上面的设计思路是正确的。在此基础上，发明人对CHY113作了初步的结构优化和评价，从而得到一系列化合物。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一类新型的用作GPR17和CysLT1受体双重拮抗剂的化合物；
本发明的另一目的在于提供上述化合物的制备方法；
本发明的又一目的是提供上述化合物在制备预防或治疗中枢神经系统损伤和神经退行性疾病(如多发性硬化症，脑白质营养不良)的药物中的用途以及在制备治疗CysLT1介导的哮喘、鼻炎、过敏、其他炎症性疾病的药物中的用途。
根据本发明的一个方面，提供了一种用作GPR17和CysLT1受体双重拮抗剂的化合物，其具有以下通式Ⅰ的结构：
其中：
Y不存在，或者为-O-或-NH-；
X不存在，或者为C1-C6亚烷基、C2-C6亚链烯基或C2-C6亚链炔基；优选X为不存在、或为-CH2CH2-或-CH＝CH-；
不存在，或者为苯环；
R1为选自如下基团中的任意一种：H；卤素原子；羟基；羧基；氨基；C1-C10直链或支链烷基；C1-C10直链或支链烷氧基；氰基C0-C6烷基；C2-C8链烯基；C2-C6链炔基；C1-C6烷氨基；3-8元环烷基C0-C10烷基；5至8元芳 基C0-C6烷基，其中，所述5至8元芳基未被取代，或者被选自如下的基团取代：
R1优选为C1-C6的直链或支链烷基；C2-C5链炔基；5-8元环烷基C0-C6烷基；苯基C0-C6烷基，其中，所述苯基未被取代，或者被选自如下的基团取代：
R1进一步优选为甲基、乙基、丙基、正丁基、异丁基、戊基、己基、苯基C1-C6烷基、苯基、4-6元环烷基C0-C6烷基、氰基C1-C6烷基、苯基C1-C6烷氧基苯基；
m为0至10的整数，优选为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
R2和R4各自独立地为氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素原子、羟基或氨基；优选各自独立地为氢、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、F、Cl、羟基或氨基；
R7选自H、四氮唑基、-(CH2)nCOOH，其中，n为0至3的整数；优选地，R7选自H、-(CH2)nCOOH，其中，n为0至2的整数，优选为0、1或2；
当不存在时，R5a和R6a不存在，R5b和R6b各自独立地选自H、卤素原子(如，F、Cl等)、羟基、羧基、氨基、C1-C10直链或支链烷基、C1-C10直链或支链烷氧基、C2-C8链烯基、C2-C6链炔基、C1-C6烷氨基；优选R5b和R6b各自独立地为H、卤素原子、C1-C6烷氧基；
当为苯环时，R5b和R6b不存在，R5a和R6a各自独立地选自H、卤素原子(如F、Cl等)、羟基、羧基、氨基、C1-C10直链或支链烷基、C1-C10直链或支链烷氧基、C2-C8链烯基、C2-C6链炔基、C1-C6烷氨基；优选R5a和R6a各自独立地为H、卤素原子、C1-C6烷氧基；
优选地，本发明所述的用作GPR17和CysLT1受体双重拮抗剂的化合物具有如下通式Ⅱ或通式Ⅳ的结构：
X、Y、R1、R7、R5a、R6a、R5b和R6b的定义如前述相同；
在本发明的更优选实施方案中，所述通式Ⅱ中的R1的结构如下：
Y为-NH-；
X为-CH＝CH-，双键具有Z、E构型，优选E构型；
其中R7优选为羧基；
优选地，本发明的所述的用作GPR17和CysLT1受体双重拮抗剂的化合物具有如下通式Ⅲ的结构：
其中：
R5a和R6a的定义同上；优选R5a和R6a各自独立地为H、卤素原子(如F、Cl)、C1-C6烷氧基；
进一步优选地，本发明通式Ⅰ结构的化合物具有如下结构：
根据本发明的另一方面，提供了包含根据本发明的通式I所示的化合物的药物组合物。
所述药物组合物进一步包含药学上可接受的辅料、赋形剂等。
根据本发明的另一方面，提供了本发明所述的用作GPR17和CysLT1受体双重拮抗剂的化合物的制备方法。
所述通式I所示的化合物的制备方法，其包括如下步骤：
a)通式V所示的化合物溶于DMF，氮气保护下加入R1OH、缩合剂DCC或者EDCI、DMAP,室温过夜的条件下发生酯化反应；
或通式V所示的化合物溶于DMF，室温下加入缩合剂HATU、DIPEA，15分钟至半小时后加入R1NH2，室温过夜；
或者通式V所示的化合物溶于DMF，氮气保护冰水浴加入碱碳酸钾或者碳酸铯，15分钟后加入R1Br，室温或者60℃反应4h至16h；
或通式V所示的化合物溶于DMF，室温下加入碳酸铯，R1OTs,室温过夜；
当R9与R7不相同时，进一步包括步骤b)
b)使R9脱保护得到通式I的化合物。例如，当保护基为甲基、乙基时，以乙醇或异丙醇为溶剂，以氢氧化锂或氢氧化钠为碱，60℃反应4h至16h得酸；当保护基为三甲基硅乙氧基时，以四氢呋喃为溶剂，加入TBAF,室温反应4h得酸。
其中，X为不存在、或为-CH2CH2-或-CH＝CH-；Y不存在，或者为-O-、-NH-)；R9为氢、或-(CH2)nCOOR10，R10为羧基保护基团，例如C1-C6烷基，三甲基硅乙基；R7为H、-(CH2)nCOOH；
R1、R5a、R6a、R5b、R6b、和n的定义与前述定义相同。
其中，所述通式V所示的化合物通过如下步骤制备：
c)通式VI中的醛基被氧化剂氧化得到通式V的化合物；
例如，反应条件可以为，将醛加入乙腈水(5:1，v/v)中,加入二水合磷酸二氢钠,双氧水、次氯酸钠，室温反应过夜；
或者
d)通式VI所示的化合物与叔丁氧羰基亚甲基三苯基膦在甲苯中回流过夜发生Horner-Wadsworth-Emmons反应；再用甲酸室温反应过夜或三氟乙酸室温反应2到6小时选择性水解叔丁酯得到通式V中α，β不饱和羧酸，以及非必须地，α，β不饱和羧酸在甲醇和四氢呋喃(2:1，v/v)中，室温下用还原剂Pd/C催化氢化4h得到通式V所示的化合物；
或者
e)通式VI中的醛基和丙二酸在例如吡啶和哌啶的弱碱的作用下，50℃反应过夜得到通式V所示的化合物；
其中，X为不存在、或为-CH2CH2-或-CH＝CH-；R9为氢、-(CH2)nCOOH或-(CH2)nCOOR10，R10为羧基保护基团；
R5a、R6a、R5b、R6b、和n的定义与前述定义相同；
更具体而言，本发明中通式I所示的化合物可以通过多种步骤和合成路线制备，代表性的步骤和合成方法如下，但不限于下述方法：
路线一：
其中，R5a、R6a和R1的定义与前述相同；
