一种高效PCR扩增长片段目的序列的方法与流程

文档序号:14685856发布日期:2018-06-14 21:42阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种高效PCR扩增长片段目的序列的方法,其特征如下:

(1)模板预变性;

(2)模板变性

(3)引物退火;

(4)DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链;

(5)按步骤(2)-(4)循环进行扩增反应;

(6)补充延伸时间使所有链合成完成。

2.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于预变性温度在95℃,时间为3~4分钟。

3.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于变性温度在98℃,时间为10秒。

4.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于引物退火温度为(Tm+3~Tm+4)℃,时间为7~8分钟。

5.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于延伸温度为所用酶的最适温度,时间为1分钟/kb。

6.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于按步骤(2)-(4)循环数为25~35个循环。

7.根据权利要求1所述高效PCR扩增长片段目的序列方法,其特征在于补充延伸的温度同权利要求5,时间为5~10分钟。

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