一种牛羊食道-咽部分泌物处理液及其制备方法和用途与流程

文档序号:12835072阅读:633来源:国知局

本发明涉及一种牛羊食道-咽部分泌物处理液,还涉及该处理液的制备方法和用途,本发明属于生物技术领域。



背景技术:

口蹄疫是口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,主要感染猪、牛、羊等偶蹄动物,对经济危害严重的动物传染病。我国地域辽阔,地形多样,与许多国家接壤,病原易感动物多而复杂,但病原持续性感染的研究相对滞后,食道探杯采集牛羊食道及咽部的上皮细胞及黏液是目前检测口蹄疫病毒感染的最好方法,牛羊o/p液采集作为口蹄疫监测的必检项目。

从牛羊活体上检查口蹄疫病毒就是运用食道探杯从牛羊的口腔和咽喉部收集食道-咽部分泌物(o/p液),该分泌物中含有大量粘液和上皮细胞组织,大量的粘液会包裹上皮细胞,从而影响后续实验室检验。



技术实现要素:

针对现有技术中存在的问题,本发明提供了一种食道-咽部分泌物处理液,使用本发明的处理液处理收集得到的牛羊食道-咽部分泌物,能够使得上皮细胞充分暴露,同时也不会对细胞造成损坏,影响实验结果的准确性。

为了达到上述目的,本发明采用了以下技术手段:

本发明的一种牛羊食道-咽部分泌物处理液,其由氯化钠、tris缓冲液、分散剂、表面活性剂以及粘液分解剂组成。

在本发明中,优选的,所述氯化钠的含量为5-19g/l,tris缓冲液的浓度为0.02-0.1m,ph6.8-7.6,分散剂的含量为0.1-5g/l,表面活性剂的含量为0.3-1%(v/v),粘液分解剂的含量为3-5g/l。

在本发明中,优选的,所述的分散剂为聚乙二醇,所述表面活性剂为tritonx-100,所述粘液分解剂为甲基半胱氨酸。

进一步的,本发明还提出了所述的处理液在牛羊食道-咽部分泌物预处理中的用途。

一种牛羊食道-咽部分泌物的预处理方法,其包括向采集的牛羊食道-咽部分泌物中加入其体积2-5倍量的本发明所述的处理液,混匀,静置15-30min,然后离心15min,所得沉淀用于进一步检测。

本发明的一种牛羊食道-咽部分泌物处理液常温下可放置贮存,不易变质、无毒,专一、高效、对牛羊o/p液中的粘液分解迅速,对细胞则比较温和,不会因为粘液降解过程而损害细胞。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1

1、牛羊食道-咽部分泌物处理液的制备

(1)0.05mtris缓冲液(ph7.4)的配制

50ml0.1mol/l的tris溶液与42.0ml0.1mol/l盐酸混匀后,加水稀释至100ml,即得。

(2)称取氯化钠1.2g,聚乙二醇0.25g,tritonx-1000.5ml以及甲基半胱氨酸0.4g,将上述组分充分溶解于配制好的100ml的0.05mtris缓冲液(ph7.4)中,即得。

2、牛羊食道-咽部分泌物处理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)预处理中的用途

采样时动物应站立保定,将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15cm处,轻轻来回抽动2-3次,然后将探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul处理液的灭菌2mlep管中,混匀,静置15-30min,然后离心15min,所得沉淀用于进一步检测。同时取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中,作为平行对照。室温下存放24h,进行染菌观察,结果表明,没有加处理液的o/p液对照有菌长出,而加入本发明处理液的o/p液无菌长出,而且持续观察5-7天后,加入本发明保存液的o/p液仍无菌 长出。两组样本分别离心15min,所得沉淀用于进一步实验室检测,结果表明,对照组无或仅有少量细胞检出,而加入本发明处理液的o/p液检测出大量的细胞及碎片。