具体来说，化合物1与2-甲基乙酰乙酸乙酯发生Japp-Klingemann缩合生成化合物2，化合物2在多聚磷酸作用下关环生成吲哚化合物3，化合物3经Vilsmeier-Haack甲酰化得到化合物4，化合物4在碱性条件下水解得酸5，酸5与2-三甲基硅基乙醇在缩合剂EDCI、DMAP的作用下生成酯化合物6，化合物6和叔丁氧羰基亚甲基三苯基膦发生Horner-Wadsworth-Emmons反应得到不饱和酯化合物7，化合物7经甲酸选择性水解叔丁酯得酸化合物8，化合物8经不同的方法引入酯基R1得到化合物9，化合物9用TBAF脱保护基即得到本发明所述的如通式10所示的化合物。
其中，化合物8到9可通过如下方法转化而成：①化合物8与醇R1OH在DCC，DMAP的条件下缩合而成；②化合物8与R1OTs在碱性条件下(如NaHCO3)发生亲核取代得到；③化合物8与R1Br在碱性条件下(如Cs2CO3)发生亲核取代得到；
路线二：
其中，R5a和R6a各自独立地为H、卤素原子、C1-C4烷氧基；R8为甲基或乙基；优选R1为：
具体来说，化合物11经Vilsmeier-Haack甲酰化得到12，化合物12和叔丁氧羰基亚甲基三苯基膦反应得到13，化合物13和三氟乙酸反应得到化合物14，化合物14和胺在缩合剂作用下缩合成酰胺化合物15，化合物15在碱性条件下水解为酸即得到本发明所述的如通式16所示的化合物。
对于商业上不可得的吲哚化合物11，其合成路线如下：
1、用路线一中合成化合物3的方法合成吲哚类化合物，其中化合物2还可以在ZnCl2/Tol.或者TsOH/Tol.的条件下得到化合物3；
2、
化合物19和叠氮化钠反应生成化合物20，化合物17和20在甲醇钠的条件下反应得到18，化合物18经加热关环得吲哚类化合物11；
3、
取代苯肼的盐酸盐或者取代苯肼与丙酮酸酯缩合成化合物22，化合物22在PPA中关环得到吲哚类化合物11；有时化合物21与丙酮酸酯在乙酸的催化作用下直接得到吲哚类化合物11；
路线三：
其中，R5a和R6a、R1的定义同上；R1优选C1-C6烷基，苯基取代的C1-C6烷基，苯基；
具体来说，化合物23和PPh3反应得化合物24，化合物24与化合物4反应得化合物25，化合物25在碱性条件下水解得到本发明所述的如通式26所示的化合物；
路线四：
其中，R5a和R6a优选为H、Cl，Y优选为-NH-，R1优选为：
具体来说，用Pd/C催化氢化化合物14得到化合物27，化合物27与R1YH缩合得到28，化合物28在碱性条件下水解得到本发明所述的如通式26所示的化合物；
路线五：
其中，R5a和R6a优选为H、Cl，Y优选为-NH-，R1优选为：
具体来说，用双氧水等将化合物12吲哚环3位的醛基氧化为羧基得到化合物30，化合物30与R1YH缩合得到31，化合物31在碱性条件下水解得到本发明所述的如通式32所示的化合物；
路线六：
其中，R5a和R6a优选为H、Cl，Y优选为-O-，R1优选为：
具体来说，化合物5在氯化亚铜和喹啉条件下脱羧得到化合物33，化合物33和丙二酸在弱碱条件下反应得34，酸34与溴代物R1Br在碱性条件下发生取代反应生成本发明所述的如通式35所示的化合物；其中溴代物的合成如下：
化合物36被硼氢化钠还原为醇37，后者在NBS，PPh3条件下被转化成溴代物38。
路线七：
其中，R5b和R6b优选为H、甲基、乙基、苯基，R1优选为：
具体来说，化合物39与化合物46反应生成化合物40，化合物40被PCC氧化成化合物41，采用合成化合物16的方法即路线二将化合物41转化成本发明所述的如通式45所示的化合物。
根据本发明的又一方面，提供了通式I所示的化合物在制备预防或治疗中枢神经系统损伤和神经退行性疾病(如多发性硬化症，脑白质营养不良)的药物中的用途以及在制备治疗CysLT1介导的哮喘、鼻炎、过敏、其他炎症性疾病的药物中的用途。
根据本发明的再一方面，提供了通式I所示的化合物在预防或治疗中枢神经系统损伤和神经退行性疾病(如多发性硬化症，脑白质营养不良)中的用途以及在治疗CysLT1介导的哮喘、鼻炎、过敏、其他炎症性疾病中的用途。
本发明设计合成了一类新型的GPR17受体和CysLT1受体双重拮抗剂，体外钙流实验表明该类化合物对GPR17有弱的拮抗活性，对CysLT1有强的拮抗作用，可用于预防、治疗脑、脊髓损伤和神经退行性疾病(如多发性硬化症，脑白质营养不良)；还可用于治疗CysLT1介导的哮喘和鼻炎、过敏、其他炎症性疾病。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步阐述，但本发明不局限于这些实施例。
化合物制备实施例
下述制备实施例中，NMR用Varian生产的Mercury-Vx 300M仪器测定，NMR定标：δH 7.26ppm(CDCl3),2.50ppm(DMSO-d6),2.05ppm(Acetone-d6)；试剂主要由上海化学试剂公司提供；TLC薄层层析硅胶板由山东烟台会友硅胶开发有限公司生产，型号HSGF 254；化合物纯化使用的正相柱层析硅胶为山东青岛海洋化工厂分厂生产，型号zcx-11，200-300目。
制备实施例一(化合物编号CHY90)
将3,5-二氯苯胺(5g,30.8mmol)加入单口圆底烧瓶中，加入水(20mL)，在冰水浴条件下滴加浓盐酸(20mL)，滴加完后，再滴加冰水冷却过的亚硝酸钠(2.34g,33.91mmol)水溶液11mL，滴毕，在冰水浴条件下搅拌20分钟；在另一个单口圆底烧瓶中加入2-甲基乙酰乙酸乙酯(6.6g,45.78mmol)，加入乙醇(25mL)，在冰水浴下滴加氢氧化钾(15.5g,0.28mol)水溶液30mL，滴毕，在冰水浴条件下搅拌15分钟后滴加到第一个瓶中，40℃下搅拌15分钟，冷却至室温，乙醚萃取(20mL×3次)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水MgSO4干燥，减压旋除溶剂后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝100:1→50:1→20:1)得产品M2(2.876g，33.9％，黄色固体)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)：δ7.63(s,1H),7.11(d,J＝1.8Hz,2H),6.94(d,J＝1.8Hz,1H),4.33(q,J＝7.1Hz,2H),2.10(s,3H),1.39(t,J＝7.1Hz,3H).
