1.一种高效PCR扩增长片段目的序列的方法,其特征如下:
(1)模板预变性;
(2)模板变性
(3)引物退火;
(4)DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链;
(5)按步骤(2)-(4)循环进行扩增反应;
(6)补充延伸时间使所有链合成完成。
2.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于预变性温度在95℃,时间为3~4分钟。
3.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于变性温度在98℃,时间为10秒。
4.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于引物退火温度为(Tm+3~Tm+4)℃,时间为7~8分钟。
5.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于延伸温度为所用酶的最适温度,时间为1分钟/kb。
6.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于按步骤(2)-(4)循环数为25~35个循环。
7.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于补充延伸的温度同权利要求5,时间为5~10分钟。