实施例2

1、牛羊食道-咽部分泌物处理液的制备

(1)0.05mtris缓冲液(ph7.4)的配制

50ml0.1mol/l的tris溶液与42.0ml0.1mol/l盐酸混匀后,加水稀释至100ml,即得。

(2)称取氯化钠1.2g,聚乙二醇0.25g,tritonx-1000.5ml以及甲基半胱氨酸0.4g,将上述组分充分溶解于配制好的100ml的0.05mtris缓冲液(ph7.4)中,高压灭菌后,即得。

2、牛羊食道-咽部分泌物处理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)预处理中的用途

采样时动物应站立保定,将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15cm处,轻轻来回抽动2-3次,然后将探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul处理液的灭菌2mlep管中,混匀,静置15-30min,然后离心15min,所得沉淀用于进一步检测。同时取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中,作为平行对照。室温下存放24h,进行染菌观察,结果表明,没有加处理液的o/p液对照有菌长出,而加入本发明处理液的o/p液无菌长出,而且持续观察5-7天后,加入本发明保存液的o/p液仍无菌长出。两组样本分别离心15min,所得沉淀用于进一步实验室检测,结果表明,对照组无或仅有少量细胞检出,而加入本发明处理液的o/p液检测出大量的细胞及碎片。

实施例3

1、牛羊食道-咽部分泌物处理液的制备

(1)0.1mtris缓冲液(ph7.5)的配制

80ml水中溶解1.211gtris碱,加入浓hcl调节ph值至7.5,加水定容至100ml,即得。

(2)称取氯化钠1.0g,聚乙二醇0.4g,tritonx-1000.3ml以及甲基半胱氨酸0.5g,将上述组分充分溶解于配制好的0.1mtris缓冲液(ph7.5)中,即得。

2、牛羊食道-咽部分泌物处理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)预处理中的用途

采样时动物应站立保定,将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15cm处,轻轻来回抽动2-3次,然后将探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul处理液的灭菌2mlep管中,混匀,静置15-30min,然后离心15min,所得沉淀用于进一步检测。同时取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中,作为平行对照。室温下存放24h,进行染菌观察,结果表明,没有加处理液的o/p液对照有菌长出,而加入本发明处理液的o/p液无菌长出,而且持续观察5-7天后,加入本发明保存液的o/p液仍无菌长出。两组样本分别离心15min,所得沉淀用于进一步实验室检测,结果表明,对照组无或仅有少量细胞检出,而加入本发明处理液的o/p液检测出大量的细胞及碎片。

实施例4

1、牛羊食道-咽部分泌物处理液的制备

(1)0.05mtris缓冲液(ph7.4)的配制

50ml0.1mol/l的tris溶液与42.0ml0.1mol/l盐酸混匀后,加水稀释至100ml,即得。

(2)称取氯化钠0.5g,聚乙二醇0.1g,tritonx-1001ml以及甲基半胱氨酸0.3g,将上述组分充分溶解于配制好的0.05mtris缓冲液(ph7.4)中,即得。

2、牛羊食道-咽部分泌物处理液在牛羊食道-咽部分泌物(o/p液)预处理中的用途

采样时动物应站立保定,将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15cm处,轻轻来回抽动2-3次,然后将探杯拉出。取出500ulo/p液倒入含有1000ul处理液的灭菌2mlep管中,混匀,静置15-30min,然后离心15min,所得沉淀用于进一步检测。同时取出500ulo/p液倒入空的2mlep管中,作为平行对照。室温下存放24h,进行染菌观察,结果表明,没有加处理液的o/p液对照有菌长出,而加入本发明处理液的o/p液无菌长出,而且持续观察5-7天后,加入本发明保存液的o/p液仍无菌长出。两组样本分别离心15min,所得沉淀用于进一步实验室检测,结果表明,对照组无或仅有少量细胞检出,而加入本发明处理液的o/p液检测出大量的细胞及碎片。

以上实验证明,本发明对于处理牛羊o/p液效果好,同时本发明牛羊o/p液处理液具有无毒,稳定性好,贮存方便安全等优点。

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