将化合物M2(780mg,2.84mmol)加入单口圆底烧瓶中，加入多聚磷酸(9.6g)，甲苯(10mL)，45℃搅拌过夜，减压旋除甲苯，加入冰水，搅拌15分钟，析出沉淀，过滤，滤饼用CH2Cl2洗两次，40℃真空干燥得化合物M3(707mg,96.5％，白色固体)。用同样的方法再制备1.876g化合物M3。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ7.43(s,1H),7.25(s,1H),7.09(s,1H),4.34(q,J＝6.6Hz,2H),1.33(t,J＝6.9Hz,3H).
将安装有冷凝管的双口圆底烧瓶置于冰水浴中，在氩气保护下加入DMF(3.26mL，42.32mmol)，缓慢滴加POCl3(3.65mL,39.92mmol)，室温搅拌15分钟，加入M3(2.06g,7.98mmol)的1,2-二氯乙烷溶液(40mL)，100℃回流7小时，冷却至室温，缓缓地倒入乙酸钠的水溶液中(50g AcONa,100mL H2O)，析出大量黄色固体，继续搅拌过夜，过滤，滤饼分别用水、二氯甲烷 洗涤，40℃真空干燥得化合物M4(1.1g,59.2％，灰色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ10.63(s,1H),7.56(d,J＝1.8Hz,1H),7.42(d,J＝1.5Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.37(t,J＝7.2Hz,3H)。
将化合物M4(1.1g,3.86mmol)加入单口圆底烧瓶中，加入乙醇(60mL)，氢氧化锂(616mg,14.67mmol)，加热到50℃逐渐溶解，2小时后反应完全，浓缩乙醇，加水稀释，1N盐酸调pH至2，析出黄色沉淀，过滤，滤饼用水洗2次，40℃真空干燥得化合物M5(920mg,92.4％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ10.76(s,1H),7.50(d,J＝1.5Hz,1H),7.34(d,J＝2.1Hz,1H).
在圆底烧瓶中依次加入化合物M5(600mg,2.33mmol)，重蒸的1,2-二氯乙烷(20mL)，2-三甲基硅基乙醇(332mg,2.79mmol)，EDCI(671mg,3.50mmol)，DMAP(340mg,2.79mmol)，室温搅拌过夜，滤掉不溶物，减压旋掉溶剂，所得粗产物用乙酸乙酯(30mL)溶解，0.5N盐酸(40mL×3次)洗涤，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M6(200mg,24％，白色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ10.81(s,1H),9.47(bs,NH),7.38(d,J＝1.5Hz,1H),7.34(d,J＝1.8Hz,1H),4.56-4.51(m,2H),1.24-1.18(m,2H),0.11(s,9H).
将化合物M6(200mg,0.56mmol)加入单口圆底烧瓶中，加入叔丁氧羰基亚甲基三苯基膦(315mg,0.84mmol)，在氮气保护下加入重蒸的甲苯(20mL)，回流过夜，减压旋掉溶剂，所得粗产物用二氯甲烷(10mL)溶解，硅胶拌样柱层析纯化(PE/EtOAc＝30:1)得化合物M7(203mg，79.6％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.15(bs,NH),8.32(d,J＝16.5Hz,1H),7.32(d,J＝1.5Hz,1H),7.20(d,J＝1.5Hz,1H),6.48(d,J＝16.2Hz,1H),4.49-4.43(m,2H),1.26-1.15(m,2H),0.08(s,9H).
将化合物M7(190mg,0.42mmol)加入单口圆底烧瓶中，加入98％甲酸(50mL)，室温搅拌过夜，减压旋掉溶剂，所得粗产物用丙酮(10mL)溶解，硅胶拌样柱层析纯化(PE/EtOAc＝20:1)得62mg化合物M7，(PE/EtOAc＝4:1)得化合物M8(78mg，46.4％，白色固体)。1H NMR(300MHz,Acetone-d6)):δ11.63(bs,1H),10.69(bs,1H),8.50(d,J＝16.5Hz,1H),7.59(s,1H),7.27(s,1H),6.64(d,J＝15.9Hz,1H),4.48(t,J＝9.0Hz,2H),1.19(t,J＝9.0Hz,2H),0.09(s,9H).
