一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法。
【背景技术】
[0002]甲鱼养殖企业一般工作程序是这样的:5-8月份，甲鱼开始产卵，甲鱼蛋产生后就进行选择，以区分受精卵与未受精卵。受精卵继续孵化，直至孵化出甲鱼苗，出售甲鱼苗或继续养殖长大出售成品。而目前，未受精的甲鱼卵一般作为食品原料加工或丢弃，造成很大程度的浪费。抗氧化物质是指低浓度存在时能有效抑制自由基的氧化反应，而消除自由基对人体的毒害，是人们预防衰老的重要原因。目前还没有利用甲鱼蛋制备抗氧化物质的有关报道。
【发明内容】
[0003]本发明目的在于提供一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法。
[0004]本发明的目的是通过以下技术方案实现:
一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)反渗透水清洗:使用反渗透水对甲鱼蛋进行清洗，反渗透水由市场通用的反渗透水设备制得，要求电导率小于5 s/cm;
(2)搅拌:将甲鱼蛋去壳后放入生物反应器，加入甲鱼蛋重量的15倍以上的去离子水，添加生物酶进行酶促反应，然后再搅拌，转速500-4500rpm ；
(3)钝化:提高生物反应器内的反应温度，升温至75-98°C，时间30-50分钟，达到生物酶活性休止的目的；
(4)过滤:将钝化后的液体采用普通布袋过滤，除去固形物；
(5)离心:采用碟片式离心机分离液体中的少量油脂，转速3000-6000rpm；
(6)浓缩:采用真空浓缩，真空度600mm汞柱以上，温度50_75°C，浓缩至甲鱼蛋重量的3-10 倍；
(7)膜过滤:对水解后浓缩的液体进行分子膜过滤，分别进行3kda、10kda、50kda分子过滤，得到了氨基酸、肽类和较大分子的蛋白混合液；
(8)灌装密封:用玻璃瓶灌装密封、杀菌，杀菌温度65-95°C，时间30-45分钟，用自来水冷却至常温。
[0005]所述步骤(2)中添加的生物酶分为四种:1、中性蛋白酶，是由枯草芽孢杆菌发酵后提取的蛋白水解酶，适宜温度35-55 °C，PH6-7.5，活力10万单位每克，添加量
0.05-0.25%，作用时间2-3小时，利用中性蛋白酶的酶促反应，把甲鱼蛋的大分子蛋白质水解成小分子肽和氨基酸；2、蛋清蛋黄专用酶，适宜温度50-55 °C，PH7-8，作用时间2_3小时，添加量0.1-0.3% ;3、碱性蛋白酶，是地衣芽孢杆菌发酵产生的蛋白水解酶，将甲鱼蛋的大分子蛋白水解为肽和氨基酸；适宜温度25-70°C，PH7-10，作用时间2_3小时，添加量0.l-0.2% ;4、胰酶，由动物胰脏提取而来，适宜温度50-55°C，PH7-8，时间2_3小时，添加量0.05-0.20% ;所述生物酶的添加量均以甲鱼蛋的重量为基准。
[0006]本发明的有益效果:本发明技术方案应用现代生物酶工程技术，温和水解甲鱼卵蛋白，水解成分相对稳定，对环境无污染，易操控。通过水解条件的控制，营养价值得到提升，容易吸收。并且这种混合液体具有一定的抗氧化能力，这种混合液体的抗氧化活性在PH4.0及85°C的热水中加热30分钟(巴氏杀菌)活性不减少。通过本方法制得的氨基酸、肽类和较大分子的蛋白混合液由于具有抗氧化能力以及热稳定性，可应用于化妆品、保健品、食品加工领域。
【具体实施方式】
[0007]下面的实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。
[0008]实施例1:
(1)反渗透水清洗:使用反渗透水对甲鱼蛋进行清洗，反渗透水由市场通用的反渗透水设备制得，要求电导率小于5 s/cm;
(2)搅拌:将甲鱼蛋去壳后放入生物反应器，加入甲鱼蛋重量的15倍以上的去离子水，添加生物酶进行酶促反应，添加生物酶分为四种:1、中性蛋白酶，是由枯草芽孢杆菌发酵后提取的蛋白水解酶，适宜温度35-55°C，PH6-7.5，活力10万单位每克，添加量0.05-0.25%，作用时间2-3小时，利用中性蛋白酶的酶促反应，把甲鱼蛋的大分子蛋白质水解成小分子肽和氨基酸；2、蛋清蛋黄专用酶，适宜温度50-55°C，PH7-8，作用时间2_3小时，添加量
