本发明涉及一种提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法，特别涉及一种利用木糖提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的方法，本发明属于生物活性肽的制备技术领域。
背景技术：
抗氧化剂是抑制或清除氧自由基以减缓氧化反应的一类物质。目前，在食品工业中，广泛应用的抗氧化剂是合成抗氧化剂，其毒性强，可能具有致癌性。糖基化反应是将还原糖的羰基与蛋白质或肽分子上的氨基通过缩合作用而发生的一系列的复杂反应。而糖基化反应产物具有较强的抗氧化活性，且是食品加工和储藏过程中自身产生的一类物质，可以认为是天然的，这给在食品工业中寻找和应用天然抗氧化剂提供了新的思路。糖基化反应修饰技术可改善活性肽的抗氧化活性，与化学和酶法相比，不需要化学试剂，安全性高，是获得天然、安全、高效抗氧剂的最佳途径。因此，本发明以酪蛋白水解肽为氨基供体，与木糖进行糖基化反应，制备出具有强抗氧化活性的酪蛋白水解肽。糖基化反应修饰后的乳蛋白水解肽，作为高效抗氧化剂，将在食品工业中具有广阔的市场应用前景。本发明所采用的制备方法简单易行、成本低廉。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服上述现有技术缺陷，提供一种可以用于工业化生产高效率和操作简单的，且可用于食品工业的提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种木糖提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法，包括以下步骤：
(1)酪蛋白水解肽的制备：称取一定量的酪蛋白，用0.01mol/l的ph7.4的磷酸盐缓冲液将其溶解，制成浓度为7.5％(w/w)的溶液，置于恒温水浴锅中，控制反应体系温度达到45℃和体系ph为7，然后添加5％的as1.398蛋白酶(酶与酪蛋白的质量比)进行水解，在整个水解过程中用电动搅拌机不断搅拌，并不断加入适当浓度的naoh以维持ph值在7±0.05内。反应6小时后，将反应体系在沸水浴中保温20min中止反应。将酪蛋白水解物在4000g离心30分钟，即取上清液，采用10kda超滤膜进行超滤分离和冷冻干燥后，即得酪蛋白水解肽；
(2)木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物的制备：将步骤(1)所得的酪蛋白水解肽和木糖按1:1(w/w)的比例溶于水中，制成固形物浓度为4％-12％(w/w)的溶液，调节起始反应ph值为7-12，在反应温度为70-120℃的条件下，反应2-7小时后，制得木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液。将制备好的木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液，迅速冷却、冷冻干 燥后，即制得木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物。
在本发明中，优选的，所述步骤(2)中酪蛋白水解肽和木糖溶液的固形物浓度为6％(w/w)。
在本发明中，优选的，所述步骤(2)中起始反应ph值为9-11。
在本发明中，优选的，所述步骤(2)中反应温度为95-105℃。
在本发明中，优选的，所述步骤(2)中反应时间为3-4小时。
本发明的有益效果是：
1)本发明采用木糖提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法，具有操作简便、得率高、无副作用等优点。
2)通过本发明制备方法可以直接获得抗氧化活性强的酪蛋白水解肽，可以将其作为抗氧剂加入化妆品等日常用品中，还可以直接作为天然保健品食用。
3)本发明利用木糖提高酪蛋白水解肽的抗氧化活性，操作方便、成本低，适合应用于工业生产中。
具体实施方式
实施例1
木糖提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法，包括以下步骤：
(1)酪蛋白水解肽的制备：称取一定量的酪蛋白，用0.01mol/l的ph7.4的磷酸盐缓冲液将其溶解，制成浓度为7.5％(w/w)的溶液，置于恒温水浴锅中，控制反应体系温度达到45℃和体系ph为7，然后添加5％的as1.398蛋白酶(酶与酪蛋白的质量比)进行水解，在整个水解过程中用电动搅拌机不断搅拌，并不断加入适当浓度的naoh以维持ph值在7±0.05内。反应6小时后，将反应体系在沸水浴中保温20min中止反应。将酪蛋白水解物在4000g离心30分钟，即取上清液，采用10kda超滤膜进行超滤分离和冷冻干燥后，即得酪蛋白水解肽；
(2)木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物的制备：将步骤(1)所得的酪蛋白水解肽和木糖按1:1(w/w)的比例溶于水中，制成固形物浓度为6％(w/w)的溶液，调节起始反应ph值为9，在反应温度为95℃的条件下，反应3小时后，制得木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液。将制备好的木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液，迅速冷却、冷冻干燥后，即制得木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物。
实施例2
木糖提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法，包括以下步骤：
(1)酪蛋白水解肽的制备：称取一定量的酪蛋白，用0.01mol/l的ph7.4的磷酸盐缓冲 液将其溶解，制成浓度为7.5％(w/w)的溶液，置于恒温水浴锅中，控制反应体系温度达到45℃和体系ph为7，然后添加5％的as1.398蛋白酶(酶与酪蛋白的质量比)进行水解，在整个水解过程中用电动搅拌机不断搅拌，并不断加入适当浓度的naoh以维持ph值在7±0.05内。反应6小时后，将反应体系在沸水浴中保温20min中止反应。将酪蛋白水解物在4000g离心30分钟，即取上清液，采用10kda超滤膜进行超滤分离和冷冻干燥后，即得酪蛋白水解肽；
(2)木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物的制备：将步骤(1)所得的酪蛋白水解肽和木糖按1:1(w/w)的比例溶于水中，制成固形物浓度为6％(w/w)的溶液，调节起始反应ph值为10，在反应温度为100℃的条件下，反应4小时后，制得木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液。将制备好的木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液，迅速冷却、冷冻干燥后，即制得木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物。
实施例3
木糖提高酪蛋白水解肽抗氧化活性的制备方法，包括以下步骤：
(1)酪蛋白水解肽的制备：称取一定量的酪蛋白，用0.01mol/l的ph7.4的磷酸盐缓冲液将其溶解，制成浓度为7.5％(w/w)的溶液，置于恒温水浴锅中，控制反应体系温度达到45℃和体系ph为7，然后添加5％的as1.398蛋白酶(酶与酪蛋白的质量比)进行水解，在整个水解过程中用电动搅拌机不断搅拌，并不断加入适当浓度的naoh以维持ph值在7±0.05内。反应6小时后，将反应体系在沸水浴中保温20min中止反应。将酪蛋白水解物在4000g离心30分钟，即取上清液，采用10kda超滤膜进行超滤分离和冷冻干燥后，即得酪蛋白水解肽；
(2)木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物的制备：将步骤(1)所得的酪蛋白水解肽和木糖按1:1(w/w)的比例溶于水中，制成固形物浓度为6％(w/w)的溶液，调节起始反应ph值为11，在反应温度为105℃的条件下，反应4小时后，制得木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液。将制备好的木糖与酪蛋白水解肽糖基化反应液，迅速冷却、冷冻干燥后，即制得木糖与酪蛋白水解肽的糖基化反应产物。