将化合物M8(10mg,0.025mmol)溶于0.5mL DMF中，冰水浴下加入碳酸铯(12mg,0.038mmol)，滴加溴苄(4.7mg,0.028mmol)的DMF溶液(0.2mL)，室温反应4小时，加入乙酸乙酯(5mL)，水(5mL)，振摇，静置分层，有机相用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M9(10mg，83.3％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.20(bs,NH),8.49(d,J＝16.2Hz,1H),7.44-7.21(m,7H),6.64(d,J＝16.2Hz,1H),5.28(s,2H),4.48-4.42(m,2H),1.17-1.11(m,2H),0.09(s,9H).
将化合物M9(10mg,0.020mmol)溶于0.3mL THF中，缓慢滴加TBAF(0.2mL,1M in THF)，室温反应3小时，减压旋掉THF，加水(2mL)，1N盐酸调PH至2，乙酸乙酯(4mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝1:1)得产品CHY90(8mg，100％，黄色固体)。其中双键主要是E构型，含有微量的Z构型。1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ11.66(bs,1H),8.62(d,J＝16.2Hz,1H),7.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.49-7.33(m,5H),7.27(d,J＝1.5Hz,1H),6.79(d,J＝16.2Hz,1H),5.27(s,2H).
采用与制备实施例一相似的操作合成以下化合物：
制备实施例二(化合物编号CHY98)
将化合物38(100mg,0.37mmol)加入5mL甲醇中，呈混浊状，在冰水浴下加入硼氢化钠(28mg,0.73mmol)，室温反应8小时，TLC检测没反应完全， 补加50mg硼氢化钠，室温过夜，TLC检测反应完全，减压旋除甲醇，加水(10mL)稀释，过滤，干燥得化合物37(100mg，100％，白色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.40(d,J＝9.0Hz,1H),8.03-7.31(m,10H),5.26(s,1H),4.56(s,2H).
将化合物M8(20mg,0.050mmol)溶于无水DMF(1mL)中，分别加入化合物37(16mg,0.058mmol)，DCC(16mg,0.078mmol)，DMAP(4mg,0.033mmol)，室温反应过夜，加乙酸乙酯(5mL)稀释，水(5mL×2次)洗涤，饱和食盐水洗涤，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝10:1)得化合物M10(25mg，74％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.20(bs,NH),8.54(d,J＝15.9Hz,1H),8.11(d,J＝8.7Hz,1H),8.07(s,1H),7.77-7.22(m,11H),6.69(d,J＝15.9Hz,1H),5.33(s,2H),4.46(m,2H),1.15(m,2H),0.06(s,9H).
将化合物M10(25mg,0.037mmol)溶于1mL THF中，缓慢滴加TBAF(0.3mL,1M in THF)，室温反应2小时，TLC检测反应完全，减压旋掉THF，加水(2mL)，1N盐酸调pH至2，析出黄色固体，过滤，滤饼分别用水、二氯甲烷洗，40℃真空干燥得15mg粗产物，用丙酮打浆得产品CHY98(10mg，47.6％，黄色固体)，含有少量杂质。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.63(d,J＝7.8Hz,1H),8.54(d,J＝15.9Hz,1H),8.17-8.06(m,5H),7.81(s,1H),7.75-7.50(m,5H),7.32(s,1H),6.74(d,J＝15.9Hz,1H),5.31(s,2H).
采用与制备实施例二相似的操作合成CHY109。1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ11.73(bs,1H),8.77(d,J＝15.9Hz,1H),7.65(s,1H),7.45-7.22(m,6H),6.99(d,J＝16.2Hz,1H).
采用与制备实施例二相似的操作合成CHY111。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.53(s,1H),9.19(s,1H),8.83(d,J＝16.5Hz,1H),8.36(s,1H),8.18(d,J＝8.7Hz,1H),8.10(d,J＝8.1Hz,1H),7.92(d,J＝8.7Hz,1H),7.82-7.70(m,2H),7.59(s,1H),7.53-7.21(m,8H),6.78(d,J＝16.5Hz,1H),5.35(s,2H).
制备实施例三(化合物编号CHY96)
将4-戊炔-1-醇(100mg,1.19mmol)和吡啶(141mg,1.57mmol)依次加入无水二氯甲烷(2mL)中，冰水浴下滴加对甲苯磺酰氯(248mg,1.30mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，室温反应2小时，分别用1N盐酸和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝10:1)得化合物M11(73mg，23.8％，无色油状)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.81-7.78(m,2H),7.36-7.33(m,2H),4.15(t,J＝6Hz,2H),2.45(s,3H),2.25(td,J＝6.9,2.7Hz,2H),1.90-1.81(m,2H),1.58(s,2H).
将化合物M11(13mg,0.055mmol)溶于0.5mL DMF中，加入化合物M8(20mg,0.050mmol)和碳酸氢钠(12mg,0.15mmol)，室温反应过夜，TLC检测没反应，加入碳酸铯(24mg,0.074mmol)，60℃反应过夜，加入乙酸乙酯(5mL)，水(5mL)，1N盐酸调PH至2，振摇，静置分层，有机相用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M12(16mg，69.6％，白色固体)。核磁中含有少量Z构型产物，以E构型为主。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.42(s,1H),8.44(d,J＝16.2Hz,1H),7.33(d,J＝1.5Hz,1H),7.20(d,J＝1.5Hz,1H),6.57(d,J＝15.9Hz,1H),4.50-4.42(m,2H),4.34(t,J＝6.3Hz,2H),2.35(td,J＝7.2,3.0Hz,2H),2.04-1.91(m,2H),1.64(s,2H),1.22-1.12(m,2H),0.09(s,9H).
将化合物M12(16mg,0.034mmol)溶于0.3mL THF中，缓慢滴加TBAF(0.2mL,1M in THF)，室温反应4小时，TLC检测反应完全，减压旋掉THF，加水(2mL)，1N盐酸调pH至2，乙酸乙酯(4mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝2:1)得产品CHY96(6mg，50％，黄色固体)。其中双键主要是E构型，含有微量的Z构型。1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ11.63(bs,1H),8.55(d,J＝15.9 Hz,1H),7.61(s,1H),7.26(s,1H),6.72(d,J＝16.2Hz,1H),4.30(t,J＝6.3Hz,2H),2.35(m,2H),2.05(s,1H),1.93(m,2H).