0.1-0.3% ;3、碱性蛋白酶，是地衣芽孢杆菌发酵产生的蛋白水解酶，将甲鱼蛋的大分子蛋白水解为肽和氨基酸；适宜温度25-70°C，PH7-10，作用时间2_3小时，添加量0.1-0.2% ;4、胰酶，由动物胰脏提取而来，适宜温度50-55°C，PH7-8，时间2_3小时，添加量0.05-0.20% ;所述四种生物酶的添加量百分数均以甲鱼蛋的重量为基准；然后再搅拌，转速500-4500rpm ;
(3)钝化:提高生物反应器内的反应温度，升温至75-98°C，时间30-50分钟，达到生物酶活性休止的目的；
(4)过滤:将钝化后的液体采用普通布袋过滤，除去固形物；
(5)离心:采用碟片式离心机分离液体中的少量油脂，转速3000-6000rpm；
(6)浓缩:采用真空浓缩，真空度600mm汞柱以上，温度50_75°C，浓缩至甲鱼蛋重量的3-10 倍；
(7)膜过滤:对水解后浓缩的液体进行分子膜过滤，分别进行3kda、10kda、50kda分子过滤，得到了氨基酸、肽类和较大分子的蛋白混合液；
(8)灌装密封:用玻璃瓶灌装密封、杀菌，杀菌温度65-95°C，时间30-45分钟，用自来水冷却至常温。
【主权项】
1.一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)反渗透水清洗:使用反渗透水对甲鱼蛋进行清洗，反渗透水由市场通用的反渗透水设备制得，要求电导率小于5 s/cm; (2)搅拌:将甲鱼蛋去壳后放入生物反应器，加入甲鱼蛋重量的15倍以上的去离子水，添加生物酶进行酶促反应，然后再搅拌，转速500-4500rpm ； (3)钝化:提高生物反应器内的反应温度，升温至75-98°C，时间30-50分钟，达到生物酶活性休止的目的； (4)过滤:将钝化后的液体采用普通布袋过滤，除去固形物； (5)离心:采用碟片式离心机分离液体中的少量油脂，转速3000-6000rpm； (6)浓缩:采用真空浓缩，真空度600mm汞柱以上，温度50_75°C，浓缩至甲鱼蛋重量的3-10 倍； (7)膜过滤:对水解后浓缩的液体进行分子膜过滤，分别进行3kda、10kda、50kda分子过滤，得到了氨基酸、肽类和较大分子的蛋白混合液； (8)灌装密封:用玻璃瓶灌装密封、杀菌，杀菌温度65-95°C，时间30-45分钟，用自来水冷却至常温。
2.根据权利要求1所述的一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法，其特征在于，所述步骤(2)中添加的生物酶分为四种:1、中性蛋白酶，是由枯草芽孢杆菌发酵后提取的蛋白水解酶，适宜温度35-55°C，PH6-7.5，活力10万单位每克，添加量0.05-0.25%，作用时间2-3小时，利用中性蛋白酶的酶促反应，把甲鱼蛋的大分子蛋白质水解成小分子肽和氨基酸；2、蛋清蛋黄专用酶，适宜温度50-55°C，PH7-8，作用时间2_3小时，添加量.0.1-0.3% ;3、碱性蛋白酶，是地衣芽孢杆菌发酵产生的蛋白水解酶，将甲鱼蛋的大分子蛋白水解为肽和氨基酸；适宜温度25-70°C，PH7-10，作用时间2_3小时，添加量0.1-0.2% ;4、胰酶，由动物胰脏提取而来，适宜温度50-55°C，PH7-8，时间2_3小时，添加量0.05-0.20% ;所述生物酶的添加量均以甲鱼蛋的重量为基准。
【专利摘要】一种将甲鱼蛋进行酶法水解制备抗氧化活性液的方法，包括步骤：反渗透水清洗、搅拌、钝化、过滤、离心、浓缩、膜过滤、灌装密封。本发明技术方案应用现代生物酶工程技术，温和水解甲鱼卵蛋白，水解成分相对稳定，对环境无污染，易操控。通过水解条件的控制，营养价值得到提升，容易吸收。并且这种混合液体具有一定的抗氧化能力，这种混合液体的抗氧化活性在PH4.0及85℃的热水中加热30分钟（巴氏杀菌）活性不减少。通过本方法制得的氨基酸、肽类和较大分子的蛋白混合液由于具有抗氧化能力以及热稳定性，可应用于化妆品、保健品、食品加工领域。
【IPC分类】A61K38-01, A61Q19-08, A23L1-305, A61K8-98, A61K35-586, A61K8-64, A61P39-06
【公开号】CN104707128
【申请号】CN201510150779
【发明人】杨明毅, 高丹文
【申请人】杨明毅
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2015年4月1日