一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及小分子肽的制备技术领域，特别涉及一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备 小分子肽的方法。
【背景技术】
[0002] 牡蛎（Oyster)是一种海产贝类。牡蛎在分类上属于软体动物门，瓣鳃纲，异柱目， 牡蛎超科，牡蛎科，它是一种食药两用的双壳贝海产品。在我国南北沿海均有养殖，特别是 广东省近几年来发展较快，牡蛎肉质乳白、细嫩、营养丰富，除含有丰富的蛋白质、维生素和 糖类外，还含有人体必需的十多种氨基酸、矿物质营养成分等。
[0003] 近代研宄表明：牡蛎含18种氨基酸、肝糖元、B族维生素、牛磺酸和钙、磷、铁、锌等 营养成分，常吃可以提高机体免疫力，其所含牛磺酸可降血脂、降血压。临床上，牡蛎在治疗 失眠、慢性中耳炎、小儿多汗症、子宫肌瘤以及小儿遗尿等方面均有突出的疗效（中医药信 息，2011，28 (1) 114-116.)。牡蛎提取物有抗菌作用，对脊髓灰质炎病毒和流感病毒有抑制 作用，其水溶性成分尚可提高动物机体免疫力等等。
[0004]目前，有人用酶解的方法制备蛋白肽活，如中国发明专利公开号为CN1680578A公 开了一种牡蛎活性肽的制备方法，以太平洋牡蛎为原料，利用蛋白酶水解牡蛎蛋白，再用纳 滤技术脱盐浓缩，可得到牡蛎活性肽。该方法中使用的为蛋白酶，而酶的选择是生产活性 肽的关键，酶的水解能力具有专一性，若想获得具有独特活性的多肽，单用一种酶效果不 佳。也有人用复合酶酶解的方法制备蛋白肽，如中国发明专利公开号为CN102250997B公开 了一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备活性肽的方法，是将牡蛎去壳，捣碎，加蒸馏水，匀浆，酶 解，灭酶，调节pH值，真空减压抽滤及冷冻干燥后，获得一种分子量小于3000Da的活性肽。 该方法虽然使用复合酶酶解的方法制备蛋白肽，但是所选的酶组合制备出来的蛋白肽，分 子量相对还是比较大。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的 方法，该方法工艺简单，易于操作，制备得到的小分子肽分子量小。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0007] -种用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法，包括如下制备步骤：
[0008] (1)将牡蛎洗净，加入牡蛎重量7~10倍水，再加入牡蛎重量0.01~0.05%的无 花果蛋白酶，调节pH值至4. 7~4. 9,升温至51~54°C，酶解5~lOmin，取牡蛎肉；
[0009] (2)将牡蛎肉打碎，加入其重量2~4倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；
[0010] (3)再加入牡蛎肉重量0? 04~0? 09%的复合酶，调节pH至5. 3~6. 5,升高温度 至46~52°C，均质30~50min，灭酶，得到酶解液；
[0011] (4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。
[0012] 本发明所述的复合酶为无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物。 本发明所用的酶作用位点无特异性，能够将全部的蛋白质水解为小分子肽。
[0013] 本发明步骤（3)中均质压力为16~21Mpa。均质使牡蛎浆液微粒化、均匀化，降低 分散物尺度和提高分散物分布均匀性。本发明提供了最佳的均质压力条件。
[0014] 本发明步骤（3)中灭酶的温度提高至75~80°C。本发明的灭酶温度温和，既能够 完全灭酶，也不损失提取的小分子肽量。
[0015] 本发明所述的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的重量比为4:2:1。所 选配比为最佳配比，既能够高效酶解牡蛎，也不会造成原料的浪费。
[0016] 本发明在牡蛎去壳步骤中，加入适量的无花果蛋白酶，采取合适的温度和时间，可 以达到机械去壳，高效快速，节省时间。酶解的时候采用的量和酶解条件都刚刚好达到刚好 去壳的程度，不损失牡蛎蛋白。
[0017] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
[0018] 1、本发明采用酶解法将牡蛎去壳，达到机械去壳，节省时间，缩短了生产周期，可 实现大规模产业化生产。
[0019] 2、本发明在酶解过程中同时进行均质处理，大大提高酶解效果，酶解时间缩短了 一倍多，同时发现均质压力为16~21Mpa时，可以实现产品的品质与生产成本的完美平衡。
[0020] 3、本发明采用复合酶酶解，找到最佳组合点和酶解条件，酶解得到的小分子肽分 子量小，活性高。
【具体实施方式】
[0021] 以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0022] 实施例1
[0023] (1)将牡蛎洗净，加入牡蛎重量7倍水，再加入牡蛎重量0. 03%的无花果蛋白酶， 调节pH值至4. 7,升温至54°C，酶解20min，取牡蛎肉；
[0024] (2)将牡蛎肉打碎，加入其重量4倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；
[0025] (3)再加入牡蛎肉重量0.09 %的复合酶，调节pH至6. 5,升高温度至46°C，在压力 为16Mpa下，均质140min，温度提高至75°C进行灭酶，得到酶解液，所述的复合酶为重量比 为4:2:1的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物；
[0026] (4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。
[0027] 实施例2
[0028] (1)将牡蛎洗净，加入牡蛎重量8倍水，再加入牡蛎重量0.04%的无花果蛋白酶， 调节pH值至4. 9,升温至52°C，酶解18min，取牡蛎肉；