制备实施例四(化合物编号CHY113)
化合物M4的制备见实施例一。
将化合物M13(850mg,5.63mmol)和化合物M14(1g,5.63mmol)加入瓶中，加入乙酸酐(6mL)，氮气保护下60℃反应4.5小时，冷却至室温，析出黄色固体，过滤，滤饼用水和乙醚各洗两次得化合物M15(1.52g，86.9％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.50(t,J＝2.1Hz,1H),8.20-8.15(m,2H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.94(d,J＝7.5Hz,1H),7.80(d,J＝16.2Hz,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.59(t,J＝8.1Hz,1H),7.48(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.47(d,J＝16.5Hz,1H).
将二水合氯化亚锡(1.81g,8.05mmol)溶于浓盐酸(4mL)中，室温下滴加化合物M15(500mg,1.61mmol)的醋酸溶液(8mL)，60℃反应2小时，呈黄色浆状，浓缩除去乙酸，加20mL水稀释，10N氢氧化钠水溶液调pH至9，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后得化合物M16(413mg，91.8％，黄色固体)。ESIMS:281.0[M+H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.38(d,J＝8.7Hz,1H),8.02(d,J＝1.8Hz,1H),7.99(d,J＝8.7Hz,1H),7.90(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(d,J＝16.2Hz,1H),7.58(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.28(d,J＝16.2Hz,1H),7.09(t,J＝7.8Hz,1H),6.89(s,1H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.58(d,J＝9.0Hz,1H),5.17(s,2H).
将化合物M4(500mg,1.75mmol)加入单口圆底烧瓶中，加入叔丁氧羰基亚甲基三苯基膦(987mg,2.63mmol)，在氮气保护下加入重蒸的甲苯(20mL)，回流过夜，减压旋掉溶剂，所得粗产物用二氯甲烷(30mL)溶解，硅胶拌样柱层析纯化(PE/EtOAc＝8:1)得化合物M17(828mg，收率＞100％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.18(bs,NH),8.33(d,J＝16.2Hz,1H),7.34(s,1H),7.21(s,1H),6.48(d,J＝16.2Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.44(t,J＝7.2Hz,3H).
将化合物M17(417mg,1.08mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，冰水浴下滴加三氟乙酸(2mL,26.93mmol)，反应液由黄色变成橙红色，室温反应1小时，TLC检测反应完毕，硅胶拌样柱层析纯化(CHCl3/CH3OH＝30:1)得化合物M18(340mg，96.0％，黄色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.66(s,1H),8.28(d,J＝15.9Hz,1H),7.51(s,1H),7.33(s,1H),6.45(d,J＝16.2Hz,1H),4.37(q,J＝6.9Hz,2H),1.35(t,J＝6.9Hz,3H).
将化合物M18(80mg,0.24mmol)溶于DMF(1mL)，分别加入HATU(139mg,0.37mmol)，DIPEA(74mg,0.57mmol)，室温反应半小时后，滴加化合物M16(68mg,0.24mmol)的二氯甲烷溶液(1mL)，再用1mL DMF洗瓶壁，加到反应液中，室温搅拌过夜，浓缩除掉二氯甲烷，所得粗品用乙酸乙酯(10mL)稀释，水(10mL×2)洗，饱和食盐水洗有机相，浓缩部分乙酸乙酯，有沉淀析出，过滤，用二氯甲烷洗两次滤饼，干燥得化合物M19(55mg，39.0％，灰色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ10.41(s,1H),8.44(d,J＝9.0Hz,1H),8.33(d,J＝15.6Hz,1H),8.22(s,1H),8.06(s,1H),8.03-7.98(m,2H),7.89(d,J＝16.5Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,1H),7.54(s,1H),7.50-7.36(m,4H),6.86(d,J＝15.6Hz,1H),4.41(q,J＝6.9Hz,2H),1.38(t,J＝6.9Hz,3H).
将化合物M19(50mg,0.085mmol)加入瓶中，加入乙醇(5mL)，氢氧化钠(22mg,0.55mmol)，60℃反应18小时，浓缩除去乙醇，用2mL水稀释，1N盐酸调pH至2，加5mL乙酸乙酯，搅拌，过滤，滤饼干燥得产品 CHY113(24mg，53.5％，红色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ10.40(s,1H),8.55(d,J＝8.7Hz,1H),8.36(d,J＝15.6Hz,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),8.09-8.06(m,2H),7.98(d,J＝16.5Hz,1H),7.69-7.64(m,2H),7.51-7.34(m,5H),6.97(d,J＝15.6Hz,1H).
采用与制备实施例四相似的操作合成以下化合物：
其中商业上不可得的吲哚衍生物可通过如下方法制备：
方法A:见制备实施例一中化合物M3的合成，用这种方法还可合成4，6-二氟吲哚-2-羧酸乙酯。
方法B:
以邻甲氧基苯胺为原料，采用合成化合物M2的方法合成化合物M21。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.12(s,1H),7.59(d,J＝7.5Hz,1H),6.70-6.85(m,3H),4.32(q,J＝7.2Hz,2H),3.90(s,3H),2.35(s,3H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H).
将化合物M21(760mg,3.22mmol)溶于乙酸(5mL)，加入甲苯(5mL)，氯化锌(1.088g,8.09mmol),110℃反应12小时，浓缩甲苯，加水和乙醚各10mL，用2N氢氧化钠调pH至中性，分层，水相再用乙醚(10mL)萃取，合并有机相，分别用水、饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝50:1to 20:1)得化合物M22(200mg，28.4％，白色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.04(bs,1H),7.27(d,J＝8.1Hz,1H),7.20(s,1H),7.06(t,J＝8.1Hz,1H),6.72(d,J＝7.5Hz,1H),4.41(q,J＝7.2Hz,2H),3.96(s,3H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H).
