修饰的CPMV增强子元件的制作方法

文档序号:12285352阅读:来源:国知局

技术特征:

1.表达增强子,其依次包含CPMV 5’UTR核苷酸序列和填充片段,所述CPMV 5’UTR核苷酸序列包含SEQ ID NO:1的核苷酸1-160或者包含与SEQ ID NO:1具有约80%至100%的序列相似性的核苷酸序列,所述填充片段包含编码不完全的M蛋白的核苷酸序列以及在植物中有活性的一种或多种kozak序列。

2.如权利要求1所述的表达增强子,其中所述填充片段包含50至约500个核苷酸的长度或者其间的任意长度。

3.如权利要求2所述的表达增强子,其中所述填充片段还包含多克隆位点。

4.如权利要求1所述的表达增强子,其中所述kozak序列选自如SEQ ID NO:5-17中所示的序列。

5.如权利要求1所述的表达增强子,其中所述编码不完全的M蛋白的核苷酸序列包含约50至约351个核苷酸的长度,或者其间的任意长度。

6.如权利要求5所述的表达增强子,其中所述编码不完全的M蛋白的核苷酸序列为349或351个核苷酸的长度。

7.如权利要求1所述的表达增强子,其选自SEQ ID NO:1、3、4或56。

8.植物表达系统,其包含含有调控区的核酸序列,所述调控区与权利要求1所述的表达增强子以及目的核苷酸序列可操作地连接。

9.如权利要求8所述的植物表达系统,其还包含豇豆花叶病毒组3’UTR。

10.如权利要求9所述的植物表达系统,其还包含第二核酸序列,所述第二核酸序列编码沉默抑制子。

11.如权利要求10所述的植物表达系统,其中所述沉默抑制子选自HcPro和p19。

12.如权利要求8所述的植物表达系统,其中所述调控区选自:质体蓝素启动子、CaMV 35S启动子、2x CaMV35S启动子、CAS启动子、RbcS启动子、Ubi启动子或者肌动蛋白启动子。

13.如权利要求8所述的植物表达系统,其中所述目的核苷酸序列编码病毒蛋白或抗体。

14.如权利要求13所述的植物表达系统,其中所述病毒蛋白为选自下述的流感病毒血凝素:H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16以及B型流感病毒血凝素。

15.如权利要求14所述的植物表达系统,其中编码病毒蛋白或抗体的核苷酸序列包含天然的信号肽序列或者非天然的信号肽。

16.如权利要求15所述的植物表达系统,其中所述非天然的信号肽来自蛋白质二硫键异构酶(PDI)。

17.在植物或者植物部分中产生目的蛋白的方法,所述方法包括:向所述植物或所述植物部分引入权利要求8所述的植物表达系统,以及在允许编码所述目的蛋白的核苷酸序列表达的条件下培育所述植物或所述植物部分。

18.植物或植物部分,其瞬时转染有或者稳定转化有权利要求8所述的植物表达系统。

19.核酸,其包含与目的核苷酸序列可操作地连接的权利要求1所述的表达增强子。

20.如权利要求19所述的核酸,其中所述目的核苷酸序列为选自下述的流感病毒血凝素(HA):B HA、C、H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15以及H16。

21.如权利要求20所述的核酸,其中所述HA为嵌合的HA,其中所述HA的天然跨膜结构域被异源跨膜结构域替代。

22.如权利要求21所述的核酸,其中所述异源跨膜结构域获自H1 California。

23.如权利要求1所述的表达增强子,其中所述编码不完全的M蛋白的核苷酸序列包含SEQ ID NO:1-4的核苷酸161至509、SEQ ID NO:55的核苷酸161-511或SEQ ID NO:56的核苷酸161-511,或者包含与来自SEQ ID NO:1-4的核苷酸161至509、SEQ ID NO:55的核苷酸161-511或SEQ ID NO:56的核苷酸161-511的序列具有约80%至100%的序列相似性的核苷酸序列,其中所述序列不包含起始密码子。

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