[0029] (2)将牡蛎肉打碎，加入其重量3倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；
[0030] (3)再加入牡蛎肉重量0.08%的复合酶，调节pH至5. 3,升高温度至47°C，在压力 为17Mpa下，均质130min，温度提高至76°C进行灭酶，得到酶解液，所述的复合酶为重量比 为4:2:1的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物；
[0031] (4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。
[0032] 实施例3
[0033](1)将牡蛎洗净，加入牡蛎重量9倍水，再加入牡蛎重量0.05%的无花果蛋白酶， 调节pH值至4. 8,升温至53°C，酶解15min，取牡蛎肉；
[0034] (2)将牡蛎肉打碎，加入其重量3倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；
[0035] (3)再加入牡蛎肉重量0.07 %的复合酶，调节pH至5. 9,升高温度至49°C，在压力 为18Mpa下，均质120min，温度提高至77°C进行灭酶，得到酶解液，所述的复合酶为重量比 为4:2:1的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物；
[0036] (4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。
[0037] 实施例4
[0038] (1)将牡蛎洗净，加入牡蛎重量10倍水，再加入牡蛎重量0. 06%的无花果蛋白酶， 调节pH值至48,升温至51°C，酶解13min，取牡蛎肉；
[0039] (2)将牡蛎肉打碎，加入其重量2倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；
[0040] (3)再加入牡蛎肉重量0.05%的复合酶，调节pH至5. 5,升高温度至50°C，在压力 为19Mpa下，均质llOmin，温度提高至78°C进行灭酶，得到酶解液，所述的复合酶为重量比 为4:2:1的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物；
[0041] (4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。
[0042] 实施例5
[0043] (1)将牡蛎洗净，加入牡蛎重量10倍水，再加入牡蛎重量0. 08%的无花果蛋白酶， 调节pH值至4. 9,升温至52°C，酶解lOmin，取牡蛎肉；
[0044] (2)将牡蛎肉打碎，加入其重量3倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；
[0045] (3)再加入牡蛎肉重量0.04%的复合酶，调节pH至6. 2,升高温度至52°C，在压力 为21Mpa下，均质lOOmin，温度提高至80°C进行灭酶，得到酶解液，所述的复合酶为重量比 为4:2:1的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物；
[0046] (4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。
[0047] 本发明得到的产品中，蛋白质含量在90%以上，95%的牡蛎小分子肽的分子量在 480Dalton以下。下表为本发明得到牡嫩小分子肽分子量分布表：
【主权项】
1. 一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法，其特征在于，包括如下制备步 骤： (1) 将牡蛎洗净，加入牡蛎重量7~10倍水，再加入牡蛎重量0. 03~0. 08%的无花果 蛋白酶，调节pH值至4. 7~4. 9,升温至51~54°C，酶解10~20min，取牡蛎肉； (2) 将牡蛎肉打碎，加入其重量2~4倍水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液； (3) 再加入牡蛎肉重量0. 04~0. 09%的复合酶，调节pH至5. 3~6. 5,升高温度至 46~52°C，均质100~140min，灭酶，得到酶解液； (4) 将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽； 所述的复合酶为无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的混合物。
2. 根据权利要求1所述的用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法，其特征在于： 步骤（3)中均质压力为16~21Mpa。
3. 根据权利要求1所述的用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法，其特征在于： 步骤（3)中灭酶的温度提高至75~80°C。
4. 根据权利要求1所述的用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法，其特征在于： 所述的无花果蛋白酶、链霉蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的重量比为4:2:1。
【专利摘要】本发明涉及小分子肽的制备技术领域，特别涉及一种用复合酶水解牡蛎蛋白制备小分子肽的方法，具体为：(1)将牡蛎洗净，加入水和无花果蛋白酶，进行酶解，取牡蛎肉；(2)将牡蛎肉打碎，加入水，搅拌均匀，得到牡蛎浆液；(3)再加入复合酶，酶解，灭酶，得到酶解液；(4)将酶解液进行超滤，冷冻干燥，得到牡蛎小分子肽。本发明方法工艺简单，易于操作，酶解机械去壳，节省时间，缩短了生产周期，制备得到的蛋白肽为小分子肽，分子量小，活性高。
【IPC分类】C12P21-06
【公开号】CN104694606
【申请号】CN201510144750
【发明人】归三岷
【申请人】广西还珠海洋生物科技有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年3月31日