方法C:
将丙酮酸乙酯(3.19g,27.59mmol)溶于乙醇(60mL)，加入乙酸(517mg,8.62mmol),对甲氧基苯肼盐酸盐(3g,17.24mmol)，加冷凝管，80℃反应2小时，固体逐渐溶解呈黑色溶液，继续反应3小时，浓缩乙醇，析出白色固体，过滤，滤液用硅胶拌样柱层析纯化(PE/EtOAc＝25:1to 10:1)得中间点，即化合物M24(456mg，12.1％，白色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ11.72(bs,1H),7.32(d,J＝8.7Hz,1H),7.07(d,J＝2.1Hz,1H),7.02(s,1H),6.89(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),4.30(q,J＝7.2Hz,2H),3.73(s,3H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H).
方法D:
将丙酮酸乙酯(3.1g,26.82mmol)溶于乙醇(60mL)，加入乙酸(498mg,8.38mmol),邻氯苯肼盐酸盐(3g,17.76mmol)，加冷凝管，80℃反应2小时，冷却至室温，浓缩乙醇，析出固体，过滤，滤饼用乙醇洗2次，得1.36g无色针状晶体，母液再浓缩至固体析出，过滤，滤饼用乙醇洗得660mg无色针状晶体，收率47.3％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ12.30(s,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,1H),7.31(t,J＝7.5Hz,1H),6.93(d,J＝7.5Hz,1H),4.27(q,J＝7.2Hz,2H),2.13(s,3H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。
将化合物M26(1g，4.15mmol)加入瓶中，加入多聚磷酸(10g)，45℃反应1小时，加冰水，搅拌10分钟，乙醚萃取，无水MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝50:1)得化合物M27(300mg，32％，白色固体)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.13(s,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.35(d,J＝7.5Hz,1H),7.26(s,1H),7.09(t,J＝8.1Hz,1H),4.35(q,J＝6.9Hz,2H),1.34(t,J＝7.2Hz,3H)。
方法E:
将叠氮化钠(1.08g，16.62mmol)加入瓶中，加入DMF(4.5mL)，室温滴加化合物M28(2.5g,14.97mmol)，室温反应2小时，加水使白色沉淀溶解，乙醚(10mL×3)萃取，合并有机相，水(10mL×6)洗，饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，浓缩后得化合物M29(1.66g，85.9％，无色油状)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ4.26(q,J＝7.2Hz,2H),3.86(s,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H).
在室温下将金属钠(280mg,12.17mmol)分批加入无水甲醇(9.5mL)中，钠块消失后回流1小时，冷却至零下20℃，滴加对甲氧基苯甲醛(500mg,3.67mmol)的甲醇溶液(2.5mL)，然后滴加化合物M29(1.184g,9.18mmol)，零下20℃反应半小时后，零下3℃反应12小时，加入冰水，搅拌析出白色沉淀，过滤，滤饼用冰水洗2次，干燥得化合物M31(412mg，48.1％，白色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.79(d,J＝7.5Hz,2H),6.91(d,J＝9.0Hz,2H),6.89(s,1H),3.90(s,3H),3.84(s,3H).
将化合物M31(412mg，1.77mmol)溶于间二甲苯(50mL)，氩气保护下160℃回流半小时，减压浓缩除掉间二甲苯，粗品用二氯甲烷溶解硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝5:1)得化合物M32(359mg，98.9％，白色固体)。ESIMS:228.1[M+Na]+。
1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ10.70(bs,1H),7.55(d,J＝9.0Hz,1H),7.11(s,1H),7.00(s,1H),6.77(dd,J＝9.0,2.1Hz,1H),3.86(s,3H),3.83(s,3H).
制备实施例五(化合物编号GP523)
将化合物M33(639mg,3mmol)，对硝基苯酚(500.8mg,3.6mmol)，碳酸钾(829mg,6mmol)溶溶于DMF(15mL)中，60℃反应过夜，TLC检测原料消失，加水稀释，乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，有机相用水洗3次，饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝10:1)得化合物M34(850mg，收率＞100％，无色固体)。ESIMS:272.1[M+H]+。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.19(d,J＝9.0Hz,2H),7.32-7.19(m,5H),6.92(d,J＝9.3Hz,2H),4.06(t,J＝6.0Hz,2H),2.71(t,J＝6.9Hz,2H),1.83(m,4H).
将化合物M34(170mg,0.63mmol)溶于甲醇(10mL)中，用氮气置换3次后加入Pa/C(20mg)，用氢气置换3次，室温反应50分钟，TLC检测反应完毕。硅藻土过滤，浓缩除掉溶剂得化合物M35(136mg，89.5％，无色液体)。
ESIMS:242.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.31-7.18(m,5H),6.74(d,J＝8.7Hz,2H),6.64(d,J＝8.7Hz,2H),3.90(t,2H),2.67(t,2H),1.79(m,4H).
将化合物M18(65mg，0.20mmol)溶于干燥的DMF(4mL)中，氮气保护下加入化合物M36(62mg，0.28mmol)，三苯基膦(73mg，0.28mmol)，室温反应3小时后，TLC检测有很多原料，补加10当量的化合物M36和三苯基膦，再反应2小时后，加入化合物M35(67mg，0.28mmol)，80℃反应过夜，加水，乙酸乙酯萃取，有机相有固体不溶，过滤，滤液浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/Acetone＝5:1)得粗品，加入甲醇后析出固体，过滤，合并固体得化合物M37(5mg，4.5％，白色固体)。
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ8.40(d,J＝15.6Hz,1H),7.63(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(d,J＝1.8Hz,1H),7.27-7.13(m,5H),6.85(d,J＝9.0Hz,2H),6.78(d,J＝15.6Hz,1H),4.41(q,J＝6.9Hz,2H),3.96(t,2H),2.67(t,2H),1.79(m,4H),1.41(t,J＝7.2Hz,3H).
将化合物M37(5mg,0.0091mmol)溶于异丙醇，氢氧化钠(2.5mg,0.063mmol)水解，用1N盐酸调PH至2，浓缩掉异丙醇，加水，析出固体，过滤，干燥得产品GP523(2mg，41.7％，黄色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.54(s,1H),10.07(s,1H),8.23(d,J＝15.6Hz,1H),7.62(d,J＝9.3Hz,1H),7.48(s,1H),7.39(s,1H),7.31-7.17(m,5H),6.88(d,J＝9.0Hz,2H),6.75(d,J＝15.6Hz,1H),3.96(s,2H),2.64(s,2H),1.71(s,4H).
制备实施例六(化合物编号CHY110)
将化合物M38(500mg，2.07mmol)溶于苯(10mL)中，室温下滴加三苯基膦(580mg，2.21mmol)的苯溶液(10mL)，室温反应48小时，析出白色沉淀，过滤，滤饼用正己烷洗一次，将所得固体溶于二氯甲烷(30mL)中，加入1％的氢氧化钠水溶液(30mL)，室温搅30分钟，分层，有机相用无水MgSO4干燥，浓缩后得化合物M39(无色油状)，直接投下一步反应。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.71-7.41(m,20H),7.27(s,1H),3.00(t,J＝7.2Hz,2H),2.65(t,J＝7.2Hz,2H).
将化合物M4(20mg，0.078mmol)溶于无水甲苯(5mL)中，加入化合物M39(41mg，0.10mmol)，120℃反应过夜，加二氯甲烷稀释，硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝6:1)得化合物M40(22mg，68.8％，白色固体)。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.47(bs,1H),8.31(d,J＝16.2Hz,1H),7.34-7.20(m,7H),6.82(d,J＝16.5Hz,1H),4.42(q,J＝7.2Hz,2H),3.05(s,4H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H).
将化合物M40(22mg，0.053mmol)加入瓶中，加入乙醇(2mL)，一水合氢氧化锂(8mg，0.20mmol)，50℃反应3.5小时，TLC检测没反应完，补加1N LiOH(1mL)，50℃反应1小时，TLC检测反应完全，浓缩掉乙醇，加水稀释，用1N盐酸调PH至2，过滤，滤饼干燥得产品CHY110(9mg，43.7％，黄色固体)。
1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ11.63(bs,1H),8.42(d,J＝16.5Hz,1H),7.61(s,1H),7.30-7.15(m,6H),6.96(d,J＝16.5Hz,1H),3.08-2.96(m,4H).
制备实施例七(化合物编号CHY112)
将化合物M5(300mg，1.16mmol)，氯化亚铜(53mg，0.54mmol)加入微波管中，加入喹啉(2mL)，氩气换气，200℃反应10分钟，加入乙酸乙酯(15mL),1N盐酸洗两次，有机相呈乳状，过滤，滤液用饱和食盐水洗，MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝1:1)得化合物M41(124mg，50.0％，灰色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ10.42(s,1H),8.34(s,1H),7.59(s,1H),7.41(s,1H).
将化合物M41(63mg，0.29mmol)，丙二酸(59mg，0.57mmol)，吡啶(1.7mL),哌啶(246mg，2.89mmol)依次加入瓶中，50℃反应12小时，浓缩掉溶剂，硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝1:1+1％甲酸)得化合物M42(50mg，67.6％，灰色固体)。
1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ11.21(bs,1H),10.46(bs,1H),8.57(d,J＝15.9Hz,1H),8.16(s,1H),7.53(s,1H),7.21(s,1H),6.36(d,J＝15.9Hz,1H).
将化合物M37(100mg，0.34mmol)溶于无水DMF(2.5mL)，在冰水浴下加入三苯基膦(108mg，0.41mmol)，NBS(72mg，0.41mmol)，室温反应3小时，溶液由澄清变浑浊，加乙酸乙酯(10mL)，分别用0.5N氢氧化锂(10mL)，水(10mL)，饱和食盐水(10mL)洗，MgSO4干燥，浓缩后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝20:1)得化合物M43(66mg，54.1％，浅黄色固体)。ESIMS：357.1，359.1。
1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.13-8.08(m,2H),7.74-7.56(m,6H),7.47-7.35(m,3H),4.54(s,2H).
将化合物M42(35mg，0.14mmol)溶于无水DMF(3mL)，在冰水浴下加入碳酸钾(39mg，0.28mmol)，搅拌15分钟后，加入化合物M43(50mg，0.14mmol)，室温过夜后溶液由澄清变成黄色浑浊，加水和乙酸乙酯各(10mL)，产生许多白色絮状物，过滤，干燥得产品CHY112(20mg，26.8％，白色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.51(d,J＝15.9Hz,1H),8.41(d,J＝8.4Hz,1H),8.33(s,1H),8.02(s,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.94-7.87(m,3H),7.80(s,1H),7.73(d,J＝6.9Hz,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.54(s,1H),7.50-7.48(m,2H),7.43(t,J＝6.3Hz,1H),7.24(s,1H),6.54(d,J＝15.9Hz,1H),5.26(s,2H).
制备实施例八(化合物编号CHY117)
从化合物M44出发，采用制备实施例四中合成M18的方法合成化合物M47。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.34(s,1H),8.54(d,J＝16.2Hz,1H),7.99(d,J＝8.1Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.24(d,J＝8.1Hz,1H),6.57(d,J＝16.5Hz,1H),4.41(q,J＝7.2Hz,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,1H).
将化合物M47(100mg，0.39mmol)溶于乙醇(5mL)和四氢呋喃(8mL)的混合溶液中，用氮气置换3次后加入Pa/C(29mg)，用氢气置换2次，室温反应7小时，硅藻土过滤，浓缩除掉溶剂得化合物M48(74mg，73.3％，白色固体)。
ESIMS：260.1[M-H]+；1H NMR(300MHz,Acetone-d6):δ10.69(bs,1H),7.77(d,J＝8.7Hz,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(ddd,J＝8.1,7.2,1.2Hz,1H),7.10(ddd,J＝7.2,6.9,0.9Hz,1H),4.38(q,J＝7.2Hz,2H),3.41(t,J＝8.1Hz,2H),2.66(t,J＝7.5Hz,2H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H).
采用制备实施例四中合成CHY113的方法可将化合物M48转化为产品CHY117。
ESIMS：494.2[M-H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ11.39(s,1H),10.01(s,1H)，8.40(d,J＝8.7Hz,1H),8.17(s,1H),8.04(s,1H)，8.02-7.92(m,3H),7.82(d,J＝16.5Hz,1H),7.74(d,J＝7.8Hz,1H),7.59(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.40-7.32(m,5H),7.21(t,J＝7.2Hz,1H),7.04(t,J＝7.2Hz,1H),3.40(t,J＝7.2Hz,2H),2.69(t,J＝7.5Hz,2H).
制备实施例九(化合物编号CHY118)
将化合物M45(200mg，0.92mmol)加入瓶中，加入水(2mL)和乙腈(10mL)，呈白色浑浊，加入二水合磷酸二氢钠(186mg，1.20mmol)，30％双氧水(125mg，1.10mmol)，冰水浴条件下滴加亚氯酸钠(116mg，1.29mmol)的水溶液(0.5mL)，室温反应7小时，TLC检测没反应完，再加水(2mL)和四氢呋喃(10mL)，室温反应过夜，冰水浴下用1N盐酸调PH至2，析出白色沉淀，过滤，水洗滤饼2次，干燥得化合物M50(177mg，82.7％，白色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.71(s,1H),12.48(s,1H)，7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.31(t,J＝7.8Hz,1H),7.20(d,J＝7.2Hz,1H),4.37(q,J＝6.9Hz,1H),1.33(t,J＝7.2Hz,1H).
采用制备实施例四中合成CHY113的操作可将化合物M50转化为产品CHY118。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ12.36(s,1H),11.63(s,1H)，8.43(d,J＝8.4Hz,1H),8.26(d,J＝8.1Hz,1H),8.20(s,1H)，8.06-7.99(m,3H),7.91(d,J＝16.2Hz,1H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,1H),7.57-7.42(m,5H),7.36(t,J＝8.1Hz,1H),7.23(t,J＝7.2Hz,1H).
制备实施例十(化合物编号CHY127)
将炔丙醇(560mg，10mmol)溶于二氧六环(27mL)中，加入碳酸银(184mg，0.67mmol)，加热到80℃，缓慢滴加化合物46(753mg，6.66mmol)，80℃反应2小时，浓缩掉溶剂，加二氯甲烷(20mL)溶解，硅藻土过滤掉黑色不溶物，浓缩滤液后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝10:1到5:1到3:1)得化合物M51(53mg，13.6％，白色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ9.07(bs,1H),6.85(s,1H),6.25(s,1H),4.75(d,J＝6.6Hz,1H),4.36(q,J＝7.2Hz,2H),3.52(bs,1H),1.28(t,J＝8.1Hz,3H).
将化合物M51(153mg，0.91mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入PCC(291mg，1.36mmol)，室温反应2小时，过滤，浓缩滤液后硅胶柱层析纯化(PE/EtOAc＝5:1)得化合物M52(100mg，65.8％，白色固体)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ10.49(s,1H),9.48(bs,1H),6.94(t,J＝2.4Hz,1H),6.81(t,J＝3.0Hz,1H),4.44(q,J＝7.2Hz,2H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H).
将化合物M52转化为产品CHY127的操作见制备实施例四。
ESIMS：442.0[M-H]+；1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ11.66(bs,1H),10.13(s,1H),8.43-8.33(m,2H),8.14(s,1H),8.06-7.94(m,3H),7.85(d,J＝16.2Hz,1H),7.64-7.58(m,2H),7.44-7.39(m,3H),6.90(s,1H),6.54(d,J＝15.6Hz,1H),6.46(s,1H).
生物实验实施例
一：GPR17,CysLT1,CysLT2拮抗活性测试实验
1、实验目的：进行本发明化合物的GPR17,CysLT1,CysLT2拮抗活性测试。
2、实验所用细胞：稳定表达GPR17/Gα16,CysLT1/Gα16,CysLT2/Gα16的HEK293细胞，作为高通量筛选和检测化合物拮抗活性的细胞模型。
3、实验原理：通过建立共转目标受体和Gα16蛋白的细胞系，使目标受体被激活后能引起Gα16蛋白的活化，进而激活磷脂酶C(PLC)产生IP3和DAG，IP3可与细胞内内质网和线粒体上的IP3受体结合，从而引起胞内钙离子的释放。因此，测定胞内钙离子浓度的变化可以作为检测目标受体活化状态的方法。Fluo-4/AM是一种钙荧光探针指示剂用来测量钙离子，作为非极性脂溶性的化合物，进入细胞后在细胞脂解酶的作用下，AM基团解离，释出Fluo-4；由于Fluo-4是极性分子，不易通过脂质双分子膜，它可使Fluo-4长时间保留在细胞内。最终可以通过测量被激发的荧光强度来反映Gα蛋白被激活的水平。如果筛选的化合物能够激动目标受体，则可以使钙流反应大大升高。反之，如果筛选的化合物能够拮抗目标受体，则可以使钙流反应大大降低。
实验试剂：BSA(Roche),D-glucose(国药集团化学试剂有限公司),sulfinpyrazone(Sigma),Cremophor EL(Biochemika),Fluo-4, AM(Invitrogen),montelukast(TCI),pranlukast(TCI),zafirlukast(TCI),MDL29951(TCI).
4、实验步骤：
样品处理：样品用DMSO溶解，低温保存，DMSO在最终体系中的浓度控制在不影响检测活性的范围之内。
稳定表达目标受体/Gα16的HEK293细胞种于96孔板，培养过夜。吸去种有细胞的孔内的培养液，加入新鲜配制的染料40mL/孔，37℃培养箱内恒温孵育40分钟。用钙缓冲液将待测的药物稀释并混匀。将染料吸尽弃去，用新鲜配制的钙缓冲液洗一遍后，换上50mL溶解有待测药物的钙缓冲液。用FlexStation II仪检测，第15秒开始由仪器自动加入25mL溶解有已知激动剂的钙缓冲液，最终读取525nm处荧光值。
三、实验结果：
阳性对照Montelukast、Pranlukast、Zafirlukast的结果表明本测试方法和实验结果是可靠的。根据上述细胞水平测试结果，本发明得到了一类新型的GPR17和CysLT1受体双重拮抗剂，其对GPR17的拮抗活性在微摩尔水平，对CysLT1和CysLT2有选择性拮抗作用，拮抗活性在纳摩尔水平。